Nuevos inhibidores de peptidasa

k
OFICINA ESPAÑOLA DE
PATENTES Y MARCAS
19
k
2 118 710
kInt. Cl. : C07K 5/02, C07K 5/06
11 Número de publicación:
6
51
ESPAÑA
C07K 5/08, C07K 5/10
C07C 237/20, A61K 38/55
k
TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA
12
kNúmero de solicitud europea: 89402763.0
kFecha de presentación : 06.10.89
kNúmero de publicación de la solicitud: 0 364 344
kFecha de publicación de la solicitud: 18.04.90
T3
86
86
87
87
k
54 Tı́tulo: Nuevos inhibidores de peptidasa.
k
73 Titular/es: Merrell Pharmaceuticals Inc.
k
72 Inventor/es: Bey, Philippe;
k
74 Agente: Ungrı́a Goiburu, Bernardo
30 Prioridad: 07.10.88 US 254762
2110 East Galbraith road, P.O. Box 156300
Cincinnati, Ohio 45215-6300, US
45 Fecha de la publicación de la mención BOPI:
01.10.98
45 Fecha de la publicación del folleto de patente:
ES 2 118 710 T3
01.10.98
Aviso:
k
k
Angelastro, Michael y
Mehdi, Shujaath
k
En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletı́n europeo de patentes,
de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina
Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar
motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de
oposición (art◦ 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas).
Venta de fascı́culos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, 1 – 28036 Madrid
ES 2 118 710 T3
DESCRIPCION
Nuevos inhibidores de peptidasa.
5
Esta invención se refiere a nuevos inhibidores de enzimas proteasas, que son útiles en diversas aplicaciones de uso final fisiológicas.
10
En sus aspectos más amplios, esta invención se refiere a análogos de sustratos de peptidasas, en los
que el átomo de nitrógeno del grupo amido escindible del sustrato peptı́dico ha sido desplazado por
H o por un radical carbonilo sustituido. Estos análogos de los sustratos de peptidasa son inhibidores
enzimáticos especı́ficos de diversas proteasas, cuya inhibición tendrá consecuencias fisiológicas útiles en
diversos estados de enfermedad.
15
El documento EP-A-133 225 se refiere a derivados peptidı́cos y a sus aplicaciones farmacéuticas como
inhibidores de elastasa en el tratamiento de enfisema y artritis.
El documento en Chemical Abstracts, vol. 99 n◦ 21, 21 Noviembre 1.983, p. 122-123 se refiere a la
“preparación y propiedades de oxalil- y malonil-bis (metionil) insulina”
20
25
30
En sus aspectos más concretos, esta invención se refiere a derivados de ciertos sustratos de peptidasa
que son útiles para inhibir enzimas proteasas serino-, tio- y metalo-dependientes, cuya inhibición tendrá
consecuencias fisiológicas útiles en diversos estados de enfermedad.
En términos aún más concretos, esta invención se refiere a derivados de sustratos de peptidasa que
caen dentro de los siguientes agrupamientos genéricos, caracterizados según las dependencias de sus sitios
activos. Estos agrupamientos genéricos son:
I. Enzimas serino-dependientes: En este grupo, se incluyen enzimas tales como Elastasa (leucocitos
humanos), Catepsina G, Trombina, Plasmina, C-1 Esterasa, C-3 Convertasa, Uroquinasa, Activador de
Plasminógeno, Acrosina, β-lactamasa, D-Alanina-D-Alanina Carboxipeptidasa, Quimotripsina, Tripsna
y Calicreı́nas.
II. Enzimas tiol-dependientes: Catepsina B y Calpaı́na.
35
III. Enzimas metalo-dependientes: Entre ellas, se incluyen la enzima que convierte angiotensina, encefalinasa, Pseudomonas elastasa, Leucina aminopeptidasa y HIV.
Los inhibidores de peptidasa contemplados de las enzimas anteriores se seleccionan de la fórmula
genérica
40
45
O
k
R1 NH C -X
\/
|
R2
I
y sus hidratos, formas isoestéricas o sales farmacéuticamente aceptables, donde X es
50
55
60
R4
|
/\
- C C -R5 Y
k k
O O
R1 es hidrógeno, un grupo protector de amino seleccionado del Grupo K, un α-aminoácido o un
péptido que comprende varios bloques de α-aminoácidos, estando opcionalmente protegido el átomo de
nitrógeno terminal de dicho α-aminoácido o dicho péptido con un grupo protector de amino seleccionado
del Grupo K,
2
ES 2 118 710 T3
R2 es el resto “grupo R” del α-aminoácido responsable de dirigir el inhibidor al sitio activo de la
enzima o es -A-SiR7R8 R9 , alquilo C1−10, aralquilo o arilo, donde cada uno de R7 , R8 y R9 se seleccionan
entre alquilo C1−10, aralquilo o arilo y A es alquileno C1−6 ,
5
R4 es el resto “grupo R” especı́fico del α-aminoácido para ese análogo de sustrato de peptidasa,
R5 es un α-aminoácido o péptido compuesto por α-aminoácidos o está suprimido,
Y es NHR3 u OR3 , siendo R3 H, alquilo C1−7 , bencilo o fenetilo.
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15
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25
30
35
40
45
Si no se indica de otro modo, los α-aminoácidos de los sustratos de peptidasa anteriores están en
configuración L preferiblemente. Un compuesto de esta invención puede estar en forma libre, v.g., en
forma anfótera, o en forma de sal, v.g., sal de adición de ácido o sal aniónica. Un compuesto se puede
convertir en su forma de sal o de base de manera conocida en la técnica, partiendo de la base o de la sal,
respectivamente. Las sales preferidas son el trifluoracetato, hidrocloruro, sal de sodio, potasio o amonio,
aunque las sales que se pueden utilizar no se limitan a estas, sino que también pueden incluirse todas las
sales conocidas que se suelen utilizar en la quı́mica de péptidos.
El término “alquilo”, en este contexto, incluye todas sus manifestaciones lineales, ramificadas o cı́clicas,
en particular grupos tales como metilo, etilo, n-butilo, t-butilo, ciclopropilo, n-propilo, pentilo, ciclopentilo, n-hexilo, ciclohexilo y ciclohexilmetilo.
El término “aralquilo” incluye aquellos grupos arilo unidos a un alquileno C1−4 . El término “arilo”
dentro de las definicion es de R2 , incluye grupos carbocı́clicos y heterocı́clicos. Los grupos aralquilo y
arilo preferidos son fenilo, bencilo, naftilmetilo, fenetilo, 2-piridilmetilo, indolilo, piridilo, indazolilo, furilo y tienilo. Otros grupos carbocı́clicos son los grupos arilo fusionados tales como pentalenı́lo, indenilo,
naftalenilo, azulenilo, heptalenilo, acenaftilenilo, fluorenilo, fenalenilo, fenantrenilo, antracenilo, acefenantrilenilo, aceantrilenilo, trifenilenilo, pirenilo, crisenilo y naftacenilo. En el término “A-SiR7R8 R9 ”, el
radical alquileno (es decir “A”) es un grupo alquileno lineal o ramificado que separa el radical “SiR7R8 R9 ”
del átomo de carbono al que está unido el radical “A-SiR7R8 R9 ”. De los radicales R7 , R8 y R9 unidos al átomo de silicio, se prefiere que dos o tres de ellos sean radicales alquilo inferior C1−7 (preferiblemente, metilo o etilo) y que cuando uno de ellos contiene un radical arilo, dicho radical sea un
grupo bencilo. Se prefiere que el resto alquileno sea metileno. Los grupos preferidos son trimetilsililmetilo, trietilsililmetilo, bencildietilsililmetilo, bencildimetilsililmetilo, benciletilmetilsililmetilo, dimetil-(3piridilmetil)sililmetilo,dimetil-(3-indolilmetil)sililmetilo, y similares.
