1. OBJETIVO Este método es usado para

Instituto de Hidrología, Meteorología y Estudios Ambientales
Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial – República de Colombia
SUBDIRECCIÓN DE ESTUDIOS AMBIENTALES - GRUPO DE ACREDITACIÓN
Código: XXXXXX
Fecha: 31/12/2008
Versión: 01
Página 1 de 11
Determinación de Carbamatos en Suelos, Aguas y Matrices de Residuos por Cromatografía Liquida de
Alto Desempeño (HPLC) con Derivitazación Post-Columna y Detección por Fluorescencia
1.
OBJETIVO
Este método es usado para determinar la concentración de N-methyl carbamatos en
suelo, agua y matrices de residuos por Cromatografía Líquida de Alto Desempeño (HPLC)
con Derivatización Post-Columna y Detección por Fluorescencia.
2.
ALCANCE DE LA APLICACIÓN
Este método es usado para determinar la concentración de N-methyl carbamatos en
suelo, agua y matrices de residuos. Los compuestos listados en la tabla 1, pueden ser
determinados por este método.
Tabla 1. Lista de compuestos
Nombre del
compuesto
Aldicarb (temik)
Aldicarb sulfone
Carbaryl (servin)
Carbofuran (furadan)
Dioxicarb
Número CAS*
Nombre del compuesto
Número CAS*
116-06-3
1646-88-4
63-25-2
1563-66-2
6988-21-2
3-Hydroxycarbofuran
Methiocarb (Mesurol)
Methomyl (Lannate)
Promecarb
Propoxur (Baygon)
16655-82-6
2032-65-7
16752-77-5
2631-37-0
114-26-1
*Chemical Abstract Registry Number
Los límites de detección del método reportados por la referencia se listan en la tabla 2.
Tabla 2. Lista de los límites de detección.
Nombre del compuesto
Aldicarb sulfone
Methomyl (Lannate)
3-Hydroxycarbofuran
Dioxicarb
Aldicarb (temik)
Propoxur (Baygon)
Carbofuran (furadan)
Carbaryl (servin)
α-naphtol
Mehiocarb (mesurol)
Promecarb
Tiempo de
retención
9,59
9,59
12,70
13,50
16,05
18,06
18,28
19,13
20,30
22,56
23,02
Limites de detección]*
µg/L
µg/kg
1,9
44
1,7
12
2,6
10
2,2
>50
9,4
12
2,4
17
2,0
22
1,7
31
--3,1
32
2,5
17
*Límites de detección reportados por la referencia.
Este método esta restringido para uso por analistas experimentados en cromatografía
líquida de alto desempeño (HPLC – High Performance Liquid Chromatography) y tener
habilidades en la interpretación de cromatogramas.
Elaborado por: LMB
Fecha: 10 – 11– 2007
Revisor por:IDEAM
Fecha: 31/12/2008
Aprobado por:
Fecha:
Instituto de Hidrología, Meteorología y Estudios Ambientales
Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial – República de Colombia
SUBDIRECCIÓN DE ESTUDIOS AMBIENTALES - GRUPO DE ACREDITACIÓN
Código: XXXXXX
Fecha: 31/12/2008
Versión: 01
Página 2 de 11
Determinación de Carbamatos en Suelos, Aguas y Matrices de Residuos por Cromatografía Liquida de
Alto Desempeño (HPLC) con Derivitazación Post-Columna y Detección por Fluorescencia
3.
FUNDAMENTO TEÓRICO
Los N-methyl carbamatos son extraídos de muestras acuosas con cloruro de metileno y
de muestras de suelo y residuos sólidos oleosos con acetonitrilo. El solvente de
extracción es intercambiado a metanol/etilenglicol y luego el extracto es limpiado con
cartucho C18, filtrado y eluido en una columna analítica C18. Después de la separación
los analitos objetivo son hidrolizados y derivatizados postcolumna y luego cuantificados
fluorométricamente. Debido a la naturaleza específica de este análisis no es esencial
realizar confirmación por un segundo método. Sin embargo la fluorescencia, debido a la
derivatización puede ser confirmada sustituyendo la solución de hidróxido de sodio y ophtalaldehyde por agua libre de orgánicos y re-analizando la muestra. Si la fluorescencia
aún es detectada, una interferencia está presente y se debe tener cuidado en la
interpretación de los resultados.
