BD Aeromonas Yersinia Agar

INSTRUCCIONES DE USO –
MEDIOS EN PLACA LISTOS
PARA USAR
PA-254056.06
Rev.: April 2013
BD Yersinia Selective Agar (CIN Agar)
BD Aeromonas Yersinia Agar
USO PREVISTO
BD Yersinia Selective Agar (=CIN Agar, Cefsulodin-Irgasan-Novobiocin Agar) (agar selectivo
para Yersinia BD: agar CIN [Cefsulodina-Irgasan-Novobiocina]) es un medio selectivo de
diferenciación para el aislamiento de Yersinia enterocolitica y BD Aeromonas Yersinia Agar
(agar para Aeromonas y Yersinia BD) es un medio selectivo de diferenciación para el
aislamiento de Yersinia enterocolitica y Aeromonas spp. a partir de diversas muestras clínicas
y no clínicas.
PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO
Método microbiológico.
BD Yersinia Selective Agar fue descrito por primera vez por Schiemann como una alternativa
al agar MacConkey y otros medios comúnmente utilizados para el aislamiento de Yersinia
enterocolitica, un agente causante de gastroenteritis1. Se ha determinado que este medio es
superior a los agares MacConkey, SS, CAL y Y2. BD Aeromonas Yersinia Agar es una
modificación de BD Yersinia Selective Agar que favorece el crecimiento de no sólo la
especie Yersinia enterocolitica sino también de Aeromonas (que también puede causar
enteritis) dado que presenta un contenido reducido de cefsulodina3,4.
En ambos medios, las peptonas proporcionan nutrientes. La fermentación de manitol en
presencia de rojo neutro crea el aspecto característico de “ojo de toro” de las colonias de Y.
enterocolitica: incoloras con centros de color rojo en ambos medios. La inhibición selectiva de
organismos gram negativos y gram positivos se obtiene mediante cristal violeta, desoxicolato
sódico y los agentes antimicrobianos: cefsulodina, Irgasan (Triclosan) y novobiocina. En BD
Aeromonas Yersinia Agar, las especies Aeromonas producen colonias pálidas con centro
rojo carmesí, similar a Yersinia. Ambos organismos pueden diferenciarse mutuamente por
medio de la reacción de oxidasa (positiva sólo para Aeromonas)3-5.
BD Yersinia Selective Agar y BD Aeromonas Yersinia Agar también pueden utilizarse para
el aislamiento de las especies Yersinia diferentes de Y. enterocolitica, por ejemplo, para Y.
pseudotuberculosis5.
REACTIVOS
Fórmulas* por litro de agua purificada
BD Yersinia Selective Agar
Digerido pancreático de gelatina
Digerido péptico de tejido animal
Extracto de carne bovina
Extracto de levadura
Manitol
Piruvato sódico
Cloruro sódico
Desoxicolato de sodio
10,0 g
5,0
5,0
2,0
20,0
2,0
1,0
0,5
Sulfato magnésico
Cristal violeta
Rojo neutro
Cefsulodina
Irgasan
Novobiocina
Agar
0,001 g
0,001
0,03
0,015
0,004
0,0025
12,0
pH 7,4 ± 0,2
En lugar de 0,015 g de cefsulodina en BD Yersinia Selective Agar, BD Aeromonas Yersinia
Agar contiene sólo 0,004 g de cefsulodina por litro de medio.
*Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.
PA-254056.06
-1-
PRECAUCIONES
. Solamente para uso profesional.
No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración,
deshidratación, agrietamientos o cualquier otro signo de deterioro.
Consultar los procedimientos de manipulación aséptica, riesgos biológicos y desecho del
producto usado en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO.
ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura entre 2 y 8 °C,
envueltas en su envase original, hasta justo antes de usarlas. Evitar la congelación y el
calentamiento excesivo. Las placas pueden inocularse hasta su fecha de caducidad (ver la
etiqueta en el paquete) e incubarse durante los períodos de incubación recomendados.
Las placas de grupos de 10 placas ya abiertos pueden usarse durante una semana siempre
que se almacenen en un lugar limpio a una temperatura entre 2 y 8 °C.
CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO
Inocular muestras representativas con las cepas siguientes (para obtener los detalles, véase el
documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Incubar las placas en atmósfera
aerobia a 25 ± 2 °C o 35 ± 2 °C y efectuar la lectura después de 20 – 24 y 42 – 48 h.