Antes de definir y/o ilustrar el alcance de los inhibidores de peptidasa representados por la Fórmula
I, conviene aclarar algunos de los conceptos más básicos referentes a los péptidos. Por ejemplo, excepto
la prolina, todos los α-aminoácidos encontrados en las proteı́nas tienen, como denominador común, un
grupo carboxilo libre y un grupo amino libre no sustituido en el átomo de carbono (en la prolina no ocurre
ası́, ya que el grupo α-amino de la prolina está sustituido, tratándose en realidad de un α-iminoácido,
aunque, por conveniencia, se considera como un α-aminoácido). Adicionalmente, cada α-aminoácido
tiene un “grupo R” caracterı́stico, que es la cadena lateral o el resto unido al átomo de carbono α del
α-aminoácido. Por ejemplo, el resto “grupo R” para glicina es hidrógeno, para alanina es metilo, para
valina es isopropilo. (Por lo tanto, en toda la memoria el grupo R2 y el grupo R4 son los restos “grupo R”
de cada α-aminoácido indicado o es otro radical que pueda ser definido para estos sitios para cualquier
inhibidor de proteasa dado). Para conocer más detalles sobre grupos R - o cadenas laterales - especı́ficos
de los α-aminoácidos, puede consultarse el libro Biochemistry de A.L. Lehninger (en particular el capı́tulo
4).
50
55
Además, por ser más conveniente para definir el alcance de los compuestos incluidos dentro del concepto genérico de la Fórmula I, y dentro de los conceptos subgenéricos relacionados con cada una de las
enzimas individuales implicadas en esta invención, se han clasificado varios α-aminoácidos en diversos
grupos que confieren caracterı́sticas funcionales similares para cada una de las enzimas especı́ficas que
son inhibidas por los sustratos de peptidasa de fórmula 1. Estos grupos se recogen en la Tabla II y las
abreviaturas por las que se conocen los bloques de α-aminoácidos se dan en la Tabla I.
60
3
ES 2 118 710 T3
TABLA I
Aminoácido
Sı́mbolo
Alanina
Arginina
Asparagina
Acido aspártico
Asn + Asp
Cisteı́na
Glutamina
Acido glutámico
Gln + Glu
Glicina
Histidina
Isoleucina
Leucina
Lisina
Metionina
Fenilalanina
Prolina
Serina
Treonina
Triptófano
Tirosina
Valina
Norvalina
Norleucina
1-Naftilalanina
Acido 2-indolincarboxı́lico
Sarcosina
Ala
Arg
Asn
Asp
Asx
Cys
Gln
Glu
Glx
Gly
His
Ile
Leu
Lys
Met
Phe
Pro
Ser
Thr
Trp
Tyr
Val
n-Val
n-Leu
Nal (1)
Ind
Sar
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
TABLA II
Grupo A: Lys y Arg
B: Glu, Asp
C: Ser, Thr, Gln, Asn, Cys, His, (3-pirazolil)Ala, (4-pirimidinil)Ala y derivados N-metilados
C’: Ser, Thr, Gln, Asn y Cys, y sus derivados N-metilados
D: Pro, Ind
E: Ala, β-Ala, Leu, Ile, Val, n-Val, β-Val, Met, n-Leu y sus derivados N-metilados (βrepresenta beta)
E’: Leu, Ile, n-Val, Met, N-Leu, CHM y sus derivados N-metilados
F: Phe, Tyr, O-metiltirosina, (3-pirazolil)Ala, (4-pirimidinil)Ala, Trp, Nal-(1) y sus derivados N-metilados,
F’: Phe, Tyr, O-metiltirosina, Trp, Nal-(I) y sus derivados N-metilados
G: Gly, Sar
G’: Gly
J:
NH
//
-CH2 φ(p-)NHC
\
NH2
NH
//
-CH2 φ(p-)C
\
NH2
(J-1)
4
(J-2)
ES 2 118 710 T3
NH
NH
//
-φ(p)-CH2 NHC
5
//
-φ(p)-CH2 C
\
(J-3)
\
NH2
(J-4)
NH2
donde φ, lógicamente, representa fenilo (entendiéndose que el enlace de J1-4 siempre está unido al átomo
de cadbono del aminoácido implicado que es, por ejemplo, el resto R 2 del aminoácido de la posición P1 ).
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
K: Acetilo (Ac),succinilo (Suc), metoxisuccinilo (H 3 COSuc), benzoı́lo (Bz), t-butiloxicarbonilo
(Boc), carbobenzoxi (CBZ), tosilo (Ts), dansilo (DNS), isovalerilo (Iva), metoxisuccinilo (MeOSuc),
1-adamantanosulfonilo (AdSO2 ), 1-adamantanoacetilo (AdAc), 2-carboxibenzoı́lo (2-CBZ), fenilacetilo,
t-butilacetilo (Tba), bis[(1-naftil)metil]acetilo (BNMA), o K’
K’: A-Rz, donde
O
k
A es - C -,
O
k
-N-C,
k
H
o
O
k
-Sk
O
y Rz es un grupo arilo que contiene 6, 10 o 12 átomos de carbono, adecuadamente sustituido con 1 a
3 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo formado por flúor cloro, bromo, yodo, trifluormetilo, hidroxi, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 3 átomos de carbono, car boxi,
alquilcarbonilamino, donde el grupo alquilo contiene de 1 a 6 átomos de carbono, 5-tetrazolo y acilsulfonamido (es decir, acilaminosulfonilo y sulfonilaminocarbonilo) que contiene de 1 a 15 carbonos, siempre
que cuando el acilsulfonamido contenga un arilo, dicho arilo pueda estar sustituido además con un sustituyente seleccionado entre flúor, cloro, bromo, yodo y nitro; y cualquier otro grupo protector de amino
terminal que sea funcionalmente equivalente a estos.
En aquellos casos en los que el resto grupo R normal de un α-aminoácido contiene un radical -OH (v.g.
serina, treonina y tirosina), hay que entender que dicho radical puede ser modificado. Por ejemplo, en
los casos anteriores, el radical -OH se puede convertir en un éter. Los radicales convertidos en éteres, por
ejemplo en sus éteres metı́licos, cambiarán la denominación del aminoácido correspondiente, de manera
que se nombrará O-metil Ser, O-metil Thr u O-metil Tyr, respectivamente. Estos radicales metoxilados
se pueden representar, respectivamente, por:
|
CH2 OMe,
|
H3 CHC-OMe
y
|
CH2 φ-OMe(p)
Los derivados de otro tipo se podrán representar de manera análoga. En aquellos casos en los que el
Grupo K representa un radical -A-Rz , se prefiere que A represente -C(=O)- y que Rz represente acilsulfonamido, en particular un acilsulfonamido que contiene un grupo arilo (preferiblemente fenilo) sustituido
con un halógeno. Los radicales -A-Rz - preferidos son 4-[(4-ciorofenil)sulfonilaminocarbonil]fenilcarbonilo,
4-[(4-bromofenil)sulfonilaminocarbonil]fenilcarbonilo y 4-[fenilsulfonilaminocarbonil]fenilcarbonilo (que
se pueden representar de manera abreviada por 4-Cl-φSAC-Bz, 4-Br-φ-SAC-Bz y φ-SAC-Bz, respectivamente).
Es bastante obvio que las modificaciones en el enlace amı́dico escindible de los sustratos de peptidasa
de esta invención presentan ciertas dificultades de nomenclatura. Para mantener un criterio general en
toda esta memoria, se ofrecen las siguientes explicaciones que solventan posibles ambigüedades con respecto al alcance y espı́ritu de esta invención.
