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  1. Ninguna Categoria

Cryopreservation of marine

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Cryopreservation of marine‹˜‡”–‡„”ƒ–‡ early-life stages
E. Paredes
Doctoral Thesis
Cryopreservation of marine invertebrate
early-life stages: applications in marine
water quality assessment and aquaculture.
Author: Estefania Paredes Rosendo
Supervisors: Dr. Juan Bellas and Dr. Ricardo Beiras
UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
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CHAPTER2.DEVELOPMENTANDSTANDARDIZATIONOFTHESEAURCHIN
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CHAPTER1.GENERALINTRODUCTION
Contents
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ANNEXES
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200
183
175
159
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3.Publications
2.Resumen
1.Listoffiguresandtables
BIBLIOGRAPHY
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CHAPTER5.GENERALDISCUSSIONANDCONCLUSIONS
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CHAPTER4.DEVELOPMENTOFBIVALVECRYOPRESERVATIONPROTOCOLS ANDAPPLICATIONS 115
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CHAPTER3.SEAURCHINCRYOPRESERVEDEMBRYOSAPPLICATIONS 83
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GeneralIntroduction౹Chapter1౹
xvi
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CHAPTER1.GENERALINTRODUCTION
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
1
FUNDAMENTALSOFCRYOBIOLOGY
2
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1.1
1.GENERALINTRODUCTION
GeneralIntroduction౹Chapter1౹
3
ƒ›…Š‡‹…ƒŽ•Šƒ˜‡„‡‡‹†‡–‹ˆ‹‡†ƒ•Šƒ˜‹‰…”›‘’”‘–‡…–‹˜‡ƒ…–‹‘ǤŠ‡•—……‡••
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Factorstobeconsideredinmarineinvertebratecryopreservation:
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
4
GeneralIntroduction౹Chapter1౹
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UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
5
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b) CPAadditionmethodology
UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
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‘•‘–‹… ’”‡••—”‡ ‘ˆ –Š‡ •‘Ž—–‹‘ ‹•‹†‡ ƒ† ‘—–•‹†‡ –Š‡ …‡ŽŽ ™‹ŽŽ …ƒ—•‡ ƒ ‹‹–‹ƒŽ
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
6
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c) Coolingrate
UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
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™ƒ•”‡’”‘†—…‡†ˆ”‘Mazuretal.(1980)Ǥ
…‘‘Ž‹‰”ƒ–‡•˜ƒ”›™‹†‡Ž›ƒ‘‰†‹ˆˆ‡”‡––›’‡•‘ˆ…‡ŽŽ•ȋ‹‰—”‡ͳǤͳȌǤ
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…‘‘Ž‹‰”ƒ–‡ǤŠ‡’Ž‘–••Š‘™‹‰•—”˜‹˜ƒŽƒ–†‹ˆˆ‡”‡–…‘‘Ž‹‰”ƒ–‡•—•—ƒŽŽ›–ƒ‡–Š‡ˆ‘”
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…”›‘„‹‘Ž‘‰›‹•˜‡”›ƒ…–‹˜‡ƒ†–Š‡•‡‘†‡Ž•™‹ŽŽ’”‘˜‹†‡Š‹‰ŠŽ›—•‡ˆ—Ž‹ˆ‘”ƒ–‹‘–‘
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‘’–‹ƒŽ Ž‘ƒ†‹‰ ‡–Š‘†‘Ž‘‰› ȋƒœ—” ͳͻ͹Ͳǡ ͳͻ͹͹ǡ ƒŠ› ͳͻͺͳǡ ‡‰‰ ʹͲͲ͹ȌǤ
…‡ŽŽǡ –‘‰‡–Š‡” ™‹–Š –Š‡ ƒ••—’–‹‘ ‘ˆ ƒ ‹†‡ƒŽ „‡Šƒ˜‹‘”ǡ ƒŽŽ‘™ ‘†‡Ž‹‰ ƒ –Š‡‘”‡–‹…
‹ƒ…–‹˜‡˜‘Ž—‡ǡ™ƒ–‡”’‡”‡ƒ„‹Ž‹–›ǡ•‘Ž—–‡’‡”‡ƒ„‹Ž‹–›ǡƒ†‘•‘–‹…–‘Ž‡”ƒ…‡‘ˆ–Š‡
GeneralIntroduction౹Chapter1౹
7
Pegg(2007).
UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
‹‰—”‡ ͳǤʹǤ …Š‡ƒ–‹… ”‡’”‡•‡–ƒ–‹‘ ‘ˆ ”ƒ’‹† ƒ† •Ž‘™ …‘‘Ž‹‰ ‘ˆ …‡ŽŽ•Ǥ Š‡ ‰”ƒ’Š ™ƒ• ”‡’”‘†—…‡† ˆ”‘
ʹͲͲ͹ȌǤ
™‹ŽŽ ‘……—” ȋƒœ—” ͳͻ͹Ͳǡ ‡‹„‘ ƒ† ƒœ—” ͳͻ͹ͳǡ ‡‹„‘ et al. ͳͻ͹Ͷǡ ƒœ—” ʹͲͲͶǡ ‡‰‰
ƒ– ™Š‹…Š ‹…‡ —…Ž‡ƒ–‹‘ ‘ˆ –Š‡ ”‡ƒ‹‹‰ •—’‡”…‘‘Ž‡† ‹–”ƒ…‡ŽŽ—Žƒ” ™ƒ–‡” ‘……—”•Ȍǡ ȋ‹‰—”‡ͳǤʹȌǤ…‡”‡ƒ…Š‡†–Š‡‹–”ƒ…‡ŽŽ—Žƒ”—…Ž‡ƒ–‹‘–‡’‡”ƒ–—”‡ȋ–Š‡–‡’‡”ƒ–—”‡
ƒŽŽ‘™…‡ŽŽ•–‘†‡Š›†”ƒ–‡ƒ†‹–”ƒ…‡ŽŽ—Žƒ”™ƒ–‡”™‹ŽŽ„‡…‘‡‹…”‡ƒ•‹‰Ž›•—’‡”…‘‘Ž‡†
‹””‡˜‡”•‹„Ž‡‡„”ƒ‡†‡ˆ‘”ƒ–‹‘•Ǥ–Š‡‘–Š‡”•‹†‡ǡ–‘‘ˆƒ•–…‘‘Ž‹‰”ƒ–‡•™‹ŽŽ‘–
†ƒƒ‰‡ –Š‡ …‡ŽŽ•ǡ ƒ……‘’ƒ›‹‰ ƒ Žƒ”‰‡ ”‡†—…–‹‘ ‹ …‡ŽŽ ˜‘Ž—‡ –Šƒ– …ƒ ’”‘†—…‡
‘‘ •Ž‘™ …‘‘Ž‹‰ ”ƒ–‡• ™‹ŽŽ Ž‡ƒ† –‘ Š‹‰Š …‘…‡–”ƒ–‹‘ ‘ˆ ‡Ž‡…–”‘Ž›–‡• –Šƒ– …ƒ
‘”ƒ–‹‘ȋȌ™Š‹…Š‹•Ž‡–ŠƒŽȋƒœ—”ʹͲͲͶȌǤ
‘ŽŽ‘™‹‰ –Š‹• ’”‘…‡•• –Š‡ …‡ŽŽ ™‹ŽŽ •Ž‘™Ž› †‡Š›†”ƒ–‡ ƒ˜‘‹†‹‰ –Š‡ –‡”ƒŽ …‡
’”‘…‡••†‡’‡†•‘–Š‡…‘‘Ž‹‰”ƒ–‡ƒ†™ƒ–‡”’‡”‡ƒ„‹Ž‹–›ƒ–ƒ‰‹˜‡–‡’‡”ƒ–—”‡ȌǤ
’‘–‡–‹ƒŽ ‹• ”‡†—…‡† –‘ ”‡ƒ…Š –Š‡ –Š‡”‘†›ƒ‹… ‡“—‹Ž‹„”‹— ȋ–Š‡ •’‡‡† ‘ˆ –Š‹•
ˆ”‡‡œ‡ ‡š–‡”ƒŽŽ›Ǥ ‘…‡–”ƒ–‹‘ ‘ˆ •‘Ž—–‡• ‹•‹†‡ –Š‡ …‡ŽŽ ™‹ŽŽ ‹…”‡ƒ•‡ ƒ† –Š‡
•Ž‘‰ƒ•–Š‹•†‹ˆˆ‡”‡…‡‹’‘–‡–‹ƒŽ”‡ƒ‹•ǡ™ƒ–‡”™‹ŽŽ•Ž‘™Ž›Ž‡ƒ˜‡–Š‡…‡ŽŽƒ†
–‡’‡”ƒ–—”‡–Šƒ–Š‡‹…‡‘—–•‹†‡–Š‡…‡ŽŽȋ‡‹•‘etal.ʹͲͲͲǡƒœ—”ʹͲͲͶȌǤ
ˆ”‡‡œ‹‰ ’‘‹– ‹• †‡ˆ‹‡† ƒ• •—’‡”…‘‘Ž‡† ƒ† Šƒ• Š‹‰Š‡” ˜ƒ’‘” ’”‡••—”‡ ƒ– ƒ ‰‹˜‡
ƒ† ™ƒ–‡” ‹•‹†‡ ™‹ŽŽ „‡ —†‡” ‹–• –Š‡”‘†›ƒ‹… ˆ”‡‡œ‹‰ ’‘‹–Ǥ ƒ–‡” „‡Ž‘™ ‹–•
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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–‡’‡”ƒ–—”‡…‘–”‘ŽŽ‡”Ǥ
–Š‡…”›‘„ƒ–ŠǤ‘––‘”‹‰Š–ǣ†‡–ƒ‹Ž‘ˆ–Š‡˜‹ƒŽ•„‡‹‰‹–”‘†—…‡†‹–Š‡…”›‘…Šƒ„‡”Ǥ‘––‘Ž‡ˆ–ǣ†‡–ƒ‹Ž‘ˆ–Š‡
‹‰—”‡ͳǤ͵Ǥ”‡‡œ‡‘–”‘Ž̺…”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘•›•–‡Ǥ‘’ǣ…‘’—–‡”ǡ…‘–”‘ŽŽ‡”ƒ†…”›‘…Šƒ„‡”‹•‹†‡‘ˆ
etal.ʹͲͲͲǡ‡‹„‘ʹͲͲͲȌǤ
–‡’‡”ƒ–—”‡–‘’”‡˜‡–•‹‰‹ˆ‹…ƒ–†‹ˆˆ‡”‡…‡•‹•—”˜‹˜ƒŽƒ‘‰•ƒ’Ž‡•Ǥȋ‡‹•‘
’‘‹– ‘ˆ –Š‡ ‡š–”ƒ…‡ŽŽ—Žƒ” ‡†‹— ƒ† ƒŽŽ •ƒ’Ž‡• •Š‘—Ž† „‡ •‡‡†‡† ƒ– –Š‡ •ƒ‡
’”‘‰”ƒ‡†”ƒ–‡ǤŠ‡•‡‡†‹‰–‡’‡”ƒ–—”‡…Š‘•‡•Š‘—Ž†„‡Ž‘™‡”–Šƒ–Š‡ˆ”‡‡œ‹‰
–Š‡ …‘‘Ž‹‰ ”ƒ–‡ ‹•‹†‡ ‘ˆ –Š‡ …”›‘…Šƒ„‡” ȋ‹‰—”‡ ͳǤ͵Ȍǡ ‹†‡’‡†‡–Ž› ‘ˆ –Š‡
•’‘–ƒ‡‘—•Ž›ƒ–˜‡”›†‹ˆˆ‡”‡––‡’‡”ƒ–—”‡•‹‡ƒ…Š•ƒ’Ž‡ȋ‡‹„‘ʹͲͲͲȌǡ‘†‹ˆ›‹‰
•‘Ž‹† •–ƒ–‡Ȍǡ –Šƒ– ™‘—Ž† …ƒ—•‡ –Š‡ –‡’‡”ƒ–—”‡ ‘ˆ –Š‡ •ƒ’Ž‡ –‘ ”‹•‡ ™Š‡ ‹…‡ ˆ‘”•
‡ˆˆ‡…–•‘ˆ–Š‡Žƒ–‡–Š‡ƒ–‘ˆ…”›•–ƒŽŽ‹œƒ–‹‘ȋŠ‡ƒ–”‡Ž‡ƒ•‡†™Š‡ƒŽ‹“—‹†…Šƒ‰‡•‹–‘ƒ
…‘•‹•–• ‹ ‹†—…‹‰ ‡š–”ƒ…‡ŽŽ—Žƒ” ‹…‡ ˆ‘”ƒ–‹‘ǡ ’”‡˜‡–• –Š‡ ’‘–‡–‹ƒŽŽ› †ƒƒ‰‹‰
”‡•—Ž– ‹ •’‘–ƒ‡‘—•ˆ”‡‡œ‹‰ ȋ‡‹•‘et al. ʹͲͲͲȌǤ Š‡ ’”‘…‡•• ‘ˆ •‡‡†‹‰ǡ ™Š‹…Š
ˆ”‡‡œ‹‰ ’‘‹– ƒ† ”‡ƒ‹• ‹ –Š‡ Ž‹“—‹† •–ƒ–‡ǡ –Š‹• ‹• ƒ —•–ƒ„Ž‡ …‘†‹–‹‘ –Šƒ– …ƒ
•‡–‹‘‡†„‡ˆ‘”‡ǡ•—’‡”…‘‘Ž‡†™ƒ–‡”‹•…‘‘Ž‡†•‡˜‡”ƒŽ†‡‰”‡‡•—†‡”‹–•‘™
d) Seeding
GeneralIntroduction౹Chapter1౹
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‡„”ƒ‡• ƒ”‡ Ž‡•• ˆŽ—‹† ƒˆ–‡” ‡š’‘•—”‡ –‘ ˜‡”› Ž‘™ –‡’‡”ƒ–—”‡•ǡ ‘” …ƒ ‡† —’
ƒ˜‘‹† ˆ—”–Š‡” †ƒƒ‰‡Ǥ Š‹• ‹• ƒŽ•‘ ƒ †‡Ž‹…ƒ–‡ •–‡’ ȋ‡‰‰ ʹͲͲ͹Ȍ •‹…‡ „‹‘Ž‘‰‹…ƒŽ
–Š‡ •‘Ž—–‹‘ ‡‘—‰Š –‘ ƒ…Š‹‡˜‡ ƒ ˆ‹ƒŽ …‘…‡–”ƒ–‹‘ —†‡” –Š‡ –‘š‹…‹–› –Š”‡•Š‘Ž† –‘
‘–Š‡‡š’‘•‡†…‡ŽŽ•Ǥ—‡–‘–Š‡–‘š‹…‹–›‘ˆ–Š‡•ǡ‹–‹•‹’‘”–ƒ––‘”‡‘˜‡‘”†‹Ž—–‡
•™‡ŽŽƒ•™‹–Š–Š‡ƒ††‹–‹‘‘ˆƒǡ–Š‡†‹Ž—–‹‘™‹ŽŽ…ƒ—•‡ƒ•Š”‹Ǧ•™‡ŽŽ’”‘…‡••
