Universidad Veracruzana Facultad: Bioanálisis Región Xalapa. Licenciatura: Química Clínica E.E: Inmunología Clínica Reporte de practica 1: Aglutinación directa Docente: María Teresa Croda Todd Integrantes: Alexis Caballero González Diego de Jesús Martínez Loeza Oscar Abraham Mendoza Salas Francisco Javier Ramos Morales Periodo: Agosto – Enero 2022-2023 Práctica #1: Aglutinación directa • Aplicación clínica o propósito de la prueba. Esta es una prueba que se realiza para comprobar la presencia de anticuerpos en la sangre, teniendo como propósito identificar previamente un microorganismo patógeno y la capacidad del individuo de actuar frente a este mismo. Algunos ejemplos de aglutinación directa son: ➢ Aglutinación de los eritrocitos del grupo A por antisueros antiA. ➢ Aglutinación de los eritrocitos RH positivos por el antisuero anti-D. ➢ Aglutinación del antígeno brucelar por anticuerpos anti-Brucella. Algunas pruebas como la de Cooms directo utilizan este mismo fundamento. • Fundamento. Las reacciones de aglutinación son una base fundamental en las técnicas inmunológicas, su principio se llega a basar en la reacción antígeno-anticuerpo, donde este tipo de técnicas se enfocarán en la detección de anticuerpos hacia un antígeno en específico, lo que a su vez ayudara a la investigación de posibles problemas con el sistema inmunológico, para llegar a detectar infecciones como a su vez la capacidad de respuesta del individuo ante está infección, al igual que la resistencia que se tenga contra esta enfermedad. En caso de que la prueba de aglutinación sea negativa nos dará indicios para poder descartar la sospecha de alguna infección. Las pruebas de aglutinación se puede realizar en dos fases siendo estas fases la directa e indirecta, pero en esta práctica solamente se determinará la aglutinación directa la cual se puede realizar en un tubo, portaobjeto o placa, aquí siempre entran las partículas microbianas las cuales en su mayoría se encuentran inactivas o muertas en una suspensión con el suero del paciente, el suero del paciente llega a poseer anticuerpos frente a esta bacteria, una forma de agregados visibles en el fondo del tubo, portaobjetos o en el fondo de la micro placa. • Insumos requeridos. Tipo de muestra: Suero Ag correspondiente (Salmonellas-Brucellas) -Pipeta automática -Placa de porcelana -Pipetas Pasteur -Varillas de madera -Centrífuga -Agitador mecánico • Procedimiento. 1.- colocar 20 uL de suero en cada uno de los círculos de la placa 2.- agregar una gota de antígeno correspondiente 3.- mezclas con ayuda de un aplicador, curando están de la mezcla en toda la superficie del círculo. 4.- situar la placa en un agitador mecánica de 80 a 100 repeticiones por minuto, durante un minuto 5.- examinar microscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación 6.- en caso de que de positivo se realizarán títulos con diluciones dobles. Rosa de bengala (Método semicuantitativo) 1.- colocar 50 uL de suero + una gota de reactivo de rosa de bengala 2.- mezclar con un aplicador 3.- agitar la placa en un agitador mecánico de 80 a 100 repeticiones por minuto, dura 4 minutos 4.- observar la presencia o ausencia de aglutinación por medio de una examinación microscópica. • Intervalos de referencia • Generalmente títulos de 1:40 ó 1:80 son sospechosos de enfermedad. Sólo títulos mayores de 1:80 pueden considerarse probatorios de diagnóstico de enfermedad cuando estén acompañados de la sintomatología clínica. Títulos mayores de 1:320, son concluyentes. • Como valor de orientación se considera internacionalmente 25 UI/mL como límite superior del margen de normalidad. Como los valores de referencia están sometidos a la influencia de numerosos factores que pueden variar en cada grupo analizado, cada laboratorio debe determinar su propio margen de referencia. Lectura Reacción negativa: Suspensión uniforme sin cambio visible alguno, tal como se presenta en el control negativo. Reacción positiva: Aglutinación débil o intensa, fácilmente visible macroscópicamente. Efectuar pruebas adicionales para confirmar la situación • Informe de resultados Se realizaron reacciones febriles y rosa de bengala con método de aglutinación directa. La técnica evaluada mostró un resultado negativo a la presencia de infección reciente por Salmonellas o Brucellas pues no apareció aglutinación, basándonos en la siguiente interpretación: Aglutinación directa: Positivo: aglutinación presente en placa. Negativo: no aparece aglutinación en placa. Aglutinación No Aglutinación Rosa de Bengala: Positivo: aglutinación presente en placa. Negativo: no aparece aglutinación en placa • Manejo de residuos químicos y/o biológico infecciosos Cabe aclarar que la separación de residuos biológicos deber de realizarse según sea el estado físico y su tipo, cuidando de que se disponga con guantes para el manejo de estos residuos, ya qué podría infectarse. Primero hay que desechar los objetos punzocortantes, en este caso serían las jeringas junto con las agujas, sean de vaccutainer o de cualquier otro tipo. Estos desechos van en los recipientes rígidos de polipropileno de color ROJO. De igual forma, van en la bolsa de color ROJO todos aquellos materiales que se hayan empleado para la toma de muestra o que estén infectados con material biológico, los cuales son las gasas, torundas, sanitas, etcétera. Aquí también se incluyen los materiales que se hayan utilizado para mezclar sustancias como por ejemplo los palos de madera o incluso los hisopos. Después de que se hayan manipulado todos los desechos hay que tirar nuestros guantes al bote de basura, para posteriormente lavarse las manos con agua y con jabón abundante. Luego de esto, hay que esterilizar el lugar donde estuvimos trabajando, ya que puede haber restos de residuos biológicos. Esto se hace con una solución de alcohol para desinfectar o también con cloro se puede realizar la limpieza. • Referencias bibliográficas 1. -Peréz, A. (s. f.). Técnicas de aglutinación. UNNE. Recuperado 20 de agosto de 2022, de https://exa.unne.edu.ar/bioquimica/inmunoclinica/documentos/Introduccion_T PN6.pdf 2. Perez, L. (2014, 24 septiembre). Prueba de Aglutinación. Slideshare. Recuperado 21 de agosto de 2022, de https://es.slideshare.net/AnclesPerez/prueba-de-aglutinacion-41834754 3. Aguilar García, V. (2004). VI. Reacciones de aglutinación. Mediagraphic. Recuperado 21 de agosto de 2022, https://www.medigraphic.com/pdfs/gaceta/gm-2004/gms043p.pdf de
