1 Etapa pre-analítica en el Laboratorio de Hemostasia y Trombosis

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Etapa pre-analítica en el Laboratorio de Hemostasia y Trombosis
Listo, Walter1
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Laboratorio de Hemostasia y Trombosis, Hospital de Pediatría “Prof. Dr. Juan P. Garrahan”. Buenos Aires,
Argentina. E-mail: [email protected]
Palabras claves: Hemostasia, Pre-analítico.
Los procesos involucrados en las fases pre-analítica, analítica y post analítica influyen directamente en el
manejo clínico y terapéutico del paciente. Los errores de laboratorio pueden ser cometidos en cualquier
punto del proceso, desde la obtención de la muestra hasta la impresión de los resultados.
Debido a los avances en la tecnología instrumental, en la informática y en la disponibilidad de estándares de
referencia, las variables analíticas no representan la principal causa de error en la precisión de los
resultados en el laboratorio de hemostasia.
Está demostrado que la mayoría de los errores son realizados en la fase pre-analítica. Esta fase incluye
desde la identificación del paciente hasta el momento de realizar la prueba de laboratorio. Las muestras
para las pruebas de hemostasia son particularmente susceptibles a las condiciones de obtención, manejo,
transporte y almacenamiento.
Identificación del paciente: el personal técnico/bioquímico debe corroborar la identidad del paciente. Todas
las extracciones deben ser realizadas ante la presencia de un adulto responsable a cargo del paciente.
Preparación del paciente:
 Ayuno: el período de ayuno debe ser de al menos 4 horas sin ingestión de alimentos grasos aunque
no se restringe la ingestión de bebidas como agua o bebidas azucaradas. Si el paciente es un
lactante, el ayuno requerido es entre 2 a 3 horas.
 Estrés: El paciente debe estar en un ambiente confortable para evitar situaciones de estrés que
podrían generar liberación de contenido endotelial (por ej. factor VIII, factor von Willebrand,
fibrinógeno).
 Drogas: Debe ser realizado un registro completo de las drogas indicadas por el médico. En el caso
del estudio de función plaquetaria avisar al profesional correspondiente si el paciente ha recibido
medicación como el acido acetilsalicílico o antiinflamatorios no esteroideos (AINES) que alteran la
función de las plaquetas.
Colección de la muestra de sangre para las pruebas de hemostasia:
 Tubos de colección: deben ser de polipropileno o vidrio siliconado para evitar la activación por
contacto. No se recomienda recolectar volúmenes de sangre mayores a 10 ml por tubo.

Anticoagulante: Las muestras deben ser anticoaguladas con citrato de sodio. La Organización
Mundial de Salud (OMS) y la Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI) recomiendan utilizar la
concentración entre 105 a 109 mM, lo que equivale a 3.13 – 3.20% de citrato trisódico di-hidrato
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(Na3C6H5O7 2H2O). Las técnicas coagulométricas dependen de la concentración de calcio en el
plasma. Debido a que la cantidad de plasma por unidad de volumen puede variar según el
hematocrito, es necesario realizar una corrección del volumen de anticoagulante (Tabla 1). Otros
anticoagulantes como el EDTA y la heparina no son utilizados para las pruebas de hemostasia.
Calibre de agujas: En general, el calibre óptimo de la agujas para la extracción de sangre es entre
21 a 23G, en algunos neonatos con accesos venosos de bajo calibre puede utilizarse 25G. Los
dispositivos tipo “butterfly” son recomendados porque permiten un mejor manejo ante el
movimiento del paciente pediátrico. Estasis venosa: La colocación del lazo no debe superar a dos
minutos de tiempo.
Extracción de la muestra: La muestra de sangre puede ser extraída por punción directa o de
catéter. La punción venosa debe ser limpia y en un solo movimiento, evitando la lesión del vaso.
Posterior a la punción, debe realizarse una compresión del sitio con un algodón seco durante al
menos 5 minutos. Las extracciones de catéter, deben ser realizadas por personal de enfermería y
se realiza utilizando tres jeringas diferentes a fin de evitar la contaminación de la muestra con
heparina. Se realiza dos descartes de 2.5 ml de sangre y la tercera jeringa es utilizada para los
estudios de hemostasia.
Llenado del tubo: El tubo para el estudio de hemostasia debe ser el primero a completar, hacerlo
hasta el enrase evitando la formación de espuma. Tapar e invertir por lo menos 5 veces en forma
suave. Identificar el tubo con el rótulo correspondiente.
Centrifugación: La sangre recogida se centrifuga a 1500 x g durante 10 minutos a temperatura controlada
entre 22 – 25 ºC. Los plasmas son trasvasados a otros tubos plásticos separándolos con pipeta plástica,
teniendo cuidado de no re-suspender la capa de plaquetas en la interfase plasma-elementos celulares. Se
efectúa una segunda centrifugación durante 5 minutos a 1500 x g a fin de asegurar que no queden restos
plaquetarios. De esta manera se obtiene el plasma pobre en plaquetas (PPP).
Conservación de las muestras: Las muestras de PPP deben ser procesadas dentro de las 4 horas de
obtención y mantenidas a temperatura controlada entre 22 – 25 ºC. Si se desea almacenar, los PPP se
fraccionan en alícuotas y se congelan a temperaturas por debajo de -20ºC. Si la temperatura es inferior, las
muestras tendrán un mayor período de almacenamiento sin pérdida de actividad.
El conocimiento de las variables pre-analíticas y su impacto sobre la precisión en los resultados es
fundamental. Para asegurar la alta calidad de los resultados es imprescindible preservar la integridad de la
muestra y respetar cada paso del proceso.
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Tabla 1. Volumen de citrato de sodio según el Hematocrito (ml)
HTO
20%
25%
30%
35%
40%
45%
50%
55%
60%
65%
70%
75%
80%
Volumen de sangre
1 ml
2 ml
3 ml
0.135 0.270 0.405
0.128 0.256 0.384
0.120 0.240 0.360
0.113 0.226 0.339
0.107 0.214 0.321
0.100 0.200 0.300
0.094 0.188 0.282
0.087 0.174 0.261
0.080 0.160 0.240
0.074 0.148 0.222
0.066 0.132 0.198
0.060 0.120 0.180
0.053 0.106 0.159
5 ml
0.700
0.650
0.620
0.570
0.540
0.500
0.460
0.430
0.390
0.350
0.320
0.280
0.250
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