análisis prospectivo de adn mitocondrial y adn nuclear en

ANÁLISIS PROSPECTIVO DE ADN MITOCONDRIAL Y ADN NUCLEAR EN
MUESTRAS ARQUEOLÓGICAS HUMANAS DEL PERIODO FORMATIVO
PROCEDENTES DEL SITIO CEMENTERIO REGIMIENTO
CHORRILLOS DE CALAMA*
Mauricio Moraga**, Juan Venegas***, Catherine Westfall**** y Carlos González*****
* Proyecto de Rescate Arqueológico inserto en el Sistema de Evaluación de Impacto Ambiental (SEIA) y financiado por
la Corporación Nacional del Cobre (CODELCO) . División Codelco Norte.
** Doctor en Ciencias, Programa de Genética, Fac. Medicina, Universidad de Chile, Stgo; [email protected]
*** Doctor en Ciencias, Programa de Biol. Cel. Mol., ICBM, Lab. Parasitología Básico-Clínico, Fac. Medicina,
Universidad de Chile, Stgo.; [email protected]
**** Arqueóloga-Taguatagua Consultores, Casilla 234, Correo de Paine, Paine, Región Metropolitana;
[email protected]
***** Arqueólogo-Taguatagua Consultores, Casilla 234, Correo de Paine, Paine, Región Metropolitana;
[email protected]
Con el objeto de conocer características filogenéticas y posibles relaciones de parentesco entre algunos
individuos de la población prehispánica encontrada en el Cementerio Regimiento Chorrillos de Calama, se
procedió al análisis de ADN mitocondrial y nuclear de muestras óseas y piezas dentales de 11 individuos
provenientes de este sitio. Este sitio posee fechados radiocarbónicos que precisan su ocupación entre los años
800 y 200 AC, en el período Formativo.
Análisis de ADN mitocondrial (mtADN)
Para llevar a cabo este tipo de estudios, se procedió a la pulverización de las muestras mediante un molino
especial y posterior extracción del ADN, de acuerdo a protocolos descritos en la literatura (Moraga et al.
2005).
Una vez purificado el ADN se procedió a la amplificación, mediante PCR, de diferentes segmentos del ADN
mitocondrial, los que posteriormente fueron digeridos por enzimas de restricción. En base a este método se
pueden determinar a cuales de los cuatro haplogrupos anteriormente descritos para poblaciones
indoamericanas (Am. J. Phys. Anthropology 2005:127:170-181), pertenecen los individuos analizados.
Producto del bajo número de muestras analizadas y su deficiente calidad en términos de conservación del
ADN, de los 11 individuos analizados, sólo en 4 de ellos se pudo obtener amplificación de las muestras
estudiadas, y en sólo una de ellas se pudo realizar la identificación respectiva (muestra 0503). Esta muestra
fue identificada como perteneciente al haplogrupo B.
A pesar que las otras tres muestras no pudieron ser totalmente clasificadas, los análisis permitieron establecer
que: una de ellas no pertenece al haplogrupo B ni D (muestra 0203), otra no pertenece al haplogrupo B
(muestra 1101), y la tercera no pertenece al haplogrupo D (muestra 0301). Si bien es cierto que la no
pertenencia sugiere que lo más probable es que el individuo de la muestra 0203 podría corresponder al
haplogrupo A o C, no se puede descartar que este individuo pudiera pertenecer a otros grupos minoritarios,
como se ha descrito anteriormente. Es interesante mencionar que de acuerdo a los datos de antigüedad y la
ubicación geográfica de los restos arqueológicos, sería esperable encontrar que más de un 30% de la
población analizada perteneciera al haplogrupo B. Nuestros resultados preliminares muestran un individuo de
4 perteneciente al haplogrupo B (25%) pudiendo ser mayor en el caso que el individuo 0301 fuese B.
Análisis de marcadores nucleares (microsatélites) en muestras de ADN antiguo
Los microsatélites son secuencias repetitivas cortas del DNA nuclear, la mayoría de ellas ubicadas en
regiones no codificantes, cuyos largos pueden oscilar entre 10 y 300 nucleótidos, siendo altamente
polimórficos. Dado el alto polimorfismo de los microsatélites, permite que estos marcadores sean muy útiles
para establecer relaciones de parentesco, entre individuos de una misma población. Sin embargo, debido a que
estos marcadores
se encuentran en un solo locus y son muy susceptibles de sufrir degradación, requieren muestras de ADN
nuclear en buen estado de conservación y en mayores cantidades que las muestras de ADN mitocondrial.
Es importante destacar que la gran mayoría de estudios de DNA antiguo usando microsatélites se han
realizado 100 en poblaciones europeas (Nature 1994:368:455-457; Hum. Biol. 1996:68:185-189;
Electrophoresis 1999:20:1722- 1728). En la actualidad existe muy poca información de análisis de restos
arqueológicos humanos de poblaciones precolombinas, mediante el uso de microsatélites.
Para la detección de microsatelites en muestras de DNA antiguo del sitio Chorrillos se eligieron los
marcadores VWA y LPL, pues de acuerdo a la literatura, estos marcadores han presentado un mejor
rendimiento (Human. Biol. 1996:68:185-189; Forensic Sci. Inter. 1997:90:1-9). Aunque se realizaron los
análisis del marcador microsatélite VWA de los restos de los once individuos procedentes del rescate
arqueológico de Chorrillos, Calama, sólo una muestra fue sistemáticamente amplificada en los cinco
experimentos realizados con cada una de las muestras. Esta muestra procede de un molar de un infante de la
unidad C18, de la cual no se obtuvo amplificación de mtDNA. Sin embargo, se deben realizar mayores
análisis para identificar claramente los alelos amplificados y descartar los productos artefactuales.
Conclusión
Es importante destacar que en la actualidad no existen datos de la literatura sobre estudios genéticomoleculares en poblaciones indoamericanas ancestrales de la región del Loa Medio, por esta razón nuestro
trabajo representa un primer esfuerzo para conocer la constitución genética y el modo de vida de dichas
poblaciones usando este tipo de metodologías. Si bien los resultados obtenidos complementan los estudios
antropológico-físicos realizados en el universo osteológico total del sitio, hay que señalar que es necesario
efectuar, en un futuro cercano, nuevos análisis del sitio arqueológico sobre un tamaño muestral mayor.
Asimismo, la mayoría de los estudios antropológico-físicos de San Pedro de Atacama, están referidos a
contextos cronológico-culturales posteriores.
En consecuencia, y aún siendo pequeña la muestra del Cementerio Regimiento Chorrillos, permite vislumbrar
interesantes resultados en el marco de futuros estudios genéticos de ADN mitocondrial y nuclear en diversas
poblaciones prehispánicas formativas de la región.