En aquellos casos en los que los compuestos se definen por la fórmula
R1 NH
60
O
k
-O-C
O
k
k
R4
|
|
@,@
,@ C ,
|
C
|
R2
k
O
5
k
O
R5 Y
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5
10
15
el grupo R2 es el resto del α(-aminoácido (u otro radical definido) localizado en la posición P1 , R1
puede ser un grupo protector seleccionado del Grupo K definido anteriormente, o puede ser un resto de
α-aminoácido o péptido (de hasta 4 α-aminoácidos). Cuando se define el radical R1 para cada enzima
especı́fica, habrá que definir el aminoácido o el aminoácido del péptido según la posición P que ocupe. Por
ejemplo, un péptido R1 que tenga 2 aminoácidos, estará formado por los radicales P2 -P3 ; uno que tenga
3 aminoácidos, estará formado por los radicales P2 -P3 -P4 , mientras que uno que tenga 4 aminoácidos,
estará formado por los radicales P2 -P3 -P4 -P5 . En todos estos casos, el átomo de nitrógeno terminal de
estos radı́cales puede estar opcionalmente protegido con un grupo protector seleccionado del Grupo K
que, lógicamente, incluirá el resto -A-Rz. Para definir los restos R1 especı́ficos para cada uno de los
inhibidores individuales de proteasas implicados en esta invención, R1 será, por ejemplo, un grupo P2 P3
que lleva un grupo protector seleccionado del Grupo K, es decir P2 P3 Pg , donde Pg representa un grupo
protector del Grupo K en su amino terminal. Si el α(-aminoácido terminal no lleva un grupo protector,
entonces se representará P2 P3 . En aquellos casos en los que R5 es un péptido, cada α(-aminoácido será
numerado (cuando sea conveniente) secuencialmente (es decir, R5−1 , R5−2, R5−3 , etc.) e Y será designado
como el extremo terminal del sustrato. En la práctica, se prefiere que R5 no contenga más de 3 restos
de aminoácido. Por ejemplo, supóngase que R1 es un péptido que contiene dos aminoácidos (Phe y Val)
cuyo átomo de nitrógeno terminal lleva un sustituyente CBZ, R2 es el resto del α(-aminoácido Arg, R4
es el resto de α-aminoácido Leu, R5 es el dipáptido formado por los dos aminoácidos Ser y Val e Y es
NHR3 , donde R3 es CH3 . Ese compuesto se podrá escribir como
20
25
30
35
CBZ-Phe-Val-Arg[C(O)Leu]-SerValNHCH3 .
El resto entre corchetes (es decir, [C(O)Leu]) se utiliza para indicar que el átomo de nitrógeno del αaminoácido P’1 ha sido sustituido por una función carbonilo, siendo Leu el resto R4 de ese α-aminoácido.
Por supuesto, es evidente que el resto entre corchetes representa un radical malonilo pero, por ser más
conveniente, se prefiere designarlo como está. Los restos P’2 y P’3 (es decir, Ser-Val) representan el radical
R5 ; algunas veces Ser y Val se cogen como R5−1 y R5−2 , respectivamente. Por último NHCH3 representa
el grupo Y de la parte terminal del sustrato. Si R5 se suprime e Y es OH u OCH3 , los compuestos se
escribirán como CBZ-Phe-Val-Arg[C(O)Leu]OH o CBZ-Phe-Val-Arg[EC(O)Leu]OCH3 , respectivamente.
Según lo anterior, los compuestos de esta invención son inhibidores de peptidasas, capaces de inhibir
enzimas del grupo formado por elastasa de leucocitos humanos, catepsina G, trombina, plasmina, C-1 esterasa, C-3-convertasa, uroquinasa, activador de plasminógeno, acrosina, β-lactamasa, D-alanina-D-alanina
carboxipeptidasa, quimotripsina, tripsina, calicreı́nas, catepsina B, calpaı́na, proteasas retrovirales necesarias para la replicación, encefalinasa, Pseudomonas elastasa y leucina aminopeptidasa, y se definen
como:
Inhibidores de peptidasa que tienen las fórmulas
R1 NHCHR2 C(O)X
40
y
I
R1 NHCHR2 CH(OH)X
y sus hidratos, formas isoestéricas o sales farmacéuticamente aceptables, donde
45
50
X es -C(O)CHR4 C(O)R5 Y,
R1 es H, un grupo protector de amino seleccionado del Grupo K, un α-aminoácido, un péptido formado por 2 a 4 α-aminoácidos, un α-aminoácido que lleva un grupo protector del Grupo K o un péptido
formado por 2 a 4 α-aminoácidos, cuyo aminoácido terminal lleva un grupo protector del Grupo K,
R2 es un resto de un α-aminoácido, -A-SiR7R8 R9 , alquilo C1−10 , aralquilo o arilo,
A es alquileno C1−6 ,
55
cada uno de R7 , R8 y R9 es alquilo C1−10, aralquilo o arilo,
R4 es un resto de un α-aminoácido,
60
R5 es un α-aminoácido, un péptido formado por 2 a 4 α-aminoácidos o está suprimido,
Y es NHR3 u OR3 , donde R3 es H, alquilo C1−7 , bencilo o fenetilo,
6
ES 2 118 710 T3
donde dichos grupos protectores, α-aminoácidos o restos peptı́dicos se seleccionan de los Grupos A,
B, C, D, E, F, G, J, C’, E’, F’, G’ y K, que se definen como:
A: Lys y Arg
5
B: Glu, Asp
C: Ser, Thr, Gln, Asn, Cys, His, (3-pirazolil)Ala, (4-pirimidinil)Ala y sus derivados N-metilados
10
C’: Ser, Thr, Gln, Asn y Cys y sus derivados N-metilados
D: Pro, Ind
15
E: Ala, β-Ala, Leu, Ile, Val, n-Val, β-Val, Met, β-valina, β-alanina, n-Leu y sus derivados N-metilados
(donde β- representa beta)
E’: Leu, Ile, n-Val, Met, n-Leu, CHM y sus derivados N-metilados
20
F: Phe, Tyr, O-metiltirosina, (3-pirazolil)Ala, (4-pirimidinil)Ala, Trp, Nal(1) y sus derivados Nmetilados
F’: Phe, Tyr, O-metiltirosina, Trp, Nal(I) y sus derivados N-metilados
G: Gly, Sar
25
G’: Gly
J:
NH
NH
//
30
-CH2 φ(p-)NHC
//
-CH2 φ(p-)C
\
(J-1)
\
NH2
(J-2)
NH2
35
NH
NH
//
-φ(p)-CH2 NHC
40
45
50
55
60
//
-φ(p)-CH2 C
\
(J-3)
\
NH2
(J-4)
NH2
K: Acetilo (Ac), succinilo (Suc), metoxisuccinilo (H3 COSuc), benzoı́lo (Bz), t-butiloxicarbonilo
(Boc), carbobenzoxi (CBZ), tosilo (Ts), dansilo (DNS), isovalerilo (Iva), metoxisuccinilo (MeoSuc), 1adamantanosulfonilo (AdSO2 ), 1-adamantanoacetilo (AdAc), 2-carboxibenzoı́lo (2-CBZ), fenilacetilo, tbutilacetilo (Tba), bis[(1-naftil)metil]acetilo (BNMA) o K’
O
k
K’: es -A-Rz, donde A es - C - ,
O
k
- N -C ,
|
H
O
k
-O-C
o
O
k
-S-;
k
O
y Rz es un grupo arilo que contiene 6, 10 o 12 carbonos adecuadamente sustituidos con 1 a 3 sustituyentes seleccionados independientemente del grupo formado por flúor, cloro, bromo, yodo, trifluormetilo,
hidroxi, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, carboxi, alquilcarbonilamino, donde el grupo alquilo contiene de 1 a 6 átomos de carbono, 5-tetrazolo y acı́lsulfonamido de 1 a
15 átomos de carbono, siempre que cuando el acilsulfonamido contenga un arilo, dicho arilo pueda estar
sustituido adicionalmente con un sustituyente seleccionado del grupo formado por flúor, cloro, bromo,
yodo y nitro.
