B1240127
Discos de O.N.P.G.
USO
Prueba rápida que permite diferenciar entre microorganismos fermentadores lentos de lactosa y no fermentadores.
Su uso es muy difundido para confirmar o descartar especies de
Salmonella.
PROCEDIMIENTO
Siembra
A partir de un cultivo puro, hacer una suspensión densa en 0.2 ml
de solución fisiológica estéril (aproximadamente Nº 2 de la escala
de Mc Farland), y agregar un disco de O.N.P.G.
FUNDAMENTO
La lactosa es un hidrato de carbono que puede ser fermentado
de manera rápida (18-24 horas), en forma lenta, o puede no ser
fermentado.
Los microorganismos que la fermentan rápidamente poseen 2 enzimas, la β−galactósido permeasa que está localizada en membrana
celular y participa en el transporte de la lactosa al interior de la
célula y la enzima β−galactosidasa, que es intracelular e interviene
en la hidrólisis de la lactosa con liberación de galactosa y glucosa.
Los microorganismos fermentadores lentos de lactosa son deficientes en la enzima β−galactósido permeasa pero no en β−galactosidasa, y los microorganismos no fermentadores no poseen
ninguna de estas 2 enzimas.
El O.N.P.G. es un compuesto incoloro, de estructura química similar
a la lactosa y que puede ingresar rápidamente al interior de la célula
bacteriana sin la necesidad de la enzima β−galactósido permeasa.
En el interior de la célula es metabolizado por la enzima β−galactosidasa y se genera galactosa y o-nitro-fenol, que es un compuesto
de color amarillo.
Al obtenerse un resultado positivo en la prueba del O.N.P.G. significa que el microorganismo en estudio es un fermentador lento de
la lactosa.
Si el resultado de la prueba es negativo, implica que el microorganismo no fermenta la lactosa.
Incubación
En aerobiosis, a 35-37 ºC hasta 4 horas.
Importante: se debe incubar hasta 24 horas antes de descartar una
reacción como negativa.
CONTENIDO Y COMPOSICIÓN
Código B1240127: envase x 50 discos.
Discos impregnados con el sustrato orto-nitrofenilgalactopiranosido (O.N.P.G.).
INSTRUCCIONES
Producto listo para usar.
ALMACENAMIENTO
A 2-8 °C.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Observar el color del disco de O.N.P.G y/o de la suspensión.
Positivo: color amarillo.
Negativo: ausencia de color amarillo.
CONTROL DE CALIDAD
MICROORGANISMOS
PRUEBA O.N.P.G.
Escherichia coli ATCC 25922
+
Escherichia coli ATCC 35218
+
Salmonella typhimurium ATCC 14028
-
Proteus mirabilis ATCC 43071
-
CONTROL DE ESTERILIDAD Medio sin inocular
RESULTADO
Sin cambios
LIMITACIONES
- Se recomienda realizar en paralelo un control positivo y un control
negativo.
- Es necesario trabajar con un inóculo denso del microorganismo
para incrementar la velocidad de la reacción.
- La glucosa inhibe la actividad de la enzima β−galactosidasa. Las
bacterias que desarrollan en medios glucosados muestran menor
actividad que las que crecen en medios lactosados.
MATERIALES NECESARIOS NO PROVISTOS
Equipos y material de laboratorio, microorganismos para control de calidad, reactivos y medios de cultivo adicionales según
HOJA 1 DE 2
Discos de O.N.P.G.
requerimiento.
- Descartar el producto que no ha sido utilizado y los desechos del
mismo según reglamentaciones vigentes.
REFERENCIAS
- Manafi M., W Kneifel, and S. Bascomb. 1991. Fluorogenic and
chromogenic substrates used in bacterial diagnostics. Microbiol
Rev. 55:335-348.
- Murray P.R., Baron, Pfaller, Tenover and Yolken. 1999. Manual of
clinical microbiology, 7th ed. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
- MacFaddin. 2000. Biochemical tests for identification of medical
bacteria, 3rd ed., Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, Md.
INDICACIONES AL CONSUMIDOR
Utilizar el producto hasta su fecha de vencimiento.
Conservar el producto según las indicaciones del rótulo.
01/2011 - REV .00
PRECAUCIONES
- Solamente para uso diagnóstico in vitro. Uso profesional exclusivo.
- No utilizar el producto si al recibirlo su envase está abierto o dañado.
- No utilizar el producto si existen signos de contaminación o deterioro, así como tampoco si ha expirado su fecha de vencimiento.
- Utilizar guantes y ropa protectora cuando se manipula el producto.
- Considerar las muestras como potencialmente infecciosas y manipularlas apropiadamente siguiendo las normas de bioseguridad
establecidas por el laboratorio.
- Las características del producto pueden alterarse si no se conserva apropiadamente.
SÍMBOLOS UTILIZADOS
DIAGNÓSTICO
IN VITRO
CÓDIGO Nº
ELABORADOR
LABORATORIOS BRITANIA S.A.
LOS PATOS 2175 (C1283ABI)
CABA - ARGENTINA
TEL/FAX 54 11 4306 0041
ESTÉRIL
Nº DE
DETERMINACIÓNES
LOTE Nº
FECHA DE
VENCIMIENTO
LÍMITE DE
TEMPERATURA
INSTRUCCIONES
DE USO
HOJA 2 DE 2
0