g) CPAremoval
‘……—”•Ǥ
–Š‡ ”ƒ’‹† †‹Ž—–‹‘ ‘ˆ –Š‡ ‡†‹ƒ ™Š‡ –Š‡ ‡Ž–‹‰ ‘ˆ ‡š–”ƒ…‡ŽŽ—Žƒ” ‹…‡
…‡ŽŽ•‘”Š‹‰Š‡”’Žƒ–…‡ŽŽ•Ȍǡ’”‘„ƒ„Ž›†—‡–‘–Š‡‘•‘–‹…•Š‘……ƒ—•‡†„›
…Ȍ ƒ’‹† ™ƒ”‹‰ …ƒ „‡ ƒŽ•‘ †ƒƒ‰‹‰ ȋƒ• ˆ‘—† ˆ‘” Š—ƒ ”‡† „Ž‘‘†
™ƒ”‹‰Ž‡ƒ†–‘ƒŠ‹‰Š‡”‡š’‘•—”‡–‹‡–‘•—„œ‡”‘–‡’‡”ƒ–—”‡•Ǥ
ƒ••‘…‹ƒ–‡† ™‹–Š –Š‡ Ž‘‰ ‡š’‘•—”‡ –‹‡ǣ •Ž‘™ …‘‘Ž‹‰ ˆ‘ŽŽ‘™‡† „› •Ž‘™
„Ȍ Ž‘™™ƒ”‹‰…ƒ„‡†ƒƒ‰‹‰ȋƒ•ˆ‘—†ˆ‘”ƒƒŽ‹ƒ•’‡”Ȍ‘•–Ž›
Ž›’Š‘ƒ…‡ŽŽ•ǡ”ƒ–‡„”›‘•ƒ†Ž›’Š‘…›–‡•ȌǤ
‘†‹ˆˆ‡”‡–‹ƒŽ‡ˆˆ‡…–ȋƒ•ˆ‘—†ˆ‘”Š—ƒ•–‡Ǧ…‡ŽŽ•ǡ‘—•‡‡„”›‘•ƒ†
’”‡˜‡–ǡƒ†–Š‡—•‡‘ˆ‡‹–Š‡”•Ž‘™‘”ˆƒ•–™ƒ”‹‰”ƒ–‡••Š‘—Ž†Šƒ˜‡
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‡ˆˆ‡…–•ƒ”‡’‘••‹„Ž‡ȋƒœ—”ʹͲͲͶȌǣ
Š‡ ‡ˆˆ‡…– ‘ˆ ™ƒ”‹‰ ‘ˆ …‡ŽŽ• –Šƒ– Šƒ˜‡ „‡‡ •Ž‘™Ǧ…‘‘Ž‡† ‹• …‘’Ž‡š ƒ† –Š”‡‡
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„‡ „‡‡ˆ‹…‹ƒŽ ȋ™‹ŽŽ ‹Š‹„‹– –Š‡ ”‡…”‹•–ƒŽ‹œƒ–‹‘ ‘ˆ ‹–‡”ƒŽ ‹…‡Ȍǡ ƒ† Ž‡ƒ† –‘ ƒ Š‹‰Š‡”
™Š‹…Š™‡”‡…‘‘Ž‡†–‘‘ˆƒ•–ǡ™‹ŽŽ’”‘„ƒ„Ž›Šƒ˜‡•—ˆˆ‡”‡†ƒ†ˆƒ•–™ƒ”‹‰”ƒ–‡™‹ŽŽ
Š‡ ™ƒ”‹‰ ”ƒ–‡ ™‹ŽŽ †‡’‡† ‹’‘”–ƒ–Ž› ‘ –Š‡ ’”‹‘” …‘‘Ž‹‰ ”ƒ–‡ —•‡†Ǥ ‡ŽŽ•
f) Thawing
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e) Liquidnitrogenconservation
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
10
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MARINEINVERTEBRATECRYOPRESERVATION
UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
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CrassostreagigasŠƒ•„‡‡‹–Š‡•’‘–‘ˆƒ›•–—†‹‡••‹…‡–Š‡‡ƒ”Ž›ͳͻ͹Ͳǯ•ǡ™Š‡”‡ƒ•
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1.1.1
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GeneralIntroduction౹Chapter1౹
11
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ȋʹͲͲͺȌǡŠƒ‘ƒ†‹ƒ‘ȋʹͲͳͳȌ
Reference
UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
„”›‘
ƒ”˜ƒ‡
Mytilustrossulus
„”›‘•
’‡”
Mytilus
galloprovincialis
„”›‘•
„”›‘•
Mytilusedulis
’‡”
‘…›–‡•
Pernacanaliculus
‘…›–‡•
ƒ”˜ƒ‡
„”›‘•
’‡”
‘…›–‡•
Haliotis
diversicolor
’‡”
’‡”
Meretrixlusoria
Ostreaedulis
ƒ”˜ƒ‡
ƒ”˜ƒ‡
Saccrostrea
glomerata
ƒ”˜ƒ‡
•’‡”
„”›‘•
‘…›–‡•
Crassostrea
virginica
’‡”
stage
Developmental
Crassostreagigas
Molluscspecies
Table1.2.”›‘„‹‘Ž‘‰›•–—†‹‡•…ƒ””‹‡†‘—–‹™‹–Š‘ŽŽ—•…•Ǥ
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
ƒ”˜ƒ‡
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ƒ”‡†‡•ƒ†‡ŽŽƒ•ȋʹͲͲͻȌ
†ƒ•etal.ȋʹͲͲ͸Ȍ
†ƒ•etal.ȋʹͲͲͻȌ
†ƒ•etal.ȋʹͲͲͶȌ
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ƒ””‘•etal.ȋͳͻͻ͸ǡͳͻͻ͸„ǡͳͻͻ͹Ȍ
ƒ””‘•etal.ȋͳͻͻ͸ǡͳͻͻ͸„ǡͳͻͻ͹Ȍ
ƒ””‘•etal.ȋͳͻͻ͸ǡͳͻͻ͸„ǡͳͻͻ͹Ȍ
ƒ””‘•etal.ȋͳͻͻ͸ǡͳͻͻ͸„ǡͳͻͻ͹Ȍ
ƒ””‘•etal.ȋͳͻͻ͸ǡͳͻͻ͸„ǡͳͻͻ͹Ȍ
—”‘—”ƒȋͳͻͺͻȌ
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•ƒŠ‹ƒƒ†ƒƒŠƒ•Š‹ȋͳͻ͹ͺȌǡ
ƒ‘˜ƒetal.ȋͳͻͺͺȌǡ
ƒ‹†‡‘etal.ȋͳͻͻͳǡͳͻͻͺȌ
•ƒŠ‹ƒƒ†ƒƒŠƒ•Š‹ȋͳͻ͹ͺȌǡƒ‹†‡‘etal.ȋͳͻͻͳǡ
ͳͻͻͺȌ
•ƒŠ‹ƒƒ†ƒƒŠƒ•Š‹ȋͳͻ͹ͻȌ
•ƒŠ‹ƒƒ†ƒƒŠƒ•Š‹ȋͳͻ͹ͺȌ
•ƒŠ‹ƒƒ†ƒƒŠƒ•Š‹ȋͳͻ͹ͺȌ
Reference
UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
„”›‘•
ƒ”˜ƒ‡
‘…›–‡•
‘…›–‡•
Paracentrotuslividus
’‡”
EvechinusChloroticus
’‡”
„”›‘•
Strongulocentrotus
drobachiensis
‘…›–‡•
’‡”
ƒ”˜ƒ‡
Tetrapigusniger
’‡”
’‡”
Loxechinusalbus
Pseudocentrotus
pulcherrimus
’‡”
ƒ”˜ƒ‡
Anthocidariscrassispina
„”›‘
Strongylocentotus
intermedius
ƒ”˜ƒ‡
ƒ”˜ƒ‡
Strongylocentrotusnudus
„”›‘
stage
Developmental
Hemicentrotuspulcherrimus
Echinoidspecies
Table1.3.”›‘„‹‘Ž‘‰›•–—†‹‡•…ƒ””‹‡†‘—–™‹–Š‡…Š‹‘‹†•Ǥ
GeneralIntroduction౹Chapter1౹
12
FUNDAMENTALSOFECOTOXICOLOGY
13
Š‡•–—†›‘ˆ–Š‡”‡Žƒ–‹‘•Š‹’„‡–™‡‡–Š‡†‘•‡ȋ‡ƒ•—”‡‘ˆ–Š‡ƒ‘—–‘ˆ…Š‡‹…ƒŽ
UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
–‘š‹…ƒ– ƒ† –Š‡ ”‡•’‘•‡ ‘ˆ ƒ „‹‘Ž‘‰‹…ƒŽ ˜ƒ”‹ƒ„Ž‡ǡ …‘•–‹–—–‡• –Š‡ …‡–”ƒŽ ’ƒ”– ‘ˆ
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(2002).
‹‰—”‡ͳǤͶǤ”‹…‹’ƒŽ…‘’‘‡–•ƒ†ƒ‹•‘ˆ…‘–‘š‹…‘Ž‘‰›Ǥ‹‰—”‡”‡’”‘†—…‡†fromWright&Welbourn
”‹‰Š–ƒ†‡Ž„‘—”ʹͲͲʹȌȋ‹‰—”‡ͳǤͶȌǤ
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•‘—”…‡• ‘ˆ ’‘–‡–‹ƒŽŽ› Šƒ”ˆ—Ž …Š‡‹…ƒŽ• ȋƒ† –Š‡‹” ”‡‰—Žƒ–‹‘Ȍǡ ’ƒ–Š™ƒ›•ǡ ˆƒ–‡ ȋ”‹•
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Š‡ –‡” ‡…‘–‘š‹…‘Ž‘‰› ™ƒ• …‘‹‡† „› ”—Šƒ—– ‹ ͳͻ͸ͻ ƒ• ̶–Š‡ „”ƒ…Š ‘ˆ
1.2
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
14
SEAURCHINBIOASSAYS
ͳͻͷͳȌǤ
UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
’”‘’‘•‡† ƒ• ™ƒ–‡” “—ƒŽ‹–› ‹†‹…ƒ–‘” ‹†‹…ƒ–‘” ‹ –Š‡ ‡ƒ”Ž› ͳͻͷͲǯ• „› ‹Ž•‘ ȋ‹Ž•‘
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”‡‰‹•–‡”Ȁ“—ƒ–‹ˆ›–Š‡‡ˆˆ‡…–•ȋ–Š‡‡†’‘‹–…ƒ„‡ƒ›“—ƒ–‹ˆ‹ƒ„Ž‡”‡•’‘•‡–Šƒ–…ƒ
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1.2.1
ͳͻͻͷǡ”‹‰Š–ƒ†‡Ž„‘—”ʹͲͲʹȌǤ
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„‡ …ƒŽ…—Žƒ–‡† ƒ• –Š‡ Š‹‰Š‡•– …‘…‡–”ƒ–‹‘ ‘ˆ ƒ •—„•–ƒ…‡ ™‹–Š‘—– ‡ˆˆ‡…– ȋȌ ƒ†
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…‘…‡–”ƒ–‹‘ ‘ˆ ƒ –‘š‹…ƒ– ™Š‹…Š ‹†—…‡• ƒ ”‡•’‘•‡ ‹ ͷͲΨ ‘ˆ –Š‡ ‡š’‘•‡†
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…Š‡‹…ƒŽ …‘…‡–”ƒ–‹‘ ‹ –Š‡ ‡š’‘•—”‡ ‡†‹—ǣ •‡ƒ ™ƒ–‡” ȋ”‹‰Š– ƒ† ‡Ž„‘—”
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‡…‘–‘š‹…‘Ž‘‰› ȋ‹„”‡ŽŽ ͳͻͻ͵ǡ ”‹‰Š– ƒ† ‡Ž„‘—” ʹͲͲʹȌǤ Š‹• …‘‡…–‹‘ ‹•
GeneralIntroduction౹Chapter1౹
15
ECOTOXICOLOGYANDCRYOPRESERVATION
UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
‡•—”‡ –Š‡ ƒ……‡••‹„‹Ž‹–› –‘ Š‹‰Š “—ƒŽ‹–› ”‡’”‘†—…–‹˜‡ ƒ–‡”‹ƒŽ ƒŽŽ ›‡ƒ” ”‘—† ƒ• ƒ
…”›‘„ƒ‹‰‘ˆ‰ƒ‡–‡•ƒ†‡„”›‘•–‘„‡—•‡†ˆ‘”ƒ”‹‡“—ƒŽ‹–›ƒ••‡••‡–…‘—Ž†
Š‡ †‡•‹‰ ‘ˆ ƒ …”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ ’”‘–‘…‘Ž ˆ‘” –Š‡ …”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ ƒ†
…ƒœ‡ƒ†Ž‡ƒ”Ž›ͳͻͻͶȌǤ
ƒ† ’”‘˜‹†‡ „‹‘Ž‘‰‹…ƒŽ ƒ–‡”‹ƒŽ ƒ˜ƒ‹Žƒ„Ž‡ –Š”‘—‰Š‘—– –Š‡ ›‡ƒ” ȋ…ƒœ‡ ͳͻͻʹǡ
‘˜‡”…‘‹‰–Š‡…‘•–”ƒ‹–‘ˆ–Š‡”‡’”‘†—…–‹˜‡•‡ƒ•‘ƒŽ‹–›‹‡„”›‘ǦŽƒ”˜ƒŽ„‹‘ƒ••ƒ›•
‡–Š‘†‘Ž‘‰‹…ƒŽ ƒ†˜ƒ…‡• ‹ …”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ ’”‘…‡†—”‡• ƒ› „‡ ƒ •‘Ž—–‹‘ –‘
1.2.2
ƒ–‡”‹ƒŽȋ‹•etal.ͳͻͻͻȌǤ
–Š‡ –‡•– •’‡…‹‡•ǡ ™Š‹…Š ‹†—…‡ ƒ •Š‘”–Ǧ–‡” ƒ˜ƒ‹Žƒ„‹Ž‹–› ‘ˆ Š‹‰Š “—ƒŽ‹–› „‹‘Ž‘‰‹…ƒŽ
†‡Žƒ›‹‰–Š‡™‹†‡•’”‡ƒ†—•‡‘ˆ–Š‡•‡‡ƒ‹‰ˆ—Ž–‘‘Ž•ǣ–Š‡”‡’”‘†—…–‹˜‡•‡ƒ•‘ƒŽ‹–›‘ˆ
”‡…‘‰‹–‹‘ ‘ˆ –Š‡ ’”‘„Ž‡• ƒ••‘…‹ƒ–‡† ™‹–Š –Š‡‹” ƒ’’Ž‹…ƒ–‹‘ǡ ™Š‹…Š ƒ”‡ …—””‡–Ž›
Š‡•—……‡••ˆ—Ž—•‡‘ˆ–Š‡•‡„‹‘Ž‘‰‹…ƒŽ–‡…Š‹“—‡•™‘”Ž†™‹†‡Šƒ•ƒŽŽ‘™‡†ƒŽ•‘–Š‡
’”‡†‹…–‡†ȋ‹•etal.ʹͲͲͲȌǤ
‡š’‘•—”‡ –‹‡• ƒ† ‡ˆˆ‡…–• ‘ †‹ˆˆ‡”‡– „‹‘Ž‘‰‹…ƒŽ ‘”‰ƒ‹œƒ–‹‘ Ž‡˜‡Ž• …ƒ „‡
‡Ȍ ‰”‡ƒ– —„‡” ‘ˆ ”‡•’‘•‡ ˜ƒ”‹ƒ„Ž‡• …ƒ „‡ ‡šƒ‹‡† ‘˜‡” †‹ˆˆ‡”‡–
ʹͲͲͲȌǤ
™‹–Š‹†‹˜‹†—ƒŽ•—„•–ƒ…‡•‘”™‹–Š™ƒ–‡”‘”•‡†‹‡–†‹Ž—–‹‘•‡”‹‡•ȋ‹•etal.