La sensibilidad del método usualmente depende en su mayoría del nivel de interferencias
que de las condiciones instrumentales. Las muestras de residuos con alto contenido de
sustancias fluorescentes extraíbles producirán limites de detección significativamente
altos.
3.1.
Interferencias
Los compuestos fluorescentes, principalmente las alquilaminas las cuales producen
alquilaminas primarias basada en hidrólisis, son fuentes potenciales de interferencias.
Los compuestos que coeluyen que detienen la fluorescencia pueden generar
interferencias negativas.
Las impurezas de los solventes y los reactivos son fuentes adicionales de interferencias,
por lo tanto antes de procesar las muestras el analista debe demostrar diariamente a
través del análisis de los blancos de reactivos que todo el sistema analítico está libre de
interferencias.
4.
ASPECTOS DE SALUD Y SEGURIDAD LABORAL
Manipule con precaución muestras y reactivos, evitando el contacto con piel y ropa. Utilice
los elementos de seguridad (bata, guantes, gafas de seguridad, cabina de extracción,
máscara para vapores orgánicos) para el manejo de los solventes y materiales de
referencia. Mantenga siempre disponible las fichas de seguridad de los reactivos que se
manipulan.
Elaborado por: LMB
Fecha: 10 – 11– 2007
Revisor por:IDEAM
Fecha: 31/12/2008
Aprobado por:
Fecha:
Instituto de Hidrología, Meteorología y Estudios Ambientales
Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial – República de Colombia
SUBDIRECCIÓN DE ESTUDIOS AMBIENTALES - GRUPO DE ACREDITACIÓN
Código: XXXXXX
Fecha: 31/12/2008
Versión: 01
Página 3 de 11
Determinación de Carbamatos en Suelos, Aguas y Matrices de Residuos por Cromatografía Liquida de
Alto Desempeño (HPLC) con Derivitazación Post-Columna y Detección por Fluorescencia
5.
EQUIPOS
5.1
Sistema de Cromatografía Líquida de Alto Desempeño (HPLC)
5.1.1 Sistema HPLC con capacidad para inyectar 20 µL, desarrollar un gradiente
multilineal a flujo constante y debe estar equipado con un sistema para medir las
áreas de los picos.
5.1.2 Columna C18 de fase reversa 25 cm*4,6 mm (5 µm)
5.1.3 Reactor post-columna con sistema para liberación de dos solventes. (kratos PCR
520 con 2 sistemas de liberación de solventes Kratos Spectroflow 400 o
equivalente).
5.1.4 Detector de fluorescencia. (Kratos Spectroflow 980 o equivalente).
5.2
Centrifuga
5.3
Balanza analítica para pesar con una precisión de + 0,0001 g.
5.4
Balanza de carga superior con una precisión de + 0,01 g
5.5
Agitador de plataforma (Shaker)
5.6
Bloque de calentamiento, o equipo similar para acomodar tubos o viales graduados
de 10 ml.
6.
REACTIVOS
Todas las sustancias químicas a ser usadas deben ser grado cromatografía líquida
(HPLC). Es necesario que todos los reactivos estén conformes a las especificaciones del
Comité de Reactivos Analíticos de la Sociedad Americana de Química. Se pueden usar
sustancias de otros grados siempre y cuando el reactivo sea lo suficientemente puro para
permitir su uso sin disminuir la precisión de la determinación.
6.1.
Acetonitrilo grado HPLC, CH3CN (Mínimo corte de longitud de onda UV 203 nm).
6.2.
Metanol grado HPLC, CH3OH (Mínimo corte de longitud de onda UV 230 nm).
6.3.
