tp3prot2006 - Facultad de Ciencias Naturales

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA
PATAGONIA SAN JUAN BOSCO
FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES
DEPARTAMENTO DE FARMACIA
CATEDRA DE FARMACOGNOSIA
TRABAJO PRACTICO Nº 3.
PROTEINAS Y ENZIMAS.
Objetivo
- Utilizar reacciones generales y técnicas de extracción adecuadas para el
análisis de proteínas y enzimas, así como de aminogrupos provenientes de ellas.
Introducción
Las proteínas son polipéptidos. La palabra péptido comprende una amplia serie
de compuestos que varían desde pesos moleculares bajos a muy elevados y muestran
diferencias marcadas en cuanto a sus propiedades físicas, químicas y farmacológicas.
Los miembros más inferiores derivan de sólo dos moléculas de aminoácidos, pero los
superiores tienen muchas unidades de aminoácidos y forman PEPTIDOS, PROTEINAS
SIMPLES (albúminas, globulinas, protaminas, glutalinas, entre otras) o PROTEINAS
COMPLEJAS CONJUGADAS, en las cuales forman parte de la molécula otros grupos,
por ejemplo hidratos de carbono en las mucoproteínas, fósforo en la caseína,
lipoproteínas, etc. Todos estos compuestos más o menos complejos tienen dos o más
moléculas de aminoácidos unidas por un enlace peptídico que resulta de la eliminación
de agua, procediendo un OH- de un a.a. y un H de otro. Por lo tanto un dipéptido se
formará así:
R-CH(NH2)COOH + R*-CH(NH2)COOH
R-CH(NH2)CO-NH-(COOH)CH-R* + H2O
Los péptidos suelen definirse como sustancias de tipo proteínico que poseen PM
por debajo de 10000. En las proteínas típicas el PM es mayor (30000 a 50000 en las
prolaminas y glutelinas por ejemplo), y alcanzan valores muy elevados en las complejas,
como las de la lana de oveja.
ENZIMAS: en general son proteínas aunque se han encontrado algunas de distinta
estructura. Poseen capacidad catalítica específica (aceleran una reacción química sin que
éstas sufran cambios, al igual que un catalizador químico). Presentan lo que se conoce
como especificidad por el sustrato (distinción entre una forma cis y una trans) y
especificidad por la catálisis (sólo reduce, desamina).
Ejemplos: Carbohidrasas: ej. amilasa, dextrinasa.
Estearasas: ej. lipasa.
Proteolíticas: ej. tripsina, papaína.
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ACTIVIDADES PRACTICAS
1- Efectuar las reacciones de Millon y Ninhidrina sobre las muestras obtenidas
mediante el protocolo de preparación del extracto indicado en el Trabajo Práctico Nº 2.
1.1) Reacción de Millon: para proteínas que contienen tirosina, da un color rojo ladrillo
o rosado. Se colocan unas gotas de la solución a ensayar sobre un portaobjetos, y
reactivo suficiente para cubrir la misma. Se calienta sobre una llama suave.
Resultado (+): color rosado o ladrillo.
REACTIVO: 9 ml de ácido nítrico, 1 g de mercurio, una vez disuelto diluir con igual
volumen de agua.
1.2) Reacción de la Ninhidrina: revela la presencia de aminogrupos primarios o
secundarios. Se hace sobre papel de filtro. Se coloca una gota de la muestra o solución a
ensayar sobre papel y se deja secar. Se agrega una cantidad similar de solución etanólica
de ninhidrina al 0,2 % y paralelamente se hace un ensayo en blanco (reactivo solo) y uno
del testigo (triptofano al 50 % en etanol) con el reactivo. Se calienta el papel en estufa
(110 -120 ºC) hasta aparición de ligero color en el blanco. Se compara la intensidad de
la mancha azul-violácea con la coloración de la solución testigo.
2- Presentar y analizar el trabajo científico correspondiente al tema en estudio.
BIBLIOGRAFIA
- Treasse - Evans, “Farmacognosia”. 13º Ed. 1991. Interamericana Mc Graw Hill.
- Dominguez, J. A., “Métodos de Investigación Fitoquímica”. 1985. México, Limusa.
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