Eficacia del preparado nutricional Viusid-líquido* en

Eficacia del preparado nutricional Viusid-líquido* en las
variables productivas e inmunológicas en pollo de engorde
Introducción.
En la actualidad, la producción intensiva de pollo de engorda hoy día requiere del concierto
de cierto número de acciones conjuntas a seguir para lograr la máxima producción posible
en el menor tiempo. Algunas de estas medidas se refieren a buenos programas de
bioseguridad, dietas balanceadas, programas óptimos de vacunación, utilización de
promotores del crecimiento y productos que mejoren la respuesta inmune
(inmunomoduladores).
En este sentido, el Viusid® producto de desarrollo de Dermaceutical, SA de CV, ofrece las
posibilidades de mejorar los parámetros productivos y de optimizar el sistema inmune del
pollo de engorda.
El Viusid líquido®, es un preparado nutricional, a base de antioxidantes, vitaminas,
oligoelementos y, un principio activo producto de la extracción del regaliz (ácido
glicirricínico) con potenciales actividades antivirales al actuar in vitro e in vivo impidiendo
la replicación tanto de virus ADN como ARN (Herpes virus, influenza A y B, Hepatitis B,
Coronavirus SARS etc.) (1,2,3,4) además impide la salida del virión de su cápside y, con
esto su penetración a las células (5,6). Estos efectos se han asociado a la inhibición selectiva
dosis dependiente de la fosforilación de la Cinasa-P (7,8). El Viusid® también es capaz de
estimular la producción de interferon gamma en los linfocitos B y T, al activar los mismos,
estimulando así el sistema inmunológico (12,13).
La activación molecular de los principios activos incrementa la actividad de las funciones
biológicas de los mismos (efecto antiviral y antioxidante), sin modificación de la estructura
molecular de los principios activos, asegurando un aumento significativo de las defensas del
organismo.
Objetivo.
El objetivo del estudio es el de confirmar la eficacia del Viusid® en pollo de engorda al
evaluar su efecto en los parámetros productivos e inmunológicos en órganos y células
linfoides del pollo de engorda.
Material y métodos.
Animales y tratamientos
El estudio se llevó a cabo en una granja comercial llamada “Bandolón” propiedad de Grupo
Abrego, ubicada en el estado de Querétaro, México para el que se utilizaron 60,000 aves
Ross x Ross de un día de edad, divididos en dos grupos de 30,000 aves cada uno, grupos A y
B; a su vez subdivididos en dos casetas de 15,000 pollos (4 casetas de 15,000 pollos). De
éstas, dos se trataron con Viusid líquido® a razón de 270 ml del producto/1000L de agua
durante todo el ciclo de producción y dos casetas se dejaron como grupo testigo sin
tratamiento.
El manejo sanitario de la parvada fue el usual de una granja de tipo comercial con ambiente
controlado y sistema de alimentación automático, con bebedero de niple sin copa. La dieta
fue a base de preiniciador, iniciador (0-21 días), crecimiento (22-42 días), finalizador y
terminador (43-49 días) de una marca comercial.
Grupo A. Grupo tratado.
Todos los animales recibieron alimento y agua ad limitum. Asimismo se les vacunó de
acuerdo con los calendarios establecidos en la granja, además de recibir el Viusid líquido®
a razón de 270 ml/1000L de agua diariamente durante todo el ciclo.
Grupo B. Grupo testigo.
Todos los animales recibieron agua y alimento ad limitum. Asimismo, se les vacunó de
acuerdo con los calendarios establecidos en la granja.
Parámetros productivos en evaluación
Porcentaje de viabilidad a 49 días, a todas las aves se les registró el peso y la conversión
alimenticia cada semana, así como la conversión alimenticia acumulada a 49 días, también
se registró el consumo de alimento cada dos semanas.
Respuesta Inmune Humoral.
Para confirmar el efecto inmunoestimulante del Viusid líquido® a nivel sistémico, se
tomaron muestras de sangre el día 23 de edad post-vacunación (15 muestras/réplica); se
obtuvieron los sueros, se congelaron a -20°C, para posteriormente determinar títulos de
anticuerpos séricos específicos para el virus de Newcastle a través de la prueba de inhibición
de la hemoaglutinación.
Respuesta Inmune Celular.
Hipersensibilidad Cutánea Basofílica. La evaluación se llevó a cabo el día 22 de edad
mediante una prueba de hipersensibilidad tardía (Stadecker et al., 1977; Edelman et al.,
1985; Corrier y DeLoach, 1990, como respuesta a la inoculación intradérmica de la
membrana interdigital de las falanges 3 y 4 de la extremidad inferior derecha, empleándose
(5 pollos por réplica), con Phitohaemaglutinina (PHA-A3) a una concentración de 0.1
mg/o.1 ml. En la membrana interdigital de la pata izquierda, se realizó el mismo
procedimiento utilizando solución salina estéril (0.1 ml) como testigo. A las 24 horas posinoculación se determinó el grosor de la membrana interdigital con un vernier digital.
Hematología
Se tomaron muestras de sangre con s-monovette EDTA (Sarsted **) de las venas radiales de
10 pollos por tratamiento los días 23 y 49. Se realizó el conteo leucocitario diferencial en
frotis sanguíneos teñidos con Wright. Las cuentas totales se determinaron indirectamente
por el cálculo de los porcentajes de las células y de cuentas totales. (Campbell TW, 1988).
Se tomaron muestras de suero con s-monovette EDTA (Sarsted **) para
determinaciones de: Aspartato amino transferasa (AST), Glucosa,
Creatinfosfoquinasa (CK), Glutamato deshidrogenasa (GLDH), Proteínas
Plasmáticas, albúmina y globulinas. (Campbell TW, 1988), esto con el objetivo de
el Viusid® a nivel de enzimas y proteínas que se producen en el hígado.
realizar
Calcio,
totales
evaluar
Histología
Se sacrificaron 10 pollos de cada tratamiento a los 23 y 49 días de edad, se tomaron
muestras de bolsa de Fabricio, bazo y timo, se fijaron en formalina bufferada al 10%, para
posteriormente ser procesados, montados en portaobjetos y teñidos con HematoxilinaEosina, para su posterior observación y evaluación mediante microscopía de luz..
Porcentaje de peso Relativo de Bazo, timo y Bolsa de Fabricio.
Se tomaron 15 aves por tratamiento se diseccionaron y se pesaron individualmente bazo,
timo y Bolsa de Fabricio. Posteriormente se calcularon los pesos individuales de estos
órganos y se expresaron como porcentaje relativo con respecto al peso total del ave.
RESULTADOS
Análisis Estadístico
Los resultados obtenidos de las variables en estudio se analizaron estadísticamente mediante
análisis de varianza conforme a un diseño completamente al azar, según el procedimiento
GLM del paquete estadístico SAS (SAS 1990). Cabe mencionar que los títulos de
anticuerpos para el análisis estadístico se sometieron a una transformación utilizando
logaritmo base 2. Para el caso específico de la histología las variables obtenidas se
analizaron mediante la prueba no paramétrica de Wilconox.
A continuación se listan los valores de las variables productivas, obtenidos durante el ciclo
de engorda:
Parámetros productivos.
Cuadro 1. Parámetros Productivos tratados con VIUSID vs Testigo
PROMEDIOS
Sem
1
2
3
4
5
6
7
VIUSID
Peso
0.1475
0.3075
0.6520
1,180
1,638
2,234
2,947
Testigo
Peso
0.1440
0.3150
0.6310
1,160
1,655
2,205
2,905
2%
-2%
3%
2%
-1%
1%
1%
VIUSID
%Mort Ac
0.67%
1.27%
1.63%
2.45%
4.15%
4.27%
5.95%
Testigo
%Mort Ac
0.64%
1.18%
1.90%
3.36%
5.74%
6.98%
8.17%
4%
8%
-14%
-27%
-28%
-39%
-27%
VIUSID
Conv.Ac
1.0130
1.2490
1.4380
1.508
1.636
1.783
1.940
Hubo una tendencia a mejorar con el uso de VIUSID.
En el peso la diferencia fue de 41.5 gr, la Mortandad mejoro 27%
alimenticia disminuyó 0.208 gr siendo 10% menor.
Testigo
Conv.Ac
1.0885
1.2565
1.4815
1.660
1.806
1.991
2.148
-7%
-1%
-3%
-9%
-9%
-10%
-10%
y la Conversión
Resultados
Evaluación de la inmunidad humoral a (21 y 49 días)
Títulos de anticuerpos contra el virus de la enfermedad de Newcastle.
21 días
49 días
6.93
A
9.91
A
6.36
B
5.53
B
(P<0.01)
(P<0.05)
Medias con distinta letra a,bc en el mismo grafico son diferentes estadísticamente.
Interpretación.- El grupo tratado con VIUSID® mostro mayor concentración en los
títulos de anticuerpos (P<0.05) contra el virus de la enfermedad de Newcastle que el
grupo testigo, lo que implica que los pollos tratados con VIUSID® produjeron un
logaritmo mas de anticuerpos que el grupo testigo a los 21 días de edad. Esta
tendencia se mantuvo a los 49 días, donde se incrementaron en 3 logaritmos la
concentración de anticuerpos.
Evaluación de la inmunidad Celular (21 y 49 días)
Prueba de hipersensibilidad tardía basofílica.
21 días
49 días
0.776
A
0.590
A
mm3
0.202
B
0.161
B
(P<0.01)
(P<0.01)
Medias con distinta letra a,bc en el mismo grafico son diferentes estadísticamente
Interpretación.- Para la respuesta celular evaluada a través de la prueba de
hipersensibilidad tardía basofílica, en pollos en etapa de iniciación aumentó el grosor
interdigital (P<0.01) en los pollos por la adición de VIUSID®; lo que implica que los
pollos tratados con VIUSID® mostraron un aumento 4.8 veces mayor en el grosor de la
membrana interdigital al compararse con el grupo testigo.
Hematología
Hematocrito.- Es la relación porcentual entre los glóbulos rojos y el plasma total.
0.3500
B
0.2990
A
A
A
(P<0.05)
Medias con distinta letra a,bc en el mismo grafico son diferentes estadísticamente
Interpretación.- En este rubro el grupo testigo representa el grupo sin el tratamiento
que nos mostraría el hematocrito normal (P<0.05); sin embargo el grupo tratado es
menor en el hematocrito, un índice bajo de Hematocrito puede deberse a:
Anemia, fallos en la médula ósea (Radiaciones, toxinas, Fibrosis, tumores, etc.),
hemorragias o deshidratación.
Eritrocitos.- Los glóbulos rojos son las células sanguíneas que contienen en su interior la
hemoglobina. Los glóbulos rojos son los principales portadores de oxígeno a las células y tejidos
del cuerpo.
3.48
B
3.0
A
X109/L
B
B
(P<0.05)
Medias con distinta letra a,bc en el mismo grafico son diferentes estadísticamente
Interpretación.- En este rubro el grupo testigo representa el grupo sin el tratamiento que
nos mostraría el hematocrito normal; sin embargo el grupo tratado es menor (P<0.05) .
Los valores disminuidos en la cantidad de eritrocitos pudiera deberse a: anemias;
enfermedades sistémicas, fibrosis de médula ósea o Hemorragias.
Leucocitos.- Los leucocitos o glóbulos blancos son células que están principalmente en la
sangre y circulan por ella con la función de combatir las infecciones.
Interpretación.- La modificación de la cantidad de leucocitos puede orientar al diagnóstico
de enfermedades infecciosas, inflamatorias, cáncer y leucemias, y otros procesos. En este
rubro vemos que el grupo tratado muestra una cantidad mayor de células blancas
(Leucocitosis) al ser comparado con el grupo testigo, con lo que pudiera inferirse que el
tratamiento pudo tener un efecto en el proceso de leucopoyesis.
Linfocitos.- Pertenecen al grupo de leucocitos. Estas células tienen núcleos de forma
ovoide que ocupan la mayoría del espacio intracelular. Son los responsables de coordinar
la respuesta inmune.
4.61 A
3.37 B
X109/L
(P<0.05)
Medias con distinta letra a,bc en el mismo grafico son diferentes estadísticamente
Interpretación.- La linfocitosis (aumento de linfocitos) observada en el grupo tratado
pudiera ser una reacción a la aplicación del tratamiento en el grupo tratado (P<0.05); que
posiblemente pudo activar el proceso de linfopoyesis.
Basófilos.- Se denomina basófilo a cualquier célula que se tiñe fácilmente con colorantes
básicos (Hematoxilina principalmente).
No Existieron diferencias estadísticas significativas entre tratamientos
( Grupo testigo 0.48 X109/L Grupo tratado 0.50 X109/L)
Monocito.- Los monocitos son un tipo de glóbulos blancos agranulocitos. Es el leucocito de
mayor tamaño en sangre. Presenta un núcleo arriñonado (forma de riñón), que se tiñe de
color violeta-azulado con una proporción 2:1 con respecto al resto de la célula, y tiene una
depresión profunda. El citoplasma es abundante y de color gris azulado pudiendo estar
acompañado de vacuolas blanquecinas. Los monocitos se generan en la médula ósea y
después viajan por la sangre, para luego emigrar a diferentes tejidos como hígado, bazo,
pulmones, ganglios linfáticos, huesos, cavidades serosas, etc. Después de alrededor de 24
horas de permanecer en el torrente sanguíneo, los monocitos lo abandonan hacia el tejido
conectivo, donde se diferencian rápidamente a macrófagos.
No Existieron diferencias estadísticas significativas entre tratamientos
(Grupo testigo 0.45 X109/L Grupo tratado 0.34 X109/L)
Trombocito.- Los trombocitos, son fragmentos citoplasmáticos pequeños, irregulares y
carentes de núcleo, los trombocitos juegan un papel fundamental en la hemostasia y son
una fuente natural de factores de crecimiento.
16.4 A
12.7 B
X109/L
(P<0.05)
Medias con distinta letra a,bc en el mismo grafico son diferentes estadísticamente
Interpretación. En el grupo tratado con VIUSID® se encontró un estado de trombositosis
(P<0.05)
en comparación con el grupo testigo. (Mayor fuente natural de factores de
crecimiento).
Heterofilos.- En aves representan la primera línea de defensa, su contraparte en los
mamíferos están representados por los neutrófilos.
1.79 A
1.10 B
X109/L
(P<0.05)
Medias con distinta letra a,bc en el mismo grafico son diferentes estadísticamente
Interpretación. En el grupo testigo mayor cantidad de heterófilos en comparación del
grupo tratado con VIUSID® (P<0.05). Esto pudiera ser un indicativo que el grupo testigo
está desarrollando una pequeña infección; ya que, los heterófilos representan la primera
línea de defensa.
QUIMICA SANGUINEA (21 días)
No existieron diferencias estadísticas significativas entre los tratamientos
(Tratado y testigo) al evaluar los siguientes parámetros:
Aspartato amino transferasa (AST), Glucosa, Calcio, Creatínfosfoquinasa( CK), Glutamato
deshidrogenasa (GLDH) Proteínas totales Plasmáticas, albumina y globulinas.
PROPORCION DE PESOS EN PORCENTAJE
21 días de edad
Timo
Bazo
(P<0.05)
Medias con distinta letra a,b en el mismo gráfico son diferentes estadísticamente
Interpretación. Los resultados de los estudios referentes a los pesos relativos de timo y
bazo fueron incrementados en el grupo tratado ( VIUSID®) arrojando diferencias
estadísticas significativas (P<0.05)lo que puede sugerir que este efecto positivo en la
mejora de pesos relativos de estos órganos linfoides pudiera estar relacionado con una
mejora en el estado de salud de las aves.
HISTOLOGIA (21 y 49 dias)
Histopatología evaluación de la Bolsa de Fabricio
21 días
49 días
4.1
A
2.4B
B
Promedio de Lesión
linfoide
4.07
TRATADO
(P<0.05)
Medias con distinta letra a,b en el mismo gráfico son diferentes estadísticamente
Interpretación.- La evaluación de la bolsa de Fabricio a los 21 y 49 días de edad nos indica
que en grupo testigo, se reporta un mayor promedio de lesión linfoide que puede ser
desde una atrofia leve hasta severa, demostrando que el grupo tratado (VIUSID®) mostró
un promedio de lesión menor estadísticamente significativo (P<0.05).
Histopatología evaluación de la Timos (21 y 49 dias)
21 días
49 días
Medida corteza
398.76
294.38
A
366.3
130.49
B
(P<0.05)
Medias con distinta letra a,b en el mismo gráfico son diferentes estadísticamente
Interpretación.- La evaluación de los timos está determinada por la medida de la corteza
del timo en micras a los 21 días de edad se muestran diferencias numéricas no
significativas, pero a los 49 días el grupo tratado (VIUSID®) mostró un mayor grosor de la
corteza tímica estadísticamente significativa (P<0.05) al compararlo con el grupo testigo..
BIBLIOGRAFIA
1. Campbell TW: Avian hematology and Cytology. Ames, Iowa State University Press,
1988.
2. Dein FJ: Laboratory Manual of Avian Hematology. American Association of Avian
Veterinarians (ed). New York, 1984.
3.Corrier, D. E., DeLoach., 1990. Evaluation of Cell – Mediated, cutaneous basophilic
hypersensitivity in young chickens by an interdigital skin test. Poultry Sci. 69, 403-408.
4. Edelman, A. S., Sánchez, L. P., Robinson, E. M., Hochwald, M.G., Thorbecke, J. G.
Primary and secondary wattle swelling response to phytohemagglutinin as a measure of
immunocompetence in chickens. 1985 Avian Dis. 30, 105-111.
Comentarios.Antes de describir los resultados, vale la pena señalar, que no se pudo seguir el
protocolo original como estaba planeado, pues éste se tuvo que modificar dado que en
la granja no se nos permitió incluir ningún grupo sin vacunar por el gran riesgo que se
correría al quedar los pollos sin la protección de la vacuna.
Con base en los resultados aquí obtenidos en pollos en etapa de iniciación (23 y 49Días) se
considera que el VIUSID® si pudiera estar generando un efecto inmunoestimulante en
algunos parámetros como se demostró de manera contundente en este trabajo por medio de
la evaluación de la inmunidad humoral a través de la medición de títulos de anticuerpos
protectores contra el virus de la enfermedad de Newcastle tanto a los 23 como a los 49días.
La prueba para evaluar la respuesta inmune de tipo celular (hipersensibilidad tardía
basofílica) también mostró resultados positivos de manera significativa, reflejados por el
aumento del grosor de la membrana interdigital de los pollos tratados con el VIUSID®, a
los 23 y 49 días, lo que refleja una mejor respuesta inmune.
Se observo un efecto positivo en el mantenimiento de la estructura histológica de la Bolsa de
Fabricio a los 21 días de edad, repitiéndose este efecto a los 49 días de edad.
Otro hallazgo importante es el incremento en el porcentaje del peso relativo en órganos
linfoides como timo y bazo, lo que pudiera participar en una mejora de la salud en las aves.
Se recomienda realizar más pruebas e investigaciones con el producto; ya que es muy
importante tener el efecto de repetibilidad y reproducibilidad; además sería muy
interesante dilucidar cual o cuales mecanismos de acción son los que activa este producto
para realizar su actividad.
Con base en lo anterior, se sugiere, realizar por lo menos otras dos pruebas de campo en las
que se prueben otros dos niveles de dosis, ej. 450 ml/1000L, 600 ml/1000L, con la finalidad
de que los parámetros inmunológicos se expresen a una mayor magnitud, pruebas que ya
están programadas para su inicio a finales del de de Mayo.
También se sugiere utilizar los resultados inmunológicos aquí obtenidos como la base para
su presentación en el XVII Congreso de la World Vetrinary Poultry Association que se
llevara a cabo en Cancún, México, Del 14 al 18 de Agosto de 2011, resumen ya aprobado
por el comité científico del congreso.
Adicionales
Se puede aplicar el producto solo hasta la 5ª semana, dado que de ahí en adelante se supone
que el sistema inmune ya fue estimulado lo suficiente como para llegar al final del ciclo sin
problemas infecciosos.
Se considera que se puede iniciar la comercialización con los datos obtenidos en la granja
Milagros y con los datos inmunológicos obtenidos del Grupo Abrego.
Finalmente, aunque los pesos fueron similares en todos los grupos, hay que resaltar que la
conversión alimenticia acumulada y la mortalidad acumulada fue mejor en los grupos
tratados.
1. Viusid-liquido mejora los parámetros productivos como son peso semanal y acumulado
42 g más (+1%), a 49 días.
2. Viusid-liquido Mejora la conversión alimenticia semanal y acumulada a 49 días en 20
puntos (+10%) , mejora la viabilidad de manera importante en 2.22% más que el grupo sin
Viusid-líquido (+27%).
3. Viusid-líquido el índice de productividad de acuerdo a la fórmula: (viabilidad % X kg
peso) / ( días de edad X conversión acum.) X 100.
Grupo Control 255.
Grupo Tratado 291
Mejora en 41 puntos el índice de productividad con relación al grupo sin Viusid-líquido.
4. Viusid-líquido comprueba que un efecto consistente en mejorar la inmunidad humoral
en niveles de anticuerpos contra Enfermedad de Newcastle en más de 2 logaritmos HIENC.
5. Viusid-liquido también tuvo efectos benéficos en generar mayor número de células
linfoides así como mayor peso y por ende mayores nódulos linfoides en órganos linfoides
bazo, timo y bolsa de Fabricio, pudiera estar relacionado con una mejora en el estado de
salud de las aves.
6. Viusid-liquido con todos los beneficios obtenidos en los parámetros productivos y la
efectividad en preservar y mejorar la respuesta inmune en órganos y células linfoides, se
comprueba la hipótesis sustentada y confirma su efecto inmunomodulador en aves de
engorda a nivel comercial