Farmacognosia I PRÁCTICA N° 1 MÉTODOS DE EXTRACCIÓN DE MATERIALES VEGETALES OBJETIVOS: La presente práctica tiene el objetivo de capacitar al estudiante en la adquisición de habilidades y destrezas para preparar materiales vegetales antes de una extracción. Realizar extracciones por el método de reflujo y soxhlet, evaluar los extractos obtenidos por el rendimiento de sólidos totales extraídos. GENERALIDADES: En el estudio y producción de medicamentos naturales o especialmente fitomedicamentos, la extracción es una de las operaciones farmacéuticas de mayor importancia, dado que a través de ella se consiguen los principios activos de una manera más concentrada y exentos de sustancias lastre y metabolitos primarios. La extracción de drogas naturales es la operación por la cual, los componentes solubles contenidos en un material vegetal debidamente preparado, se disuelven en un solvente adecuado, llamado solvente extractor, y forman una disolución o extracto la cual se purifica por filtración. El extracto obtenido es un extracto crudo o total, y aunque contiene la mayor cantidad de principios activos, también contienen pigmentos vegetales y metabolitos primarios. Según los arreglos experimentales y materiales de laboratorio utilizados, los procedimientos de extracción toman diferentes denominaciones. - Infusión Decocción o cocimiento Maceración Digestión Lixiviación o percolación Soxhlet. Los más importantes serán estudiados y comparados en cuanto a su rendimiento de sólidos totales extraídos. 1. Maceración: Es una técnica de extracción en la que el material vegetal se pone en contacto con el solvente extractor, a temperatura ambiente y por un tiempo prolongado. Las sustancias solubles pasan el solvente por difusión simple, y se consigue una extracción hasta el momento en que la concentración de sustancias solubles sea igual en el solvente extractor que en el material vegetal. La maceración es la forma más simple de preparar extractos, y puede realizarse de manera repetida para conseguir un mayor agotamiento de las sustancias solubles contenidas en el material vegetal. Su desventaja es el prolongado tiempo, que algunas veces es de días o semanas. 1 Farmacognosia I 2. Digestión: La digestión es una maceración a elevada temperatura. En este caso, la temperatura determina que las sustancias solubles sean extraídas a mayor velocidad lo cual disminuye grandemente el tiempo de ejecución del extracto. La digestión para evitar la pérdida del solvente por evaporación, se realiza con un refrigerante, por lo cual toma el nombre de digestión a reflujo y se realiza a la temperatura de ebullición del solvente extractor. En el caso de principios activos termolábiles, la digestión se realiza con solvente de bajo punto de ebullición. 3. Extracción por Soxhlet: Es un método de extracción equivalente a una digestión y a una precolación, es un sistema cerrado y que permite el flujo de solvente en ciclos. Los equipos de soxhlet constan de tres partes: un reservorio de solvente en la parte interior, el cual es un balón donde se coloca el solvente extractor y se somete a ebullición. La segunda parte es un soporte para el material vegetal el cual se coloca empaquetado en papel filtro. Finalmente se tiene un refrigerante o condensador el cual recibe los vapores de solvente que vienen desde el balón y los condensa para hacer gotear el solvente sobre el material vegetal. Cuando el soporte que mantiene el material vegetal se llena de solvente recién destilado, se activa espontáneamente un sifón que hace que el extracto formado pase al balón donde continua en ebullición. Cada llenada de solvente en el soporte de muestra es un ciclo, y pueden repetirse varios ciclos de extracción hasta el agotamiento de la muestra. MATERIALES Vasos de 250 ml. Vasos de 150 ml. Erlenmeyers de 250 ml. Erlenmeyers de 500 ml. Pipetas de 10 ml. Pipetas de 5 ml. Refrigerantes con tapón para erlenmeyers Equipos de soxhlet Morteros Embudos Espátulas Papel filtro en pliegos Papel filtro en redondelas 8 4 4 4 8 4 4 4 4 4 4 1 4 REACTIVOS Alcohol de 96 grados Metanol EQUIPOS Estufa PROCEDIMIENTO 2 Farmacognosia I Efectuar extractos de un material vegetal estabilizado, desecado y pulverizado utilizando los diferentes métodos de extracción y etanol como solvente extractor. 1. Digestión a reflujo: Pesar 10 g. de material vegetal, mezclar con 100 ml. de etanol aproximadamente, en un erlenmeyer de 250 ml. Acoplar un refrigerante en la parte superior del matraz y someter a calentamiento a baño mana durante 20 minutos contados desde el inicio de la ebullición. Proceder a filtrar el extracto, lavando el residuo y depositarlo en un vaso tarado, al cual luego se colocará en la estufa para determinar el rendimiento de sólidos extraídos por evaporación hasta sequedad. 2. Extracción por Soxhlet: Empaquetar 10 g. de material vegetal en una hoja de papel de filtro y colocarla en un equipo de soxhlet con 150 ml. de etanol. Efectuar ciclos de extracción durante 20 minutos. Recuperar el extracto y proceder a evaluar su rendimiento como en los casos anteriores. RESULTADOS Y DISCUSIONES.CUESTIONARIO 1. Como se debe secar el material vegetal antes de hacer una extracción? 2. Cuál es la diferencia entre un metabolito primario y uno secundario, de ejemplos de cada uno de ellos? 3. Cuál es el fundamento del método de soxhlet? 