Cloruro de metileno grado HPLC, CH2Cl2 (Mínimo corte de longitud de onda UV
230 nm).
6.4.
Hexano grado análisis de pesticidas C6H14.
6.5.
Etilengliclol grado reactivo, HOCH2CH2OH.
6.6.
Agua libre de orgánicos. (Como se define en el protocolo de control de calidad).
6.7.
Hidróxido de sodio grado reactivo, NaOH, Solución 0,05 N
6.8.
Acido fosfórico grado reactivo, H3PO4.
6.9.
Buffer de boratos pH 10 (J.T. Baker #5609-1, o equivalente).
6.10. o – Phthaldehyde, o-C6H4(CHO)2 grado reactivo.
6.11. 2- mercapetanol, HSCH2CH2OH grado reactivo.
6.12. Estándares de N-methyl carbamates (equivalentes a USEPA estándares)
6.13. Acido cloroacético, ClCH2COOH
Elaborado por: LMB
Fecha: 10 – 11– 2007
Revisor por:IDEAM
Fecha: 31/12/2008
Aprobado por:
Fecha:
Instituto de Hidrología, Meteorología y Estudios Ambientales
Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial – República de Colombia
SUBDIRECCIÓN DE ESTUDIOS AMBIENTALES - GRUPO DE ACREDITACIÓN
Código: XXXXXX
Fecha: 31/12/2008
Versión: 01
Página 4 de 11
Determinación de Carbamatos en Suelos, Aguas y Matrices de Residuos por Cromatografía Liquida de
Alto Desempeño (HPLC) con Derivitazación Post-Columna y Detección por Fluorescencia
6.14. Solución de reacción: Disuelva 0,500 g de o-Phthaldehyde en 10 ml de metanol, en
un matraz volumétrico de 1 L. A esta solución añada 900 ml de agua grado
reactivo seguido de 50 ml de buffer de boratos pH 10. Después mezcle bien y
añada 1 ml de 2-mercaptoetanol. Posteriormente diluya hasta la marca con agua
libre de orgánicos. Mezcle la solución. Prepare soluciones frescas semanalmente,
proteja de la luz y almacene en refrigeración.
6.15. Soluciones estándar
6.15.1. Soluciones Stock estándar: Prepare soluciones individuales de 1000 mg/L
añadiendo 0,025 g de carbamatos a un matraz volumétrico de 25 ml y diluya hasta
la marca con metanol. Almacene en refrigeración en viales de vidrio con tapa de
teflón. Reemplace cada 6 meses.
6.15.2. Soluciones estándar Intermedios: Prepare una mezcla de carbamatos de 50 mg/L
adicionando 2,5 ml de cada solución stock en un matraz volumétrico de 50 ml y
diluya hasta la marca con metanol. Almacene las soluciones en refrigeración en
viales de vidrio con tapa de recubrimiento de teflón o grafables.
6.15.3. Soluciones estándar de trabajo: Prepare soluciones de 0,5 – 1,0 – 2,0 – 3,0 y 5,0
mg/L adicionando 0,25 – 0,5 – 1,0 – 1,5 y 2,5 ml de la solución intermedia en un
matraz de 25 ml, respectivamente, y diluya hasta la marca con metanol. Almacene
las soluciones bajo refrigeración en viales de vidrio con tapa de teflón. Reemplace
estas soluciones cada 2 meses o antes si es necesario.
6.15.4. Solución estándar mixto de control de calidad: Prepare una solución de 40 mg/L de
otro grupo de stocks preparada similarmente al grupo de stocks. Añada 2 ml de
cada stock en un matraz volumétrico de 50 ml y diluya hasta la marca con metanol.
Almacene la solución bajo condiciones de refrigeración en viales con tapa de
recubrimiento teflón o grafables. Reemplace cada 3 meses.
7.
MATERIALES E INSUMOS
7.1.
7.2.
7.3.
7.4.
7.5.
7.6.
7.7.
7.8.
7.9.
7.10.
7.11.
7.12.
