Instrucciones - Centro de Nanociencias y Micro y Nanotecnologías

INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL
CENTRO DE NANOCIENCIAS Y MICRO Y NANOTECNOLOGIAS
INSTRUCTIVO PARA PREPARACION Y ENVIO DE MUESTRAS
ESPECTROMETRO BRUKER micrOTOF-Q II
Dr. Daniel Arrieta Baez
Responsable del Laboratorio de Espectrometría de Masa
TODAS LAS MUESTRAS DEBEN ESTAR ACOMPAÑADAS DE LA SOLICITUD GENERAL
CORRESPONDIENTE Y DEL FORMATO GENERAL DE ENVIO DE MUESTRAS, completando toda la
información ahí solicitada. La información estructural es muy importante para elegir las
condiciones óptimas de ionización incluyendo el agregado de promotores de ionización y
seleccionar modo positivo o negativo. Los valores de M+H+ y M+Na+ pueden calcularse fácilmente
con programas como ChemDraw u otros específicos que se encuentran en internet, como por
ejemplo:
http://www.chemcalc.org/mf_finder/mfFinder_em_new
ChemSketch: http://www.acdlabs.com/resources/freeware/
Los experimentos disponibles son: determinación de espectro de masa (Puede hacerse
fragmentación “in source”) y análisis MS/MS para iones seleccionados (por defecto el análisis
MS/MS se realiza sobre el ión molecular salvo indicación contraria), determinación de fórmula
molecular.
Las muestras se analizaran primero con la fuente de electrospray (ESI) con eventual agregado de
promotores de ionización. En caso de no lograrse la ionización de la muestra, se usará la fuente de
APCI.
En el caso de mezclas a analizar por CROMATOGRAFÍA LIQUIDA – ESPECTROMETRÍA DE MASAS
(UHPLC-MS), se debe proveer junto con la muestra un cromatograma con detección UV-Vis
realizado en condiciones compatibles con el sistema: fase móvil de metanol-agua o acetoniriloagua (pH entre 3.5 y 8), SIN buffers salinos, sales, ácidos o bases minerales (sólo se admiten
buffers volátiles, ejm acetato de amonio). El flujo no excederá 0.5 mL/min (se harán los ajustes
necesarios si los flujos son mayores). Proporcionar los datos de la columna utilizada (tipo de
columna, longitud, diámetro interno, tamaño de partícula), consultar previamente las columnas
disponibles (Por el momento el laboratorio de espectrometría de masa sólo cuenta con columnas
C18).
LAS MUESTRAS DEBEN ENVIARSE EN VIALES DE VIDRIO NUEVOS (nunca lavados con detergentes)
o en TUBOS EPPENDORF DE ALTA CALIDAD RESISTENTES A DISOLVENTES. Eppendorf vende tubos
de distintas calidades, verificar que se cumpla la especificación anterior. Tubos “tipo Eppendorf”
de otras marcas en general pueden contaminar las muestras. Las muestras deben prepararse con
extremo cuidado evitando incorporar contaminantes (grasas de las manos, jabón, detergentes,
plastificantes, residuos de disolventes, etc.) El equipo es extremadamente sensible y muchos de
estos contaminantes suelen dar iones muy intensos aunque se encuentren en pequeña cantidad.
La presencia de cationes como Na+ produce iones M+Na que al fragmentarse dejan la cargan en el
Na+. Si está interesado en ver fragmentaciones (espectro de masa, MS/MS) evite la contaminación
con cualquier tipo de catión, especialmente Na+.
DEBEN ENTREGARSE PREFERENTEMENTE ENTRE 0.5 - 1.0 mg DE MUESTRA PESADA. Esta cantidad
es suficiente para hacer las diluciones correspondientes; conocer la cantidad de muestra permite
que se analice en la concentración adecuada evitando repeticiones. Tener en cuenta que un
exceso de muestra puede ensuciar considerablemente al equipo. No se recibirán muestras con 2 o
mas mg o que no indiquen la cantidad enviada.
Puede entregarse muestras en solución, sin embargo los disolventes utilizados deben ser de
calidad LC-MS (calidad HPLC no es suficiente)
LAS MUESTRAS SE DISUELVEN EN METANOL (CALIDAD LC-MS) o mezclas de metanol-agua,
metanol-diclorometano según sea el caso, de ser necesario se agregará una solución de ácido
fórmico o de acetato de amonio para facilitar la ionización (y disminuir la formación de especies
con sodio). En la mayoría de los casos esto permite observar los iones M+H+ o M+NH4+. Estos iones
pueden sufrir fragmentaciones posteriores o en la misma fuente (“in source”) para dar un
espectro de masas. Los espectros obtenidos en presencia de acetato de amonio se asemejan a los
espectros de ionización química con amoniaco. Todos los fragmentos se obtienen con masa
exacta. En caso que la muestra sea insoluble en metanol indicar los disolventes que se pueden
utilizar.
Recepción de muestras: Ponerse en contacto con el Responsable del Laboratorio de
Espectrometría de Masa
Atte.
Dr. Daniel Arrieta Baez
Responsable del Laboratorio de Espectrometría de
masa
Centro de Nanociencias y Micro y NanoTecnología
Luis Enrique Erro s/n
Unidad Profesional Adolfo López Mateos
Gustavo A. Madero, 07738 México, DF
email: [email protected]