4. Grafique un soxhlet e identifique sus partes 3 Farmacognosia I PRÁCTICA N° 2 PERCOLACIÓN OBJETIVOS: Realizar extracciones por el método de lixiviación o percolación. Evaluar el extracto obtenido GENERALIDADES: La lixiviación o percolación es el procedimiento más utilizado para la preparación de tinturas y extractos fluidos, es un método indicado para sustancias muy activas, presentes en pequeña cantidad o de baja solubilidad. En este método se utiliza un equipo llamado percolador, que es una estructura cilíndrica o cónica, de vidrio o de metal, equivalente a una pera de decantación, en el cual se coloca el material vegetal pulverizado en una cantidad adecuada, para luego proceder a humectarlo con el solvente extractor. La operación anterior se realiza con la llave de salida cerrada y se deja en maceración por 24 horas. Luego de la humectación se efectúa la elusión del solvente extractor, a volumen constante de una gota por segundo, para lo cual se necesita una alimentación continua de solvente por la parte superior, la cual debe ser graduada con la llave de salida. MATERIALES Vasos de 250 ml. Vasos de 150 ml. Erlenmeyers de 250 ml. Erlenmeyers de 500 ml. Pipetas de 10 ml. Pipetas de 5 ml. Peras de decantación de 500 ml. Morteros Embudos Espátulas Papel filtro en redondelas 8 4 4 4 8 4 4 4 4 4 4 REACTIVOS Alcohol de 96 grados Metanol EQUIPOS Estufa 4 Farmacognosia I PROCEDIMIENTO En una pera de decantación, colocar una torunda de algodón en la punta y proceder a llenarla con 20 g. de material vegetal. Después colocar algodón o papel de filtro en la parte superior. Luego con la llave cerrada agregar solvente (etanol) hasta que todo el material vegetal se encuentre humectado. Dejar reposar 20 minutos y proceder a agregar solvente por goteo o en la parte superior y recibir el extracto de la parte inferior a la misma velocidad de goteo. Recibir extracte hasta un volumen de 200ml. El extracto obtenido colocarlo en un vaso tarado y someterlo a evaporación para calcular su rendimiento. RESULTADOS Y DISCUSIONES.CUESTIONARIO 5 Farmacognosia I PRÁCTICA N° 3 FRACCIONAMIENTO DE EXTRACTOS TOTALES POR REEXTRACCIÓN OBJETIVOS: Capacitar al estudiante en la adquisición de habilidades para realizar el fraccionamiento de extractos totales por extracción y separación de compuestos por cromatografía en capa fina. GENERALIDADES En el estudio y la producción de medicamentos de origen natural, es necesario realizar extracciones de los materiales vegetales desecados y pulverizados. Los extractos iniciales conocidos como extractos totales o crudos, contienen todos los principios extraíbles o solubles del material vegetal, los cuales muchas veces son mezclas de metabolitos primarios y secundarios. Para proseguir con el desarrollo de un producto natural es necesario que los extractos totales o crudos sean fraccionados para conseguir principios activos más concentrados o con cierta purificación, o complejos activos separados de los metabolitos primarios. El fraccionamiento de un extracto puede realizarse de varias maneras, pero dos son los métodos más utilizados en los laboratorios de investigación y producción de medicamentos de origen natural. 1. Fraccionamiento por Cromatografía preparativa: Se realiza por cromatografía en columna, o por cromatografía preparativa de capa fina. El primer caso es el más importante. La cromatografía en columna tiene la capacidad de separar un extracto total por la afinidad diferencial de los diversos componentes, entre la fase estacionaria y la fase móvil. Es decir que todo el extracto crudo que inicia su recorrido disuelto en la fase móvil, a medida que atraviesa la fase estacionaria se va fraccionando porque sus componentes tienen diferentes afinidades por las moléculas de dicha fase. Las moléculas con mayor afinidad por la fase estacionaria se unirán parcialmente a ella y pasarán la columna con mayor lentitud, mientras que las moléculas con menor afinidad por la fase estacionaria, serán menos retenidas por la columna y serán eludías rápidamente. Por lo anterior podemos decir que la fase móvil que va siendo eludía de una columna cromatográfica va cambiando su composición en el tiempo, y si la recibimos en fracciones, cada fracción tendrá diferentes componentes del extracto total original. 2. Fraccionamiento por Reextracción: Es más simple, y se realiza en una pera de decantación y utilizando solventes de polaridad creciente y no miscible con el solvente original que debe ser agua. Este tipo de fraccionamiento es motivo de la presente práctica y por lo tanto será descrito en el procedimiento de la práctica. 6 Farmacognosia I MATERIALES DE LABORATORIO Vasos de 500 ml. Vasos de 250 ml. Erlenmeyers de 250 ml. Morteros Pipetas de 10 ml. Pipetas de 5 ml. Refrigerantes Peras de decantación Embudos Papel filtro Espátulas Capilares Papel cromatografico Cuba cromatografica REACTIVOS Etanol Hexano Tolueno Diclorometano Metanol Éter de petróleo Acetato de etilo N-butanol 4 4 4 4 4 4 4 4 4 12 4 10 2 500 ml 200ml 50 ml 50ml 100ml 200 ml 200 ml 200 ml PROCEDIMIENTO Pesar 2 a 3 g. de material vegetal estabilizado, seco y pulverizado, y someterlo a extracción con 40 ml. de etanol por digestión a reflujo durante 20 minutos. El extracto obtenido, filtrarlo, lavando el residuo con 5 ml. de etanol y someterlo a desecación en estufa a la temperatura de 90°C, a realizar el secado a baño maría hirviente. El extracto seco obtenido o extracto total, suspenderlo en 20 ml. de agua destilada con agitación. La suspensión obtenida colocarla en una pera de decantación y extraerla con 120 ml. de hexano por dos veces, separando el hexano con una pipeta. La fracción de hexano obtenida colocarla en un vial y someterla a desecación o concentración A la pera de decantación con la suspensión acuosa restante, agregarle 20 ml. de acetato de etilo y extraer igual que en el caso anterior, repitiendo una vez más. Posteriormente realizar la reextracción o fraccionamiento con n-butanol, de la misma manera. 7 Farmacognosia I Las fracciones obtenidas con cada solvente, deberán ser concentradas, para proceder hacer la siembra de cada una enel papel cromatografico. Fase móvil: PolarTolueno:acetato de etilo (8:2) Diclorometano:metanol (1:9) RESULTADOS Y DISCUSIONES.CUESTIONARIO 8 Farmacognosia I PRÁCTICA N° 4 EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE ALMIDONES OBJETIVOS: Realizar la extracción e identificación de los almidones presente en los vegetales. ORIGEN: Los almidones se encuentran muy repartidos en el reino vegetal, ya que con excepción de algunos vegetales inferiores, son elaborados y acumulados en las células de los tejidos de la mayoría de los vegetales. A nivel comercial se reserva el nombre de almidón al que se extrae de los granos, se llama fécula al que se extrae de las raíces y tubérculos. Se denomina harina al producto obtenido de la molienda de los granos de los vegetales, separándose los residuos constituidos por las envolturas de los granos llamados afrecho o salvado. Caracteres: Los almidones son polvos blancos, inodoros, insípidos, muy tenues constituidos por