Los compuestos de Fórmula I que son útiles como inhibidores de calpaı́na y catepsina B son compuestos
de fórmula
7
ES 2 118 710 T3
R1 NHCHR2 C(O)X
Iu
donde X es -C(O)CHR4 C(O)R5 Y,
5
R1 es P2 P3 o P2 P3 Pg donde Pg es un grupo protector del Grupo K, preferiblemente los grupos protectores son CBZ, Bz o Ac,
P2 es un α-aminoácido de los Grupos E y F, preferiblemente Val, Ile, Ala o Pro,
10
15
P3 es un α-aminoácido de los Grupos B, E o F o está suprimido, y preferiblemente está suprimido o
es Ile,
R2 es H, una cadena lateral de α-aminoácido de los Grupos E, F, J, naftilo, alquilo C1−7 , bencilo,
fenetilo, o A-SiR7R8 R9 , donde R7 , R8 y R9 son alquilo C1−10 fenilo, bencilo, fenetilo, y A es alquileno
C1−6 , preferiblemente R2 es ciclohexilmetilo, Phe o naftilo.
R3 es alquilo C1−6 , bencilo o fenetilo, preferiblemente alquilo C1−6 ,
R4 es el resto de un α-aminoácido de los Grupos C, E o H,
20
R5 está suprimido, e
Y es OR3 o NHR3 .
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30
35
40
Debido a que inhiben calpaı́na y catepsina B proteasas, los compuestos (Iu) (a) tendrán efecto sobre la
movilidad celular a través de la matriz extracelular, lo que los hace útiles para tratar metástasis cáncerosa;
(b) producirán cambios de larga duración en las proteı́nas reguladoras (v.g., regulación descendente de
proteı́na quinasa C y descomposición del citoesqueleto causando efectos secundarios sobre la activación
de plaquetas, tales como la potenciación de la formación de coágulos, la desgranulación de leucocitos,
para tratar inflamación y enfermedades inmunológicas, v.g., artritis, enfisema, esclerosis múltiple y lupus sistémico); (c) producirán una proteolisis intracelular general, en particular sobre las células de los
músculos, causando efectos secundarios sobre la muerte de las células por isquemia/reperfusión, propiedades que confieren a estos compuestos utilidad en el tratamiento de apoplejı́a y ataques al corazón; y
(d) ayudarán a bloquear la lisis de los eritrocitos, lo que confiere a los compuestos utilidad en el tratamiento de condiciones asociadas con hemolisis excesiva, tales como la depranocitosis, y en la diálisis de
los riñones. Cabe esperar que el intervalo de dosificación para una aplicación de uso final sea de unos
0,01 a 10 mg/kg de peso corporal al dı́a, para conseguir un efecto terapéutico eficaz.
Los compuestos de esta invención se pueden preparar por procedimientos quı́micos convencionales
análogos a otros procedimientos descritos en la técnica. Los procedimientos se resumen en los esquemas
de reacción A y B y se describen a continuación.
45
50
(Ver Esquema de Reacción A en página siguiente)
55
60
8
ES 2 118 710 T3
Esquema de Reacción A
5
10
-
R1 NHCHC(O)OH
|
R2
(2)
[R1HNCHR2 (O)OC(O)OCH2 CH(CH3 )2 ]
(3)
(LiCHR4 C(O)Y
————————
Acilación
R1 NHCHC(O)NOCH3
|
|
CH3
R2
(4)
15
20
25
30
?
R1 NHCHCH(OH)C(O)CHC(O)OEt
|
|
R4
R2
(6)
Oxidación
R1 NHCHCH(OH)C(O)CHC(O)Y
|
|
R4
R2
(12)
?
?
R1 NHCHC(OH)C(O)CHC(O)OEt
|
|
R4
R2
(7)
Saponificación
35
40
?
Acilación (LiCHR4 COOEt)
R1 NHCHCH(OH)C(O)CHC(O)Y
|
|
R4
R2
(13)
?
R1 NHCHC(OH)C(O)CHC(O)OH
|
|
R4
R2
(8)
Copulación
?
45
H(NHCHC(O)n Y’
|
R5 ’
(9)
50
R1 NHCHC(OH)C(O)CHC(O)(NHCHC(O))n Y’
|
|
|
R4
R5 ’
R2
(10)
55
60
Desprotección
?
R1 NHCHC(OH)C(O)CHC(O)(NHCHC(O))n Y
|
|
|
R4
R5 ’
R2
(11)
9
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donde
Y’ es NHR3 , OR3 ,
5
Y es NHR3 u OR3 , donde R3 es alquilo, bencilo o fenetilo,
R5 ’, es un resto de un aminoácido,
n es 1-4 y R1 , R2 y R4 se definen como antes.
10
Esquema de Reacción B
R1 NHCHC(O)N-OCH3
|
R2
15
+
20
/——|
|
R4 -C=C-N
\——|
|
C=O
|
R5
(4)
?
25
(14)
O
k
/——|
|
R1 NH-CH-C-C-N
|
k \——|
C-R4
R2
|
HC=O
|
R5 Y
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35
(15)
40
?
R4
|
/\
R1 NHCH-C-C C-R5 Y
k k
O O
45
50
(16)
55
donde
R1 , R2 , R4 , R5 e Y se definen como antes.
60
El procedimiento del Esquema de Reacdión A comienza sometiendo el compuesto de partida (2) a
la etapa (a) que se inicia formando el anión del compuesto de partida con una base, preferiblemente
N-metilmorfolina, trietilamina (TEA), diisopropiletilamina (DIEA) u otras aminas adecuadas. Preferiblemente, el anión se forma utilizando un exceso de la amina, agitando la mezcla a una temperatura
como prendida entre unos -15◦ C y 10◦C, preferiblemente 0◦C. La adición de una cantidad equivalente de
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cloroformiato de isobutilo, enfriando a unos -20◦C, forma un anhı́drido mixto in situ (3). (En vez de cloroformiato de isobutilo, se puede utilizar cualquier otro agente copulante de péptidos que funcione igual,
por ejemplo cianofosfonato de dietilo, DCC, reactivos BOP, cloruro de BOP). La adición de una cantidad
molar equivalente de N,O-dimetilhidroxilamina al intermedio in situ activado (3) forma un derivado de
ácido dimetilhidroxámico (es decir, una N-metil-N-metoxi amida) de fórmula 4. Esta etapa, ası́ como las
etapas (b) y (g) se efectúan en una atmósfera inerte (argón o nitrógeno) en condiciones anhidras.
Las peptidil-α-hidroxi-N-metil-N-metoxiamidas de Fórmula (4) ası́ producidas se acilan, utilizando
los acetatos de alquil litio de fórmula (5), en condiciones de acilación convencionales, por ejemplo, por
reacción de las amidas (4) con los derivados de alquil litio (5) a unos -78◦ C durante aproximadamente 1
hora, y la mezcla de reacción resultante se lleva a la temperatura ambiente y se neutraliza por adición
de ácido clorhı́drico diluido, para producir los intermedios deseados de fórmula (6). Estos intermedios
hidroxı́licos se someten a procedimientos de oxidación, por ejemplo (1) por el procedimiento de oxidación
de Swern, (2) por una reacción de Jones modificada, utilizando dicromato de piridinio, (3) con un complejo de anhı́drido crómico-piridinio o (4) con 1,1,1-triacetoxi-2,1-benzoxiodol.
