estudio de plaquetas por citometría de flujo

ESTUDIO DE PLAQUETAS
POR CITOMETRÍA DE FLUJO
Patricia Rodríguez Domínguez
7 de Febrero 2015
SOCIEDAD VENEZOLANA DE HEMATOLOGÍA
EDUCACIÓN MÉDICA CONTÍNUA
DECLARACIÓN DE POTENCIAL CONFLICTO DE INTERESES
Conferencia: ESTUDIO DE PLAQUETAS POR CITOMETRÍA DE FLUJO
Conferencista: Patricia Rodríguez Domínguez.
ITEMS
CASA COMERCIAL
Acciones
NO
Sueldo / Honorarios profesionales
NO
Consultorías o asesorías
NO
Fondos para investigación
NO
Becas
NO
Testimonios
NO
Comité de Ética
NO
Invitación a eventos nacionales /internacionales
NO
Con el objeto de asegurar un adecuado balance, independencia, objetividad y rigor científico en todas las actividades de
educación continua de la SVH, los conferencistas deberán declarar a la audiencia si han sido beneficiarios de recursos
financieros de empresas fabricantes o proveedoras de medicamentos, reactivos o material relacionado con su
conferencia durante los últimos 12 meses. La intención de esta declaración es permitir a la audiencia determinar bajo su
propio criterio si la información presentada pudiera estar influenciada por las relaciones o compromisos del expositor.
Láser
Sensor
de
tamaño
FSC
Detectores de Fluorescência
(PMT1, PMT4 etc.)
EN LA PRÁCTICA CLÍNICA RUTINARIA:
-DIAGNÓSTICO DE LA FUNCIÓN PLAQUETARIA: SBS,TG EAG
-TROMBOCITOPENIA INMUNE (AAP)
NO RUTINARIO, DE INVESTIGACIÓN:
-MEDIDA DE LA ACTIVACIÓN PLAQUETARIA
-EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD PROCOAGULANTE
-MONITORIZACIÓN DE LA TROMBOPOYESIS
-SEGUIMIENTO DE LA TERAPIA ANTI-PLAQUETARIA
SBS
CD42b: GP Ib
CD42A: GP IIIa
CD41: GP IIb
CD61: GP IIIa
MEPACRINA: colorante fluorescente específico para los nucleótidos de adenina
Asociadas a AAP: anticuerpos dirigidos contra las
glicoproteínas de la membrana
plaquetaria
y se
clasifican de acuerdo a las estructuras que reconozcan
en :
Aloanticuerpos
frente a alelos específicos ( HPA)
Autoanticuerpos
Glicoproteínas P
(GP)
frente a las glicoproteínas completas
IIb/IIIa (CD41/CD61)
Ib/IX/V(CD42b/CD42a/CD42d)
Ia/IIa (CD49/CD29)
TROMBOCITOPENIA INMUNE PRIMARIA (2009)
AAP
70-80% son detectables
Utilidad en discusión
Demostración de Ac contra Gp específicas*
IIb/IIIa (CD41/CD61) /
70-80%
Ib/IX/V(CD42b/CD42a/CD42d 20-40%
TROMBOCITOPENIA DEBIDA A FÁRMACOS (HIT)
Método Directo: Detección de anticuerpos unidos a la
membrana plaquetaria
Método Indirecto: Detección de anticuerpos circulantes.
MARCADORES:
EXPRESIÓN DEL CD62-P ( P-SELECTINA)
ANTI-PAC-1
DETECCIÓN DE CD63
BASAL
ADP +
CD62P
DETRMINACIÓN DE MICROAGREGADOS DE LEUCOCITO-PLAQUETA
CD14
CUANTIFICACIÓN DE LAS GP IIb/IIIa , LIBRES Y OCUPADOS
A: CN
B: C(+)
C Y D: PRP CON SUERO DE PAC CON HIT
CONTROL SANO
PACIENTE CON PTI
NARANJA DE TIAZOL: COLORANTE
FLUORESCENTE,
AFIN
AL
ARN,
INICIALMENTE
USADO
EN
RETICULOCITOS
AUMENTA 3000 VECES SU INTENSIDAD
DE FLORESCENCIA AL UNIRSE AL ARN
LA CITOMETRÍA DE FLUJO PERMITE EL ACCESO A UNA VARIEDAD
DE INFORMACIÓN RELATIVA A LAS PLAQUETAS, QUE INCLUYE SUS
MOLÉCULAS DE SUPERFICIE , NIVEL DE ACTIVACIÓN, E
INTERACCIÓN
CON
OTROS
ELEMENTOS
SANGUÍNEOS
,
CONVIRTIÉNDOLA
EN
UNA
HERRAMIENTA
EMERGENTE
EXTREMADAMENTE ÚTIL EN EL ANÁLISIS DE DESÓRDENES
ASOCIADOS AL FUNCIONALISMO PLAQUETARIO.
SU APLICABILIDAD EN LA RUTINA DIARIA DE LABORATORIO ESTÁ
LIMITADA POR EL ALTO COSTO DEL EQUIPO Y LOS REACTIVOS ASI
COMO LA NECESIDAD DE UN PERSONAL MUY ESPECIALIZADO,
AUNADO A QUE MUCHAS DE SUS TÉCNICAS AUN SE ENCUENTRAN
POCO ESTANDARIZADAS.
ESTUDIO DE PLAQUETAS
POR CITOMETRÍA DE
FLUJO