Cepas
Aeromonas hydrophila
ATCC 7966
Yersinia enterocolitica
ATCC 9610
Escherichia coli ATCC 25922
Enterococcus faecalis
ATCC 29212
Proteus mirabilis ATCC 14153
Pseudomonas aeruginosa ATCC
27853
Staphylococcus aureus
ATCC 25923
Sin inocular
BD Yersinia Selective Agar
(CIN Agar)
Inhibición de parcial a completa
Crecimiento de bueno a
excelente; colonia rosa pálido
con un centro de color rojo
oscuro (aspecto característico de
“ojo de toro”)*
Inhibición completa.
Inhibición de parcial a completa
Inhibición de parcial a completa
Inhibición de parcial a completa
Inhibición de parcial a completa
BD Aeromonas Yersinia Agar
Crecimiento de medio a bueno;
colonia de incolora a rosa pálido
con un centro de rosa a rojo
Crecimiento de bueno a
excelente; colonia rosa pálido
con un centro de color rojo
oscuro (aspecto característico de
“ojo de toro”)*
Inhibición completa.
Inhibición de parcial a completa
Inhibición de parcial a completa
Inhibición de parcial a completa,
crecimiento medio aceptable
Inhibición de parcial a completa
Rosa claro, ligeramente opalescente
* Pueden presentar un color completamente rosa después de 42 – 48 h de incubación.
PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados
BD Yersinia Selective Agar (CIN Agar) o BD Aeromonas Yersinia Agar, ambos
suministrados en placas Stacker de 90 mm. Controladas microbiológicamente.
Material no suministrado
Medios de cultivo auxiliar, reactivos y el equipo de laboratorio que se requiera.
Tipos de muestras
BD Yersinia Selective Agar es un medio selectivo y de diferenciación para el aislamiento de
Yersinia enterocolitica y BD Aeromonas Yersinia Agar es un medio selectivo y de
diferenciación para el aislamiento de especies de Aeromonas y Yersinia enterocolitica a partir
de muestras fecales o torundas rectales humanas (véase también CARACTERÍSTICAS DE
RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO).
PA-254056.06
-2-
Procedimiento de análisis
Extender las muestras tan pronto como sea posible después de recibirlas en el laboratorio. La
placa de extensión se utiliza principalmente para aislar los cultivos puros de las muestras con
flora mixta. Si, por el contrario, el material se cultiva directamente empleando una torunda,
hacerla girar en una sección pequeña cercana al borde, extendiendo luego a partir de esta
área inoculada.
Las especies Aeromonas y Yersinia crecen bien a una temperatura entre 25 y 37 °C. La
temperatura inferior es óptima para Yersinia y está recomendada para aislamiento primario.
Incubar las placas a 25 – 32 °C durante 24 – 48 h.
También debe inocularse con la muestra (e incubarse a 35 ± 2 °C) un medio menos selectivo,
tal como BD MacConkey II Agar para la detección de otros patógenos involucrados en la
infección.
En algunas ocasiones, tal vez sea necesario realizar un procedimiento de “enriquecimiento en
frío” para el aislamiento de Yersinia enterocolitica a partir de muestras fecales y otros
materiales tales como alimentos: Inocular alrededor de 1 gramo de muestra en 8 – 12 ml de
solución salina tamponada con fosfato (pH 7,2) y mantener a 4 °C durante un máximo de 21
días5,6 . Se puede realizar el enriquecimiento de Aeromonas en agua de peptona alcalina4,7.
Subcultivar periódicamente desde el enriquecimiento correspondiente en las placas de
cualquiera de los medios descritos en este documento, realizando la extensión para obtener
aislamiento. Incubar las placas como se detalla anteriormente.
Resultados
Las colonias características de Yersinia enterocolitica presentarán centros de color rojo intenso
rodeadas de un borde pálido y transparente que le da el aspecto de un “ojo de toro” en BD
Yersinia Selective Agar y BD Aeromonas Yersinia Agar después de 24 horas de incubación.
Después de 42 – 48 h de incubación, a menudo presentan un color completamente rosa.
Yersinia pseudotuberculosis por lo general carece de la zona transparente alrededor de las
colonias. Aeromonas produce colonias más pálidas, que también tienen un centro rojo carmesí
y son positivas a la oxidasa. Aeromonas se pueden diferenciar fácilmente de Yersinia y otras
Enterobacteriaceae mediante una prueba de oxidasa estándar (sólo Aeromonas spp. dará
resultado positivo). Se requiere confirmación bioquímica y serológica para obtener una
identificación completa de los aislados presuntivos.
CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
BD Yersinia Selective Agar (CIN) y BD Aeromonas Yersinia Agar son adecuados para el
aislamiento de Yersinia enterocolitica a partir de muestras fecales humanas y otros
materiales1,2,5-8. Además, BD Aeromonas Yersinia Agar se utiliza para el aislamiento de
Aeromonas3-5,7,8.
Aunque Yersinia puede recuperarse mediante extensión directa en placa, las muestras con
recuentos viables bajos pueden necesitar enriquecimiento en frío (4°C) en solución tamponada
con fosfato5,7. Sin embargo, el enriquecimiento en frío tal vez no sea un método práctico debido
a tiempo de incubación prolongado y porque selecciona las cepas no patógenas de Y.
enterocolitica y otras especies de Yersinia5.
El enriquecimiento de Aeromonas en agua de peptona alcalina puede resultar útil para aislar las
poblaciones de organismos que liberan poca cantidad de organismos, por ejemplo, de pacientes
portadores o en convalecencia4,7.
En ambos medios descritos en este documento, también crecerán otras especies de Yersinia,
tal como Y. pseudotuberculosis, Y. frederiksenii y Y. intermedia 5. El potencial patógeno de los
dos últimos organismos es causa de polémica, pero, en la actualidad no se deben desestimar
los aislados5.
Se recomienda la fórmula de BD Aeromonas Yersinia Agar y no BD Yersinia Selective Agar
para el aislamiento de Yersinia pestis5.
Las especies Enterobacteriaceae diferentes de Yersinia pueden crecer en estos medios, en
especial la Citrobacter. Serratia y Citrobacter no siempre se pueden diferenciar fiablemente de
Yersinia por la morfología de las colonias exclusivamente. Por tanto, son necesarias pruebas
PA-254056.06
-3-
bioquímicas y serológicas para obtener la confirmación e identificación completas de los
aislados.
Determinadas cepas de Aeromonas pueden producir un crecimiento débil en BD Aeromonas
Yersinia Agar. Se recomienda incluir medios de aislamiento adicionales para la recuperación
de la población total de estos organismos.
REFERENCIAS
1. Schiemann, D.A. 1979. Synthesis of a selective agar medium for Yersinia enterocolitica.
Can. J. Microbiol. 25:1298-1304.
2. Head, C.B., D.A. Whitty, and S. Ratnam. 1982. Comparative study of selective media for
recovery of Yersinia enterocolitica. J. Clin. Microbiol. 16:615-621.
3. Altorfer, R., et al. 1985. Growth of Aeromonas spp. on cefsulodin-irgasan-novobiocin agar
selective for Yersinia enterocolitica. J. Clin. Microbiol. 22: 478-480.
4. Abbott, S.L. 2003. Aeromonas. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller,
and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for
Microbiology, Washington, D.C.
5. Bockemühl, J., and J.D. Wong. 2003. Yersinia. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H.
Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed.
American Society for Microbiology, Washington, D.C.
6. Weissfeld, A.S. and A.C. Sonnenwirth. 1982. Rapid isolation of Yersinia spp. from feces. J.
Clin. Microbiol. 15:508-510.
7. Kist, M., et al. 2000. Infektionen des Darmes. In: Mauch, H., Lüttiken, R., and S. Gatermann
(eds.): MiQ - Qualitätsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik, vol. 9.
Urban & Fischer, Munich, Germany.
8. Downes, F.P., and K. Ito. 2001. Compendium of methods for the microbiological examination
of foods. 4th edition. American Public Health Association (APHA). Washington, D.C. USA.
ENVASE/DISPONIBILIDAD
BD Yersinia Selective Agar (CIN)
Nº de cat. 254056
Medios en placa listos para usar, 20 placas
Nº de cat. 254088
Medios en placa listos para usar, 120 placas
BD Aeromonas Yersinia Agar
Nº de cat. 254443
Medios en placa listos para usar, 20 placas
INFORMACIÓN ADICIONAL
Para obtener más información, diríjase a su representante local de BD.
Becton Dickinson GmbH
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
[email protected]
http://www.bd.com
http://www.bd.com/europe/regulatory/
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection
BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company. © 2013 BD
PA-254056.06
-4-