En general, la reacción de Swern se efectúa haciendo reaccionar de unos 2 a 10 equivalentes de dimetilsilfóxido (DMSO) con alrededor de 1 a 6 equivalentes de anhı́drido trifluormetilacético [(CF3 CO)2 O]
o cloruro de oxalilo [(COCL)2 ] disolviendo dichos reactivos en un disolvente inerte, v.g. cloruro de metileno (CH2 Cl2 ),y manteniendo el matraz de reacción en una atmósfera inerte (v.g., nitrógeno u otro gas
inerte similar) en condiciones anhidras, a temperaturas de unos -80◦ C a unos -50◦C , para formar un
aducto de sulfonio in situ al que se añade aproximadamente 1 equivalente del alcohol de Fórmula (6).
Preferiblemente, el alcohol se disuelve en un disolvente inerte, v.g., CH2 Cl2 o cantidades mı́nimas de
DMSO, y la mezcla de reacción se lleva a u nos -50◦ C (durante unos 10-20 minutos). La reacción se
completa agregando unos 3-10 equivalentes de una amina terciaria, v.g., trietilamina, N-metilmorfolina,
etc. Después de la oxidación, se aislan los intermedios deseados (7) para utilizarlos en la siguiente etapa
de la secuencia de reacciones.
En general, el procedimiento de oxidación de Jones modificado se puede efectuar convenientemente
haciendo reaccionar el alcohol (6) con dicromato de piridinio, poniendo en contacto ambos reactivos en
tamiz molecular absorbente del agua, v.g., un tamiz molecular molido a un tamaño de 3 Angströms), en
presencia de ácido acético glacial, a unos 0-50◦C, preferiblemente a la temperatura ambiente.
Alternativamente, la oxidación se puede efectuar utilizando el complejo de anhı́drido crómico-piridina,
es decir el reactivo de Sarett preparado in situ (véase Fieser y Fieser “Reagents for Organic Synthesis”
vol. 1, pág. 145 y Sarett y col., J.A.C.S. 25, 422 (1953). Este complejo se prepara in situ en un disolvente
inerte (v.g., CH2 Cl2 ) en una atmósfera inerte y en condiciones anhidras, a una temperatura comprendida
entre 0 y 50◦C. En este caso, se agrega 1 equivalente del alcohol (6) a 1-5 equivalentes del complejo de
anhı́drido crómico-piridina y se deja transcurrir la reacción por espacio de 1 a 15 horas aproximadamente.
Después, se aisla el producto deseado (7).
Otro procedimiento alternativo para convertir los alcoholes (6) en las cetonas deseadas (7) es una
reacción de oxidación utilizando peryodinano (es decir, 1,1,1-triacetoxi-2,1-benzosiodol-3-(3H)-ona) (véase
Dess Martin, J. Org. Chem., 48, 4155 (1983)). Esta oxidación se efectúa poniendo en contacto alrededor
de 1 equivalente del alcohol (6) con 1 a 5 equivalentes de peryodinano (prefeeriblemente 1,5 equivalentes)
suspendido en un disolvente inerte (v.g., cloruro de metileno) en una atmósfera inerte (preferiblemente
nitrógeno), en condiciones anhidras y a una temperatura comprendida entre 0 ◦ C y 50◦ C (preferiblemente
a la temperatura ambiente) y dejando transcurrir la reacción durante 1 a 48 horas aproximadamente.
Después de la oxidación y el aislamiento del producto, el ácido de fórmula (8) se puede preparar por
un procedimiento de saponificación convencional, por ejemplo, por reacción del éster con hidróxido de
litio en una mezcla disolvente de dioxano/agua.
El producto de Fórmula (9) se puede obtener por copulación del ácido (8) con la amina apropiada,
siguiendo los procedimientos normales de copulación de péptidos, empleando agentes copulantes tales
como cloroformiato de isobutilo (y otros que se han descrito anteriormente). Después de la copulación,
se pueden eliminar selectivamente los grupos protectores de amino y los ésteres se pueden convertir en
sus ácidos utilizando procedimientos convencionales bien conocidos en la técnica.
Los compuestos de Fórmula (4) también se pueden convertir en los derivados de malonilo deseados
en los que n es 0 (es decir, R5 está suprimido) por procedimientos de acilación y oxidación similares a los
descritos antes para producir los compuestos 12 y 13 respectivamente.
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5
Alternativamente, los compuestos de fórmula (16) se pueden preparar por la serie de reacciones del
Esquema B, que consiste esencialmente en someter los derivados hidroxámicos de Fórmula (4) a un ataque
nucleofı́lico por acilación con un sintón aniónico β-vinı́lico, siguiendo el método de R.R. Schmidt y J.
Talbiershyl [Angew. Chem. Int. Ed. Engl. vol. 15 (1976) n◦ 3, pág. 171], que consiste en someter a
reacción un anión de β-acilenamina (14) (formado por tratamiento de la correspondiente β-acilenamina
con t-butil o litio a temperaturas inferiores a -100◦ C) con los derivados hidroxámicos (4) para producir
compuestos (15) que, tras un tratamiento con ácido trifluoracético y agua, producen los compuestos deseados de Fórmula (16).
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El procedimiento secuencial en fase sólida se puede efectuar utilizando métodos automáticos, por ejemplo, empleando un sintetizador automático de péptidos. En este procedimiento, se une un aminoácido
que tiene el grupo amino protegido a una resina soporte por su extremo carboxi terminal, después se
desprotege el aminoácido en la posición amino en la que se va a forma el enlace peptı́dico, el grupo amino
se neutraliza con una base y se copula el siguiente aminoácido amino-protegido de la secuencia deseada,
formando un enlace peptı́dico. Se repiten las etapas de desprotección, neutralización y copulación hasta
que se sintetiza el polipáptido deseado. Por lo tanto, los compuestos de la presente invención se sintetizan
desde su extremo carboxi terminal hasta su extremo amino terminal. El aminoácido amino protegido
puede ser un aminoácido convencional, un derivado o isómero del mismo, o un grupo espaciador. La
resina soporte empleada puede ser cualquier resina adecuada empleada convencionalmente en la técnica
para la preparación de polipéptidos en fase sólida. La resina preferida es poliestireno que ha sido entrecruzado con alrededor del 0,5 al 3% de divinilbenceno, y que ha sido benzhidrilamidado, clorometilado
o hidroximetilado para proporcionar sitios para la formación de la amida o el éster con el aminoácido
amino-protegido introducido en primer lugar.
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Un ejemplo de resina hidroximetilada es la que describe Bodansky y col. [Chem. Ind (London) 38,
1597-98 (1966)]. La preparación de resinas clorometiladas y benzhidrilamidadas ha sido descrita por
Stewart y col. [“Solid Phase Peptı́de Synthesis”, 2a¯ edición, Pierce Chemical Co., Rockford, Illinois
(1984), capı́tulo 2, págs. 54-55]. Muchas de estas resinas se pueden conseguir en el mercado. En general,
el aminoácido aminoprotegido que va a constituir el extremo carboxi terminal del péptido se une a la
resina siguiendo procedimientos y métodos bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, al aminoácido
amino-protegido se puede unir a la resina por el procedimiento de Gisin [Helv. Chem. Acta, 56,.1476
(1973)]. Cuando se desea utilizar una resina que contiene un radical benzhidrilamino como sitio de anclaje en la resina, el aminoácido amino-protegido se copula a la resina a través de un enlace amido entre
su función ácido carboxı́lico en α y el radical amino de la resina. Esta copulación se efectúa utilizando
procedimientos de copulación convencionales, que se describen más adelante. En el mercado, se pueden
conseguir muchos aminoácidos anclados en resinas.