Jeringa de HPLC de 50 µL.
Papel filtro (Whatman 113 y 114 o equivalente).
Pipetas volumétricas clase A de diferentes tamaños.
Cartucho de fase reversa C18 (C-18 Sep-Pak (Water Associates) o equivalente).
Jeringas de vidrio de 5 ml.
Matraces volumétricos clase A de diferentes volúmenes.
Matraces Erlenmeyer con tapa de teflón de 250 ml.
Embudos de vidrio.
Embudos de separación con tapa de vidrio y llave de teflón de 250 ml
Probetas graduadas de 100 ml.
Viales de vidrio graduados de 10 ml, 20 ml.
Tubos de centrifuga de 250 ml o de 50 ml, según el tamaño de la centrifuga.
Elaborado por: LMB
Fecha: 10 – 11– 2007
Revisor por:IDEAM
Fecha: 31/12/2008
Aprobado por:
Fecha:
Instituto de Hidrología, Meteorología y Estudios Ambientales
Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial – República de Colombia
SUBDIRECCIÓN DE ESTUDIOS AMBIENTALES - GRUPO DE ACREDITACIÓN
Código: XXXXXX
Fecha: 31/12/2008
Versión: 01
Página 5 de 11
Determinación de Carbamatos en Suelos, Aguas y Matrices de Residuos por Cromatografía Liquida de
Alto Desempeño (HPLC) con Derivitazación Post-Columna y Detección por Fluorescencia
7.13. Viales de 25 ml con tapa rosca con recubrimiento de teflón o con grafas.
7.14. Micropipeta de desplazamiento positivo de capacidad de 3 a 25 µl (Gilson
Microman o equivalente)
7.15 Filtros nylon de 25 mm de diámetro, 0,45 µm de tamaño de poro desechables
(Alltech Associates # 2047 o equivalente).
8.
CONSIDERACIONES PARA LA TOMA DE MUESTRA
8.1.
Debido a la extrema inestabilidad de los N-methylcarbamatos en medio alcalino,
acuoso, residuo acuoso o lixiviado, se debe preservar inmediatamente después de
la recolección acidificando a pH 4 – 5 con 0,1 N ácido cloroacético.
Almacene las muestras a 4 °C y lejos de la luz solar directa a partir del momento
de la toma de la muestra hasta el análisis. Los N-methylcarbamatos son sensibles
a la hidrólisis alcalina y al calor.
Todas las muestras deben ser extraídas dentro de los 7 días después de la toma
de la muestra y analizadas dentro de los 40 días de la extracción.
8.2.
8.3.
9.
LIMPIEZA DE MATERIAL
Ver protocolo de “Toma y Preservación de Muestras y Limpieza de Material para
Determinación de Plaguicidas”
10.
PREPARACIÓN DE MUESTRAS
10.1. Extracción Aplicable a Aguas Residuales Domesticas, Residuos Industriales
Acuosos y Lixiviados
a. Medir 100 ml de la muestra en un embudo de separación de 250 ml y extraer por
agitación vigorosa por 2 minutos con 30 ml de de cloruro de metileno, repetir la
extracción 2 o más veces.
b. Combine todos los extractos en un matraz volumétrico de 100 ml y diluya a volumen
con cloruro de metileno.
c. Continúe con el paso de limpieza si es necesario, si no continúe con el intercambio de
solvente.
10.2. Extracción Aplicable a Suelos, Sólidos, Lodos y Suspensiones Acuosas
Pesadas
a. Determinación del porcentaje seco de la muestra: en algunos casos es deseable
reportar el resultado en base seca, cuando esto es deseado se debe tomar una
Elaborado por: LMB
Fecha: 10 – 11– 2007
Revisor por:IDEAM
Fecha: 31/12/2008
Aprobado por:
Fecha:
Instituto de Hidrología, Meteorología y Estudios Ambientales
Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial – República de Colombia
SUBDIRECCIÓN DE ESTUDIOS AMBIENTALES - GRUPO DE ACREDITACIÓN
Código: XXXXXX
Fecha: 31/12/2008
Versión: 01
Página 6 de 11
Determinación de Carbamatos en Suelos, Aguas y Matrices de Residuos por Cromatografía Liquida de
Alto Desempeño (HPLC) con Derivitazación Post-Columna y Detección por Fluorescencia
porción de muestra que debe ser pesada al mismo tiempo que la porción usada para
la determinación analítica.