granos de forma y tamaño variables, más pesados que el agua, densidad 1.5. Caracteres microscópicos Los almidones vistos al microscopio se observan como corpúsculos inodoros o grisáceos, presentan en la superficie estrias concéntricas, estas capas están dispuestos alrededor de un punto oscuro rico en agua, el hilio, considerando como el centro generador del grano de almidón. El hilio puede estar en el centro del grano o un tanto excéntrico o hasta colocado en la extremidad del grano. Puede ser puntiforme o alargado, o bien tener la forma de un "V" o de una "Y" o de una hendidura irregularmente desgarrada. Usos El almidón posee propiedades nutritivas, absorbentes, demulcentes y protectoras. MATERIALES Reactivos Sol de Ido (Lugol) HC1 concentrado Na(OH)al 10% Material de Laboratorio 24 tubos de ensayo 04 vasos de precipitado x 250 ml. 9 Farmacognosia I 04 vasos de precipitado x 150 ml. 04 pipetas por 5 ml. 04 espátulas 04 vasos de precipitación 600 ml. O refrigerantes de reflujo 04 Erlenmeyer por 250 ml. 04 Baguetas 04 Pinzas para tubos. MÉTODOS Obtención Rayar el tubérculo Exprimir este rayado a través de una tela apropiada recogiendo el líquido en un vaso de precipitado Añadir dos volúmenes de agua y dejar sedimentar Decantar y lavar el residuo con porciones de agua Lavar 2 veces con etanol, y 2 veces con ester (para eliminar el agua) Raspar el almidón y ponerlo a secar a la estufa por 20 minutos. Reacciones de identificación a) Al microscopio, preparar una suspensión de almidón al 2% en agua, colocar una gota de la suspensión en un portaobjetos y agregar una gota de lugol. b) Insoluble con agua fría, soluble con agua caliente formando una masa transparente (engrudo de almidón), preparar una suspensión al 5%. c) Complejo yodo – Almidón, para esto tome 5 ml de la solución al 2% preparada anteriormente y agregar aproximadamente 3 gotas de yodo ( si el color es muy tenue agregar unas gotas mas), caliente con cuidado, anotar el tiempo que demora en cambiar de color. Degradación Hidrolítica: En medio ácido a) Pesar uno o dos gramos de harina problema y adicionarle 200 ml. de agua destilada, 6 ml. de HC1. Calentar a B.M. manteniéndose a ebullición y reflujo por 3 horas. b) Controlar las fases de la hidrólisis cada hora con S.R. de Lugol en placa de Toque y observar las siguientes coloraciones. Violeta: Amilodextrina, Roja: Eritrodextrina, Incolora: Acrodextrina. RESULTADOS Y DISCUSIONES.CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4. Describir la estructura del almidón. ¿En que consiste la solución de lugol? ¿A qué se debe la reversibilidad del complejo yodo – Almidón?. Explique En nuestro sistema digestivo cuando ingerimos alimentos con almidón ¿Qué tipo de hidrolisis de almidón se realiza? 5. Explique mediante reacciones la degradación hidrolítica del almidón. 10 Farmacognosia I 11 Farmacognosia I PRÁCTICA N° 5 CUANTIFICACIÓN DE POLISACARIDOS OBJETIVOS Lograr que el estudiante adquiera dominio y destreza en análisis de polisacáridos. Despertando el interés que sobre las técnicas volumétricas debe tener el alumno y destacando en ellas la utilidad que ofrecen en análisis, para conseguir resultados óptimos de acuerdo a las normas establecidas para la determinación de azucares totales. GENERALIDADES Los polisacáridos.- Son compuestos constituidos por muchas unidades de monosacáridos: por moléculas, cientos y aún miles de ellas, que se mantienen unidos por enlaces glicósidos los que pueden romperse por hidrólisis como lo hacen los disacáridos. Los polisacáridos son macromoléculas naturales presentes en casi todos los organismos vivos y constituyen uno de los más grandes grupos de productos naturales. Son hidratos de carbono de elevado peso molecular formados por reacciones de condensación, por las cuales monosacáridos neutros normales 2-amino-2-dexoderivados o ácidos hexurónicos derivados de ellos están vinculados entre sí mediante uniones éter que resultan de la pérdida de agua de un hidroxilo glicosídico (de C\) y un hidroxilo, generalmente específico, de otra molécula. Cuando en una molécula interviene diez o menos monosacáridos, dichos productos reciben el nombre genérico de oligosacáridos, dichos productos reciben el nombre genérico de oligosacáridos (en particular, disacáridos, trisacáridos, etc.) mientras que si la molécula contiene más de 10 unidades se designan genéricamente con el nombre de polisacáridos. En cuanto a la función de estos productos, por lo general constituyen fuente de energía o unidades estructurales del organismo que los contiene. Como ejemplo de función estructural mencionaremos la celulosa (polímero de D-glucosa) que es el material de estructura de las plantas y, por cierto, la sustancia orgánica más abundante en la naturaleza mientras que la quitina (un polímero de 2-acetamido-2 desoxi-D-glucosa) es el principal material orgánico del caparazón de cangrejos; insectos, etc. Como ejemplos de material de reserva energética cabe citar a los almidones y el glucógeno (polímeros de D-glucosa), que son fuentes de reserva de energía de vegetales y animales, respectivamente. La celulosa y el almidón son los polisacáridos más importantes ambos se producen en vegetales por medio del proceso de fotosíntesis a partir de dióxido de Carbono y agua y están constituidos por unidades de D (+) glucosa. La celulosa es el principal material estructural de los vegetales confiriéndoles rigidez y forma. El almidón representa la reserva alimenticia de los vegetales y se halla predominantemente en sus semillas. Contiene generalmente alrededor de 20% de una fracción soluble conocida como amilopectina ambas fracciones de peso molecular 12 Farmacognosia I elevado de formula (C6Hlo03)n por tratamiento con ácido o enzimas, los componentes del almidón se hidrolizan lentamente dando sucesivamente dextrina mezcla de polisacáridos de bajo peso molecular), (+) - maltosa y finalmente D - (+) glucosa. Todo esto se halla en los jarabes de cereal. MATERIALES Y REACTIVOS Material Matraz Erlenmeyer de 250 ml. Fiola de 100 ml. Buretas de 25 ml. Vasos de precipitado de 250 ml. Vasos de precipitado de 150 ml. Pipetas de 5 ml. y 10 ml. Espátulas Agitadores de vidrio 04 04 04 08 04 04 04 04 Reactivos Sol. de Reactivo de Felhing A y B Solución de Glusoca al 0.5% Azul de metileno al 1% S.R. de HC1 6.34 N S.R.deNa(OH)4N S.R.deHC10.1N Solución de fenolftaleina PROCEDIMIENTO 1. Colocar en la bureta la solución de glucosa 0.5% 2. Medir exactamente en un Erlenmeyer 5 ml. de Fehling A, 5 ml. de Fehling B y 25 ml. de agua destilada y someter a fuego directo hasta ebullición constante, dejar caer gota a gota desde la bureta, la solución de glucosa 0.5% agregar 5 gotas de azul de metileno sin parar la ebullición y sin parar el goteo hasta la desaparición del color azul terminando en rojo ladrillo. 