Aislamiento e identificación molecular de cepas bacterianas procedentes de suelos industriales contaminados P. García*, P. Pinilla, M. Pirredda, M. Gil-Díaz, M.C. Lobo Instituto Madrileño de Investigación y Desarrollo Rural, Agrario y Alimentario (IMIDRA). Finca Experimental “El Encín” A-2, Km 38,2 28800-Alcalá de Henares, Madrid, España. *[email protected] La recuperación biológica de suelos contaminados debido a la actividad industrial requiere del análisis previo de los microorganismos presentes en el emplazamiento a remediar así como del estudio de su potencial degradativo. El objetivo de este trabajo es el aislamiento e identificación por métodos moleculares de cepas bacterianas presentes en cinco emplazamientos afectados por actividades industriales, contaminados por hidrocarburos y metales pesados. El aislamiento de cepas bacterianas degradadoras de hidrocarburos se llevó a cabo mediante incubación de 4 g de muestras de suelo en medio MM a 30ºC durante 15 días. A partir de estas suspensiones se realizaron diluciones seriadas y se sembraron en placas con medio MM suplementado con diesel (0,2% v/v) así como en placas con medio MM y como fuente de carbono y energía se agregó naftaleno, fenantreno y antraceno (2ppm). En total se aislaron 16 colonias, algunas con idéntica morfología en cultivo en placa. Para la diferenciación de ribotipos procedentes de los aislamientos se realizó la amplificación selectiva de la región variable V3 del ADNr 16s con los cebadores 341FGC y 907R y la separación de los productos de PCR por electroforesis en gradiente desnaturalizante (DGGE). Del conjunto de muestras analizadas se encontraron 8 patrones diferenciados. A partir del ADN de cada cepa diferenciada se amplificó el gen ARNr 16s con los cebadores universales 27F y 1392R y los productos de amplificación se secuenciaron y compararon con otras secuencias en cuatro bases de datos. Con índices de identidad del 99-100% se determinaron las especies pertenecientes a bProteobacteria: Ralstonia picketti, Ralstonia eutropha, Massilia aerilata y Achromobacter xilosoxidans. En la clase g-Proteobacteria se identificaron Pseudomonas stutzeri, Acinetobacter junii y Enterobacter cloacae y para el phylum Firmicutes se determinó Staphylococcus epidermis. Se discute el predominio de miembros del phylum Proteobacteria asociados a suelos contaminados con hidrocarburos así como el potencial biorremediador de Ralstonia picketti y Ralstonia eutropha capaces, respectivamente, de crecer en suelos contaminados por metales pesados y degradar componentes aromáticos clorados.