El grupo protector de α-amino empleado con cada aminoácido introducido en la secuencia polipeptı́dica puede ser cualquier grupo protector conocido en la técnica. Las clases de grupos protectores
de α-amino contempladas son: (1) grupos protectores de tipo acilo, tales como formilo, trifluoracetilo,
ftalilo, p-toluenosulfonilo (tosilo), bencenosulfonilo, nitrofenilsulfenilo, tritilsulfenilo, o-nitrofenoxiacetilo
y α-clorobutirilo; (2) grupos protectores de tipo uretano aromáticos, tales como benciloxicarbonilo y benciloxicarbonilo sustituido, tal como p-clorobenciloxicarbonilo, p-metoxibenciloxicarbonilo, pnitrobenciloxicarbonilo, p-bromobenciloxicarbonilo, 1-(p-bifenilil)-1-metiletoxicarbonilo, α-α-dimetil-3,5dimetoxibenciloxicarbonilo y benzhidriloxicarbonilo; (3) grupos protectores de tipo uretano alifáticos,
tales como t-butiloxicarbonilo (Boc), diisopropilmetoxicarbonilo, isopropiloxicarbonilo, etoxicarbonilo y
aliloxicarbonilo; (4) grupos protectores de tipo uretano cicloalquı́licos, tales como ciclopentiloxicarbonilo,
adamantiloxicarbonilo y ciclohexiloxicarbonilo; (5) grupos protectores de tipo tiouretano, tales como feniltiocarbonilo; (6) grupos protectores de tipo alquilo, tales como trifenilmetilo (tritilo) y bencilo (Bzl);
(7) grupos protectores de tipo trialquilsilano, tales como trimetilsilano. El grupo protector de α-amino
preferido es t-butiloxicarbonilo (Boc). El uso de Boc como grupo protector de α-amino para aminoácidos
ha sido descrito por Bodansky y col. en “The Practice of Peptide Synthesis”, Springer-Verlag, Berlin
(1984), pág. 20.
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60
Una vez copulado el aminoácido amino-protegido a la resina soporte, se elimina el grupo protector
de α-amino por cualquier procedimiento adecuado, por ejemplo, utilizando ácido trifluoracético, ácido
trifluoracético en diclorometano o HCl en dioxano. La desprotección se efectúa a una temperatura comprendida entre 0◦C y la temperatura ambiente. Se pueden utilizar otros reactivos desbloqueantes para
eliminar grupos protectores de amino determinados, en condiciones bien conocidas en la técnica.
Después de eliminar y neutralizar el grupo protector de α-amino, se copula el siguiente aminoácido
12
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amino-protegido a través de un enlace peptı́dico. Este procedimiento de desprotección, neutralización y
copulación se repite hasta que se obtiene el polipéptido de la secuencia deseada. Alternativamente, se pueden copular varios aminoácidos por el método en solución y después copular la secuencia de aminoácidos
ası́ obtenida a la resina soporte.
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Cualquier experto en la técnica puede elegir y utilizar el reactivo copulante más apropiado. Los
reactivos copulantes más adecuados cuando el aminoácido que se agrega es Gln, Asn o Arg son N,Ndiciclohexilcarbodı́imida y 1-hidroxibenzotriazol. El uso de estos reactivos evita la formación de nitrilos
y lactamas. Otros agentes copulantes son (1) las carbodiimidas (v.g., N,N-diciclohexilcarbodiimida y
N-etil-N’-α-dimetilaminopropilcarbodiimida); 3-cleteniminas; (4) sales de isoxazolio (v.g., 3-sulfonato
de N-etil-5-fenilisoxazolio); (5) amidas heterocı́clicas que contienen nitrógeno monocı́clico, que tienen
carácter aromático y contienen de uno a cuatro nitrógeno en el anillo, tales como las imidazolidas,
pirazolı́das y 1,2,4-triazolidas (algunos ejemplos más concretos de amidas heterocı́clicas útiles son el N,Ncarbonildiimidazol y el N,N-carbonil-di-1,2,4-triazol); (6) acetileno alcoxilado (v.g., etoxiacetileno); (7)
reactivos que forman un anhı́drido mixto con el radical carboxi del aminoácido (v.g., cloroformiato de
etilo y cloroformiato de isobutilo) o el anhı́drido simétrico del aminoácido que se copula (v.g., Boc-AlaO-Ala-Boc); (8) compuestos heterocı́clicos que contienen nitrógeno, que tienen un grupo hidroxi en un
nitrógeno del anillo (v.g., N-hidroxiftalimida, N-hidroxisuccinimida y 1-hidroxibenzotriazol). Otros reactivos activantes y su uso en la copulación de péptidos son los descritos por Kapoor [J. Pharm. Sci.,
59, 1-27 (1970)]. El método de copulación generalmente preferido para los aminoácidos utilizados en la
presente invención es el uso del anhı́drido simétrico como agente copulante.
El método copulante preferido para Gln, Asn y Arg consiste en reaccionar el aminoácido protegido, o sus derivados o isómeros, con N,N-diciclohexilcarbodiimida y 1-hidroxibenzotriazol (1:1) en N,Ndimetilformamida (DMF) en presencia de la resina o aminoácido o péptido unido a la resina. El método
copulante preferido para otros aminoácidos consiste en someter a reacción el aminoácido protegido, o
un derivado o isómero del mismo, con N,N-diciclohexilcarbodiimida en diclorometano, para formar el
anhı́drido do simétrico. El anhı́drido simétrico se introduce en el reactor en fase sólida que contiene la
resina o el aminoácido o péptido unido a la resina, y se lleva a cabo la copulación en un medio de DMF o
diclorometano o DMF/diclorometano 1:1. Se prefiere que el medio sea DMF. El éxito de la reacción de
copulación en cada etapa de la sı́ntesis se controla por un ensayo con ninhidrina, descrito por Kaiser y col.
[Analyt. Biochem. 34, 595 (1970)]. Cuando la copulación no ha sido completa, se repite el procedimiento
de copulación. Si aun ası́ la copulación sigue siendo imcompleta, la amina desprotegida se bloquea con un
reactivo bloqueante adecuado para evitar que continúe su sı́ntesis. Los reactivos bloqueantes adecuados
y su empleo son bien conocidos en la técnica. Ejemplos de reactivos bloqueantes adecuados son anhı́drido
acético y acetilimidazol, ambos descritos por Stewart y col., [“Solid Phase Peptide Synthesis”, 2a¯ edición,
Pierce Chemical Co., Rockford, Ill (1984), capı́tulo 2, pág. 73].
Una vez obtenida la secuencia de aminoácidos deseada, el péptido de separa de la resina. Esto se puede
hacer siguiendo procedimientos conocidos en la técnica, por ejemplo por hidrólisis del enlace éster o amido
a la resina. Para separar el péptido de una resina benzhidrilamidada, se prefiere utilizar una solución
de sulfuro de dimetilo, p-cresol, tiocresol o anisol en fluoruro de hidrógeno anhidro. Preferiblemente,
la reacción de escisión se lleva a cabo a temperaturas comprendidas entre unos 0◦ C y la temperatura
ambiente, y se deja que continúe preferiblemente entre unos 5 minutos y unas 5 horas.