3. Anotar el gasto obtenido Preparación de solución problemas. Pesar 3 gramos de harina y colocar en un vaso de 100 ml. aAñadir 25 ml. de agua destilada más 12 ml. de sol. HC1 6.34 N, llevar a Baño María hirviente por 30 minutos, enfriar, agregar 5 ml, de fenoltaleina, añadir Na(OH) 4 N hasta la aparición del color rojo grosella, luego añadir gotas de HC1 0.1 N hasta la desaparición del color rojo grosella y enrazar a 100 ml. Dosificar esta solución siguiendo el método de Fehling teniendo cuidado de mantener el liquido siempre en constante ebullición. Anotar el gasto y realizar los cálculos. 13 Farmacognosia I RESULTADOS Y DISCUSIONES.CUESTIONARIO 14 Farmacognosia I PRÁCTICA N° 6 IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE GLICOSÍDOS CIANOGENETICOS OBJETIVOS: Conocer y ensayar las reacciones básicas que permiten identificar rápidamente glicósidos cianogeneticos Interpretar los resultados de las reacciones de reconocimiento y los métodos de cuantificación. GENERALIDADES: Los glicósidos cianogenéticos son principios cuaternarios nitrogenados que liberan como aglucón el ácido cianhídrico; se les conoce también con el nombre de cianofórico o cianóforos. Entre las plantas que contienen glicósidos cianogenéticos tenemos: las almendras amargas, el laurel cerezo que contienen amigdalina y prulauracina respectivamente; cerezo silvestre con prunacina; el capulí que contiene amigdalina todas de la familia Rosáceas. También se encuentra en las Semillas de duraznos, albaricoques (damascos), guindas, ciruelas. MATERIALES Erlenmeyers de 250 ml. Erlenmeyers de 150 ml. Erlenmeyers de 50 ml. Tubos de ensayo Vasos de 250 ml. Refrigerantes con conexión en ángulo Buretas de 25 ml. Probetas de 5 ml. Pipetas de 5 ml. Agitadores de vidrio Papel filtro en redondelas Termómetro 4 4 4 12 4 4 4 4 4 4 8 2 REACTIVOS S.R. de Grignard S.R. de Fehling A y B Sol. de Cl3Fe al 5% Sol. de Na(OH)al 10% Sol. IK al 10% Sol. NO3Ag 0.03 N 15 Farmacognosia I PROCEDIMIENTO Droga Usada: Hojas frescas de laurel cerezo Composición Química: Glicósidos: Prulaurasina Taninos Emulsina (perfectamente soluble") Materias grasas DETERMINACIÓN CUALITATIVA 1. S.R. de Grignard: Colocar 0.5 gramos de hojas de laurel cerezo previamente picadas en un erlenmeyer, añadir 50 ml. de agua, taparlo herméticamente, suspender un papel humedecido con el reactivo picrosodado (Impregnar tiras papel de filtro en una solución de ácido pícrico al 1 %, dejar secar en la oscuridad, impregnar el mismo papel en una solución de carbonato de sodio al 10 %, dejar secar en la oscuridad) y calentar a B.M. por 15 minutos al cabo del cual se observará que el papel se tiñe de rojo, lo que nos indica la presencia de HCN, por formación de isopurpurato de sodio. 2. Azúcares: A partir del mismo líquido, se toma 1 ml. al cual se le agrega 1 ml. de S.R, de Fehling, calentar y observamos la formación de un precipitado rojo ladrillo, que nos manifiesta la presencia de azúcares. 3. Taninos: Tomar 1 ml. de líquido filtrado, añadirle gotas de Cl3Fe al 5% nos da una coloración azul, la que nos indica presencia de taninos. DETERMINACIÓN CIANOGENETICAS CUANTITATIVA DE HCN EN DROGAS Droga usada: Hojas frescas de laurel cerezo Procedimiento: Pesar 5 gramos de hojas de Laurel cerezo, colocarlas en un erlenmeyer de 50 ml. añadirle 25 ml. de agua caliente (50 grados). Tapar herméticamente y someterlo a B.M. por 10 minutos. Destapar y rápidamente unirlo al dispositivo de destilación, con el extremo del refrigerante sumergido en un erlenmeyer que contiene 20 ml. de Na(OH) al 10% y 10 ml. de IK al 10% . Empezar la destilación con llama pequeña regulable a fin de recoger los 20 ml. del destilado en unos 20 minutos (marcar rápidamente el nivel). Terminada la destilación, el extremo del refrigerante lavarlo con agua destilada. Valorar con nitrato de plata 0.03 N hasta aparición de ligera opalescencia. Cada ml. nitrato de plata equivale a 0.00162 g. de HCN. RESULTADOS Y DISCUSIONES.CUESTIONARIO Explicar las reacciones con el reactivo de grignard, reactivo de Fehling y el Cl3Fe al 5% 16 Farmacognosia I PREPARACIÓN DEL PAPEL PICROSÓDICO PRÁCTICA N° 6 EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE CUMARINAS OBJETIVOS Adiestrar al estudiante en la identificación cumarinas en extractos vegetales. GENERALIDADES Las Cumarinas deben su nombre a la palabra "Coumaron" que es el nombre popular de la planta Dipteryx odorata de la cual se aisló la primera de ellas en 1820. Las cumarinas son Benzopironas que se pueden considerar como lactonas de los ácidos 2 hidroxicínámicos. Se conocen miles de cumarinas y están ampliamente distribuidos en el reino vegetal. En las especies de las angiospermas. Las familias más caracterizadas por las cumarinas son Fabaceae, Asteraceae, Apiaceae y Rutaceae. MATERIAL Y REACTIVOS - Probetas de 100 ml. Vasos de 250 ml. Vasos de 500 ml. Erlenmeyers de 250 ml. Refrigerantes para erlenmeyers Pipetas de 10 ml. Pipetas de 5 ml. Morteros Erlenmeyerzs de 500 ml. Embudos Espátulas Papel filtro redondeles Peras de Decantación 4 8 8 4 4 4 4 4 4 4 4 8 4 Reactivos - Solución Etanolica de Acetato de Pb al 5% - Amoniaco al 10% - Acido Acético al 10% - Etanol de 96° 500 ml. - Cloroformo 400 ml. 17 Farmacognosia I - Cloruro forrico al 5% (Etanolico) PROCEDIMIENTO Tomar 5a 10 g. de material vegetal (hojas de Ruta Graveolens -Ruda) y mezclar con 100 ml. de Etanol de 96° en un Matraz de Erlenmeyer. Someter a Digestión o Reflujo a baño María durante 20 minutos. Filtrar el extracto, Precipitar con Acetato de Pb al 5% y filtrar nuevamente. Evaporar a sequedad y suspender en 50 ml. de agua destilada en forma homogénea y acidificar con 5 ml. de Acido Acético al 10%, Reextraer con 30 ml. de Cloroformo por 3 veces. Juntar los 3 volúmenes de Cloroformo y evaporarlos a sequedad. El residuo disolverlo en 5 ml. de Etanol y realizar las reacciones de identificación siguientes: - 0.5 ml. de solución etanolica en un tubo de Ensayo y agregar 1 ml. De solución de Cloruro férrico al 5%, observar la coloración azul verdosa de los cumarinas. 