†Ȍ ƒ—•‡Ǧ‡ˆˆ‡…– ”‡Žƒ–‹‘•Š‹’• …ƒ „‡ ‡šƒ‹‡† „› †‘•‡Ǧ”‡•’‘•‡ ‡š’‡”‹‡–•
™ƒ–‡”“—ƒŽ‹–›…”‹–‡”‹ƒǤȋ”‹‰Š–ƒ†‡Ž„‘—”ʹͲͲʹȌǤ
ƒ† –”ƒ…‡ –Š‡ •‘—”…‡Ǥ ȋ‘‡• et al. ʹͲͲͷȌǤ ‡•—Ž–• …ƒ „‡ —•‡† –‘ †‡˜‡Ž‘’
…Ȍ ‡”˜‡ ƒ• †‹ƒ‰‘•–‹… –‘‘Ž•ǡ —•‡† –‘ †‡–‡”‹‡ –Š‡ …ƒ—•‡ ‘ˆ ’‘‘” ™ƒ–‡” “—ƒŽ‹–›
al.ʹͲͲͷȌǤ
„Ȍ ”‘˜‹†‡ ’”‡†‹…–‹‘• ƒ† ‡ƒ”Ž› ™ƒ”‹‰ ‘ˆ ‡˜‹”‘‡–ƒŽ ‹’ƒ…–• ȋ‘‡• et
al.ʹͲͲͷȌǤ
ƒ†–ƒ‡‹–‘ƒ……‘—––Š‡‡ˆˆ‡…–•‘ˆ‹–‡”ƒ…–‹‘•ƒ‘‰•—„•–ƒ…‡•ȋ‘‡•et
ȋ‹•etal.ʹͲͲͲȌǡ‹…Ž—†‹‰–Š‘•‡–Šƒ–ƒ”‡‘–†‡–‡…–‡†„›…Š‡‹…ƒŽƒƒŽ›•‡•ǡ
ƒȌ ‹‘ƒ••ƒ›•‹–‡‰”ƒ–‡–Š‡‡ˆˆ‡…–•‘ˆƒŽŽ•—„•–ƒ…‡•’”‡•‡–‹ƒ…‘’Ž‡š‹š–—”‡
’”‡•‡–••‡˜‡”ƒŽƒ†˜ƒ–ƒ‰‡•
Š‡ ƒ’’Ž‹…ƒ–‹‘ ‘ˆ –Š‡•‡ „‹‘Ž‘‰‹…ƒŽ –‡…Š‹“—‡• –‘ ‡˜‹”‘‡–ƒŽ ‘‹–‘”‹‰
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
16
AQUACULTUREOFMARINEINVERTEBRATES
UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
‰Ž‘„ƒŽƒ”‡–—’–‘ͳʹʹ–Š‘—•ƒ†‹ŽŽ‹‘ȋʹͲͳ͵ǡ‹‰—”‡ͳǤ͸ȌǤ
†‡˜‡Ž‘’‡– –‘ –Š‡•‡ ‡–‡”’”‹•‡•ǡ –Š‡”‡ Šƒ• „‡‡ ƒ ‹…”‡ƒ•‡ ‹ –Š‡ „‡‡ˆ‹–• ‹ –Š‡
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1.3
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GeneralIntroduction౹Chapter1౹
17
(YROXWLRQRIWKHHFRQRPLFYDOXHRIPDULQHLQYHUWHEUDWHV
SURGXFHGE\DTXDFXOWXUH86'
UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
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‹‰—”‡ ͳǤͷǤ ‘”Ž† ’”‘†—…–‹‘ ‘ˆ ƒ”‹‡ ‹˜‡”–‡„”ƒ–‡• „› ƒ“—ƒ…—Ž–—”‡ ˆ”‘ ƒ”‹‡ ƒ† „”ƒ…‹•Š ™ƒ–‡”
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
……‘”†‹‰–‘–Š‡‹–‡†ƒ–‹‘•ǡ–Š‡™‘”Ž†’‘’—Žƒ–‹‘‹•…—””‡–Ž›‘˜‡”͹Ǥʹ„‹ŽŽ‹‘
18
AQUACULTUREANDCRYOPRESERVATION
UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
ƒ‘‰ƒŽ‡•ƒ†–Š‡”‡ˆ‘”‡‘„–ƒ‹‹‰”‡Ž‹ƒ„Ž‡”‡•—Ž–•ȋƒ‰etal.ʹͲͳʹȌǤ
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ʹͲͲͺȌǤ
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…”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘–‡…Š‹“—‡•ƒ›ƒŽ•‘‹’”‘˜‡–Š‡ƒƒ‰‡‡–‘ˆ•‡Ž‡…–‹˜‡„”‡‡†‹‰
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ƒ”‹‡ ‹˜‡”–‡„”ƒ–‡ ‡„”›‘• ƒ† Žƒ”˜ƒ‡ ™‘—Ž† ‡ƒ„Ž‡ ƒ ›‡ƒ”Ǧ”‘—† •’ƒ– •—’’Ž›
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1.3.1
…—Ž–‹˜ƒ–‡†‹–Š‡ˆ—–—”‡†—‡–‘–Š‡‹”Š‹‰Šˆ‡…—†‹–›ȋ“—ƒ…—Ž–—”‡ƒ—ƒŽȌǤ
“—ƒ…—Ž–—”‡ƒ—ƒŽǡ…‹†•‡›ʹͲͲ͹Ȍǡ™Š‹…Šƒ”‡‰‘‘†…ƒ†‹†ƒ–‡• –‘…‘–‹—‡„‡‹‰
–‘ ™‹†‡ –Š‡ ˜ƒ”‹‡–› ‘ˆ •’‡…‹‡• …—Ž–‹˜ƒ–‡†ǡ ƒ‘‰ –Š‡ ƒ”‹‡ ‹˜‡”–‡„”ƒ–‡• ȋ
–‘†‡˜‡Ž‘’ƒ†–‘’”‘†—…‡‘”‡‡ˆˆ‹…‹‡–Ž›†—‡–‘–Š‡‹…”‡ƒ•‹‰Š—ƒ†‡ƒ†ǡƒ†
’‡‘’Ž‡ȋ‹–‡†ƒ–‹‘•ʹͲͳ͵Ȍǡƒ†’”‡†‹…–‹‘•‹†‹…ƒ–‡–Šƒ–ƒ“—ƒ…—Ž–—”‡™‹ŽŽ…‘–‹—‡
GeneralIntroduction౹Chapter1౹
19
THESEAURCHINParacentrotuslividus
1.4.1
UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
ȋ…†™ƒ”†ƒ†‹‡”ʹͲͲ͹ȌǤ
Žƒ”˜ƒ‡ƒ”‡”‡ƒ†›–‘‡–ƒ‘”’Š‘•‡ƒ†•‡––Ž‡ȋƒ†—Ž–•†‹••‡…–‹‘‹••Š‘™‹‹‰—”‡ͳǤͺȌ
…‘’Ž‡š‹–›‘ˆŽƒ”˜ƒŽƒ”•Ǥ‘’‡–‡…‡‹•ƒ…Š‹‡˜‡†‹–Š‡’Žƒ–‘ƒ†ƒ––Š‹•’‘‹––Š‡
ƒ…Š‹‡˜‡†ǡ Žƒ”˜ƒ‡ ƒ”‡ ƒ„Ž‡ –‘ ˆ‡‡† ƒ† ‰”‘™ •—„•–ƒ–‹ƒŽŽ› „› ‹…”‡ƒ•‹‰ –Š‡ •‹œ‡ ƒ†
†‡˜‡Ž‘’‡– ”‡Ž‹‡• ‹ ›‘Ž ”‡•‡”˜‡•ǡ „—– ‘…‡ –Š‡ ‡“—‹‘’Ž—–‡—• Žƒ”˜ƒŽ •–ƒ‰‡ ‹•
ƒ† ‹‡” ʹͲͲ͹ǡ ‘—†‘—”‡•“—‡ǡ ƒ† ‡”Žƒ“—‡ ʹͲͲ͹ȌǤ ‡ƒ —”…Š‹ ‡„”›‘‹…
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…‡ ˆ‡”–‹Ž‹œƒ–‹‘ ‘……—”• ȋ–Š‡ ‘‘…›–‡ •‹œ‡ ‹• ͻͲ ρȌǡ ‡„”›‘• ™‹ŽŽ †‡˜‡Ž‘’ –‘ –Š‡
–Š‡Žƒ”˜ƒŽ†‡˜‡Ž‘’‡––ƒ‡•’Žƒ…‡‹–Š‡’Žƒ–‘ȋŽ‹ˆ‡…›…Ž‡‹••Š‘™‹‹‰—”‡ͳǤ͹ȌǤ
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–Žƒ–‹……‡ƒǡƒƒ”›•Žƒ†•ƒ†‘”‘……‘Ǥ‡ƒ—”…Š‹•ƒ”‡„”‘ƒ†…ƒ•–•’ƒ™‡”•™‹–Š
Paracentrotus lividus …ƒ „‡ ˆ‘—† –Š”‘—‰Š‘—– –Š‡ ‡†‹–‡””ƒ‡ƒ ‡ƒǡ ‡ƒ•–‡”
GENERALBIOLOGYOFTHETESTSPECIES
1.4
ʹͲͲͶȌǤ
•‡•‹–‹˜‹–›–‘•—„Ǧœ‡”‘–‡’‡”ƒ–—”‡•ƒ†‡š’‘•—”‡ƒ†Ž‘™’‡”‡ƒ„‹Ž‹–›ȋŠƒ‰
ʹͲͳͳǡ ƒ‹†‡‘ et al. ͳͻͻͳǡ ƒ””‘• et al. ͳͻͻ͹ȌǤ ‘…›–‡• ƒ† ‡„”›‘• •Š‘™ Š‹‰Š
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ȋ†ƒ•etal.ʹͲͳͳǡ‹etal.ͳͻͻ͵ǡƒ””‘•etal.ͳͻͻ͸ƒȌǤ”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘‘ˆ‡„”›‘•
‘…›–‡• Šƒ† „‡‡ ‘”‡ …ŠƒŽŽ‡‰‹‰ǡ ƒ† Ž‹‹–‡† •—……‡•• Šƒ• „‡‡ ƒ…Š‹‡˜‡†
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
š–‡”ƒŽ
ˆ‡”–‹Ž‹œƒ–‹‘
›‰‘–‡
Žƒ•–—Žƒ
†—Ž–•‡ƒ—”…Š‹•
ƒ•–”—Žƒ
20
‘’‡–‡–Žƒ”˜ƒ‡
͸Ǧƒ”’Ž—–‡—•
—˜‡‹Ž‡•
ͶǦƒ”’Ž—–‡—•
UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
‹‰—”‡ͳǤ͹Ǥ‹ˆ‡…›…Ž‡‘ˆ–Š‡•‡ƒ—”…Š‹Paracentrotuslividus.