Advertencia: El horno de secado debe estar contenido en una cabina de extracción o
venteo, para evitar contaminación en el área de laboratorio.
Inmediatamente después de pesar la muestra para extracción pese 5 a 10 g de la
muestra en un crisol previamente tarado, determine el contenido de peso seco de la
muestra por secado durante la noche a 105 °C, permita enfriar el crisol en desecador
antes de pesar:
% de peso seco = gramos de muestra seca *100/ gramos de muestra.
b. Inicie la extracción pesando 20 + 0,1 g de la muestra en un erlenmeyer de 250 ml con
tapa de teflón.
c. Añada 50 ml de acetonitrilo y agite por 2 horas en plataforma de agitación (shaker).
d. Permita que la mezcla se sedimente 5 a 10 minutos.
e. Decante el extracto en tubos de centrifuga de 250 ml.
f. Repita dos veces más la extracción con 20 ml de acetonitrilo y una hora de tiempo de
extracción en plataforma de agitación (shaker).
g. Decante y combine todos los extractos.
h. Centrifugue el extracto a 200 rpm por 10 minutos.
i. Cuidadosamente decante el sobrenadante en un matraz volumétrico de 100 ml y
diluya a volumen con acetonitrilo. (Factor de dilución 5).
j. Proceda al paso de intercambio de solvente.
10.3. Extracción Aplicable a Suelos Altamente Contaminados con Sustancias No
Acuosas como Aceites.
a. Determinación del porcentaje seco de la muestra: En algunos casos es deseable
reportar el resultado en base seca, cuando esto es deseado se debe tomar una
porción de muestra que debe ser pesada al mismo tiempo que la porción usada
para la determinación analítica.
Advertencia: El horno de secado debe estar contenido en una cabina de extracción o
venteo, para evitar contaminación en el área de laboratorio.
Inmediatamente después de pesar la muestra para extracción pese 5 a 10 g de la
muestra en un crisol previamente tarado, determine el contenido de peso seco de
Elaborado por: LMB
Fecha: 10 – 11– 2007
Revisor por:IDEAM
Fecha: 31/12/2008
Aprobado por:
Fecha:
Instituto de Hidrología, Meteorología y Estudios Ambientales
Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial – República de Colombia
SUBDIRECCIÓN DE ESTUDIOS AMBIENTALES - GRUPO DE ACREDITACIÓN
Código: XXXXXX
Fecha: 31/12/2008
Versión: 01
Página 7 de 11
Determinación de Carbamatos en Suelos, Aguas y Matrices de Residuos por Cromatografía Liquida de
Alto Desempeño (HPLC) con Derivitazación Post-Columna y Detección por Fluorescencia
la muestra por secado durante la noche a 105 °C, permita enfriar el crisol en
desecador antes de pesar:
% de peso seco = gramos de muestra seca *100/ gramos de muestra.
b. Inicie la extracción pesando 20 + 0,1 g de la muestra en un erlenmeyer de 250 ml con
tapa de teflón.
c. Añada 60 ml de hexano y agite por 1 hora en plataforma de agitación (shaker).
d. Añada 50 ml de acetonitrilo y agite por 3 horas en plataforma de agitación (shaker).
e. Permita que la mezcla se sedimente 5 a 10 minutos.
f. Decante las capas de solvente en un embudo de separación de 250 ml.
g. Drene la capa inferior de acetonitrilo a través de papel filtro en un matraz de 100 ml.
h. Añada 60 ml de hexano y 50 ml de acetonitrilo a la muestra en el matraz de extracción
y agite por 1 horas en plataforma de agitación (shaker).
i. Permita que la mezcla se sedimente 5 a 10 minutos.
j. Decante las capas de solvente en un embudo de separación conteniendo el hexano
de la primera extracción.
k. Agite el embudo de separación por 2 minutos, permita que las fases se separen.
l. Drene el acetonitrilo a través de papel filtro en un matraz volumétrico de 100 ml y
diluya a volumen con acetonitrilo. (Factor de dilución 5).
m. Proceda al paso de intercambio de solvente.