0.5. ml. de solución etanolica agregar 1 ml. de Amoniaco al 10% y observar la coloración amarilla de los cumarinas La Solución Etanolica restante conservaría en un envase cerrado para ser utilizada en la siguiente práctica. RESULTADOS Y DISCUSIONES.- 18 Farmacognosia I PRÁCTICA N° 7 ANÁLISIS DE CUMARINAS POR CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA OBJETIVO: Adquirir y reforzar destrezas para realizar análisis cromatográficos de capa fina para identificar metabolitos secundarios vegetales. GENERALIDADES: Existen 5 clases de cumarinas en la naturaleza; según sus características estructurales. Estas son: - Cumarinas simples o no condensadas Cumarinas preniladas Furanocumarinas Piranocumarinas Cumarinas Diméricas Cada clase de cumarinas tiene características de solubilidad específicas lo que hace difícil su extracción conjunta. Sin embargo puede afirmarse que todas las cumarinas son solubles en Etanol y Metanol y son los solventes más adecuados para su extracción. El enriquecimiento o fraccionamiento de la cumarinas puede realizarse con otros solventes como Acetato de Etilo, Cloroformo o Éter según su estructura química. MATERIALES Utilizar la solución Etanolica reextraída de la práctica anterior - Vasos de 250 ml. Matraces de 250 ml. Pipetas de 5 ml. Pipetas de 10 ml Capilares de vidrio Cuba de cromatografía Placa de silica Gel 20 x 20 cm Pulverizador de soluciones Lámpara de UV-254 mm 4 4 4 4 8 1 1 1 1 Reactivos - Hidróxido de Potasio en Etanol al 5% Cloruro Férrico en Etanol al 5% Tolueno Éter Acido Acético al 10% 50 ml. 50 ml. 100 ml. 100 ml. 100 ml. PROCEDIMIENTO 1. Fase Móvil: Tolueno Éter (1:1) saturada con ácido acético. 19 Farmacognosia I Mezclar y agregar 50 ml. de Acido Acético al 10%, agitar todo en una pera de decantación. Eliminar la fase acuosa inferior y la fase superior depositada en la cuba de desarrollo cromatográfico. 2. Fase Estacionaria: Cortar la placa de sílica gel en 4 láminas de 10 x 5 cm y marcar los lugares de siembra de muestra con lápiz. 3. Muestras: Tomar con el capilar la solución etalonica reestraida de la práctica anterior y colocarla en el sitio de siembra de la placa de silica-gel. Realizar la operación con cuidado y limpieza. Si hubiera otra solución a analizar colocarla en un segundo lugar de siembra. 4. Desarrollo: Colocar las placas sembradas y secas en la cuba de desarrollo hasta que el solvente ascienda hasta un centímetro del borde superior. 5. Detección: Retirar las placas, secarlas en estufa a 80°C o al sol y observarlas bajo luz UV de 254 mm (Con precaución, la luz UV es nociva para la piel y ojos). Luego pulverizar las placas con KOH etanolico al 5% y observar bajo luz de *>54 rTT1l. Luego pulverizar las placas con FeCls al 5% y observar directamente. T1: rutarina T2: cocusaginina. T3: xantotoxina T4: gamma-fagarina T5: escopolatina T6: umbeliferona 20 Farmacognosia I RESULTADOS Y DISCUSIONES.- 21 Farmacognosia I PRÁCTICA N° 8 EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN DE FLAVONOIDES OBJETIVOS: Adiestrar al estudiante en la extracción y purificación de principios activos de origen vegetal ANTECEDENTES Los Flavonoides son moléculas Bioactivas muy distribuidas en el Reino Vegetal. Existen miles de Flavonoides descubiertos y cuyas estructuras químicas han sido determinadas; y cada año se descubren centenares de ellos en especies vegetales no estudiadas. Su estructura general esta constituida por el anillo de Flavona mostrado a continuación: Dicho anillo puede tener sustituyentes los cuales determinan su diversidad. Los Flavonoides tiene importancia farmacéutica como antiinflamatorios, antioxidantes, etc. por ello su estudio es necesario. MATERIALES - 4 Morteros Pliego Papel filtro 4 Equipos de soxhiet 4 Vasos de 250 ml. 4 Embudos 8 Redondilas de Papel 4 vasos de 500 ml. 4 peras de decantación 4 pipetas de 10 ml. 4 pipetas de 5ml. REACTIVOS 500 ml. de éter de petróleo 500 ml. de etanol 500 mi, de Acetato de Etilo 100 ml. de Cloroformo Cloruro de Aluminio al 5% Magnesio Metálico en cinta Acido Clorhídrico concentrado. 22 Farmacognosia I PROCEDIMIENTO Cinco gramos de material vegetal seco y pulverizado, se somete a una extracción con éter de Petróleo en un equipo de soxhlet. El extracto es eliminado y el residuo vegetal seco es extraído del mismo modo con etanol. El extracto etanólico es evaporado a sequedad y suspendido en agua destilada hirviente (100 ml. ) con agitación. La suspensión acuosa luego es filtrada por papel y el filtrado, se coloca en una pera de decantación. Después se realiza una extracción con acetato de etilo, por tres veces, cada una con 50 ml. La fase con acetato de etilo contiene los flavonoides los cuales precipitan con el agregado progresivo de cloroformo. Para lo cual realizar la precipitación con 100 ml. del extracto de acetato de etilo. Filtrar el precipitado y el residuo redisolvedo en Etanol para las pruebas de identificación Identificación 1. Shínoda.A 1 ml. de extracto añadir un trozo de cienta de Magnesio y agregarle 0.5 ml. de HC1 conc. 2. Tricloruro de Aluminio: A 1 ml. de extracto añadir 0.5 ml. de tricloruro de Aluminio al 5% y observar los cambios de calor. RESULTADOS Y DISCUSIONES.