GeneralIntroduction౹Chapter1౹
21
THEGREENSHELLTMMUSSELPernacanaliculus
UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
„‹˜ƒŽ˜‡•‹••Š‘™‹‹‰—”‡ͳǤͳͲǤ
Šƒ˜‡ƒ…‘’Ž‡–‡‰ƒ•–”‘‹–‡•–‹ƒŽ–”ƒ…ƒ†ƒ”‡’Žƒ–‘–”‘’Š‹…ǤŠ‡‰‡‡”ƒŽŽ‹ˆ‡…›…Ž‡‘ˆ
…”‡ƒ–‡ ƒ ‡††‹‡ –‘ …‘–”‘Ž –Š‡‹” ‘˜‡‡– ƒ† ˆ‡‡†‹‰ ȋ
‘•Ž‹ ʹͲͲ͵ȌǤ ”‘…Š‘’Š‘”‡•
…‘’Ž‡š Žƒ”˜ƒ‡ǡ …‹Ž‹†”‹…ƒŽ ‘” ’‡ƒ” •Šƒ’‡† ™‹–Š •‡˜‡”ƒŽ „ƒ†• ‘ˆ …‹Ž‹ƒ –Šƒ– Š‡Ž’ –‘
Žƒ”˜ƒ‡Ȍ‹ʹͶǦͶͺŠ‘—”•ȋƒ˜‡”ƒ‰‡•‹œ‡ͳͷͲǦʹͷͲρȌǤ”‘…Š‘’Š‘”‡•ƒ”‡•ƒŽŽ„—–“—‹–‡
Žƒ”˜ƒ‡ ȋ•‹œ‡ ‘ˆ ͺͲǦͳͲͲ ρȌ ™Š‹…Š ™‹ŽŽ †‡˜‡Ž‘’ ‹–‘ ƒ Ǧ•Šƒ’‡† ˜‡Ž‹‰‡” Žƒ”˜ƒ‡ ȋǦ
ƒ„‘—– ͸Ͳ ρǤ ‡”–‹Ž‹œ‡† ‘‘…›–‡ †‡˜‡Ž‘’• ‹ ͳ͸ǦʹͲ Š‘—”• ȋʹͲ ͑Ȍ –‘ ƒ –”‘…Š‘’Š‘”‡
P.canaliculusƒ”‡„”‘ƒ†…ƒ•–•’ƒ™‡”•™‹–Š‡š–‡”ƒŽˆ‡”–‹Ž‹œƒ–‹‘Ǥ‘‘…›–‡••‹œ‡‹•
ˆƒ…‹Ž‹–›ƒ”‡•Š‘™‹‹‰—”‡ͳǤͻȌǤ
ˆƒ”‡† —••‡Ž•Ǥ †—Ž–• ”‡ƒ…Š ʹͶͲ  ‹ Ž‡‰–Š ȋƒ†—Ž–• •’ƒ™‹‰ ‹ ƒ ƒ“—ƒ…—Ž–—”‡
‹•ƒ‡…‘‘‹…ƒŽ‹’‘”–ƒ–”‡•‘—”…‡‹‡™‡ƒŽƒ†ƒ†‘‡‘ˆ–Š‡„‹‰‰‡•–•’‡…‹‡•‘ˆ
‡ƒŽƒ†Ǥ‘…ƒŽŽ‡†‰”‡‡ǦŽ‹’’‡†—••‡Žƒ†…‘‡”…‹ƒŽŽ›‘™ƒ•
”‡‡•Š‡ŽŽ—••‡Žǡ
Perna canaliculus Šƒ• ƒ ˜‡”› ”‡•–”‹…–‡† †‹•–”‹„—–‹‘ ƒ† ‹– ‹• ƒ–‹˜‡ ˆ”‘ ‡™
1.4.2
’‘—”‘—–ˆ”‘–Š‡‰‘ƒ†•™Š‡†‹••‡…–‡†Ǥ
•’ƒ™‹‰ ’‡”‹‘†Ǥ ‘…›–‡• ȋ‹–‡•‡ ‘”ƒ‰‡Ȁ”‡† •—•’‡•‹‘Ȍ ƒ† •’‡” ȋ™Š‹–‡ •—•’‡•‹‘Ȍ •’‘–ƒ‡‘—•Ž›
‹‰—”‡ͳǤͺǤ‘‰‹–—†‹ƒŽ†‹••‡…–‹‘‘ˆƒˆ‡ƒŽ‡•‡ƒ—”…Š‹ȋ–‘’Ȍƒ†ƒŽ‡•‡ƒ—”…Š‹ȋ„‘––‘Ȍ†—”‹‰–Š‡‹”
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
22
THEMEDITERRANEANMUSSELMytilusgalloprovincialis
‹‰—”‡ͳǤͳͲȌǤ
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Š‘—”• ƒ– ʹͲ ͑ ƒ† ƒˆ–‡” Ͷͺ Š‘—”• –Š‡ ǦŽƒ”˜ƒŽ •–ƒ‰‡ ȋͳͲͲǦͳʹͲ ρȌ ‹• ”‡ƒ…Š‡† ȋ•‡‡
ˆ‡…—†‹–›Ǥ‘…›–‡•ƒ”‡ͺͲǦͻͲρ‹†‹ƒ‡–‡”ǡ–”‘…Š‘’Š‘”‡Žƒ”˜ƒ‡ƒ’’‡ƒ”•ƒˆ–‡”ʹͲǦʹͺ
edulisǤ Š‡•‡ —••‡Ž• ƒ”‡ „”‘ƒ†…ƒ•– •’ƒ™‡”• ™‹–Š ‡š–‡”ƒŽ ˆ‡”–‹Ž‹œƒ–‹‘ ƒ† Š‹‰Š
–Š‡‘•–ˆƒ”‡†•’‡…‹‡•‘ˆ—••‡Ž•‹–Š‡™‘”Ž†ǡ–‘‰‡–Š‡”™‹–Š–Š‡„Ž—‡—••‡ŽMytilus
‡”‹…ƒǡƒ™ƒ‹‹‘”‘”–ŠǦ‡ƒ•–‡”•‹ƒȋʹͲͳ͵Ȍ.Mytilusgalloprovincialis‹‘‡‘ˆ
‡†‹–‡””ƒ‡ƒ‡ƒǡ–Žƒ–‹……‡ƒǡŽƒ…‡ƒǡ†”‹ƒ–‹…‡ƒǡ•‘—–Š‡”ˆ”‹…ƒǡ™‡•–‘”–Š
Š‡†‹•–”‹„—–‹‘‘ˆ–Š‡‡†‹–‡””ƒ‡ƒ—••‡Ž‹•˜‡”›™‹†‡ƒ†…ƒ„‡ˆ‘—†‹–Š‡
1.4.3
•‡ƒ™ƒ–‡”Ǧ”‹‰Š–„‘––‘…‘”‡”’‹…–—”‡Ǥ
‹‰—”‡ͳǤͻǤ ”‡‡ǦŽ‹’’‡†—••‡Ž• •’ƒ™‹‰Ǥ”›…‘ŽŽ‡…–‹‘‘ˆ•’‡”‹’Žƒ•–‹…„‘––Ž‡•Ǥ ‡ƒŽ‡ •’ƒ™‹‰‹
GeneralIntroduction౹Chapter1౹
23
THEPACIFICOYSTERCrassostreagigas
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‘•Ž‹ʹͲͲ͵Ȍȋ•‡‡‹‰—”‡ͳǤͳͲȌǤ
‹…—„ƒ–‹‘ƒ–ʹʹ͑ǤŠ‡–”‘…Š‘’Š‘”‡•†‡˜‡Ž‘’–‘ǦŽƒ”˜ƒ‡‹ʹͶǦͶͺŠ‘—”•ȋʹͲͳ͵ǡ
ρƒ†–Š‡–”‘…Š‘’Š‘”‡Žƒ”˜ƒŽ•–ƒ‰‡ȋ…ƒǤͷͲρ†‹ƒ‡–‡”Ȍ‹•”‡ƒ…Š‡†ƒˆ–‡”ͳͶŠ‘—”•‘ˆ
‹ŽŽ‹‘‘‘…›–‡•‹ƒ•‹‰Ž‡•’ƒ™‹‰ǤŠ‡ƒ…‹ˆ‹…‘›•–‡”‘‘…›–‡Šƒ•ƒ†‹ƒ‡–‡”‘ˆʹͲǦͶͲ
‡†‹–‡””ƒ‡ƒ ‡ƒǤ C. gigas ƒ”‡ ˜‡”› ˆ‡…—†ǣ ƒ ˆ‡”–‹Ž‡ ˆ‡ƒŽ‡ …ƒ ’”‘†—…‡ ͷͲǦʹͲͲ
‘”‡ƒǡ ƒ’ƒǡ ‹„‡”‹ƒǡ —•–”ƒŽ‹ƒǡ ǡ ƒƒ†ƒǡ ‡ƒ•–‡” –Žƒ–‹… …‡ƒ ƒ† –Š‡
ƒ…‹ˆ‹… ‘›•–‡”• ƒ”‡ ƒ–‹˜‡ ˆ”‘ –Š‡ ƒ…‹ˆ‹… …‘ƒ•– ‘ˆ •‹ƒ ƒ† …ƒ „‡ ˆ‘—† ƒŽ‘‰
1.4.4
…ƒ”‡ƒ…ŠͳͷͲȋž…‡”‡•Ǧƒ”–‹‡œƒ†‹‰—‡”ƒ•ʹͲͲ͹ȌǤ
…‘’‡–‡– –‘ •‡––Ž‡ ‘…‡ ‹– ˆ‹†• –Š‡ ƒ’’”‘’”‹ƒ–‡ •—„•–”ƒ–‡ –‘ „‡…‘‡ •‡••‹Ž‡Ǥ †—Ž–•
†‡˜‡Ž‘’•–Š‡‡›‡•’‘–•ƒ†–Š‡‡Ž‘‰ƒ–‡†ˆ‘‘–ȋ
‘•Ž‹ʹͲͲ͵ȌǤŠ‹•’‡†‹Ǧ˜‡Ž‹‰‡”Žƒ”˜ƒ‡‹•
ƒ …‹Ž‹ƒ–‡† ‘”‰ƒ —•‡† –‘ •™‹ ƒ† ˆ‡‡†Ǧ ƒ† ƒˆ–‡” …ƒǤ ͶͲ †ƒ›• ’‘•–Ǧˆ‡”–‹Ž‹œƒ–‹‘
Š‡ǦŽƒ”˜ƒ‡’”‡•‡–•–Š‡ˆ‹”•–Žƒ”˜ƒŽ•Š‡ŽŽƒ†•–ƒ”–•–‘†‡˜‡Ž‘’–Š‡˜‡‹ŽǦ™Š‹…Š‹•
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
š–‡”ƒŽ
ˆ‡”–‹Ž‹œƒ–‹‘
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CrassostreagigasǤ
GeneralIntroduction౹Chapter1౹
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OBJECTIVES
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1.5
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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GeneralIntroduction౹Chapter1౹
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ʹǤ͵—”˜‹˜ƒŽƒ†‰”‘™–Š‘ˆ•‡ƒ—”…Š‹ȋParacentotuslividusȌ
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CHAPTER2.DEVELOPMENTAND
STANDARDIZATIONOFTHESEAURCHIN
CRYOPRESERVATIONPROTOCOL
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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Developmentandstandardization౹Chapter2౹
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CHAPTER2:DEVELOPMENTANDSTANDARDIZATIONOFTHESEAURCHIN
CRYOPRESERVATIONPROTOCOL
SUMMARY
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
Developmentandstandardization౹Chapter2౹
’—„Ž‹…ƒ–‹‘•ǣ
Š‡”‡•‡ƒ”…Š’”‡•‡–‡†‹–Š‹•…Šƒ’–‡”ˆ‘”•’ƒ”–‘ˆ–Š‡ˆ‘ŽŽ‘™‹‰
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”‡’”‘†—…–‹˜‡•‡ƒ•‘ƒŽ‹–›Ǥ†‡””‡˜‹‡™”›‘Ž‡––‡”•ʹͲͳͶǤ
lividusȌ …”›‘’”‡•‡”˜‡† ‡„”›‘•ǣ ‡ˆˆ‡…–• ‘ˆ …”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ ’ƒ”ƒ‡–‡”• ƒ†
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Article1ǤǦǤƒ”‡†‡•ǡǤ‡ŽŽƒ•ǡ”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘‘ˆ•‡ƒ—”…Š‹‡„”›‘•ȋParacentrotus
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1.Introduction
ƒ†ˆ”‘œ‡„Žƒ•–—Žƒ‡ǡ”‡•’‡…–‹˜‡Ž›Ǥ
Žƒ”˜ƒŽ‰”‘™–Š˜ƒŽ—‡•‘ˆͶʹǤͻΨƒ†͸ͲǤͷΨǡ™‡”‡‘„–ƒ‹‡†ˆ‘”ˆ”‘œ‡ˆ‡”–‹Ž‹œ‡†‘‘…›–‡•
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ˆ‘”ʹ‹ˆ‘”•‡‡†‹‰ǡ…‘‘Ž‹‰–‘ǦʹͲ͑ƒ–ͲǤͷ͑‹Ǧͳǡƒ†–Š‡…‘‘Ž‹‰–‘Ǧ͵ͷ͑ƒ–ͳ
•—……‡••ˆ—Žˆ”‡‡œ‹‰”‡‰‹‡…‘•‹•–‡†‘…‘‘Ž‹‰ˆ”‘Ͷ–‘Ǧͳʹ͑ƒ–ͳ͑‹ǦͳǡŠ‘Ž†‹‰
‘‘…›–‡• ƒ† ‡„”›‘•Ǥ ‡˜‡”ƒŽ ˆ”‡‡œ‹‰ ’”‘…‡†—”‡• ™‡”‡ ƒŽ•‘ ƒ••ƒ›‡†Ǥ Š‡ ‘•–
…‘„‹ƒ–‹‘™‹–Šǡ•‡‡–‘„‡‘•–•—‹–ƒ„Ž‡ˆ‘”–Š‡…”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘‘ˆP.lividus
•‡ƒ —”…Š‹ Paracentrotus lividusǤ  –Š‡ „ƒ•‹• ‘ˆ –Š‡ • –‘š‹…‹–›ǡ ƒ† ǡ ‹
ȋ•Ȍƒ†–Š‡‹”…‘„‹ƒ–‹‘ǡˆ‘”–Š‡…”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘‘ˆ‘‘…›–‡•ƒ†‡„”›‘•‘ˆ–Š‡
’‡”‡ƒ–‹‰ ȋ–”‡ŠƒŽ‘•‡ǡ Ǣ ’‘Ž›˜‹›Ž’›””‘Ž‹†‘‡ǡ Ȍ …”›‘’”‘–‡…–‹‰ ƒ‰‡–•
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–Š‡ „‹‘Ž‘‰‹…ƒŽ ‡–Š‘†• ‘•– ™‹†‡Ž› —•‡† ™‘”Ž†™‹†‡Ǥ ”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ ‘ˆ ‡ƒ”Ž›
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Abstract
2.1.CRYOPRESERVATIONOFSEAURCHINEMBRYOS(Paracentrotuslividus)
APPLIEDTOMARINEECOTOXICOLOGICALSTUDIES.
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
Developmentandstandardization౹Chapter2౹
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…”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘’”‘–‘…‘Ž•™‹–Š–Š‘•‡‘”‰ƒ‹••Ǥ
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’‡”‡ƒ–‹‰…”›‘’”‘–‡…–‹‰ƒ‰‡–•ȋ•Ȍǡ‹†‹˜‹†—ƒŽŽ›ƒ†‹…‘„‹ƒ–‹‘ǡ‹‘”†‡”–‘
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ͳͻͻͷǡ‡”‘’‘ŽŽ‹etalǤʹͲͲͶǡƒ‹ƒ‰—ƒǦŠƒ˜‡œƒ†‹‡”…ŠʹͲͲͳǡ‡ƒ”†ͳͻͻͳǡ‹–Šet
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…‘•–”ƒ‹– ƒ† ’”‘˜‹†‡ „‹‘Ž‘‰‹…ƒŽ ƒ–‡”‹ƒŽ ƒ˜ƒ‹Žƒ„Ž‡ –Š”‘—‰Š‘—– –Š‡ ›‡ƒ”ǡ ‡Šƒ…‹‰
•—…Š ƒ• „‹˜ƒŽ˜‡• ƒ† •‡ƒ —”…Š‹• ™‘—Ž† ’”‘˜‹†‡ ƒ ™ƒ› –‘ ‘˜‡”…‘‡ –Š‹• ƒ‹
Š‡ …”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ ‘ˆ ‰ƒ‡–‡•ǡ ‡„”›‘•ǡ ƒ† Žƒ”˜ƒ‡ ‘ˆ ƒ”‹‡ ‹˜‡”–‡„”ƒ–‡•
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ˆ‡”–‹Ž‡•–‘…•ƒŽŽ›‡ƒ””‘—†ǡƒ†–Š‡“—ƒŽ‹–›‘ˆ–Š‡•’ƒ™‘ˆˆǦ•‡ƒ•‘‹•ˆ”‡“—‡–Ž›Ž‘™
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–Š‡ ‹†‡–‹Ƥ…ƒ–‹‘ ‘ˆ –Š‡ ƒŒ‘” †”ƒ™„ƒ…• –Šƒ– ƒ”‡ Ž‹‹–‹‰ ƒ ‘”‡ ‡š–‡•‹˜‡ —•‡ ‘ˆ
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Biologicalmaterial
2.Materialsandmethods
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
Developmentandstandardization౹Chapter2౹
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UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
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35
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UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
Developmentandstandardization౹Chapter2౹
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37
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
Developmentandstandardization౹Chapter2౹
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4.Discussion
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
Developmentandstandardization౹Chapter2౹
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1.Introduction
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Abstract
APPLICATIONINMARINEQUALITYASSESSMENT.
2.2. ADVANCES IN THE CRYOPRESERVATION OF SEA URCHIN EMBRYOS: POTENTIAL
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
Developmentandstandardization౹Chapter2౹
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Biologicalmaterial
2.Materialsandmethods
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”‘Ž‡•‹–Š‡ˆ—…–‹‘‹‰ǡ†›ƒ‹…•ƒ†•–”—…–—”‡‘ˆ„‡–Š‹…ƒ••‡„Žƒ‰‡•ǡ™Š‹…Š‘……—”•
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Cryopreservationexperiments
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UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
Developmentandstandardization౹Chapter2౹
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Developmentandstandardization౹Chapter2౹
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Developmentandstandardization౹Chapter2౹
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Developmentandstandardization౹Chapter2౹
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4.Discussion
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Developmentandstandardization౹Chapter2౹
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
Developmentandstandardization౹Chapter2౹
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1.Introduction
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Abstract
REPRODUCTIVESEASONALITY.