10.4. Extracción Aplicable a Líquidos No Acuosos tales como Aceites
a. Inicie la extracción pesando 20 + 0,1 g de la muestra en un erlenmeyer de 250 ml,
transfiera a un embudo de separación de 125 ml.
b. Añada 40 ml de hexano y 25 ml de acetonitrilo y agite vigorosamente por 2 minutos.
c. Permita que las fases se separen.
d. Drene la capa inferior de acetonitrilo a través de papel filtro en un matraz de 100 ml.
e. Añada 25 ml de acetonitrilo al embudo de separación y agite vigorosamente por 2
minutos.
f. Permita que las fases se separen.
g. Drene la capa inferior de acetonitrilo a través de papel filtro en un matraz de 100 ml.
h. Repita la extracción con otros 25 ml de acetonitrilo al embudo de separación y agite
vigorosamente por 2 minutos.
i. Permita que las fases se separen.
j. Drene el acetonitrilo a través de papel filtro en un matraz volumétrico de 100 ml y
diluya a volumen con acetonitrilo. (Factor de dilución 5).
k. Proceda al paso de intercambio de solvente.
Elaborado por: LMB
Fecha: 10 – 11– 2007
Revisor por:IDEAM
Fecha: 31/12/2008
Aprobado por:
Fecha:
Instituto de Hidrología, Meteorología y Estudios Ambientales
Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial – República de Colombia
SUBDIRECCIÓN DE ESTUDIOS AMBIENTALES - GRUPO DE ACREDITACIÓN
Código: XXXXXX
Fecha: 31/12/2008
Versión: 01
Página 8 de 11
Determinación de Carbamatos en Suelos, Aguas y Matrices de Residuos por Cromatografía Liquida de
Alto Desempeño (HPLC) con Derivitazación Post-Columna y Detección por Fluorescencia
10.5
Limpieza
a. Tome 20 ml del extracto en un tubo o vial conteniendo 100 µL de etilenglicol. Lleve el
vial a un bloque de calentamiento a 50 °C y evapore el extracto bajo una corriente de
nitrógeno (en una cabina de extracción) únicamente el etilenglicol debe permanecer.
b. Disuelva el residuo de etilenglicol en 2 ml de metanol.
c. Pase el extracto a través de un cartucho de fase reversa C18 prehumedecido y
colecte el eluato en un tubo de 5 ml.
d. Eluya el cartucho con metanol hasta que un volumen final de 5 ml sea obtenido.
(Factor de dilución 0,25).
e. Usando un filtro de desechable de 0,45 µm, filtre una alícuota del extracto limpio
directamente en un vial apropiado. El extracto esta listo para análisis, proceda con el
paso de determinación.
10.6. Intercambio de Solvente
10.6.1. Intercambio de Solvente Aplicables a los Extractos de Muestras de Agua,
Agua Residual Domestica, Residuos Industriales Acuosos y Lixiviados
a. Tome 10 ml del extracto en un vial o tubo de 10 ml que contiene 100 µl de etilenglicol.
b. Lleve el vial a un bloque de calentamiento a 50°C y evapore suavemente bajo una
corriente de nitrógeno (en una cámara de extracción) hasta que solo permanezca el
etilenglicol.
c. Añada metanol gota a gota hasta completar un volumen total de 1 ml (dilución 0,1).
d. Usando filtro de desechables de 0,45 µm filtre el extracto y llévelo a un vial y esta listo
para análisis.
e. Proceda con el paso de determinación.