- 23 Farmacognosia I PRÁCTICA N° 9 ANÁLISIS DE FLAVONOIDES POR CROMATROGRAFIA DE CAPA FINA (CCF) OBJETIVOS: Señala la importancia que ofrece los flavonoides como un recurso colorantes naturales. Familiarizar al estudiante con los diferentes métodos utilizados en extracción y purificación de productos naturales y manejar adecuadamente con criterio los materiales e instrumentos utilizados en el análisis. GENERALIDADES Los flavonoides constituyendo uno de los grupos más numerosos y ampliamente distribuidos en ellos. Se conocen aproximadamente diez clases de flavonoides, todos contienen 15 átomos de carbono en un núcleo básico arreglados bajo el sistema C6-C3C6, posee dos anillos aromáticos llamados A y B y los que están unidos a una unidad de tres carbonos pudiendo formar o no un tercer anillo, que en caso de existir se le llama anillo C. Figura: Muestra la estructura de un flavonoide La variedad en los tipos de flavonoides difieren en su estructura por la degradación u oxidación del anillo C y en parte de la sustitución del anillo A y alaunas veces del anillo B. Los flavonoides se presentan en las drogas como monoglicosidos o diglicosidos. Una de las fuentes de flavonoides de origen natural son las flores de Caléndula Officinalis Linne cuyo nombre común es Marigold que es ampliamente utilizada en la cosmética, concentrados (alimento para aves), etc. Es un planta de aproximadamente 60 a 80 cm. de altura tipo arbusto siempre verde, con flores tipos cabezuela de color amarillo anaranjado de floreo frondoso, cuya recolección es de flor madura, su habitad es en valles de clima cálido a templado. Los flavonoides contenidos en mayor concentración son la Quercitina y Rutina. MATERIAL Y REACTIVOS - Flores de Calendura Horno eléctrico o estufa Morteros de porcelana 1 6 2 24 Farmacognosia I - Equipo para extracción SoxHelt Matraz Erlenmeyer de 250 ml. Balón de destilación de 250 ml. Soporte Universal Pinza para equipo de destilación Vasos de precipitado de 500 ml. Placas de Silicagel Fuente de luz UV Fiólas de 25 ml y 50 ml Papel filtro 6 2 2 4 6 1 1 10-1 Reactivos - Acetato de Etilo Acido acético Acido fórmico Quercitina Rutina Metanol Etanol PROCEDIMIENTO Recolección: Es obtener la planta entera o la parte de la planta que interesa por contener el principio activo para el caso de utilizar a las flores, recolectadas en época de floración. Estabilización y secado: Este proceso se realiza para inactivar las enzimas o para destruirlas. En la práctica se procederá a la desnaturalización por deshidratación para lo que se coloca las flores de calentarla o estufa a la temperatura de 70-90°C. Preparación de extractos: La droga seca es pulverizada de forma manual en mortero de porcelana, tomar 10 g. y armar el equipo para extraer los flovonoides por Soxhlet a la temperatura del solvente utilizado (agua, etanol, metanol). Luego de obtenidos los extractos se procede a filtrar, el filtrado someter a Baño María hasta evaporación total del solvente (extracto seco) Análisis Cualitativo: Para este análisis haremos uso de dos métodos: 1. Método Cromatográftcos: La cromatografía es el proceso de separación de mezclas de sustancias por medios de su afinidad diferencial por dos fases; una fase estacionaria y una móvil; de ese modo las sustancias separados pueden ser identificadas y cuantificadas sin mayor interferencia.. - Cromatografía de capa fina: Sirve para identificar los principios activos la fase estacionaria está constituida por Silica Gel (placas) corte una placa del 5 cm de ancho por 12 de alto. Mientras la fase móvil está constituida por: Acetato de etilo, Acido acético, Acido fórmico, agua destilada, (100:11: 11: 27) 25 Farmacognosia I Coloque la muestra estándares de Quercitma, Rutina Img/ml) en los solventes de la fase móvil, a una distancia de 0.5 del borde inferior y a una distancia de 2 cm de cada muestra deje desarrollar el cromatograma y proceda luego a la detección (revelado) mediante luz ultra violeta. (Vainillina 1%, con etanol H2SO4 5 %, en sol. etanolica). Observe en cual de los solventes se capta mejor los estándares. Según ello elija el adecuado y proceda a trabajar con la muestra problema (extracto de caléndula) y desarrolle y revele el cromatograma. Compare. 26 Farmacognosia I PRACTICA N° 10 ANÁLISIS DE FLAVONOIDES POR HPLC OBJETIVO: Adquirir destrezas preliminares en el manejo de un equipo de HPLC para la cuantificación de moléculas orgánicas. GENERALIDADES La Cromatografía líquido de alta resolución es la técnica cromatográfíca más avanzada (HPLC) y que ha tenido la mayor aplicación en el mundo científico y en la investigación de productos naturales. Un equipo de HPLC consta de las siguientes partes básicas: 1. Reservorios para la Fase Móvil: desde donde la fase móvil será succionada por la bomba de impulsión. 2. Una Bomba de impulsión: de pistones y programable, capaz de mezclar diferentes solventes para realizar fases móviles isocráticas o en gradiente. La Bomba de impulsión toma los solventes de la fase móvil y los lleva por todo el sistema de HPLC. 3. Inyector: Es el sitio donde se puede introducir una muestra en el Sistema del HPLC. El Inyector tiene la capacidad de introducir un volumen exacto de muestra o soluciones estándares en el flujo de la fase móvil para poder efectuar el análisis correspondiente. 4. Fase Estacionaria: Material insoluble empaquetado en una columna, que permite las interacciones con la muestra o los estándares a su paso por la columna e impulsados por la fase móvil. La Columna de la fases estacionaria recibe el flujo continuo de la fase móvil y también recibe la muestras introducidas por el inyector. 5. Detector: es un espectrofotometro de flujo que mide la absorbancia de la fase móvil al salir de la columna de la fase estacionaria y por lo tanto puede detectar las sustancias separadas que fueron introducidas por el inyector. 6. Integrados: es un equipo que imprime el cromatograma y calcula las áreas de los picos de cada sustancia detectada, para realizar los cálculos correspondientes. MATERIALES - Accesorios de Filtración para HPLC Filtros de Muestras de 0.2 um Filtros de Membrana para solventes Jeringa de inyección Reactivos - Metanol HPLC Agua destilada Quercetina Estándar Muestras de extractos de prácticas anteriores 27 Farmacognosia I PROCEDIMIENTO: 1. Solventes: Colocar en 2 reservónos del HPLC, 500 ml. de Metanol filtrado por membrana de 0.24 um de poro y 500 ml. de Agua filtrada de la misma manera. 2. Estabilización: Hacer pasar Metanol puro por el sistema a un flujo de 1 mi/minuto después de haber purgado el equipo y observar la línea base hasta su estabilización. 