“Estrategias para incrementar la producción de proteínas heterólogas en plantas basadas en la modificación en su capacidad de plegado y de secreción.” Director: Dra. Silvana Petruccelli Período: 2008-2011 Institución otorgante: ANPCyT Integrantes: Lic. Fabricio Lareu Dra. Silvina Mangano Bqca. Angela Candreva Objetivos Las proteínas recombinantes son ampliamente utilizadas en terapia, profilaxis, diagnóstico y en una gran variedad de procesos industriales, por lo que es indispensable contar con métodos eficientes de producción. Los sistemas de producción deben ser capaces de realizar las modificaciones postraduccionales requeridas para generar un producto activo, lo que implica en muchos casos, que la proteína de interés deba dirigirse a la vía secretoria. La sobreexpresión de una proteína secretoria se encuentra limitada por la capacidad de las maquinarias de plegamiento y de exportación de la célula; en aquellos casos que estos mecanismos se saturan, se activa la "unfolded protein response" (UPR) que incrementa la expresión de chaperonas, aunque también inhibe la síntesis de proteínas y estimula su degradación, por lo que la manipulación de esta respuesta es un problema delicado. El objetivo general de este proyecto es introducir modificaciones en células vegetales que permitan mejorar su capacidad de plegamiento y secreción de proteínas heterólogas, con el objetivo final de producir alguna/s línea/s celular/es mejoradas en su capacidad de producción de proteínas de interés. Las estrategias planteadas en este proyecto consisten en: 1-La expresión de chaperonas de origen heterólogo, en particular una proteína disulfuro isomerasa de mamífero y análisis del efecto en la expresión de dos proteínas reporteras. Esta estrategia se basa en evidencias que indican que la maquinaria de plegado sería específica de proteínas. 2- La expresión de factores de transcripción y otras proteínas que modifiquen la respuesta UPR. En este caso se utilizarán cuatro factores de transcripción bZIP de arabidopsis vinculados a UPR y una proteína heat shock propia de semillas en desarrollo. Los niveles de expresión de estos genes en semillas en desarrollo son más elevados que en otros tejidos. 3-Se analizará también la capacidad de una globulina de reserva de semilla de inducir la maquinaria plegado y secreción en hojas. Estas estrategias serán estudiadas empleando plantas transgénicas de tabaco y células BY2 que expresan un anticuerpo monoclonal y una proteína secretoria fluorescente (ambas usadas como reporteras). Si alguna/s de estas estrategias resulta/n exitosa/s se obtendrán líneas celulares de tabaco modificadas, cuya capacidad de producción de otras proteínas secretorias de interés será también analizada.