3) Músculo liso vascular : exp con anillos de aorta de rata

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Músculo liso vascular : experimento con anillos de aorta de rata
a) Extracción de la aorta
Utilizaremos para el experimento una rata adulta macho de la cepa Wistar. Colocar el animal en un recipiente adecuado que contenga un algodón con éter etílico y
esperar que se anestesie. Sacarlo de la cámara de anestesia y fijarlo por las cuatro
patas a la mesada. Abrir el abdomen con una tijera y observar los órganos. Ubicar el
diafragma y cortarlo para comunicar el tórax con la atmósfera (neumotórax). Cortar
las costillas con la tijera y rebatir la caja torácica para descubrir los pulmones y el
corazón. Correr hacia la izquierda los intestinos, el estómago y el hígado ( con cuidado, para evitar hemorragia ) para poder ver la aorta, que corre paralela a la columna vertebral. Con una pinza sujetar la aorta abdominal. Con cortes cuidadosos ir
separando la arteria del tejido conectivo que la rodea hasta llegar casi al corazón.
Lavar la aorta con solución de Krebs-Ringer-CO3H- burbujeada con 95% O2 - 5%
CO2 y cuidadosamente eliminar los restos de tejido adheridos a ella. Cortar dos anillos de ~5mm de longitud.
b) Montado de los anillos en el transductor de fuerza
Colgar cada anillo según el esquema de la
figura: un estribo fijo y el otro unido a un transductor de fuerza. El extremo unido al transductor
se puede mover hacia arriba o hacia abajo con
un tornillo, y de esa manera regular la tensión a
la que se encuentra el anillo. Sumergir cada uno
de los segmentos del vaso en una cámara con
solución de Krebs-Ringer-CO3H- burbujeada con
95% O2 - 5% CO2 y termostatizada a 37o C y.
Darle a los preparados una tensión de reposo
de 3g.
Cuando el segmento de arteria se contrae
ejerce una tensión sobre el alambre; esta tensión es transformada por el transductor en una
señal eléctrica que es recogida por una computadora para ser graficada en la pantalla como un
registro de fuerza en función del tiempo.
c) Realización del experimento :
Dejar que el preparado se estabilice durante una hora. Durante este tiempo se
realizarán tres lavados (uno cada 20 minutos) y se corregirá la tensión de reposo
cuando sea necesario.
Una vez terminado el período de estabilización se ensayará la acción de distintos
compuestos:
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- Noradrenalina (NA), angiotensina II (Ang II) y cafeína (Caf) que producirán contracción del músculo liso vascular.
- NA en solución de KRB libre de Ca++ o en presencia de un bloqueante cálcico:
compararla con la contracción anterior.
- Acetilcolina (ACh) para demostrar la acción relajante del endotelio.
Entre una y otra intervención realizar dos lavados para que el preparado vuelva a la
situación de reposo.