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BOVINE LEUKAEMIA
Test de ELISA para la detección de anticuerpos contra la Leucosis Enzootica Bovina
(BLV) en muestras de suero y leche.
DENOMINACIÓN DEL REACTIVO:
Bovine Leukaemia, Test de ELISA para la detección específica de anticuerpos contra
la proteína gp-51 del Virus de la Leucosis Bovina (BLV) en muestras de suero y leche.
MEMORIA TÉCNICA:
La finalidad del reactivo es la determinación de anticuerpos específicos de Leucosis
Bovina.
Usando un método de ELISA indirecto, basado en la fijación en fase sólida (placa de 96
pocillos) de un anticuerpo monoclonal de la glicoproteína BLV-51 KDalton, que detecta
los anticuerpos específicos en muestras de Suero y/o leche. Los sueros problema serán
colocados en contacto con el antígeno, y en caso de reacción positiva, se unirán
específicamente formando el complejo antígeno/anticuerpo. El uso de un conjugado
específico marcado con una enzima (peroxidasa) y la adición de sustrato, desarrollará
un color debido a la reacción de conversión del sustrato por el conjugado. Un resultado
positivo se indicará por un cambio de color que se puede medir mediante un colorímetro
y por lo tanto se puede cuantificar. Una reacción negativa queda expresada por la no
modificación de color (no color).
Todos los Kits llevan todos los reactivos necesarios para la realización de la técnica.
Todos los Kits están fabricados bajo la supervisión de controles de calidad exhaustivos,
tanto en producción de antígeno como en la fijación de éste en la placa. Para conocer la
fiabilidad de los resultados, se usa en cada Kit controles positivo y negativo específicos
de la enfermedad, necesarios para el buen funcionamiento del Kit y para interpretar los
resultados de los sueros problema. Se recomienda duplicar tanto el control positivo
como el negativo, el resto de la placa va entera tapizada en un total de 50 placas, de tal
forma que se consiguen testar 880 muestras en un mismo Kit. Todos los reactivos
adicionales del Kit llevan igualmente su control de calidad establecido.
Oficina Central Calle José Echegaray 8 – P.A.E Casablanca I, local 1-3 – 28100 Alcobendas. Madrid.
España – Teléfono: 902 103 578 – Fax: 902 102 459 – e-mail: ventas @tdi.es
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El Kit lleva su fecha de caducidad y su número de lote correspondiente. Todos los
controles de fabricación están realizados por el Instituto Sueco de Veterinaria en
Uppsal. Suecia.
SVANOVA BIOTECH tiene registrados todos sus Kits en el registro Nacional de
Suecia, con la marca registrada SVANOVIR TM.
Todos los Kits llevan instrucciones para su buen uso, así como folletos y textos
informativos.
MATERIAL DE ACONDICIONAMIENTO:
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Denominación comercial: BLV-gp51-Ab BOVINE LEUKAEMIA VIRUS
(BLV) : Kit de detección de anticuerpos específicos contra gp-51 de Leucosis
Bovina por la técnica ELISA.
Fabricante: SVANOVA S-751 83 Uppsala. Sweden
Distribuidor exclusivo para España: TDI, SA
Fecha de caducidad: mínimo un año.
PROCEDIMIENTO
1. Todos los reactivos deben ser colocados a Tª ambiente (18 a 25ºC) antes de ser
usados.
2. Quitar los precintos de las placas que se van a usar y lavarlas con PBS.
En caso de muestras de Suero:

Añadir 100µl de Buffer de Dilución a cada pocillo incluidos los controles.

Añadir 4µl del suero control positivo (Reactivo A) y 4µl del suero control
negativo (Reactivo B) en cada pocillo seleccionado como control. Se
recomienda realizar duplicados de los controles para una mejor interpretación de
los resultados
Añadir 4µl de cada muestra de suero atestar en cada pocillo apropiado.

En caso de muestras de Leche:

Añadir100 µl del leche control positiva (Reactivo A) y 100 µl del leche control
negativa (Reactivo B) en cada pocillo seleccionado como control. Se
recomienda realizar duplicados de los controles para una mejor interpretación de
los resultados
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
Añadir100 µl de cada muestra de leche a atestar en cada pocillo apropiado.
3. Agitar la placa suavemente. Tapar la placa e incubar a 37º una hora o a
temperatura ambiente cuatro horas.
4. Lavar la placa tres veces con PBS-Tween, y asegurarse de su vaciado total antes
de seguir la técnica.
5. Añadir 100µl del conjugado en cada pocillo e incubar a 37º una hora. Se
recomienda incubar con agitación,
6. Repetir el paso 4.
7. Añadir 100µl de solución de sustrato a cada pocillo preparada en el momento,
incubar 10 minutos a Tª ambiente (18-25ºC).
8. Parar la reacción añadiendo 50µl de solución de parado a cada pocillo y mezclar
suavemente
9. Medir densidad óptica (OD) de los controles y las muestras en un
espectrofotómetro a 450 nm. Se recomienda medir en los 15 minutos siguientes a
haber añadido la solución de parado.
CÁLCULOS
Los cálculos deben realizarse de la siguiente manera:
Calcular el Porcentaje de Positividad (PP)
PP: OD de cada muestra ( incluido Control Negativo ) x 100 dividido por OD
del Control Positivo.

Criterio de Validación del Kit:
Para validar el Kit el valor de OD del control positivo debe ser mayor que 1.
El valor de OD del control negativo debe ser menor que 0,2. Si el valor PP del
control negativo resulta en la interpretación como una muestra positiva (ver siguiente
punto) el Kit es inválido.
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INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
SUERO
PP
INTERPRETACIÓN
< 15
> ó = 15
NEGATIVO
POSITIVO
< 10
NEGATIVO
> ó = 10
POSITIVO
LECHE
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