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CONCLUSIONES
•
De
acuerdo
con
el
análisis
electroforético
en
condiciones
desnaturalizantes y con base en la actividad específica para el sustrato
de BAPNA la enzima purificada mediante métodos cromatográficos es
identificada como tripsina.
•
Se establecieron las condiciones óptimas para llevar a cabo la técnica de
ELISA y el Ensayo de Manchas, las cuales fueron adecuadas para el
estudio de la respuesta inmune de tipo humoral frente a tripsina de
sardina Monterey (Sardinops sagax caerulea) en ratones C3H/HeJ.
o
En el caso del método de ELISA para lograr evaluar la producción
de anticuerpos anti-tripsina de sardina Monterey (Sardinops sagax
caerulea), se necesita 1 µg de la enzima, utilizando un segundo
anticuerpo (anticuerpo de cabra anti-IgG de ratón) en una dilución
constante de 1:2000.
o
Para lograr una óptima detección mediante el ensayo de manchas,
es necesaria la cantidad de 1.6 µg de tripsina por cada membrana de
nitrocelulosa, utilizando un segundo anticuerpo (anticuerpo de cabra
anti-IgG de ratón) en una dilución constante de 1:10,000.
Los datos obtenidos en este estudio serán de gran utilidad para lograr la
generación de anticuerpos monoclonales para tripsina, específicamente en la
etapa del tamizaje y la amplificación del hibridoma (dirigido a tripsina) lo cual a
su vez permitirá la creación de una cromatografía de afinidad biológica con el
fin de tener una mayor eficiencia en la purificación de tripsina de sardina
Monterey (Sardinops sagax caerulea).
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