CRYOPRESERVED EMBRYOS: EFFECTS OF CRYOPRESERVATION PARAMETERS AND
2.3. SURVIVAL AND GROWTH OF SEA URCHIN (Paracentrotus lividus)
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Biologicalmaterial
2.MaterialsandMethods
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Methodologicalparameters
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Cryopreservationmethodology
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
Developmentandstandardization౹Chapter2౹
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UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
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Cryopreservationcontainers
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Histologicalanalysis
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ConditionIndex
Biologicalparameters
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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CPAsaqueousmedia
Methodologicalparameters
3.Results
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
Developmentandstandardization౹Chapter2౹
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UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
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ConditionIndex
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Cryopreservationcontainers
71
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UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
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Histologicalanalysis
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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Developmentandstandardization౹Chapter2౹
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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Cryopreservationofseaurchinembryos
Seaurchincryopreservedembryosapplication౹Chapter3౹
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CHAPTER3.SEAURCHINCRYOPRESERVED
EMBRYOSAPPLICATIONS
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SUMMARY
CHAPTER3:SEAURCHINCRYOPRESERVEDEMBRYOSAPPLICATIONS
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Š‡”‡•‡ƒ”…Š’”‡•‡–‡†‹–Š‹•…Šƒ’–‡”ˆ‘”•’ƒ”–‘ˆ–Š‡ˆ‘ŽŽ‘™‹‰
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ȋParacentrotuslividusȌ‹ƒ”‹‡“—ƒŽ‹–›ƒ••‡••‡–Ǥ†‡””‡˜‹‡™ǡŠ‡‘•’Š‡”‡Ǥ
Article 4ǤǦ Ǥ ƒ”‡†‡•ǡ Ǥ ‡ŽŽƒ•ǡ Š‡ —•‡ ‘ˆ …”›‘’”‡•‡”˜‡† •‡ƒ —”…Š‹ ‡„”›‘•
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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Š‡ ƒ–‡” ”ƒ‡™‘” ‹”‡…–‹˜‡ ȋȌ ‡•–ƒ„Ž‹•Š‡• ƒ ˆ”ƒ‡™‘” ˆ‘” ™ƒ–‡”
1.Introduction
…Žƒ••‹…„‹‘ƒ••ƒ›Ǥ
„‹‘ƒ••ƒ› ƒŽŽ‘™• †‡–‡…–‹‰ Ž‘™‡” …‘…‡–”ƒ–‹‘• ‘ˆ ’‘ŽŽ—–ƒ–• ‹ …‘’ƒ”‹•‘ ™‹–Š –Š‡
…”›‘’”‡•‡”˜‡†„Žƒ•–—Žƒ•ǤŠ‡”‡•—Ž–••Š‘™‡†–Šƒ––Š‡—•‡‘ˆ–Š‡…”›‘’”‡•‡”˜‡†„Žƒ•–—Žƒ
•‡ƒ —”…Š‹ ‡„”›‘ǦŽƒ”˜ƒŽ „‹‘ƒ••ƒ› ™ƒ• …‘’ƒ”‡† ™‹–Š –Š‡ „‹‘ƒ••ƒ› …‘†—…–‡† ™‹–Š
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“—ƒŽ‹–› ”‡’”‘†—…–‹˜‡ ƒ–‡”‹ƒŽ ƒŽŽ ›‡ƒ” ”‘—†ǡ ƒ• ƒ ‘’–‹‘ –‘ …‘†‹–‹‘‹‰ ƒ†—Ž–• ˆ‘”
‡„”›‘•–‘„‡—•‡†ˆ‘”ƒ”‹‡“—ƒŽ‹–›ƒ••‡••‡–ƒ†‡•—”‡–Š‡ƒ……‡••‹„‹Ž‹–›–‘Š‹‰Š
‘”†‡” –‘ ‡ƒ„Ž‡ –Š‡ •—……‡••ˆ—Ž …”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ ƒ† …”›‘„ƒ‹‰ ‘ˆ ‰ƒ‡–‡• ƒ†
ƒ”„‘—”ȋ
ƒŽ‹…‹ƒǡ„‡”‹ƒ‡‹•—ŽƒȌǤ…”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘’”‘–‘…‘Ž™ƒ•†‡•‹‰‡†‹
‹‘”‰ƒ‹…Ȍ ’‘ŽŽ—–ƒ–• ƒ† •‡†‹‡– ‡Ž—–”‹ƒ–‡• ˆ”‘ Ͷ †‹ˆˆ‡”‡– Ž‘…ƒ–‹‘• ˆ”‘ ‹‰‘
•–ƒ†ƒ”†‹œ‡† •‡ƒ —”…Š‹ ‡„”›‘ǦŽƒ”˜ƒŽ „‹‘ƒ••ƒ›ǡ —•‹‰ •‡Ž‡…–‡† ȋ‘”‰ƒ‹… ƒ†
•‡ƒ —”…Š‹ ‡„”›‘•ȋParacentotuslividusȌƒ†’”‘˜‹†‡†ƒ…‘’ƒ”‹•‘–‘–Š‡ƒŽ”‡ƒ†›
‡ Šƒ˜‡ ‡•–ƒ„Ž‹•Š‡† ˆ‘” ˆ‹”•– –‹‡ ƒ ‡…‘–‘š‹…‘Ž‘‰‹…ƒŽ „‹‘ƒ••ƒ› —•‹‰ …”›‘’”‡•‡”˜‡†
Abstract
85
3.1.THEUSEOFCRYOPRESERVEDSEAURCHINEMBRYOS(Paracentrotuslividus)IN
MARINEQUALITYASSESSMENT.
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‘ˆ–Š‹•„‹‘ƒ••ƒ›™‹–Š–Š‡ƒŽ”‡ƒ†›•–ƒ†ƒ”†‹œ‡†•‡ƒ—”…Š‹‡„”›‘ǦŽƒ”˜ƒŽ„‹‘ƒ••ƒ›™ƒ•
…”›‘’”‡•‡”˜‡†•‡ƒ—”…Š‹‡„”›‘•‹ƒ”‹‡™ƒ–‡”“—ƒŽ‹–›ƒ••‡••‡–Ǥ…‘’ƒ”‹•‘
Š‡ƒ‹‘ˆ–Š‹•™‘”™ƒ•–‘˜ƒŽ‹†ƒ–‡–Š‡—•‡‘ˆƒ‡…‘–‘š‹…‘Ž‘‰‹…ƒŽ„‹‘ƒ••ƒ›—•‹‰
ƒ“—ƒ–‹…‡˜‹”‘‡–•ȋƒ„„”‘…‹‹etal.ʹͲͳʹȌǤ
ȋSparus aurata) •’‡”ƒ–‘œ‘ƒ Šƒ˜‡ ƒŽ•‘ „‡‡ —•‡† ˆ‘” ‡…‘–‘š‹…‘Ž‘‰‹…ƒŽ ‡˜ƒŽ—ƒ–‹‘ ‘ˆ
ˆ”‡•Š‹…”‘ƒŽ‰ƒ‡Selenastrumcapricornutum‹Žƒ„‘”ƒ–‘”›Ǥ”›‘’”‡•‡”˜‡†•‡ƒ„”‡ƒ
–‘š‹…‹–› ‘ˆ ‡–ƒŽ• ȋ…ƒ†‹—ǡ …‘’’‡” ƒ† …Š”‘‹—Ȍ —•‹‰ –Š‡ ”›‘ƒŽ‰‘–‘š –‡•– ƒ†
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…”›‘’”‡•‡”˜‹‰ ˜‹ƒ„Ž‡ ‡ƒ”Ž› ‡„”›‘•ǡ ™Š‹…Š ƒ”‡ –Š‡ ™‡ƒ‡•– Ž‹ ‹ –Š‡ Ž‹ˆ‡ …›…Ž‡ ‘ˆ
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
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Cryopreservationprotocol
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2.MaterialsandMethods
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Seaurchincryopreservedembryosapplication౹Chapter3౹
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UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
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Elutriationprocedure
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Cryopreservedembryobioassay
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Standardandfreshblastulabioassays.
Bioassays
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
89
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UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
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3.Results
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Statisticalanalyses
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Chemicalanalysis
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Seaurchincryopreservedembryosapplication౹Chapter3౹
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
91
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Longitude(W)
Ͳ
O2(mgLǦ1)
S2Ǧ(mgLǦ1)
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Cd2+(μgLǦ1)
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ͳͲͲ
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25%
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ͳͲͲ
ͳͲͲ
ͳͲͲ
ͳͲͲ
ͳͲͲ
ͳͲͲ
ͳͲͲ
ͳͲͲ
ͳͲͲ
ͳͲͲ
ͳͲͲ
%LarvalGrowthcryopreservedblastulabioassay
ͳͲͲ
ͳͲͲ
ͳͲͲ
ͳͲͲ
%LarvalGrowthStandardbioassay
δͲǤͲʹ
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Metalconcentrationmeasuredintheelutriates
Ͳ
͹
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Ͷʹιʹʹǯ͹ʹǯǯ
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Vi2
Elutriateparameters
ͺι͹Ͷǯͻͺǯǯ
Ͷʹιʹʹǯͺͺǯǯ
ʹͲǤͲ͸Ǥͳ͵
Vi1
SedimentSamplingLocation
UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
ͳͲͲ
50%
ͷ͹Ǥ͸
75%
100%elutriate
ͳͲͲ
50%
͹ͺǤͶ
75%
100%elutriate
ʹͻάͷ
Zn2+(μgLǦ1)
ͲǤ͵͹άͲǤͲͷ
Cu2+(μgLǦ1)
Pb2+(μgLǦ1)
ͲǤ͸άͲǤʹ
͹Ǥͳ
pH
͵ͷ
ͺǤͳͳ
Salinity(‰)
Tª(ºC)
ʹͳǤͶ
Ͷʹιʹ͸ǯ͸͹ǯǯ
Latitude(N)
ʹͲǤͲ͸Ǥͳ͵
Vi0
Date
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δͲǤͲʹ
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ͳͲͲ
ͳͲͲ
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ͲǤͶ͸άͲǤͲͳ
Ͳ
͸Ǥ͹
ͺǤʹ͸
͵ͷǤͳͷ
ʹͳǤͶ
ͺι͹ʹǯʹ͹ǯǯ
ͶʹιʹͶǯͳͺǯǯ
ʹͲǤͲ͸Ǥͳ͵
Vi4
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Seaurchincryopreservedembryosapplication౹Chapter3౹
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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Š‡•‡ƒ—”…Š‹Paracentrotuslividusȋƒƒ”…ͳͺͳ͸Ȍ‹•ƒŽƒ”‰‡”‡‰—Žƒ”•‡ƒ—”…Š‹
1.Introduction
”‡’”‡•‡–•–Š‡ʹͷΨ‘ˆ…‘–”‘ŽŽƒ”˜ƒ‡•‡––Ž‡‡–Ǥ
–Šƒˆ”‡•Š…‘–”‘Ž•ǤŠ‡•‡––Ž‡‡–’‡”…‡–ƒ‰‡‘ˆ…”›‘’”‡•‡”˜‡†Žƒ”˜ƒ‡™ƒ•͹Ψǡ™Š‹…Š
”—†‹‡–ƒ†Žƒ”˜ƒ‡ƒ…Š‹‡˜‡†…‘’‡–‡…‡–‘‡–ƒ‘”’Š‘•‡ƒŽ‘•–ƒ––Š‡•ƒ‡–‹‡
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•Š‘™‡††‹ˆˆ‡”‡…‡•™‹–Š–Š‡…‘–”‘Ž„Žƒ•–—Žƒ•ƒˆ–‡”ͳͲ†‘ˆ–Š‡Žƒ”˜ƒŽ”‡ƒ”‹‰ȋ•–ƒ›‹‰
’”‹• ‘” ͶǦƒ” ’Ž—–‡—• •–ƒ‰‡ ƒ– ͻ͸ Š‘—”• ƒˆ–‡” ˆ‡”–‹Ž‹œƒ–‹‘Ǥ ƒ”˜ƒŽ †‡˜‡Ž‘’‡–
”›‘’”‡•‡”˜‡† „Žƒ•–—Žƒ• •—ˆˆ‡”‡† ƒ †‡Žƒ› ‹ ‰”‘™–Š ƒ† †‡˜‡Ž‘’‡–ǡ ƒ…Š‹‡˜‹‰ –Š‡
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‰”‘™ ‹–‘ …‘’‡–‡– Žƒ”˜ƒ‡ǡ ‡–ƒ‘”’Š‘•‡ ƒ† •‡––Ž‡Ǥ ”›‘’”‡•‡”˜‡† „Žƒ•–—Žƒ•
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Š‹• ‹• –Š‡ ˆ‹”•– ƒ––‡’– –‘ …”›‘’”‡•‡”˜‡ Paracentrotus lividus ‡„”›‘• ˆ‘” –Š‡
Abstract
CRYOPRESERVEDEMBRYOS.
3.2. SEA URCHIN (Paracentrotus lividus) LARVAL REARING – CULTURE FROM
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Š‡ƒŽ–Š›Žƒ”˜ƒ‡ˆ‘”Paracentrotuslividusǡ„—–ƒ…‘’Ž‡–‡Žƒ”˜ƒŽ”‡ƒ”‹‰‘ˆ…”›‘’”‡•‡”˜‡†
…”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ ’”‘–‘…‘Ž ȋ‡ŽŽƒ• ƒ† ƒ”‡†‡• ʹͲͳͳȌ ’”‘†—…‹‰ Š‹‰Š •—”˜‹˜ƒŽ ƒ†
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”ƒ‰‡–ƒ”› ‹ˆ‘”ƒ–‹‘ ™ƒ• ’—„Ž‹•Š‡† ‘ –Š‡ species Hemicentrotus pulcherrimus,
…ƒ””‹‡† ‘—– ”‡‰ƒ”†‹‰ •‡ƒ —”…Š‹ …”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ ȋ‰ƒ‡–‡•ǡ ‡„”›‘• ‘” Žƒ”˜ƒ‡ȌǤ
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Š‡ …”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ ‡–Š‘†‘Ž‘‰› ™ƒ• ’‡”ˆ‘”‡† ˆ‘ŽŽ‘™‹‰ ‡–Š‘†• †‡•…”‹„‡† ‹
Cryopreservationprotocol
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…‘ŽŽ‡…–‹‘Ȍ ƒ† Cylindrotheca closterium ȋ …‘ŽŽ‡…–‹‘Ȍ —•‡† †—”‹‰ –Š‡
Chaetoceros gracilis ȋ …‘ŽŽ‡…–‹‘Ȍǡ Phaeodactilum tricornutum ȋ
Tetraselmis suecica ȋͻͲͶȌǡ Isocrysis aff. galbana clon TǦISO ȋͳ͵ʹͶȌǡ
‹‡†‹ƒ–‡Ž›‹–”‘†—…‡†‹–Š‡Žƒ”˜ƒŽ”‡ƒ”‹‰–ƒ•ƒ•…‘–”‘Ž•Ǥ‹…”‘ƒŽ‰ƒ‡…—Ž–—”‡•‘ˆ
…”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ ‡š’‡”‹‡–•Ǥ ‘…›–‡• ˆ”‘ –Š‡ •ƒ‡ „ƒ–…Š ™‡”‡ ˆ‡”–‹Ž‹œ‡† ƒ†
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‘‘…›–‡• ƒ† ‘–‹Ž‡ •’‡” ™‡”‡ —•‡† ˆ‘” ˆ‡”–‹Ž‹œƒ–‹‘Ǥ ˆ‡™ ‹…”‘Ž‹–‡”• ‘ˆ ‘–‹Ž‡
‡š’‡”‹‡– ƒ……‘”†‹‰ –‘ ‡‹”ƒ• ƒ† ƒ…‘ǦŽ˜ƒ”‡œ ȋʹͲͲ͸ȌǤ Ž› „ƒ–…Š‡• ‘ˆ Š‡ƒŽ–Š›
‰‘ƒ†• ™‹–Š ƒ ƒ•–‡—” ’‹’‡––‡ ƒˆ–‡” †‹••‡…–‹‘ ‘ˆ ƒ •‹‰Ž‡ ’ƒ‹” ‘ˆ ƒ†—Ž–• ˆ‘” ‡ƒ…Š
™‡”‡ˆ‡†™‹–Š–Š‡‰”‡‡ƒŽ‰ƒ‡Ulvalactuca.