10.6.2. Intercambio de Solvente Aplicables a los Extractos de Muestras de Suelos,
Sólidos, Lodos, Suspensiones Altamente Acuosas y Líquidos No Acuosos
a. Eluya 15 ml del extracto de acetonitrilo a través de un cartucho de fase reversa C18,
prelavado con 5 ml de acetonitrilo.
b. Descarte los 2 primeros ml de eluato y colecte el remanente.
c. Tome 10 ml del eluato en un tubo conteniendo 100 µl de etilenglicol.
d. Lleve el tubo a un bloque de calentamiento a 50°C y evapore el extracto lentamente
bajo una corriente de nitrógeno (en una cabina de extracción) hasta que permanezca
solo el etilenglicol.
e. Añada metanol gota a gota hasta completar un volumen total de 1 ml (dilución 0,1).
Elaborado por: LMB
Fecha: 10 – 11– 2007
Revisor por:IDEAM
Fecha: 31/12/2008
Aprobado por:
Fecha:
Instituto de Hidrología, Meteorología y Estudios Ambientales
Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial – República de Colombia
SUBDIRECCIÓN DE ESTUDIOS AMBIENTALES - GRUPO DE ACREDITACIÓN
Código: XXXXXX
Fecha: 31/12/2008
Versión: 01
Página 9 de 11
Determinación de Carbamatos en Suelos, Aguas y Matrices de Residuos por Cromatografía Liquida de
Alto Desempeño (HPLC) con Derivitazación Post-Columna y Detección por Fluorescencia
f.
Usando filtro de desechable de 0,45 µm, filtre el extracto llévelo a un vial y esta listo
para análisis.
g. Proceda con el paso de determinación.
11. PROCEDIMIENTO ANALÍTICO
Analice las muestras de acuerdo con las condiciones cromatográficas dadas a
continuación:
11.1. Condiciones Cromatográficas
Solvente A: Agua libre de orgánicos acidificada con 0,4 ml de ácido fosfórico por litro de
agua.
Solvente B: Metanol/Acetonitrilo (1:1, v/v)
Flujo: 1 ml/min
Volumen de inyección: 20 µL
Programación de liberación de solvente
Tiempo ( min)
Función
Valor
Duración
Archivo
0
FR
1
0
0
%B
10%
0
0,02
%B
80%
20
0
20,02
%B
100%
5
0
25,02
%B
100%
5
0
30,02
%B
10%
3
0
33,02
%B
10%
7
0
36,02
ALARMA
0,01
0
11.2. Parámetros de Hidrólisis Post-Columna
Solución: Hidróxido de sodio acuoso 0,05 N
Flujo: 0,7 ml/min
Temperatura: 95 °C
Tiempo de residencia: 35 segundos (reactor de 1 ml)
11.3. Parámetros de Derivatización Post-Columna
Solución: o-phthalaldehyde/2-mercaptoetanol
Flujo: 0,7 ml/min
Temperatura: 40 °C
Tiempo de residencia: 25 segundos (coil de 1 ml)
Elaborado por: LMB
Fecha: 10 – 11– 2007
Revisor por:IDEAM
Fecha: 31/12/2008
Aprobado por:
Fecha:
Instituto de Hidrología, Meteorología y Estudios Ambientales
Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial – República de Colombia
SUBDIRECCIÓN DE ESTUDIOS AMBIENTALES - GRUPO DE ACREDITACIÓN
Código: XXXXXX
Fecha: 31/12/2008
Versión: 01
Página 10 de 11
Determinación de Carbamatos en Suelos, Aguas y Matrices de Residuos por Cromatografía Liquida de
Alto Desempeño (HPLC) con Derivitazación Post-Columna y Detección por Fluorescencia
11.4. Parámetros del Fluorómetro
Celda: 10 µL
Longitud de onda de excitación: 340 nm
Longitud de onda de emisión: 418 nm corte de filtro
Longitud de onda de sensibilidad: 0,5 µA
PMT voltaje: -800 V
Constante de tiempo: 2 segundos
Si las señales de las áreas de los picos de las muestras exceden el rango de calibración
del sistema, diluya el extracto como sea necesario y re-analice el extracto diluido.
