PRT-712.02-037 V5 Rto E. coli VRB

PROCEDIMIENTO RECUENTO DE E COLI
EN ALIMENTOS UTILIZANDO
AGAR VRB-MUG
Sección Microbiología
de Alimentos
1.
PRT-712.02-037
Fecha emisión:
1996
Revisión: 5
Fecha revisión:
12-09-2011
Página 1 de 8
OBJETIVO
Enumerar los microorganismos E. coli presentes en una muestra de alimento
2.
CAMPO DE APLICACIÓN Y ALCANCE
Muestras de alimentos que se requiera realizar método rápido de Recuento de E. coli
3.
FUNDAMENTO
La incorporación de 4-methylumbelliferyl- beta- D- glucoronide (MUG) en Agar Rojo Neutro
permite la detección de E. coli de entre otras colonias coliformes a través de la detección de la
actividad beta- glucoronidasa. E. coli produce la enzima beta-glucoronidasa la cual hidroliza el
MUG produciendo un compuesto fluorogénico detectable con luz UV a 366 nm.
Las cepas típicas de E. coli, colonias rojas con precipitación biliar, muestran fluorescencia. Los
coliformes que no son E. coli pueden producir colonias rojas con zonas de precipitación biliar
pero son MUG negativas.
4.
REFERENCIAS
4.1
Bacteriological Analytical Manual Online Septiembre 2002 Capitulo 4, letra G
5.
TERMINOLOGÍA
5.1
No Aplica
6.
MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS
6.1
EQUIPOS
6.1.1
Todo lo requerido para el método convencional, PRT-712.02-008.
6.1.2
Lámpara UV 6 Watt
6.2
MATERIALES
6.2.1
Lentes UV
PROCEDIMIENTO RECUENTO DE E COLI
EN ALIMENTOS UTILIZANDO
AGAR VRB-MUG
Sección Microbiología
de Alimentos
6.3
PRT-712.02-037
Fecha emisión:
1996
Revisión: 5
Fecha revisión:
12-09-2011
Página 2 de 8
MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS
6.3.1
Todo lo requerido para el método convencional PRT-712.02-008
6.3.2
Agar VRB-MUG (100 ug. de MUG/ ml. de medio)
7.
DESARROLLO
7.1
TEST PRESUNTIVO
7.1.1
Realizar el método convencional descrito en el punto 7 del PRT-712.02-008 Método de
recuento en placa para la determinación de coliformes en alimentos, utilizando agar
VRB-MUG.
7.1.2
Utilizar cepa de E. coli como control positivo.
7.1.3
Al término del período de incubación, observar la fluorescencia de las colonias bajo luz
UV.
7.1.4
Anotar los resultados en el “Registro de resultados análisis de coliformes, E. coli y
Salmonella en muestras de alimentos”
7.2
CÁLCULO Y EXPRESION DE RESULTADOS
7.2.1
Considerar para hacer el recuento aquellas colonias que presentan fluorescencia bajo la
luz UV.
7.2.2
Los resultados del Recuento de E. coli se expresan cuantitativamente en Nº ufc/g o mL.
de muestra.
PROCEDIMIENTO RECUENTO DE E COLI
EN ALIMENTOS UTILIZANDO
AGAR VRB-MUG
Sección Microbiología
de Alimentos
8.
PRT-712.02-037
Fecha emisión:
1996
Revisión: 5
Fecha revisión:
12-09-2011
Página 3 de 8
REGISTROS
-
Registro de resultados análisis de coliformes, E. coli y Salmonella en muestras de
alimentos
-
Registro cepas control de incubadoras
-
Registro control de esterilidad de medios de cultivo utilizados en el análisis de
coliformes, coliformes fecales y Escherichia coli
-
Registro control de ambiente
9.
ANEXOS
-
Anexo Nº 1. RG-712.00-072. Registro de resultados análisis de coliformes, E. coli y
Salmonella en muestras de alimentos.
-
Anexo Nº 2. RG-712.00-004. Registro cepas control de incubadoras.
-
Anexo Nº 3. RG-712.00-006. Registro control de esterilidad de medios de cultivo
utilizados en el análisis de coliformes, coliformes fecales y Escherichia coli
-
Anexo Nº 4. RG-712.00-009. Registro control de ambiente.
PROCEDIMIENTO RECUENTO DE E COLI
EN ALIMENTOS UTILIZANDO
AGAR VRB-MUG
Sección Microbiología
de Alimentos
PRT-712.02-037
Fecha emisión:
1996
Revisión: 5
Fecha revisión:
12-09-2011
Página 4 de 8
Anexo Nº 1. RG-712.00-072
Registro de resultados análisis de coliformes, E. coli y Salmonella en muestras de
alimentos
Nº:...................................Tipo de muestra :.......................................................Analista..................................................
Fecha /hora recolección.............................Fecha/hora análisis:.....................Tº Ambiental…………….
E. coli y coliformes
Medios
CLST (S)
#
CBCB
#
Incubadora/
Baño term.