ƒ‡–‡•™‡”‡‘„–ƒ‹‡††‹”‡…–Ž›ˆ”‘–Š‡
ƒ‹–ƒ‹‡† ‹ ƒ“—ƒ”‹ƒ ™‹–Š ”—‹‰ ƒ–—”ƒŽ ˆ‹Ž–‡”‡† •‡ƒ™ƒ–‡” ȋͳͺάʹ ιǡ ͵ͷΩȌ ƒ†
Àƒ †‡ ‹‰‘ ȋ
ƒŽ‹…‹ƒǡ „‡”‹ƒ ‡‹•—ŽƒȌ †—”‹‰ –Š‡ ƒ–—”ƒŽ ”‡’”‘†—…–‹˜‡ •‡ƒ•‘ǡ
ƒ–—”‡•‡ƒ—”…Š‹•ǡParacentrotuslividusǡ™‡”‡…‘ŽŽ‡…–‡†‹–Š‡‘—–‡”’ƒ”–‘ˆ–Š‡
Biologicalmaterial
2.MaterialsandMethods
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‡„”›‘•ƒ†‡šƒ‹‡–Š‡‹”ƒ„‹Ž‹–›–‘•—”˜‹˜‡ƒ††‡˜‡Ž‘’ˆ”‘‡„”›‘–Š”‘—‰ŠŽƒ”˜ƒŽ
Š‡ ƒ‹ ‘ˆ –Š‹• ™‘” ™ƒ• –‘ –‡•– –Š‡ ˜‹ƒ„‹Ž‹–› ‘ˆ …”›‘’”‡•‡”˜‡† •‡ƒ —”…Š‹
•’‡…‹‡•Ǥ
ƒ† –Šƒ™‡† ‡ƒ”Ž› ‡„”›‘• –‘ •‡––Ž‡‡– Šƒ• ‡˜‡” „‡‡ …ƒ””‹‡† ‘—– „‡ˆ‘”‡ ˆ‘” –Š‹•
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‹‘…—Žƒ–‡†™‹–Šͳͷ‘ˆȋͲǤʹʹρΪŽ–”ƒ˜‹‘Ž‡–Ȍ™‹–ŠˆȀʹ‡†‹—ƒ†ͷ‘ˆƒ
‡˜‡ †ƒ›• „‡ˆ‘”‡ ”‡ƒ…Š‹‰ …‘’‡–‡…‡ǡ ͳͲ ‡–”‹ †‹•Š‡• ’‡” –”‡ƒ–‡– ™‡”‡
–Š‡ˆ‹”•–͵ͷ‹†‹˜‹†—ƒŽ•ǡ‡„”›‘•‹…Ž—†‡†ȌǤ
’‡”ˆ‘”ƒ…‡ǣ•—”˜‹˜ƒŽ…‘—–•ȋαͳͲͲȌǡŽ‡‰–Š‡ƒ•—”‡‡–•ȋƒš‹—†‹‡•‹‘‘ˆ
—”‹‰ Žƒ”˜ƒŽ ”‡ƒ”‹‰ ‹ˆ‘”ƒ–‹‘ ™ƒ• …‘’‹Ž‡† –‘ ‡ƒ•—”‡ –Š‡ Žƒ”˜ƒŽ
—ŽŽ‡”Ǧ‡—‰ƒetalǤȋʹͲͲ͵ȌǤ
‡“—‹˜ƒŽ‡–•—–‹Ž†ƒ›ͳͶƒ†ͺͲ—–‹Ž†ƒ›ʹͲȌƒ•†‡•…”‹„‡†‹ƒ•ƒŽetalǤȋʹͲͳʹȌƒ†
‡“—‹˜ƒŽ‡– ‹ †”› ™‡‹‰Š– –‘ Isochrysis galbanaǡ ˆ”‘ †ƒ› ͲǦ͹ ™‹–Š ͶͲ ‡“—‹˜ƒŽ‡–•ǡ ͸Ͳ
iso, Chaetoceros gracilis ƒ† Phaeodactilum tricornutumǡ ‹ ƒ —„‡” ‘ˆ ƒŽ‰ƒŽ …‡ŽŽ•
ͶͲ–‘ͺͲ‡“—‹˜ƒŽ‡–•ȋƒ†‹‡–„ƒ•‡†‘etraselmissuecica,Isocrysisaff.galvanaclonTǦ
‹…—„ƒ–‡†ƒ–ͳͻάͳ͑™‹–ŠƒʹͶŠ‘—”•Ž‹‰Š–•…Š‡†—Ž‡ȋ͹ǤͳρǦʹ•ǦͳȌǡƒ†™‡”‡ˆ‡†™‹–Š
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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Seaurchincryopreservedembryosapplication౹Chapter3౹
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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4.Discussion
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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Seaurchincryopreservedembryosapplications౹Chapter3౹
3.4CONCLUSIONS
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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CHAPTER4.DEVELOPMENTOFBIVALVE
CRYOPRESERVATIONPROTOCOLS
ANDAPPLICATIONS.
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115
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SUMMARY
APPLICATIONS
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Š‡”‡•‡ƒ”…Š’”‡•‡–‡†‹–Š‹•…Šƒ’–‡”ˆ‘”•’ƒ”–‘ˆ–Š‡ˆ‘ŽŽ‘™‹‰
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1.Introduction
’‡†‹˜‡Ž‹‰‡”•Ǥ
•Š‘™‡†–Šƒ–‘Ž›ʹǤͺΨ‘ˆ–Š‡ˆ”‘œ‡–”‘…Š‘’Š‘”‡•™‡”‡ƒ„Ž‡–‘†‡˜‡Ž‘’–‘…‘’‡–‡–
…‘†—…–‡† –‘ ƒ••‡•• –Š‡ ƒ„‹Ž‹–› ‘ˆ –Š‡•‡ ˆ”‘œ‡ Žƒ”˜ƒ‡ –‘ †‡˜‡Ž‘’ ˆ—”–Š‡”Ǥ ‡•—Ž–•
’Ž—‰‹‰ ‹–‘ Ž‹“—‹† ‹–”‘‰‡Ǥ ˆ‹ƒŽ Žƒ”˜ƒŽ ”‡ƒ”‹‰ ‡š’‡”‹‡– ‘ˆ ͳͺ †ƒ›• ™ƒ•
ˆ—”–Š‡”ͷ‹ǡ–Š‡…‘‘Ž‹‰ƒ–ͲǤͷ͑‹Ǧͳ–‘Ǧ͵ͷ͑ˆ‘ŽŽ‘™‡†„›ƒͷ‹Š‘Ž†ƒ†–Š‡
‹˜‘Ž˜‡†ǣŠ‘Ž†‹‰ƒ–Ͳ͑ˆ‘”ͷ‹ǡ–Š‡…‘‘Ž‹‰ƒ–ͳ͑‹Ǧͳ–‘ǦͳͲ͑ǡŠ‘Ž†‹‰ˆ‘”ƒ
–”‘…Š‘’Š‘”‡• –‘ †‡˜‡Ž‘’ –‘ ǦŽƒ”˜ƒ‡ ™Š‡ ‘”ƒŽ‹œ‡† –‘ …‘–”‘Ž•Ǥ Š‡ ’”‘–‘…‘Ž
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‹ ‘”†‡” –‘ †‡˜‡Ž‘’ ƒ ’”‘–‘…‘Ž ˆ‘” …”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ ‘ˆ –”‘…Š‘’Š‘”‡ Žƒ”˜ƒ‡ ȋͳ͸ȂʹͲ ŠǤ
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Abstract
4.1. CRYOPRESERVATION OF GREENSHELLTM MUSSEL (Perna canaliculus)
TROCHOPHORELARVAE
Developmentofbivalvecryopreservationprotocols౹Chapter4౹
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™ƒ•ƒ••‡••‡†Ǥ
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•–”ƒ–‡‰‹‡•ǤŠ‡ƒ„‹Ž‹–›‘ˆˆ”‘œ‡–”‘…Š‘’Š‘”‡•–‘†‡˜‡Ž‘’–‘˜‹ƒ„Ž‡ǦŽƒ”˜ƒ‡ƒ†„‡›‘†
…‘…‡–”ƒ–‹‘ǡ Ž‘ƒ†‹‰ ƒ† —Ž‘ƒ†‹‰ ‡–Š‘†ǡ ƒ† †‹ˆˆ‡”‡– ˆ”‡‡œ‹‰ ƒ† –Šƒ™‹‰
…”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ •–—†‹‡•Ǥ Š‡ ƒ‹ ‘ˆ –Š‹• •–—†› ™ƒ• –‘ ‡˜ƒŽ—ƒ–‡ –Š‡ ‡ˆˆ‡…–• ‘ˆ †‹ˆˆ‡”‡– Žƒ”˜ƒŽ •–ƒ‰‡• Ž‡ƒ† —• –‘ •‡Ž‡…– –Š‡ –”‘…Š‘’Š‘”‡ Žƒ”˜ƒŽ •–ƒ‰‡ ˆ‘” †‡–ƒ‹Ž‡†
•–ƒ‰‡Ǥ Š‡•‡ •–—†‹‡• –‘‰‡–Š‡” ™‹–Š ‘—” ’”‡Ž‹‹ƒ”› —’—„Ž‹•Š‡† ‡š’‡”‹‡–• ‘
galloprovincialis ƒ– Ǧ•–ƒ‰‡ ƒ† ™‡”‡ ƒ„Ž‡ –‘ ”‡ƒ” ƒ’’”‘š‹ƒ–‡Ž› ͳΨ –‘ ’‡†‹˜‡Ž‹‰‡”
•–ƒ‰‡Ǥ ƒ‰ et al. ʹͲͳͳ ˆ”‘œ‡ Žƒ”˜ƒ‡ ‘ˆ –Š‡ ‡†‹–‡””ƒ‡ƒ —••‡Žǡ Mytilus
ͳͻͺͻ •—……‡••ˆ—ŽŽ› ˆ”‘œ‡ Žƒ”˜ƒ‡ ‘ˆ –Š‡ „Ž—‡ —••‡Žǡ Mytilus edulisǡ ƒ– –Š‡ –”‘…Š‘’Š‘”‡
Š‹‰Š‡” –Š‡ •—”˜‹˜ƒŽ ƒˆ–‡” ˆ”‡‡œ‹‰ ȋ
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
119
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Gametecollectionandhandling
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2.Materialsandmethods
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120
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Cryopreservationexperiments
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121
UniversidadedeVigo ǦFacultadedeCienciasdoMar
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Experiment4:effectofcryopreservationondevelopmentbeyondDǦlarvalstage
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Experiment3:effectoffreezingcontainertypeandvolume
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Experiment2:effectofvaryingEGandTREconcentrations
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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Toxicitytests
3. Results
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Statisticalanalysis
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Developmentofbivalvecryopreservationprotocols౹Chapter4౹
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VWHSDGGLWLRQ
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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UniversidadedeVigo ǦFacultadedeCienciasdoMar
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Experiment1:effectofcoolingrate
Cryopreservationexperiments
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Developmentofbivalvecryopreservationprotocols౹Chapter4౹
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UniversidadedeVigo ǦFacultadedeCienciasdoMar
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Experiment2:effectofvaryingEGandTREconcentrations
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125
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UniversidadedeVigo ǦFacultadedeCienciasdoMar
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
Generaldiscussionandconclussions౹Chapter5౹
126
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Experiment3:effectoffreezingcontainertypeandvolume
1RUPDO'ODUYDH
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UniversidadedeVigo ǦFacultadedeCienciasdoMar
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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Generaldiscussionandconclussions౹Chapter5౹
&U\RSUHVHUYHG
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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Ž‘ƒ†‹‰Ȁ—Ž‘ƒ†‹‰ ƒ† ˆ”‡‡œ‹‰ ‘ˆ –”‘…Š‘’Š‘”‡• ‘ˆ ‘–Š‡” „‹˜ƒŽ˜‡
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Š‡ ’—”’‘•‡ ‘ˆ –Š‹• •–—†› ™ƒ• –‘ ‡˜ƒŽ—ƒ–‡ –Š‡ –‘š‹…‹–› ‘ˆ …‘…‡–”ƒ–‹‘•ǡ
4. Discussion
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‹‰—”‡ͶǤ͸Ǥ˜‡”ƒ‰‡‰”‘™–Š‘˜‡”ͳͻ†ƒ›•‘ˆ–Š‡ˆ”‘œ‡–”‘…Š‘’Š‘”‡•‘ˆˆ‹˜‡†‹ˆˆ‡”‡–…”‘••‡•‹…‘’ƒ”‹•‘
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ƒ…–‹˜‹–› ȋ‘…Š‡ et alǤ ʹͲͲͺǡ ›•ƒŽ et al. ʹͲͲ͹Ȍǡ …‘—Ž† ”‡†—…‡ Ž‹’‹† ’‡”‘š‹†ƒ–‹‘ ‘ˆ –Š‡
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„‡Ž‹‡˜‡† –Šƒ– –Š‡ •ƒ‡ ’”‘…‡•• …ƒ ‘……—” ‹ —••‡Ž –”‘…Š‘’Š‘”‡• †—”‹‰ –Š‡
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ͲǤͷ͑‹Ǧͳ’”‘†—…‡†Š‹‰Š‡”—„‡”•‘ˆ‘”ƒŽǦŽƒ”˜ƒ‡™Š‡…‘„‹‡†™‹–ŠͲǤͳΨ
…‘‘Ž› —•‡† ‹ –Š‡ …”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ ‘ˆ ƒ”‹‡ ‹˜‡”–‡„”ƒ–‡•ǡ ƒ† ‘„•‡”˜‡† –Šƒ–
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Generaldiscussionandconclussions౹Chapter5౹
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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1.Introduction
Žƒ”˜ƒ‡’‘•–Ǧ–Šƒ™‹‰ȋͶͺǤͻά͹Ǥ͸ؐ‘”ƒŽǦŽƒ”˜ƒ‡ȌǤ
–Š‡•‡ …‘„‹ƒ–‹‘•ǡ ƒ”‘—† ŠƒŽˆ ‘ˆ –”‘…Š‘’Š‘”‡• ™‡”‡ ƒ„Ž‡ –‘ †‡˜‡Ž‘’ –‘ ‘”ƒŽ Ǧ
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…”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘’”‘–‘…‘Ž’”‘†—…‹‰–Š‡„‡•–”‡•—Ž–•ˆ‘”‘›•–‡”–”‘…Š‘’Š‘”‡•ȋ͸ͲǤͲά
‘”ƒŽ ǦŽƒ”˜ƒ‡ ˆ‘” ˆ—–—”‡ †‡˜‡Ž‘’‡–• ‘ˆ Šƒ–…Š‡”› •’ƒ– ’”‘†—…–‹‘Ǥ Š‡
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Abstract
MUSSEL(Mytilusgalloprovincialis)
SPECIES OF BIVALVES: PACIFIC OYSTER (Crassostreagigas) AND MEDITERRANEAN
4.2.COMPARATIVECRYOPRESERVATIONSTUDYOFTROCHOPHORELARVAEFROMTWO
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”‡•—Ž–• ȋ‘Ž‡†‘ et al. ͳͻͺͻȌǤ Š‡•‡ •–—†‹‡• –‘‰‡–Š‡” ™‹–Š ‘—” ‡š’‡”‹‡–• ‘
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Generaldiscussionandconclussions౹Chapter5౹
135
UniversidadedeVigo ǦFacultadedeCienciasdoMar
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Gametecollectionandhandling
2. MaterialsandMethods
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
136
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Generaldiscussionandconclussions౹Chapter5౹
UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
137
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UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
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Cryopreservationexperiments
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Generaldiscussionandconclussions౹Chapter5౹
138
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UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
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Toxicitytests
3.Results
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4. Discussion
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5ǤǦ ˜‡”ƒ‰‡•—”˜‹˜ƒŽ‘˜‡”ͳͻ†ƒ›•‘ˆˆ”‘œ‡–”‘…Š‘’Š‘”‡•‘ˆˆ‹˜‡†‹ˆˆ‡”‡–…”‘••‡•™ƒ•
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…‘…‡–”ƒ–‹‘•‘ˆ
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1ǤǦ‘ •‹‰‹Ƥ…ƒ– †‹ˆˆ‡”‡…‡ ™ƒ• ˆ‘—† „‡–™‡‡ –Š‡ –™‘ Ž‘ƒ†‹‰ ‡–Š‘†• ˆ‘”
4.3.CONCLUSIONS
UniversidadedeVigo ǦFacultadedeCienciasdoMar
CHAPTER5.GENERALDISCUSSIONAND
CONCLUSIONS
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
147
GENERALDISCUSSION
5.1
148
UniversidadedeVigo ǦFacultadedeCienciasdoMar
ƒ††‡•’‹–‡•—ˆˆ‡”‹‰•‘‡ƒ„‘”ƒŽ‹–‹‡•ǡͲǤͳǦͲǤʹΨ•—”˜‹˜‡†–Š‡Žƒ”˜ƒŽ”‡ƒ”‹‰Ǥ
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Ž–Š‘—‰Š’”‡˜‹‘—•”‡•‡ƒ”…Š‘•‡ƒ—”…Š‹‡„”›‘•”‡’‘”–‡†’‘•‹–‹˜‡”‡•—Ž–•ǡŽ‹‡
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ˆ‡™ •–—†‹‡• Šƒ˜‡ ˆ‘…—••‡† ‘ –Š‡ …”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ ‘ˆ •‡ƒ —”…Š‹ ‘‘…›–‡•ǡ
GENERALDISCUSSIONANDCONCLUSIONS
5.