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Es un hecho conocido en la técnica de la sı́ntesis de péptidos en fase sólida que muchos de los
aminoácidos llevan funcionalidades en las cadenas laterales que deben ser protegidas durante la preparación del péptido. La elección y el uso de un grupo protector apropiado para estas funcionalidades de
las cadenas laterales no ofrece problema para los expertos en la técnica y dependerá del aminoácido que
va a ser protegido y de la presencia de otros restos de aminoácido protegidos en él péptido. La elección
de dicho grupo protector de la cadena lateral es crı́tica en el sentido de que debe resistir en las etapas
de desprotección y copulación de la sı́ntesis. Por ejemplo, cuando sé utiliza Boc como grupo protector de α-amino, son adecuados los siguientes grupos protectores para las cadenas laterales: los grupos
p-toluenosulfonilo (p-tosilo) se pueden utilizar para proteger las cadenas laterales que contienen amino
de aminoácidos tales como Lys y Arg; p-metilbencilo, acetamidometilo, bencilo (Bzl) o t-butilsulfonilo
se pueden utilizar para proteger las cadenas laterales que contienen azufre de aminoácidos tales como
cisteı́na, homocisteı́na, penicilamina y similares, o derivados de ellos; los grupos bencilo (Bzl) y ciclohexilo
se pueden utilizar para proteger en forma de éster las cadenas laterales que contienen ácido carboxı́lico
de aminoácidos tales como Asp o Glu; se puede utilizar un grupo bencilo (Bzl) para proteger en forma
de éter las cadenas laterales que contienen hidroxi de aminoácidos tales como Ser y Thr; y se puede
utilizar un grupo 2-bromocarbobenzoxi (2Br-Z) para proteger las cadenas laterales que contienen hidroxi
de aminoácidos tales como Tyr. Estos grupos protectores de cadenas laterales se introducen y se elimi13
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nan siguiendo métodos y procedimientos bien conocidos en la técnica. Se prefiere eliminar estos grupos
protectores de las cadenas laterales empleando una solución de anisol en fluoruro de hidrógeno anhidro
(1:10). Tı́picamente, la desprotección de los grupos protectores de las cadenas laterales se efectúa una vez
terminada la sı́ntesis de la cadena peptı́dica, pero también se pueden eliminar en otro momento oportuno.
Se prefiere desproteger estas cadenas laterales al mismo tiempo que se separa el péptido de la resina.
Después, los compuestos se aislan y purifican por técnicas convencionales. Los aminoácidos, o sus
derivados o isómeros, deseados se pueden obtener en el mercado o se pueden sintetizar siguiendo procedimientos conocidos en la técnica.
10
Los siguientes ejemplos especı́ficos ilustran la preparación de los compuestos de esta invención, pero
hay que entender que su alcance sólo está limitado por la fórmula I.
Ejemplo 1
15
4-Hidroxi-6-fenil-5-[((fenilmetoxi)carbonil)amino]-3-oxohexanoato de etilo
20
Una solución de la N - metoxi - N - metilamida del ácido 2 - hidroxi - 4 - fenil - 3 - [((fenilmetoxi)carbonil)amino]butanoico (372 mg, 1,0 mmoles) en tetrahidrofurano se enfrı́a a - 78◦C y se agrega
acetato de etil litio (72 mg, 3,0 mmoles). La solución se agita a - 78◦C durante 1 hora, se lleva a la
temperatura ambiente y se agita durante otra hora y por último se vierte en HCl diluido. El producto se
extrae con acetato de etilo (3 x 150 ml) y los extractos orgánicos combinados se lavan con NaHCO3 , se
secan sobre Na2 SO4 y el disolvente se elimina a vacı́o. El producto bruto se purifica por cromatografı́a
instantánea sobre gel de sı́lice.
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Ejemplo 2
3,4-Dioxo-5-[((fenilmetoxi)carbonil)amino]-6-fenilhexanoato de etilo
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35
Una solución de 4-hidroxi-6-fenil-5-[((fenilmetoxi)-carbonil)amino]-3-oxohexanoato de etilo (397 mg,
1,0 mmoles) en acetonitrilo (15 ml) se trata con el peryodano de Dess-Martin (1,27 g, 3,0 mmoles). A la
mezcla resultante, se agrega ácido trifluoracático (342 mg, 3,0 mmoles) y se agita durante 48 horas. El
disolvente se evapora a vacı́o y se agrega EtOAc (100 ml), seguido de una solución de NaHCO3 (0,80 g)
y Na2 S O4 (1,41 g) en H2 O (25 ml). La capa orgánica se separa y la fase acuosa se extrae con acetato de
etilo. Los extractos combinados se secan sobre Na2 S2 O3 y el disolvente se evapora a vacı́o. El producto
se purifica por cromatografı́a instantánea sobre gel de sı́lice.
Ejemplo 3
40
Acido 3,4-dioxo-5-[((fenilmetoxi)carbonil)amino]-6-fenilhexanoico
A una solución de 3,4-dioxo-5-[((fenilmetoxi)carbonil)amino]-6-fenilhexanoato de etilo (400 mg, 1,0
mmoles) en dioxano/H2O (10:1), se agrega hidróxido de litio (72 mg, 3,0 mmoles). La mezcla se agita
durante 3 horas, se elimina el disolvente a vacı́o y el producto bruto se utiliza sin purificarlo.
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Ejemplo 4
N-[3,4-Dioxo-5-(((fenilmetoxi)carbonil)amino))-6-fenilhexanoil] glicinamida
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A una solución de ácido 3,4-dioxo-5-[((fenilmetoxi)-carbonil)amino]-6-fenilhexanoico (370 mg, 1,0
mmoles) en cloruro de metileno (300 ml), se agrega N-metilmorfolina (0,30 g, 3,0 mmoles). La mezcla se enfrı́a a -15◦C y se agrega cloroformiato de isobutilo (136 mg, 1,0 mmoles). La mezcla se agita a
-15◦C durante 15 minutos y se agrega hidrocloruro de N,O-dimetilhidroxilamina (194 mg, 1,0 mmoles).
La mezcla se agita a -15◦ C durante 1 hora se lleva a la temperatura ambiente y se agita otras 3 horas.
La mezcla de reacción se vierte en H2 O (300 ml) y la fase acuosa se extrae con cloruro de metileno (2 x
150 ml). Los extractos orgánicos combinados se secan sobre Na2 SO4 , se concentran a 100 ml y se filtran
a través de gel de sı́lice (5 cm). El disolvente se elimina a vacı́o para dar el producto del titulo que se
purifica por cromatografı́a instantánea.
Se han descrito detalladamente los aspectos genéricos y especı́ficos del alcance de la invención, ası́
como la manera de practicar y utilizar la invención. Además, aunque los procedimientos de evaluación de
los efectos bioquı́micos son conocidos en la técnica, también se incluyen en esta memoria referencias de los
14
ES 2 118 710 T3
mismos para utilizarlos en la evaluación de los efectos bioquı́micos de los compuestos de esta invención.
5
Por ejemplo, la elastasa humana se ensaya in vitro utilizando péptidos cromofóricos, succinilalanilalanilalanil-p-nitro-anilida, metoxisuccinilalanilalanilprolilvalil-p-nitroanilida, otros, todos ellos asequibles
en el mercado. El tampón de ensayo, pH 8,0, y las técnicas de ensayo son similares a las descritas por
Lottenberg y col. la enzima se aisla de esputo humano y se purifica, aunque recientemente ha sido comercializada. La caracterización cinética de los inhibidores inmediatos se hace por el método gráfico de
Dixon, mientras que la caracterización de los inhibidores que se unen lenta y/o fuertemente se hace por
técnicas de análisis de datos, revisadas por Williams y Morrison.
10
15
Similarmente, se ensayan las demás proteasas y los efectos de los inhibidores se determinan in vitro
por técnicas espectroscópicas análogas: catepsina G, trombina, quimotripsina, tripsina, plasmina, Clesterasa, uroquinasa, activador de plasminógeno, acrosina, β-lactamasa, catepsina B, pepsina, catepsina
D y leucina aminopeptidasa. Pseudo-monas elastasa se determina en un procedimiento de ensayo acoplado utilizando un sustrato de elastasa humana y aminopeptidasa microsómica.
20
Los ensayos radiométricos de la enzima que convierte angiotensina I y de encefalinasa y sus inhibidores se basan en el procedimiento de Ryan y en el uso de un sustrato tritiado, vendido por Ventrex
Laboratories, Inc. Se utiliza un radioinmunoensayo para los estudios con renina. C3-convertasa se mide
como describe Tack y col.