11.5. CALIBRACIÓN
a. Analice un blanco de solvente (20 µL de etanol) para asegurar que el sistema está
limpio.
b. Analice los estándares de calibración empezando con el de 0,5 mg/L y terminando con
el de 5 mg/L. Si la desviación estándar relativa (%DSR) del factor de respuesta (FR)
no excede el 20% el sistema esta calibrado y las muestras se puede proceder a
analizarlas. Si el %DSR para un analito excede el 20% revise el sistema y re-calibre
con soluciones preparadas frescas.
c. Usando la calibración establecida con los factores medios de respuesta, chequee la
calibración del instrumento al comienzo de cada día usando el estándar mixto de 2
mg/L, si la concentración de cada analito cae en el rango de 1,70 a 2,30 mg/L (dentro
del 15% del valor verdadero), el instrumento es considerado calibrado y se puede
proceder al análisis de las muestras. Si el valor esta fuera del rango el instrumento
debe ser recalibrado.
d. Después de cada 10 muestras analizadas o menos, se debe analizar el estándar de 2
mg/L para asegurar que los tiempos de retención y factores de respuesta están dentro
de los límites aceptables.
12. METODOLOGÍA DE CÁLCULO
12.1. Cálculos del Factor de Respuesta, RF
Calcule cada factor de respuesta así:
RF = Concentración del estándar / área de la señal
Media RF = (Sumatoria RFi )/ 5
% RSD de Media RF = {[(Sumatoria RFi – RF media)2 ]1/2 / 4} *100 / RF media
Elaborado por: LMB
Fecha: 10 – 11– 2007
Revisor por:IDEAM
Fecha: 31/12/2008
Aprobado por:
Fecha:
Instituto de Hidrología, Meteorología y Estudios Ambientales
Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial – República de Colombia
SUBDIRECCIÓN DE ESTUDIOS AMBIENTALES - GRUPO DE ACREDITACIÓN
Código: XXXXXX
Fecha: 31/12/2008
Versión: 01
Página 11 de 11
Determinación de Carbamatos en Suelos, Aguas y Matrices de Residuos por Cromatografía Liquida de
Alto Desempeño (HPLC) con Derivitazación Post-Columna y Detección por Fluorescencia
12.2. Cálculo de la Concentración
µg/g ó mg/L = RF media * área de la señal * factor de dilución
13. ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD ANALÍTICA
13.1. Antes de procesar las muestras el analista debe demostrar a través del análisis del
blanco para cada tipo de matriz que toda la vidriería y reactivos están libres de
interferencias. Cada vez que halla un cambio de reactivos el blanco debe ser
procesado para verificar su adecuado desempeño.
13.2. Se debe preparar y analizar una solución de chequeo con cada grupo de muestras.
Prepare esta solución de 2 mg/L a partir del estándar mixto de 40 mg/L, el rango
de respuesta aceptable es de 1,7 a 2,3 mg/L para cada analito.
13.3. La interferencia negativa que se presenta debido a la limitación de la fluorescencia
puede ser determinada por adiciones conocidas y comparadas contra la respuesta
esperada.
13.4. Confirme los analitos detectados por sustitución del hidróxido de sodio ophthaldehyde en el sistema de reacción post-columna con agua desionizada y
analizando el extracto sospechoso. La fluorescencia continuada indicará que hay
presencia de una interferencia positiva.
14. PROPUESTA DE VALIDACIÓN DEL MÉTODO
Aseguramiento de la Calidad y Estandarización de Métodos Cromatográficos.
15. BIBLIOGRAFÍA
N-methyl carbamates by High performance liquid chromatography (HPLC). USEPA
Method 8318
Elaborado por: LMB
Fecha: 10 – 11– 2007
Revisor por:IDEAM
Fecha: 31/12/2008
Aprobado por:
Fecha: