PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS NOMBRE

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS
NOMBRE DEL ALMUNO (A) ____________________________
OBJETIVO: Adiestrar al alumno en la preparación de diferentes medios de
cultivo.
MATERIAL
Frasco Schot
Autoclave
Parrilla de agitación y calentamiento
Baño maría
Mecheros Fisher
Espátula
Tubos de ensayo 16X150
Vaso de precipitado de 500 ml
Medios de cultivo
Cajas de petri
Agitador
Asa de platino
Papel estraza
Algodón
Papel aluminio
Marcador permanente de punto fino
Alcohol
Rollo de plástico adherible
Masking tape
cubre bocas
Cubre pelo
INTRODUCCIÓN
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos
es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en
el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el
Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Para
que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y
presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad.
Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento
necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. La mayoría
de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en
composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de
muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la
que se añadirán otros ingredientes. El Agar es un elemento solidificante muy
empleado para la preparación de medios de cultivo. En los diferentes medios de
cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de
carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan
por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y
para detectar reacciones de fermentación de los microorganismos que ayuden a
identificarlos. El suero y la sangre completa se añaden para promover el
crecimiento de los microorganismos menos resistentes. Por su aspecto físico.
Los medios de cultivo preparados pueden ser clasificados por su aspecto en: :
Líquidos, Semisólidos, Sólidos. Y por su uso en: I.- Medios de cultivos básicos II:_
Medios de cultivos especiales como: mejorados, selectivos, diferenciales, de
transporte.
PROCEDIMIENTO:
1- Primeramente se desinfecta el área de trabajo con fenol al 5% o alcohol y se
enciende el mechero.
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS
1.- Leer las instrucciones del fabricante para cada medio de cultivo y pesar la
cantidad necesaria según el volumen requerido.
2.- Colocar el medio en un vaso de precipitado que contenga el agua destilada en
el volumen requerido, agitar y calentar a ebullición para disolver el Agar. En el
último paso se debe tener cuidado ya que el recipiente se calienta en exceso y el
producto tiende a hervir y proyectarse, lo cual puede producir serias
quemaduras. El Agar disuelto hace transparente al medio que originalmente
estaba turbio. Puede utilizarse un baño maría para aumentar la solubilidad.
3.- Si se va a envasar en cajas de petri, es necesario conservar el medio en un
frasco schot y esterilizarlo a 121·C durante 15 minutos. Al terminar, es
conveniente mantener el mechero encendido para formar un área de esterilidad al
momento del vaciado en las cajas de petri aproximadamente de 15 ml a 20 ml de
medio de cultivo por caja procurando que no se forman burbujas. Tapar la caja
inmediatamente.
4.- Si se desea que el Agar quede en tubos, entonces se esterilizará el Agar
directamente en ellos a 121·C durante 15 minutos tapados con algodón, gasa y
papel estraza. Si desea que solidifiquen inclinados, colocarlos en una superficie
lisa inclinándolos en un ángulo de 20 a 30 · sobre una varilla de vidrio.
A) VACIADO EN CAJAS DE PETRI
3.- No destapar las cajas de petri, sino hasta el momento que vayan a ser
utilizadas. Es conveniente colocarse un cubre bocas la persona que va a realizar
el vaciado y evitar hablar en todo momento para no contaminar el medio de
cultivo.
4.- Es conveniente mantener el mechero encendido y trabajar cerca del área
estéril al momento del vaciado en las cajas de petri. Levantar la tapadera de la
caja petri con la mano izquierda , sin soltarla y sin retirarla demasiado de la base
de la misma caja mientras que con la mano derecha tomar el matraz que contiene
el medio de cultivo y realizar el vaciado de aproximadamente 15 ml a 20 ml de
Agar por caja procurando que no se forman burbujas, se procede a tapar la caja
inmediatamente
5.- Si se forman burbujas, tomar el mechero, flamear el medio de cultivo sobre la
superficie de la caja de petri y de manera rápida. Se procede a tapar la caja.
6.- Esperar a que el medio solidifique, Se rotulan los medios de cultivo, anotando
la fecha y con iniciales el tipo de medio de cultivo. Si las placas no se van a
utilizar el mismo día se sujetan con cinta y se colocan en el refrigerador de
manera invertida para evitar que el vapor condensado caiga sobre el medio de
cultivo y lo pueda contaminar.
CUESTIONARIO
1.- ¿Qué es un medio de cultivo?
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___________________________________________________________________________2.Qué es un cultivo de microorganismo?
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3.- Qué finalidad tiene utilizar medios de cultivo sólidos?
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4.- Escribe el nombre de 5 medios de cultivo que pueden ser empleados en el
laboratorio de microbiología.
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5.- De dónde es obtenido el extracto Agar- Agar para la preparación de medios de
cultivos?_________________________________________________________________
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6.- Por qué es necesario esterilizar la mesa entes de realizar el vaciado del medio
de cultivo en las cajas de petri?______________________________________
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7.-Por qué la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de
carne y Peptona?_______________________________________________________
____________________________________________________________________________8.Escribe la composición química un medio medio de cultivo que
utilizaste.__________________________________________________________________
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OBSERVACIONES.
Dibuja todos los pasos realizados en la preparación de los medios de cultivo.
CONCLUSIONES:
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TÉCNICAS DE SEMBRADO
NOMBRE DEL ALUMNO (A)
OBJETIVOS
- Observar la gran variedad de microorganismos presentes en el medio ambiente,
determinando las diferentes morfologías de colonias que se obtienen.
- Los efectos de un desinfectante por medio del crecimiento de colonias de
bacterias en un medio de cultivo en cajas de Petri.
MATERIAL
 Cajas de Petri estériles preparadas con medio de cultivo PDA
 Tubos de ensaye con tapón de rosca y agar incinado
 Mechero bunsen o de preferencia Fisher
 Asas de siembra
 Cinta pegante
 Marcador permanente o lápiz de cera
 Un desinfectante con 70% de solución de alcohol, 10% de una solución
blanqueadora, jabón líquido Extran o alkox.
INTRODUCCIÓN
La población microbiana existente en nuestro entorno es grande y compleja.
Cientos de especies microbianas habitan normalmente en distintas. Ellos flotan
alrededor hasta que entran en contacto con una superficie que ofrezca comida y
resguardo. Se encuentran más frecuentemente en la oscuridad, en objetos
húmedos que a menudo entran en contacto con la comida, la suciedad o la
vegetación.
Un estudio adecuado de microorganismos que hay en estos hábitat requiere
técnicas que permitan conocer y ordenar la compleja población mixta o cultivo
mixto, separándole en sus distintas especies como cultivos puros. Un cultivo
puro consta de una población de células derivadas todas ellas de una célula
parental. Los microorganismos se cultivan en el laboratorio sobre materiales
nutritivos denominados medios. Se dispone de una gran cantidad de medios y la
clase que se debe de utilizar depende de muchos factores, uno de los cuales es la
clase de microorganismos que se va a cultivar. El material que se inocula sobre el
medio se denomina inóculo mediante alguna técnica (siembra por estría en placa
o siembra en masa en placa). Durante la incubación a 37˚C, las células
microbianas individuales se reproducen tan rápidamente que en un lapso de 18 a
24 horas producen masas visibles de células denominadas colonias. Una colonia
es visible a simple vista. Cada colonia diferente es presumiblemente un cultivo
puro de una sola clase de microorganismo. Si dos células microbianas
procedentes del inóculo original quedan muy cerca una de otra sobre el medio de
Agar, la masa de células observables no será un cultivo puro. La mayoría de los
microbios en nuestro cuerpo y otras superficies son inofensivas, pero algunos son
patógenos o causan enfermedad. Por esta razón, queremos controlar el número
de microbios que nos rodea. La posibilidad de infectarnos aumenta con el número
de microbios en los objetos circundantes. Pero ¿qué podemos hacer para reducir
el número de microbios en las superficies que nos rodean?
PROCEDIMIENTO
A partir de una suspensión bacteriana o cultivo mixto:
- Agotamiento, con asa de platino y en placa de AN. Tomar una muestra del
cultivo mixto, con ayuda del asa de siembras previamente flameada.
Debe flamearse la boca del tubo antes y después de tomar la muestra. La
muestra se extiende con suavidad con el asa sobre la superficie del medio de agar
nutritivo en placa Petri. Para ello la placa se destapa ligeramente en las
proximidades del Mechero bunsen. Una vez finalizado se vuelve a tapara la placa
y está se dispone en posición invertida para llevar a incubar. Este es el
proceso general para la siembra de placas.
- Estrías escocesas, con asa de platino y en placa de AN Para obtener colonias
aisladas por este procedimiento, según se indique en el esquema, se realizan una
serie de estrías sobre la superficie del medio, tras lo cual se cierra la placa y se
flamea el asa. Con el asa estéril se realizan nuevas estrías arrastrando células de
las estrías anteriores, y por tanto diluyendo la muestra. El proceso se repite
varias veces, flameando el asa entre cada nuevo paso de estrías. Al final se puede
realizar un pequeño agotamiento. La placa se lleva a incubar, invertida, como en
el caso anterior. Ello permitirá obtener colonias aisladas. Incubar a 27º C. Ver
esquema:
CUESTIONARIO
1.- Qué es un cultivo puro de microorganismos?
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2.Qué es in inóculo?
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3.Físicamente en un medio de cultivo de microorganismos cuando se dice que no
forma un cultivo puro?_____________________________________________
___________________________________________________________________________ 4.Qué tipo de técnica empleaste para la siembra de microorganismos?
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5.- ¿En cuál caja crecieron más y más grandes las colonias? ¿Por qué piensas
eso? _____________________________________________________________________
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6.- ¿Cómo podemos controlar la contaminación microbiana?
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OBSERVACIONES: Dibuja todos los pasos empleados en el sembrado de las cajas
de petri con Agar nutritivo.
CONCLUSIONES_______________________________________________________________
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