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Siguiendo las técnicas que se acaban de mencionar y utilizando otras conocidas, y estableciendo comparaciones con los resultados obtenidos con otros compuestos con utilidad confirmada para el tratamiento
de los estados de enfermedad que se han citado aquı́, se piensa que cualquier experto en la técnica dispone
del material adecuado para poner en práctica la invención. Por supuesto, para utilizar los compuestos
de esta invención en su aplicación de uso final, se prefiere formularlos en preparaciones farmacéuticas
adecuadas tales como pastillas, cápsulas o elixires, para administración oral, o en soluciones o suspensiones estériles para administración parenteral. Los compuestos de esta invención se pueden administrar
a pacientes (animales y seres humanos) que necesiten el tratamiento, en un intervalo de dosificación de
0,01-10 mg por kg de peso corporal al dı́a. Como ya se ha indicado, la dosis variará dependiendo de la
gravedad de la enfermedad, del peso del paciente y de otros factores que serán tenidos en cuenta por los
expertos en la técnica.
Tı́picamente, los compuestos descritos aquı́ se formulan en composiciones farmacéuticas como se describe a continuación.
Alrededor de 10 a 500 mg de un compuesto o de una mezcla de compuestos de Fórmula I, que pueden
estar en forma de sales fisiológicamente aceptables, se mezclan con un vehı́culo, portador, excipiente, aglutinante, preservante, estabilizante, aroma, etc. fisiológicamente aceptable, en una forma de dosificación
unitaria, como lo requieren las prácticas farmacéuticas aceptadas. La cantidad de sustancia activa en
estas composiciones o preparaciones será tal que se obtenga una dosis adecuada en el intervalo indicado.
Ejemplos de coadyuvantes que se pueden incorporar en comprimidos, cápsulas y similares son los siguientes: un aglutinante, tal como goma de tragacanto, acacia, almidón de maı́z o gelatina; un excipiente
tal como celulosa microcristalina; un agente disgregante, tal como almidón de maı́z, almidón pregelatinizado, ácido algı́nico y similares, un lubricante, tal como estearato de magnesio; un agente edulcorante,
como sacarosa, lactosa o sacarina; un aroma, como menta, esencia de pirola o cereza. Cuando la unidad
de dosificación es una cápsula, puede contener, además de las sustancias anteriores, un portador lı́quido
tal como un aceite graso. Las unidades de dosificación pueden contener otros materiales, tales como
revestimientos, para modificar su forma fı́sica. Por ejemplo, los comprimidos se pueden revestir con laca,
azúcar o ambos. Un jarabe puede contener el compuesto activo, sacarosa como agente edulcorante, metil
y propil parabenos como preservantes, un tinte y un aroma, tal como aroma de naranja o de cereza.
Las composiciones estériles para inyección se pueden formular siguiendo las prácticas farmacéuticas
convencionales, disolviendo o suspendiendo la sustancia activa en un vehı́culo, tal como agua para
inyección, un aceite vegetal natural, como aceite de sésamo, aceite de coco, aceite de cacahuete, aceite de
semilla de algodón, etc., o un vehı́culo graso sintético, como oleato de etilo o similares. Si es necesario,
se pueden incorporar tampones, preservantes, antioxidantes y similares.
60
15
ES 2 118 710 T3
REIVINDICACIONES
1. Un procedimiento para preparar compuestos de fórmula
5
R1 NH
O
kk
R4
||
@,@
,@ C ,
|
C
|
R2
10
k
O
Y
k
O
y sus hidratos, isoesteres o sales farmacéuticamente aceptables, donde R1 es P2 P3 ó P2 P3 Pg , siendo Pg
un grupo protector del grupo K,
15
P2 es un α-amino ácido de los grupos E o F:
P3 es un α-amino ácido de los grupos B, E o F o está suprimido.
20
R3 es H, un resto de un α-amino ácido de los Grupos E, F, J naftilo, alquilo C1−7 , bencilo, fenetilo, o
A-SiR7R8 R9 , siendo R7 , R8 y R9 alquilo C1−10 , fenilo, bencilo, fenetilo, y A es alquileno C1−6 .
R3 es alquilo C1−6 , bencilo o fenetilo,
R4 es el resto de un α-amino ácido de los Grupos C,E o H, y
25
Y es OR3 o NHR3 ,
siendo dicho grupo protector o los α-amino ácidos de los Grupos B, C, E, F, J como sigue:
30
B: Glu, Asp
C: Ser, Thr, Gln, Asn, Cys, His, (3-pirazolil)Ala, (4-pirimidinil)Ala, y sus derivados N-metilados
E: Ala, β-Ala, Leu, Ile, Val, n-Val, β-Val, Met, n-Leu, y sus derivados N-metilados
35
F: Phe, Tyr, O-metiltirosina, (3-pirazolil)Ala, (4-pirimidinil)Ala, Trp, Nal(1) y sus derivados Nmetilados
J:
NH
//
40
-CH2 φ(p-)NHC
(J-1)
\
NH2
45
NH
//
-CH2 φ(p-)C
\
NH2
NH
//
NH
//
-φ(p)-CH2 NHC
50
(J-2)
(J-3)
\
-φ(p)-CH2 C
NH2
(J-4)
\
NH2
donde φ representa un grupo fenilo.
55
60
K: Acetilo (Ac), succinilo (Suc), metoxisuccinilo (H 3 COSuc), benzoilo (Bz), t-butiloxicarbonilo
(Boc), carbobenzoxi (CBZ), tosilo (Ts), dansilo (DNS), isovalerilo (Iva), metoxisuccinı́lo (MeOSuc), 1adamantanosulfonilo (AdSO2 ), 1-adamantanoacetil o (AdAc), 2-carboxibenzoı́lo (2-CBZ), fenilacetilo,
t-butilacetilo (Tba), bis[(1-naftil)-metil] acetilo (BNMA), cuyo procedimiento comprende la oxidación de
un compuesto de fórmula:
R1 NHCHCH(OH)C(O)CHC(O)Y
|
|
R4
R2
16
(12)
ES 2 118 710 T3
efectuándose dicha oxidación con,
a) un aducto de sulfonio preparado in situ por reacción de dimetilsulfóxido con (CF3 CO)2 O o (COCl)20
5
b) un dicromato de piridinio, en presencia de ácido acético glacial,
c) un complejo de anhı́drido crómico-piridina preparado in situ, o
d) 1,1,1,-triacetoxi-2,1-benzoxiodol-3-(3H)-ona.
10
2. Procedimiento según la reivindicación 1, donde se utiliza un compuesto de fórmula (12) en el que
R1 es un grupo protector CBZ, Bz o Ac.
15
3. Procedimiento según la reivindicación 1, donde se utiliza un compuesto de fórmula (12) en el que
P3 está suprimido o P3 es Ilc.
4. Procedimiento según la reivindicación 1, donde se utiliza un compuesto de fórmula (12) en el que
R2 es ciclohexilmetilo, naftilo o fenilo.
20
5. Procedimiento según la reivindicación 1, donde se utiliza un compuesto de fórmula (12) en el que
Y es OR3 o NHR3 en que R3 es alquilo C1 -C6 .
6. Uso de un compuesto obtenido de acuerdo con el procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para la preparación de medicamentos útiles como inhibidores de calpaina y captesina B.
25
30
35
40
45
50
55
60
NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE)
y a la Disposición Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la
aplicación del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a
España y solicitadas antes del 7-10-1992, no producirán ningún efecto en España en
la medida en que confieran protección a productos quı́micos y farmacéuticos como
tales.
Esta información no prejuzga que la patente esté o no incluı́da en la mencionada
reserva.
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