IA-MBA-PT-024 Determinación de Enterococos fecales en

LANASEVE
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29/10/10
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IA-MBA-PT- 024
Determinación de Enterococos fecales en
agua potable
Versión 06
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Revisado por: Encargada de Calidad de Sección
Aprobado por: Jefe de Sección
1. Objetivo
Disponer de un método para realizar un recuento de Enterococos fecales.
2. Alcance
Para aplicar en muestras de agua potable.
3. Responsabilidad y Autoridad
Jefe de Sección: debe velar por el cumplimiento de las normas establecidas en este procedimiento.
Analista: debe realizar las actividades descritas en este procedimiento.
4. Definiciones
No aplica
5. Abreviaturas y/o Siglas
No aplica
6. Referencias y/o Bibliografía
IA-MBA-PE-009-RE- 008 Hoja de Trabajo
IA-MBA-PE-012 Control interno
IA-MBA-PO-004 Control de Equipo
SEG-PE-005 Control de medios de cultivo
Métodos ISO 7899-2:2000 Calidad del agua- Detección y enumeración de Enterococos fecales Parte 2:
Método de filtración en membrana
7. Descripción del procedimiento
7. 1 Fundamento Teórico
Filtración de un volumen específico de agua a través de una membrana con un tamaño de 47 mm y de
poro de 0,45 μm que permite retener la bacteria.
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La membrana es colocada en un agar selectivo que contiene azida, esta sustancia impide el crecimiento
de bacterias Gram negativas; los enterococos reducen el 2,3,5-triphenyltetrazolium cloruro (TTC) a rojo de
formazán por lo que las colonias típicas son de color rojo.
Para la confirmación, transferir la membrana al agar azida bilis esculina. Los enterococos hidrolizan la
esculina y se obtiene como producto final el 6,7-dihydroxycoumarin que se combina con los iones de hierro
III para obtener un compuesto de color negro que se difunde en el medio.
7.2 Equipo, materiales, medios de cultivo y cepas de referencia
7.2.1 Equipo
Incubador 36 ºC ± 2 °C
Incubador 44 ºC ± 0,5 ºC
Sistema para filtración de agua (Embudos, bomba para vacío, soporte para embudos)
7.2.3 Materiales
Pinzas estériles
Membranas Millipore 0,45 µm estériles
7.2.4 Medios de cultivo y cepas de referencia
Agar Slanetz Bartley
Agar Azida Bilis Esculina
Enterococcus faecalis ATCC 29212
7.3 Procedimiento
7.3.1 Colocar la membrana Millipore en el embudo de filtración, utilizar pinzas estériles.
7.3.2 Sellar el embudo
7.3.3 Depositar 100 ml de agua en el embudo y filtrar por vacío.
7.3.4 Remover la membrana con pinzas estériles y colocarla en el medio de cultivo Slanetz Bartley
7.3.5 Incubar las placas a 36 °C ± 2 °C por 44 h ± 4 h.
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7.3.6 Después del período de incubación examinar las placas y considerar las colonias de color rojo,
marrón o rosado como colonias típicas
7.3.7
Si se observan colonias típicas transferir con pinzas estériles la membrana al agar Azida Bilis
Esculina precalentado a 44 °C.
7.3.8
Incubar a 44 °C ± 0,5 °C por 2 horas.
7.3.9
Después de las 2 horas observar las placas, alrededor de las colonias típicas se observa un
color negro en el medio.
7.3.10
Reportar el número de colonias confirmadas como Enterococos fecales en 100 ml. Registrar
los datos en IA-MBA-PE-009-RE- 008 Hoja de Trabajo.
7.4 Control de Calidad
7.4.1 Se deben usar cultivos de referencia de Enterococos spp como control positivo.
7.4.2 La concentración del inóculo de los controles positivos debe estar aproximadamente entre 30
a 100 ufc para 100 ml de muestra. Seguir procedimiento de Control interno IA-MBA-PE-012.
7.4.3 El control de calidad de los medios de cultivo utilizados se debe llevar a cabo de acuerdo al
procedimiento SEG-PE-005.
7.5 Puntos Críticos de Control
Control de temperaturas de los incubadores y baños maría, se debe mantener el registro de la
temperatura óptima de cada equipo, así como las medidas correctivas en caso de alguna variable
según IA-MBA-PO-004 Control de Equipo.
8. Anexos
No aplica
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