3. Elección de Fase móvil: Inyectar en el equipo una solución de Amecetina de concentración 0.1 mg/ml en metanol y buscar la fase móvil más adecuada cambiando los parámetros de la Bomba de impulsión. Probar las siguientes fases móviles - Metanol 100% - Metanol 90% Agua 10% - Metanol 75% Agua 25% - Metanol 50% Agua 50% Y elegir la mejor fase móvil según los tiempos de retención. Nota: La solución de quercitina filtrarla previamente por un filtro de 0.2 um de poro con ayuda de una jeringa. 4. Análisis Definitivo: Con la fase móvil elegida comparar los cromatogramas de la solución estándar de quercitina con los de extractos o fracciones preparados anteriormente, considerando los tiempos de retención, las áreas de los picos y la concentración de la solución estándar. Calcular los resultados y discutirlos. RESULTADOS Y DISCUSIONES.- 28 Farmacognosia I PRACTICA N° 11 DROGAS CON TANINOS: EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN OBJETIVO.- La presente práctica permite al estudiante realizar la extracción e identificación de las sustancias fenólicas presente en los vegetales, así como diferenciar en un extracto vegetal los taninos gálicos y catequices. ANTECEDENTES.- Los taninos son sustancias fenólicas naturales de origen vegetal que tienen la propiedad de curtir la piel transformándola en cuero y de dar con las sales de fierro coloraciones azul oscuras, negras o verdes. Los taninos se caracterizan por ser sustancias amorfas, de sabor astringente, son solubles en agua, alcohol y acetona, insolubles en éter y éter de petróleo. Las soluciones acuosas de los taninos son de carácter coloidal y tienen reacción acida por la cual se les llama también ácidos tánicos. Producen coloraciones (tintas) con las sales férricas que varían de negro azulado al verde. MATERIALES - Morteros Probetas de 100 ml. Vasos de 150 ml Vasos de 250 ml Vasos de 600 ml Matraces con refrigerante a reflujo Tubos de ensayo Pipetas de 5 ml Embudos Papel filtro en redondelas Pinzas de nuez suficientes Espátulas Varillas de vidrio Pinzas para tubos 4 4 4 4 4 4 24 4 4 8 4 4 4 REACTIVOS - Cloruro de Fierro al 5% S.R. de bicromato de potasio al 5% S.R.deCNKal5% S.R. de acetato de plomo al 5% Sol. de agua de cal Acido Tánico HCL concentrado Formaldehido al 40% Sol. de alumbre férrico al Í% Acetato de sodio 29 Farmacognosia I PROCEDIMIENTO 1. Extracción 1 gramo de droga problema, es tratada, con 50 ml. de agua destilada, calentar a B.M. por unos minutos, dividir en tantas fracciones como ensayos practique. 2. Identificación Cualitativa a. Con las sales férricas, los taninos dan pp o coloraciones - (según concentración). b. Taninos gálicos; Azul oscuro - Taninos catequices ; verde - Con S.R. de bicromato de Potasio al 5%, pp pardo amarillento o pardo oscuro. c. Con S.R. de CNK al 5%, el ácido gálico da coloración roja y pp amarillo con el ácido tánico d. Con S.R. de acetato de plomo al 5% , pp pardo de tanato de plomo. e. Con sol, de agua de cal pardo amarillento. f. Con S.R. de hipoclorito de sodio, coloración anaranjada. 3. Reacción de Diferenciación A 50 ml. de la solución tánica al 4% se añade 5 ml. de HCL concentrado y 10 ml. de formaldenido al 40% y se hierve durante 30 minutos en un matraz con refrigerante a reflujo. Obsérvese si durante el calentamiento se forma un enturbamiento o precipitado. Los taninos gálicos no precipitan; ios toninos catequicus precipitan formando un compuesto insolubles. Se enfría, se filtra ya 10 ml. del filtrado se añade 1 ml. de sol. de alumbre férrico al 1% en presencia de 5 g. de acetato de sodio. Si se forma una coloración azul oscura indica la presencia de taninos gálicos y elágicos. RESULTADOS Y DISCUSIONES.- 30 Farmacognosia I PRACTICA N° 12 DROGAS CON TANINOS: EXTRACCIÓN Y CUANTIFICACIÓN OBJETIVO.- La presente práctica permite al estudiante realizar la extracción y valoración de los taninos presente en los vegetales así como conocer las propiedades farmacológicas de las mismos. ANTECEDENTES.Las drogas que contienen taninos son muy empleadas en la industria para el curtido de pieles y por tanto, su valor está en relación con la cantidad de taninos que contienen. Existen varios métodos para valorar taninos, sólo nos ocuparemos de uno de ellos, que a pesar de su sencillez y de su rapidez, dan resultados satisfactorios. Las cortezas, hojas, frutos o las diferentes materias sólidas en las cuales se propone la determinación del tanino, deben ser reducidas a polvo lo más fino posible. Para ésto, después de haberlas dividido groseramente, se las pulveriza en un mortero. MATERIAL - Morteros Matraces de 100 ml Buretas de 25 ml. Papel filtro en redondelas 8 Pipetas de 5 ml. Probetas de 50 ml. Agitadores de vidrio Espátulas Vasos de 150 ml. Vasos de 250 ml. Vasos de 600 ml. Embudos Matraces con refrigerante a retlujo Pinzas de nuez 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 REACTIVOS - Sol. de Iodo al 2.5% Sol. saturada de bicarbonato de sodio Tanino en polvo Papel almidonado Cloruro férrico al 5% Acetato de plomo al 5% Cloruro Férrico al 5% 31 Farmacognosia I PROCEDIMIENTO 1. EXTRACCIÓN Pulverizar (10 g.) de corteza desecada de uña de gato y mezclarlo con 100 ml. de una mezcla hidroalcoholica, colocar la mezcla en un equipo de digestión a reflujo y someter a B.M. durante 15 minutos de ebullición continua, filtrar el extracto y someter a evaporación hasta un tercio de su volumen. 2. VALORACIÓN DE TANINOS POR EL MÉTODO DE JEAN. Fundamento.- En la fijación del Iodo metálico en medio alcalino (HNaCO3) por parte del ácido tánico y ácido gálico. Técnica Operatoria.- Se requiere los siguientes reactivos: 1. Solución de Iodo al 2.5% (A) 2. Solución de ácido tánico al 1% (B) 3. Solución saturada de HNaC03 (C) En un matraz de 100 ml. se colocan 10 ml de solución tipo de tánino (B) que contiene 0.01 de tánino. Se agregan 2 ml. de Sol. de C03HNa y desde una bureta se deja caer la solución (A) de Iodo hasta que una gota extraída con una varilla de vidrio tina en azul un papel almidonado. Se agrega agua hasta completar 50 ml. , se agita y se vuelve a probar con el papel almidonado; agregando más solución (A) sino hubiese Iodo en pequeño exceso. Se anota el número de ml. gastados. Como el C03HNa fija también algo de Iodo, se hace una prueba en blanco; se mide 2 ml. de solución (C) y se completa a 50 ml. con agua, se agrega solución (A) hasta coloración azul del. papel almidonado se lee en la bureta el número de ml. gastados y se resta éste del anterior. Así tenemos el dato exact<~» de Iodo correspondiente a 0.01 de tánino. Se hace una solución de la sustancia, tánica problema de modo que tenga una concentración de 1 x 1000 y con 10 ml. de esta solución se repite la operación de la solución (B). Se anota el número de ml. gastados y se hacen los cálculos. CÁLCULOS.