Generaldiscussionandconclussions౹Chapter5౹
149
UniversidadedeVigo ǦFacultadedeCienciasdoMar
…”›‘’”‡•‡”˜‡†Žƒ”˜ƒ‡™‡”‡•ƒŽŽ‡”–Šƒˆ”‡•Š…‘–”‘Ž•ȋ…ǤƒǤͳͲǦʹͲΨ•ƒŽŽ‡”ȌǤ
…”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ •—……‡•• ™ƒ• Š‹‰ŠŽ› ˜ƒ”‹ƒ„Ž‡ „‡–™‡‡ „ƒ–…Š‡•ǡ ƒ† ”‡•—Ž–‹‰
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Mytilusgalloprovincialisƒ†Crassostreagigas–”‘…Š‘’Š‘”‡•…”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘•—……‡••
–Š‡ …”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ ’”‘…‡•• ƒ• ‡„”ƒ‡ †ƒƒ‰‡ ‘” •–”‡••Ǥ ‘” Perna Canaliculus,
•—‰‰‡•–‡†–Š‹•†‡Žƒ›‹‰Š–„‡†—‡–‘‡š’‘•—”‡–‘Ž‘™–‡’‡”ƒ–—”‡•ƒ†•‹†‡Ǧ‡ˆˆ‡…–•‘ˆ
…ƒ—•‡ ƒ †‡˜‡Ž‘’‡– †‡Žƒ› ‹ –Š‡ ”‡•—Ž–‹‰ –Šƒ™‡† ‡„”›‘• ‘” Žƒ”˜ƒ‡Ǥ ‡ Šƒ˜‡
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Survival,Growthanddevelopment
›‹‡Ž†‹‰‰‘‘†•—”˜‹˜ƒŽǤ
canaliculus and Mytilus galloprovincialis ƒ† ‘›•–‡” Crassostrea gigas ™ƒ• †‡˜‡Ž‘’‡†
…”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ ’”‘–‘…‘Ž ˆ‘” –”‘…Š‘’Š‘”‡• ‘ˆ –Š”‡‡ „‹˜ƒŽ˜‡ •’‡…‹‡•ǣ —••‡Ž• Perna
•—……‡••ˆ—Ž …”›’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ ‘ˆ Mytilus galloprovincialis –”‘…Š‘’Š‘”‡ Žƒ”˜ƒ‡Ǥ ‡”‡ ƒ
”‡“—‹”‡• ƒ Ž‘– ‘ˆ Šƒ†Ž‹‰ •–‡’•ǡ „—– †‡•’‹–‡ –Š‹•ǡ ‘Ž‡†‘ et al. ȋͳͻͺͻȌ ”‡’‘”–‡†
”‘…Š‘’Š‘”‡ Žƒ”˜ƒ‡ ƒ”‡ ˜‡”› †‡Ž‹…ƒ–‡ –‘ Šƒ†Ž‡ǡ ƒ† ƒ …”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ ’”‘–‘…‘Ž
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 –Š‹• –Š‡•‹• ƒ …”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ ’”‘–‘…‘Ž ˆ‘” •‡ƒ —”…Š‹ Paracentrotus lividus
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
150
Mytilusgalloprovincialis‡š’‡”‹‡–••Š‘™‡†–Šƒ––Š‡”‡™ƒ•‘ƒ…–‹˜‡‰”‘™–Š‘ˆ
Generaldiscussionandconclussions౹Chapter5౹
UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
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™‘ͳͻͻͷǡƒ‹ƒ‰—ƒʹͲͲͳǡ‡”˜‹–etal.
•‘Ž—–‹‘• Šƒ• –‘ „‡ ƒ…Š‹‡˜‡† ȋƒ•‘‡ et alǤ ʹͲͲͷȌǤ ‡…‘†Ž› …”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘
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‹”•–Ž› …”›‘’”‘–‡…–‹‰ ƒ‰‡–• ƒ”‡ •–ƒ‰‡ ƒ† •’‡…‹‡• •’‡…‹ˆ‹… ȋ†ƒ• et alǤ ʹͲͲͻǡ
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Cryopreservationprotocols
ƒŽ•‘‡„”›‘•–Šƒ–…ƒ‰”‘™‹–‘Žƒ”˜ƒ‡ƒ†‡–ƒ‘”’Š‘•‡ƒ†•‡––Ž‡‹–‘Œ—˜‡‹Ž‡•Ǥ
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
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Žƒ”‰‡•…ƒŽ‡ƒ“—ƒ…—Ž–—”‡’”‘†—…–‹‘ǤŠ‡’‘••‹„‹Ž‹–›‘ˆ…ƒ””›‹‰‘—–ƒŽƒ”˜ƒŽ”‡ƒ”‹‰™‹–Š
™Š‡”‡‘”‡”‡•‡ƒ”…Š‹•‡‡†‡†–‘‹’”‘˜‡Ž‘‰–‡”˜‹ƒ„‹Ž‹–›‹‘”†‡”–‘„‡—•‡ˆ—Ž–‘
‹˜ƒŽ˜‡…”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘’”‘–‘…‘Ž•ˆ‘”–”‘…Š‘’Š‘”‡•ƒ”‡ƒ–ƒ†‡˜‡Ž‘’‡–•–ƒ‰‡
Applicationsofcryopreservationprotocols
ƒ†‡‡”‰›–‘™‘”Ǥ
†‹•”—’–‹‘•ȋ…‡‹Žƒ†‹”…ŠŠƒ—•‡ʹͲͲͷȌǡ„—–ƒŽŽ–Š‡•‡”‡…‘˜‡”›–‘‘Ž•ƒŽ•‘–ƒ‡–‹‡
Šƒ˜‡ ‡…Šƒ‹• ‘ˆ †‡ƒŽ‹‰ ™‹–Š ȋƒ—‡” et al. ʹͲͲ͵Ȍ ƒ† ‡„”ƒ‡ ‹–‡‰”‹–›
˜‘Ž—‡‡š…—”•‹‘•ƒ••‘…‹ƒ–‡†™‹–Šƒ††‹–‹‘Ȁ”‡‘˜ƒŽƒ†ˆ”‡‡œ‹‰Ȁ–Šƒ™‹‰Ǥ‡ŽŽ•
‡…Šƒ‹…ƒŽ •–”‡•• ‘ˆ Šƒ†Ž‹‰ ƒ† ‹…‡ ‰”‘™–Šǡ ‡„”ƒ‡ †‡ˆ‘”ƒ–‹‘ †—‡ –‘ –Š‡
—– –Š‡”‡ ‹‰Š– „‡ ‘–Š‡” ˆƒ…–‘”• ƒ• ™‡ŽŽǡ Ž‹‡ •–”‡•• ‰‡‡”ƒ–‡† „› • –‘š‹…‹–›ǡ
’—––‹‰ƒŽŽ–Š‘•‡‡–ƒ„‘Ž‹…’ƒ–Š™ƒ›•„ƒ…–‘™‘”–ƒ‡•–‹‡ƒ†‡‡”‰›Ǥ
’‘‹––Š‡‡–ƒ„‘Ž‹…ˆ—…–‹‘‹•…‘’Ž‡–‡Ž›‘Š‘Ž†ƒ†‹–‹•”‡ƒ•‘ƒ„Ž‡–‘ƒ••—‡–Šƒ–
–‡’‡”ƒ–—”‡•”‡•—Ž–•‹–Š‡•Ž‘™†‘™‘ˆ‡–ƒ„‘Ž‹•ˆ‘”ƒ›‘”‰ƒ‹••„—–ƒ––Š‹•
…‘—Ž† „‡ •–‘”‡† ˆ‘” ƒ• Ž‘‰ ƒ• ‡‡†‡†Ǥ – ‹• ™‡ŽŽ ‘™ –Šƒ– ‡š’‘•—”‡ –‘ Ž‘™
Ž‹“—‹†‹–”‘‰‡ȋǦͳͻ͸͑ȌƒŽŽ‡–ƒ„‘Ž‹…”‡ƒ…–‹‘•ƒ”‡‘Š‘Ž†ǡƒ†–Š‡‘”‡–‹…ƒŽŽ›•ƒ’Ž‡•
–Š‹•™‘”–Šƒ––Š‹•‹‰Š–„‡†—‡‹’ƒ”––‘Ž‘™–‡’‡”ƒ–—”‡‡š’‘•—”‡ǤŠ‡•–‘”‡†‹
–Šƒ™‹‰ǡ͵ǦͶ †ƒ›•™Š‡ƒŽ‘•–‘ƒ…–‹˜‡‰”‘™–Š‹•‘–‹…‡†Ǥ–Šƒ•„‡‡•—‰‰‡•–‡†‹
–—•–„‡‘–‡†–Šƒ–‹–Šƒ•„‡‡…‘•‹•–‡–Ž›ˆ‘—†ƒ†‡Žƒ›‹†‡˜‡Ž‘’‡–ƒˆ–‡”
”‡•—Ž–•Ǥ
’”‘†—…‡ƒˆ‹ƒŽ…”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘’”‘–‘…‘Ž†‹ˆˆ‡”‡–ˆ”‘–Š‡‹‹–‹ƒŽ‹†‡ƒ›‹‡Ž†‹‰„‡––‡”
–Š‡’”‘–‘…‘Žǡ–Š‡…‘…‡–”ƒ–‹‘•ƒ†‘–Š‡”•’‡…‹ˆ‹…ƒ†ƒ’–ƒ–‹‘•–‘–Š‡•’‡…‹‡•ǡ…ƒ
•‹‹Žƒ”…‡ŽŽ—Žƒ”–›’‡•‘ˆ•‹‹Žƒ”•’‡…‹‡•…ƒ„‡ƒ˜ƒŽ‹†•–ƒ”–’‘‹–Ǥ”‘–Šƒ–•–ƒ”–’‘‹–
‹†‹…ƒ–‡•–Šƒ–™Š‡ƒ’’”‘ƒ…Š‹‰–Š‡…”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘‘ˆ‡™•’‡…‹‡•ǡ’”‘–‘…‘Ž•ˆ”‘
–Š‡ ‡š‹•–‡…‡ ‘ˆ ƒ —‹˜‡”•ƒŽ …”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ ’”‘–‘…‘Ž ˆ‘” ƒ …‡ŽŽ—Žƒ” –›’‡ǡ „—–
…”›‘’”‡•‡”˜‡†—•‹‰•‹‹Žƒ”’”‘–‘…‘Ž•ƒ†›‹‡Ž†•‹‹Žƒ””‡•—Ž–•ǤŠ‹•†‘‡•‘–‹†‹…ƒ–‡
–ƒ‹‰ ‹–‘ ƒ……‘—– •‹œ‡ǡ ‡„”ƒ‡ …‘’‘•‹–‹‘ ƒ† –Š‡”‡ˆ‘”‡ ’‡”‡ƒ„‹Ž‹–›ǡ …ƒ „‡
ʹͲͲͷȌ„—–ǡƒ•„‹˜ƒŽ˜‡”‡•‡ƒ”…Š•—‰‰‡•–•ǡ•‹‹Žƒ”†‡˜‡Ž‘’‡–•–ƒ‰‡•‘ˆ•‹‹Žƒ”•’‡…‹‡•ǡ
Generaldiscussionandconclussions౹Chapter5౹
152
UniversidadedeVigoǦFacultadedeCienciasdoMar
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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CONCLUSSIONS
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Generaldiscussionandconclussions౹Chapter5౹
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౹Bibliography౹
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BIBLIOGRAPHY
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౹Bibliography౹
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UniversidadedeVigo ǦFacultadedeCienciasdoMar
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
౹Bibliography౹
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UniversidadedeVigo ǦFacultadedeCienciasdoMar
LISTOFFIGURESANDTABLES
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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౹FiguresandTables౹
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Figure 1.6 …‘‘‹… ˜ƒŽ—‡ ‘ˆ –Š‡ ™‘”Ž†™‹†‡ ’”‘†—…–‹‘ ‘ˆ ƒ”‹‡
‹˜‡”–‡„”ƒ–‡•„›ƒ“—ƒ…—Ž–—”‡ˆ”‘ƒ”‹‡ƒ†„”ƒ…‹•Š™ƒ–‡”†—”‹‰–Š‡
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Figure 1.5. Ǧ ‘”Ž† ’”‘†—…–‹‘ ‘ˆ ƒ”‹‡ ‹˜‡”–‡„”ƒ–‡• „› ƒ“—ƒ…—Ž–—”‡
”‡’”‘†—…‡†from”‹‰Š–Ƭ‡Ž„‘—”ȋʹͲͲʹȌǤ
Figure 1.4 .Ǧ ”‹…‹’ƒŽ …‘’‘‡–• ƒ† ƒ‹• ‘ˆ …‘–‘š‹…‘Ž‘‰›Ǥ ‹‰—”‡
Table1.3.Ǧ”›‘„‹‘Ž‘‰›•–—†‹‡•…ƒ””‹‡†‘—–™‹–Š‡…Š‹‘‹†•Ǥ
Table1.2.Ǧ”›‘„‹‘Ž‘‰›•–—†‹‡•…ƒ””‹‡†‘—–™‹–Š‘ŽŽ—•…•Ǥ
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–Š‡ ˜‹ƒŽ• „‡‹‰ ‹–”‘†—…‡† ‹ –Š‡ …”›‘…Šƒ„‡”Ǥ ‘––‘ Ž‡ˆ–ǣ †‡–ƒ‹Ž ‘ˆ –Š‡
…‘–”‘ŽŽ‡”ƒ†…”›‘…Šƒ„‡”‹•‹†‡‘ˆ–Š‡…”›‘„ƒ–ŠǤ‘––‘”‹‰Š–ǣ†‡–ƒ‹Ž‘ˆ
Figure 1.3Ǥ Ǧ ”‡‡œ‡ ‘–”‘Ž̺ …”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ •›•–‡Ǥ ‘’ǣ …‘’—–‡”ǡ
Š‡‰”ƒ’Š™ƒ•”‡’”‘†—…‡†ˆ”‘‡‰‰(2007).