PORCION DE MUESTRA (mL)
COLIFORMES PRESUNTIVO
CLST o VRBA
24 / 48 hrs.a 35ºC
COLIF. CONFIRMATIVO
CBVB 24 / 48 hrs. a 35 ºC
E.coli CONFIRMATIVO
Caldo E.C: a 44,5ºC 24 h / 48 h
PRUEBAS BIOQUÍMICAS IMViC
Indol
RM
V. P
Citrato
Diluyente
#
VRBA
#
Caldo EC
#
C. Tripotona
#
C. RM-VP
#
C. Koser
#
Pipeta 1/5 mL
#
PROCEDIMIENTO RECUENTO DE E COLI
EN ALIMENTOS UTILIZANDO
AGAR VRB-MUG
Sección Microbiología
de Alimentos
Salmonella
Medios
PRT-712.02-037
Fecha emisión:
1996
Revisión: 5
Fecha revisión:
12-09-2011
Página 5 de 8
P/A
Pre-enriq.
#
TT
#
Rapa.
#
Iodo
#
Verde Bri.
#
XLD
#
Hecktoen
#
Bismuto
#
TSI
#
LIA
#
MIO
#
Pipeta 1/5 mL
#
Incubadora
/Baño ter.
Caldos enriquecimiento
Agares Selectivos
Tetrathionato
Rappaport
T°C……
T°C……
Agar Bismuto Sulfito
Colonias:
Colonias:
Tetrathionato
Rappaport
T°C……
T°C……
Agar Hektoen
Colonias:
Colonias:
Tetrathionato
Rappaport
T°C……
T°C……
Agar XLD
Colonias:
Colonias:
TSI
LIA
MIO
SEROLOGIA
Otros
N.M.P. Coliformes :......................................germ/g
Rto coliformes....................ufc/g
N.M.P. E. coli :.............................................germ /g
Rto de E. coli......................ufc/g
P/A E.coli /g:.............................................................
P/A Salmonella en 25 o 50 g :..............................................Fecha informe……………………………
PROCEDIMIENTO RECUENTO DE E COLI
EN ALIMENTOS UTILIZANDO
AGAR VRB-MUG
Sección Microbiología
de Alimentos
PRT-712.02-037
Fecha emisión:
1996
Revisión: 5
Fecha revisión:
12-09-2011
Página 6 de 8
Anexo Nº 2. RG-712.00-004
Registro cepas control de incubadoras
FECHA
Incub. Nº inventario
Incub. Nº inventario
Incub. Nº inventario
Incub.Nº inventario
----------------------
----------------------
----------------------
----------------------
CONTROLES
CONTROLES
CONTROLES
CONTROLES
LST
BVB VRB LST
BVB VRB LST
BVB
(+ , - ) (+ , - ) (+ , - ) (+ , - ) (+ , - ) (+ , - ) (+ , - ) (+ , - )
INIC:
VRB
LST
BVB
VRB
(+ , - ) (+ , - ) (+ , - ) (+ , - )
Anexo Nº 3. RG-712.00-006
Registro control de esterilidad de medios de cultivo utilizados en el análisis de
coliformes, coliformes fecales y Escherichia coli
FECH
A
Caldo
Lauril
Sulfato
Triptosa
concentra
d
Caldo
Lauril
Sulfato
Triptosa
simple
Agar
Caldo
Rojo
Bilis
Neutro Verde
Cristal Brillant
Violeta
e
(VRB)
Cald
o EC
Cald
o
A-1
Agar Rojo
Neutro
Cristal
Violeta Glucosa
(VRBG)
Agar
MacConke
y Sorbitol
Agar
glucosa
(enterobacteria)
INIC
PROCEDIMIENTO RECUENTO DE E COLI
EN ALIMENTOS UTILIZANDO
AGAR VRB-MUG
Sección Microbiología
de Alimentos
PRT-712.02-037
Fecha emisión:
1996
Revisión: 5
Fecha revisión:
12-09-2011
Página 7 de 8
PROCEDIMIENTO RECUENTO DE E COLI
EN ALIMENTOS UTILIZANDO
AGAR VRB-MUG
Sección Microbiología
de Alimentos
PRT-712.02-037
Fecha emisión:
1996
Revisión: 5
Fecha revisión:
12-09-2011
Página 8 de 8
Anexo Nº 4. RG-712.00-009
Registro control de ambiente
LABORATORIO:......................................................................................................MES :....................................................................................AÑO
:..............................
FECHA
/
LOTE
MEDIO
CONTROL AMBIENTE MESON DE TRABAJO
Lado izquierdo
Placa abierta Placa cerrada
Lado derecho
Placa abierta Placa cerrada
CONTROL AMBIENTE FLUJO LAMINAR
Izquierda fondo
Placa
Placa
abierta
cerrada
Izquierda afuera
Placa
Placa
abierta cerrada
Derecha fondo
Placa
Placa
abierta cerrada
Derecha afuera
Placa
Placa
abierta cerrada
INIC