Construyendo la Nueva Universidad Generación de protocolos para la propagación in vivo e in vitro de genotipos élites de especies forestales nativas y promisorias para la reforestación de la Región Sur del Ecuador. Investigadores: Ing. Julia Minchala Patiño, Ing. Víctor Hugo Eras Mg. Sc., Ing. Ruth Poma, Ing. Luis Muñoz Introducción E l Proyecto de investigación en el año 2013, tuvo como objetivo general la generación de protocolos para la producción de plántulas, tanto a nivel de laboratorio e invernadero, de cuatro especies forestales promisorias para la reforestación del bosque seco en la Región Sur del Ecuador. En el siguiente resumen se presentan resultados obtenidos sobre germinación de semillas in vitro de las especies Prosopis limensis, Tabebuia billbergii y Loxopterygium huasango, que constituyen el germoplasma de base para las fases de brotamiento y enraizamiento in vitro de ápices caulinares y segmentos nodales de las plántulas germinadas in vitro. Además, se tiene previsto en fases posteriores realizar la inducción de callos y la organogé- nesis directa e indirecta. La germinación in vitro de estas tres especies forestales se realizó en el Laboratorio de Micropropagación Vegetal del Área Agropecuaria y de Recursos Naturales Renovables de la Universidad Nacional de Loja. Los frutos se recolectaron de árboles con características fenotípicas sobresalientes del bosque seco de los cantones Paltas, Macará y Zapotillo. Metodología La metodología utilizada para la germinación de semillas in vitro fue la siguiente: a). Selección y escarificación de semillas Se seleccionó las mejores semillas, considerando características fenotípicas como: forma, tamaño, peso, color, madurez fisiológica y buenas condiciones fitosanitarias. En el caso de T. billbergii, se eliminó parte del ala de la semilla y en L. huasango se eliminó la parte alada que cubre a la semilla, a fin de reducir la contaminación. Cuadro 1. Efecto de escarificación en la germinación in vitro de semillas de P. limensis y L. huasango Tratamiento AG3 * (mg/L) Métodos de Escarificación T1 0,0 Testigo T2 0,0 Físico T3 0,0 Mecánico T4 0,0 Químico Para semillas de P. limensis y L. huasango se realizaron tratamientos de escarificación: mecánico, físico y químico, con la finalidad de romper la dureza de los tegumentos de la semilla e inducir la imbibición del embrión. T5 0,5 Testigo T6 0,5 Físico T7 0,5 Mecánico T8 0,5 Químico b). Cultivo de semillas T9 1,0 Testigo Se colocaron 50 semillas en frascos de vidrio, en el caso de L. huasango, por el tamaño de la semilla, fueron colocadas en tul. En la cámara de flujo laminar estas fueron desinfestadas con alcohol etílico al 70% e hipoclorito de sodio comercial, más 3 gotas Tween 80, en concentraciones y tiempos variables. El medio de cultivo para germinación de semillas estuvo conformado por las sales minerales de Murashige y Skoog (1962) suplementadas con vitaminas tiamina y m-inositol, sacarosa y ácido giberélico (AG3), en diferentes concentraciones (ver Cuadro 1.) y agar. El pH se ajustó a 5,8. Luego se distribuyó 25 ml de medio de cultivo por frascos, esterilizados en autoclave a 120 °C de temperatura y 1,5 kg/ cm2 de presión, durante 25 minutos. T10 1,0 Físico T11 1,0 Mecánico T12 1,0 Químico En la cámara de flujo laminar se inocularon las semillas, en estudio, tres semillas por frasco, 15 semillas por tratamiento. Se probaron doce tratamientos para P. limensis, cuatro tratamientos para L. huasango, y tres tratamientos para T. billbergii. Una vez inoculadas las semillas se mantuvieron en incubación a una temperatura de ± 23 °C, fotoperiodo de 16 horas luz y 8 horas de oscuridad. c). Parámetros evaluados La evaluación se realizó por observación directa, cada 5 días hasta treinta días después de la siembra. Los parámetros que se evaluaron fueron: porcentaje de semillas germinadas, porcentaje de contaminación y días a la germinación. Resultados: En P. limensis con los métodos de escarificación física y mecánica, en las tres concentraciones de AG3 utilizadas, se obtuvo 100% de germinación, la misma que se inició al segundo día después de la inoculación. La contaminación fue del 7 al 27% causada por hongos y bacterias. Las plántulas germinadas in vitro iniciaron un crecimiento y desarrollo homogéneo (Figura 1). Unidad de Difusión y Transferencia de Conocimiento e Innovación 5 Construyendo la Nueva Universidad Figura 1. Porcentaje de germinación de semillas de Prosopis limensis con diferentes métodos de escarificación, en tres concentraciones de AG3 Figura 4. Crecimiento de plántulas germinadas in vitro de L. huasango Para T. billbergii, la germinación estuvo entre el 67 y 75 %, no existiendo diferencias significativas entre las concentraciones de AG3 probadas. La germinación inició al sexto día de la inoculación y las semillas no presentaron contaminación. Las plántulas germinadas in vitro iniciaron un crecimiento y desarrollo homogéneo (figura 5 y 6). Figura 2. Crecimiento de plántulas germinadas in vitro de P. limensis La germinación en L. huasango estuvo entre el 60 y 70 %, no existiendo diferencias significativas entre los métodos de escarificación. La germinación inició al quinto día de la inoculación, con una contaminación entre el 20 a 28 % causada por bacterias y hongos. Las plántulas germinadas in vitro iniciaron un crecimiento y desarrollo homogéneo (figura 3 y 4). Figura 5. Porcentaje de germinación de semillas de T. billbergii en tres concentraciones de AG3 Conclusiones: • La escarificación mecánica y física fueron los mejores tratamientos pregerminativos para las semillas de P. limensis en condiciones de laboratorio. La adición de AG3 al medio de cultivo no influyó de forma significante en los resultados obtenidos. • En L. huasango los tratamientos pregerminativos no incidieron de manera significativa en la germinación. • En T. billbergii el uso de AG3 en el medio de cultivo no incidió de manera significativa en la germinación de las semillas. • En T. billbergii el almacenamiento prolongado de las semillas disminuye el poder germinativo de las mismas. • Los métodos utilizados para la desinfección de las semillas, previo a la inoculación in vitro, permitieron obtener bajos porcentajes de contaminación. Figura 3. Porcentajes de germinación de semillas de L. huasango en diferentes métodos de escarificación 6 Unidad de Difusión y Transferencia de Conocimiento e Innovación Palabras clave: escarificación, germinación, in vitro, bosque seco.