- (Supuestos Gastos) Gasto para la solución tanino patrón = 9.8 ml. Gasto para prueba en blanco = 0.4 ml. Gasto para solución problema = 1.2 ml. 32 Farmacognosia I Qué cantidad de taninos tiene la muestra? 9.8- 1.2- 9.4 0.4 9.4 ml. de I para 0.8 ml. de I para X de tanino 0.01 de tanino 9.4 ------------ 0.01 0.8 ------------ X X = 0.00085 g. de tanino 10 ml. ------------ 0.00085 g. de tanino 1000 ml. ------------ x X = 0.0085 g. de tanino en la solución 0.085 ------------ 1 g. de droga X ------------ 100 X = 8.5% de tanino en la muestra 33 Farmacognosia I PRACTICA N° 13 DROGAS CON GLICOSIDOS ANTRAQUINÓNICOS OBJETIVOS: Determinar los principios activos presentes en los Glicosidos Antraquinonicos GENERALIDADES: Los Glicosidos Antraquinonicos o Antraglicosidos tienen como aglicones derivados de la antraquinona y se encuentran en una serie de drogas de acción purgante. Esta acción catártica es debida principalmente a las hidroximetilantraquinonas en estado Ubre o a glicosidos de estos derivados antracénicos que son susceptibles de dar por hidrólisis glucosa y otro azúcar como la ramnosa o la arabinosa. En el núcleo de la antraquinona pueden existir diferentes funciones químicas, de cuyo número, función y posición derivan los distintos tipos de hidroximetilantraquinonas. La principales hidroximetilantraquinonas que se encuentran en los vegetales son: En Crisofanol o dihÍdroxil-1-8 metÍl-3-antraquinona de color amarillo y que se encuentra en el Ruibarbo y en el Sen. La emodina o trihidroxil-l-6-8-metil-3antraquinona de color anaranjado que se encuentra en el Aloe, Ruibarbo, Cascara Sagrada, etc. ACCIÓN FARMACOLÓGICA La acción farmacológica purgante de estos compuestos antracénicos es debida a los grupos OH fenólicos. Las antraquinonas libre tiene menor acción que los glicosidos porqué los azucares sirven para transportar el aglicón hasta el intestino grueso donde actúa y la posición de los OH es fundamental para la acción catártica. Los antranones han demostrado tener mayor acción catártica. MATERIALES DE LABORATORIO - Vasos de 250 ml. Vasos de 150 ml. Papel filtro Tubos de ensayo Pipetas de 5 ml. Espátulas Bagüelas Pinzas para tubos Erlenmeyer de 250 ml. Peras de separación Embudos REACTIVOS - Sulfato de cobre al 25% 34 Farmacognosia I - Talco Sol. de cloruro de sodio Alcohol etílico Hidróxído de sodio diluido HCL diluido Éter etílico Hidróxido de amonio diluido Borato de sodio saturado Papel de tornasol. PROCEDIMIENTO REACCIONES DE IDENTIFICACIÓN Parte usada: Jugo desecado obtenido de las hojas de Aloe. A. R. de Bortranger.Hervir en 10 ml. de agua y 3 gotas de Na(OH) diluido 1 gramo de muestra problema, filtrar, el liquido filtrado enfriar y agregar HCL diluido en exceso, agitar con 10 ml. de éter, separar la capa etérea y agitarla luego con 5 ml. de hidróxido de amonio diluido, el amoniaco liquido se colorea desde el rosado al rojo cereza según la cantidad de principio smraquínónico libre presente en la droga. Cuando se trata de caracterizar derivado antraquinónicos combinados con azúcares en forma de glicosidos hay que hidrolizar previamente la droga con HCL diluido. B. R. de Klunge.- Determinación de la Isobarbaloina Tratar 0.5 g. de droga con 100 ml. de agua, calentar suavemente, enfriar y agregar mg. de talco, filtrar y 20 ml. de la solución filtrada, adicionarle una gota de sulfato de cobre al 25%. una gota de Sol. de CINa y 10 ml. de alcohol de 90 grados, calentar, se produce una coloración rojo vinosa o rojo grosella que luego pasa al amarillo. C. R. de Schonteten.- Determinación de la Barbaloina Tomar 5 ml. de la reacción de Bortranger añadirle 5 ml. de solución saturada de borato de sodio y observar al trasluz una fluorescencia verde. RESULTADOS Y DISCUSIONES.- 35 Farmacognosia I PRACTICA N° 14 ANTRAOUINQNAS: IDENTIFICACIÓN CROMATOGRAFÍA OBJETIVO: La presente práctica permite al alumno realizar la identificación por C.C.F. de las drogas antraquinonas presente en los vegetales así como conocer las propiedades farmacológicas de las mismas. MATERIAL Y REACTIVOS - Capilares de vidrio 1 placa de cromatografía de capa fina Merck de silicagel 4 vasos de 250 ml. 4 matraces de 250 ml. 4 vasos de 600 ml. 4 pipetas de 5 ml. 4 pipetas de 10 ml. 4 probetas de 100 ml. Papel filtro 4 embudos 1 Cuba cromatografía I pulverizador de líquidos 2 equipos de soxhlet con sus soportes N- Butanol Etanol Metanol Cloroformo Sol. de acetato de Magnesio al 05% en metanol Hidróxido de amonio concentrado. Métodos 1. Preparación de extracto.Cinco gramos de material seco y pulverizado se somete a una extracción con Cloroformo en un equipo de soxhlet. El extracto es eliminado y el residuo vegetal seco es extraído del mismo modo con etanol de 96° por 20 minutos, filtrar del extracto y concentrar a pequeño volumen. 2. Preparación de la Fase Móvil Mezclar en la cuba cromatografía los siguientes solventes en las proporciones indicadas. N-Butanol: Etanol: Agua (50:10:40) 3. Preparación de la placa cromatrográfica Cortar placas cuadradas de 10 cm de lado, y cada placa marcada con lápiz para efectuar la aplicación del extracto en zonas de 1 cm. de ancho. Con ayuda de los capilares de vidrio, aplicar los extractos en la parte inferior de la placa a una cm. de 36 Farmacognosia I borde, hasta obtener zonas de aplicación intensa. Dejar secar y colocar la placa en la cuba con la fase móvil. 4. Desarrollo cromatográflco Dejar desarrollar hasta que el solvente migre a 1 cm. del borde superior. En ese momento retirar la placa de la cuba cromatográfica y dejar secar al medio ambiente. 5. Detección Las placas desarrolladas y secas pueden ser observadas bajo una lámpara de luz UV de 254 mm. Con la cual se detecta ias manchas correspondientes. Para una identificación más específica se puede utilizar vapores de amoniaco o una solución de acetato de magnesio al 05% en metanol. RESULTADOS Y DISCUSIONES.- 37