Figure1.2.Ȃ…Š‡ƒ–‹…”‡’”‡•‡–ƒ–‹‘‘ˆ”ƒ’‹†ƒ†•Ž‘™…‘‘Ž‹‰‘ˆ…‡ŽŽ•Ǥ
Figure1.1ǤǦ‘’ƒ”ƒ–‹˜‡‡ˆˆ‡…–•‘ˆ…‘‘Ž‹‰”ƒ–‡•‘–Š‡•—”˜‹˜ƒŽ‘ˆ˜ƒ”‹‘—•
…‡ŽŽ• …‘‘Ž‡† –‘ Ǧͳͻ͸͑Ǥ Š‡ ‰”ƒ’Š ™ƒ• ”‡’”‘†—…‡† ˆ”‘ Mazur et al.
(1980)Ǥ
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175
Table 1.1 Ȃ Š›•‹…‘…Š‡‹…ƒŽ ’”‘’‡”–‹‡• ‘ˆ ‘•– —•‡† …”›‘’”‘–‡…–‹‰
ƒ‰‡–•ǣ†‹‡–Š›Ž•—Žˆ‘š‹†‡ȋ‡ʹȌǡ‡–Š›Ž‡‡‰Ž›…‘Žȋ
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Table 2.1.Ǧ • …‘…‡–”ƒ–‹‘• –‡•–‡†Ǥ ‡Ž‡…–‡† …‘…‡–”ƒ–‹‘• ˆ‘”
‹š–—”‡‡š’‡”‹‡–•ƒ”‡•Š‘™‹„‘Ž†ˆƒ…‡Ǥ
UniversidadedeVigo ǦFacultadedeCienciasdoMar
Table 2.4.Ǧ ‘”—Žƒ–‹‘ ‘ˆ –Š‡ ƒ”–‹Ƥ…‹ƒŽ •‡ƒ™ƒ–‡” —•‡† ‹ –Š‡
‡š’‡”‹‡–•Ǥ
Table2.3.Ǧ‡”…‡–ƒ‰‡‘ˆŽƒ”˜ƒŽ‰”‘™–Šƒ†‘”ƒŽŽƒ”˜ƒ‡‹P.lividus
ƒˆ–‡” ͵Ͳ ‹ ‡š’‘•—”‡ ‘ˆ —ˆ‡”–‹Ž‹œ‡† ‘‘…›–‡•ǡ ˆ‡”–‹Ž‹œ‡† ‘‘…›–‡• ƒ†
„Žƒ•–—Žƒ‡ –‘ †‹ˆˆ‡”‡– …‘…‡–”ƒ–‹‘• ‘ˆ ‡ʹǡ ǡ ǡ ǡ ƒ† ȋ–ƒ†ƒ”††‡˜‹ƒ–‹‘•ƒ”‡•Š‘™‹„”ƒ…‡–•ȌǤ
Figure. 2.4.Ǧ ‡”…‡–ƒ‰‡ ‘ˆ Žƒ”˜ƒŽ ‰”‘™–Š ‹ P. lividus ƒˆ–‡” ͵Ͳ ‹
‡š’‘•—”‡ ‘ˆ —ˆ‡”–‹Ž‹œ‡† ‘‘…›–‡•ǡ ˆ‡”–‹Ž‹œ‡† ‘‘…›–‡• ƒ† „Žƒ•–—Žƒ‡ –‘
†‹ˆˆ‡”‡–…‘„‹ƒ–‹‘•‘ˆ
™‹–Šƒ†ǤȋȌ
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†‡˜‹ƒ–‹‘•
Figure. 2.3ǤǦ ‡”…‡–ƒ‰‡ ‘ˆ Žƒ”˜ƒŽ ‰”‘™–Š ‹ P. lividus ƒˆ–‡” ͵Ͳ ‹
‡š’‘•—”‡ ‘ˆ —ˆ‡”–‹Ž‹œ‡† ‘‘…›–‡•ǡ ˆ‡”–‹Ž‹œ‡† ‘‘…›–‡•ǡ ƒ† „Žƒ•–—Žƒ‡ –‘
†‹ˆˆ‡”‡–…‘„‹ƒ–‹‘•‘ˆ
™‹–Šƒ†ǤȋȌ
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Figure. 2.2.Ǧ ‡”…‡–ƒ‰‡ ‘ˆ Žƒ”˜ƒŽ ‰”‘™–Š ‹ P. lividus ƒˆ–‡” ͵Ͳ ‹
‡š’‘•—”‡ ‘ˆ —ˆ‡”–‹Ž‹œ‡† ‘‘…›–‡•ǡ ˆ‡”–‹Ž‹œ‡† ‘‘…›–‡•ǡ ƒ† „Žƒ•–—Žƒ‡ –‘
†‹ˆˆ‡”‡–…‘„‹ƒ–‹‘•‘ˆ‡ʹ™‹–Šƒ†ǤȋȌ‡ʹͳΪ
ǢȋȌ‡ʹͳǤͷΪǢȋȌ‡ʹͳΪǢȋȌ‡ʹͳǤͷΪ
ǢȋȌ‡ʹʹΪǤ””‘”„ƒ”•”‡’”‡•‡–•–ƒ†ƒ”††‡˜‹ƒ–‹‘•Ǥ
Table 2.2.Ǧ ƒ† ˆ‘” –Š‡ –‡•–‡† • ƒŽ‘‡ ƒ† ‹
…‘„‹ƒ–‹‘Ǥ
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Figure1.10ǤǦ…Š‡‡‘ˆ–Š‡Ž‹ˆ‡…›…Ž‡‘ˆ„‹˜ƒŽ˜‡•ǤȋƒȌPernacanaliculusǢ
ȋ„ȌMytilusgalloprovincialisǢȋ…ȌCrassostreagigasǤ
Figure.2.1.Ǧ‘’ƒ”‹•‘‘ˆ•‹’”‡‰ƒ–‹‘’”‘–‘…‘Ž•‹ˆ‡”–‹Ž‹œ‡†
‘‘…›–‡• ƒ† „Žƒ•–—Žƒ‡ ‘ˆ Ǥ Ž‹˜‹†—•Ǥ ȋȌ ‡”…‡–ƒ‰‡ ‘ˆ Žƒ”˜ƒŽ ‰”‘™–Š
ƒˆ–‡”͵Ͳ‹‡š’‘•—”‡‘ˆ‡„”›‘•–‘†‹ˆˆ‡”‡–…‘…‡–”ƒ–‹‘•‘ˆ‡ʹ
ƒ††‡†‹ͳͷƤš‡†˜‘Ž—‡•–‡’•ǤȋȌ‡”…‡–ƒ‰‡‘ˆŽƒ”˜ƒŽ‰”‘™–Šƒˆ–‡”
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†‹ˆˆ‡”‡…‡•δͲǤͲͷǤ‡ƒάǤ
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…‘’‘—†•Ǥ“—ƒ”‡•”‡’”‡•‡––Š‡”‡•—Ž–•‘ˆ–Š‡•–ƒ†ƒ”†„‹‘ƒ••ƒ›ȋšȌ
ƒ†–Š‡ˆ”‡•Š„Žƒ•–—Žƒ„‹‘ƒ••ƒ›ȋ›Ȍǡ…‹”…Ž‡•”‡’”‡•‡––Š‡•–ƒ†ƒ”†ȋšȌ
˜‡”•—• …”›‘’”‡•‡”˜‡† „Žƒ•–—Žƒ „‹‘ƒ••ƒ› ȋ›Ȍǡ ƒ† –”‹ƒ‰Ž‡• ”‡’”‡•‡–
–Š‡ ˆ”‡•Š ȋšȌ ˜‡”•—• …”›‘’”‡•‡”˜‡† „Žƒ•–—Žƒ „‹‘ƒ••ƒ› ȋ›ȌǤ ‹‡ƒ”
”‡‰”‡••‹‘ƒ†‡“—ƒ–‹‘•ƒ”‡•Š‘™Ǥ
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͑Ȁ‹ ‹ ͳͲ ƒ† ͳͷΨ ƒ† ͵ Ž‡˜‡Ž• ‘ˆ Ǥ ŽŽ †ƒ–ƒ Šƒ• „‡‡
‘”ƒŽ‹œ‡† –‘ –Š‡ …‘–”‘Ž•Ǥ ‡––‡”• ƒ„‘˜‡ ‹†‹…ƒ–‡ •–ƒ–‹•–‹…ƒŽ
†‹ˆˆ‡”‡…‡•δͲǤͲͷǤ‡ƒά
Figure4.4.Ǧ ˆˆ‡…– ‘ˆ †‹ˆˆ‡”‡– …‘–ƒ‹‡” –›’‡• ƒ† ˆ”‡‡œ‹‰ ˜‘Ž—‡•
ȋͲǤʹͷƒ†ͲǤͷŽ•–”ƒ™•Ǣʹƒ†ͶŽ˜‹ƒŽ•Ȍˆ‘”–™‘…‘„‹ƒ–‹‘•‘
–Š‡ ’‡”…‡–ƒ‰‡ ‘ˆ –”‘…Š‘’Š‘”‡ Žƒ”˜ƒ‡ ”‡ƒ…Š‹‰ ǦŽƒ”˜ƒŽ •–ƒ‰‡ ’‘•–Ǧ
–Šƒ™‹‰Ǥ ŽŽ †ƒ–ƒ Šƒ• „‡‡ ‘”ƒŽ‹œ‡† –‘ –Š‡ …‘–”‘Ž•Ǥ ‡––‡”• ƒ„‘˜‡
‹†‹…ƒ–‡•–ƒ–‹•–‹…ƒŽ†‹ˆˆ‡”‡…‡•δͲǤͲͷǤ‡ƒά
Figure4.5ǤǦ˜‡”ƒ‰‡•—”˜‹˜ƒŽ‘˜‡”ͳͻ†ƒ›•‘ˆˆ”‘œ‡–”‘…Š‘’Š‘”‡•‘ˆ
ˆ‹˜‡ †‹ˆˆ‡”‡– …”‘••‡• ‹ …‘’ƒ”‹•‘ ™‹–Š –Š‡‹” ”‡•’‡…–‹˜‡ —ˆ”‘œ‡
…‘–”‘Ž•ǤŠ‡—„‡”‘ˆǦŽƒ”˜ƒ‡‹‡ƒ…Š–”‡ƒ–‡–™‡”‡•–ƒ†ƒ”†‹•‡†
ƒ––Š‡•–ƒ”–‘ˆ–Š‡Žƒ”˜ƒŽ”‡ƒ”‹‰’‡”‹‘†ȋ‹Ǥ‡Ǥƒ›Ͳα–Š‡ˆ‹”•–†ƒ›Žƒ”˜ƒ‡
”‡ƒ…Š‡†ǦŽƒ”˜ƒŽ•–ƒ‰‡ȌǤ‡ƒά
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…‘–”‘Ž•Ǥ‡ƒά
Figure 4.7.Ǧ ‡”…‡–ƒ‰‡ ‘ˆ ǦŽƒ”˜ƒ‡ †‡˜‡Ž‘’‹‰ ˆ”‘ ‘›•–‡”
–”‘…Š‘’Š‘”‡•ˆ‘ŽŽ‘™‹‰‡š’‘•—”‡–‘‹…”‡ƒ•‹‰…‘…‡–”ƒ–‹‘•‘ˆ
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…‘„‹ƒ–‹‘ –‘ ȋȌ ƒ†Ȁ‘” ͳΨ Ǥ Š‡ „ƒ” ”‡’”‡•‡–• ƒ
Šƒ†Ž‹‰…‘–”‘ŽǤŽŽ†ƒ–ƒŠƒ•„‡‡‘”ƒŽ‹œ‡†–‘–Š‡…‘–”‘Ž•Ǥ‡ƒά
–ƒ†ƒ”†””‘”ȋȌǤ
Figure 4.8.Ǧ ‡”…‡–ƒ‰‡ ‘ˆ ǦŽƒ”˜ƒ‡ †‡˜‡Ž‘’‡† ˆ”‘ —••‡Ž
–”‘…Š‘’Š‘”‡•ˆ‘ŽŽ‘™‹‰‡š’‘•—”‡–‘‹…”‡ƒ•‹‰…‘…‡–”ƒ–‹‘•‘ˆ
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…‘„‹ƒ–‹‘–‘ȋȌǤŽŽ†ƒ–ƒŠƒ•„‡‡‘”ƒŽ‹œ‡†–‘–Š‡…‘–”‘Ž•Ǥ
‡ƒά–ƒ†ƒ”†””‘”ȋȌǤ
Figure 4.9.Ǧ ‡”…‡–ƒ‰‡ ‘ˆ ƒ…‹ˆ‹… ‘›•–‡” –”‘…Š‘’Š‘”‡• †‡˜‡Ž‘’‹‰ –‘
ǦŽƒ”˜ƒ‡ˆ‘ŽŽ‘™‹‰…”›‘’”‡•‡”˜ƒ–‹‘ƒ–ͲǤͷ͑‹Ǧͳƒ†ͳ͑‹Ǧͳ‹
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UniversidadedeVigo ǦFacultadedeCienciasdoMar
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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Resumen
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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Capítulo1
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Fundamentosdecriobiología
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Acuiculturadeinvertebradosmarinos:
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Fundamentosdecotoxicología
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CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
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౹Resumen౹
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Capítulo2
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Capítulo3
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Capítulo4
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Capítulo5
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Conclusiones:
197
198
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PULICATIONSINSCIJOURNALS
CryopreservationofmarineinvertebrateearlyǦlifestages
199
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200
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applications
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UniversityofTennessee(USA), herPhDthesisis
research stays in Cawthron Institute (NZ) and
counting with seven months accumulated in
participated in several research projects and
Advance Studies Diploma in 2010. Having
Finished her PhD master studies obtaining the
specialization on Environment and Pollution.
by Universidade de Vigo (Spain) with a
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