Resumen Estimación del tiempo de deposición de trazas con biomarcadores circadianos Una herramienta prospectiva y versátil para la reconstrucción de escenas del crimen

Resumen: Estimación del tiempo de deposición de trazas con
biomarcadores circadianos: Una herramienta prospectiva y versátil
para la reconstrucción de escenas del crimen
Introducción
Se sabe que la vinculación de muestras biológicas recolectadas en el lugar de los hechos con el
hecho delictivo y con la identificación de su donante es uno de los aspectos más relevantes para
las investigaciones (sino el más relevante). El artículo lo que plantea es que si bien la
identificación del donante se puede establecer exitosamente mediante el análisis de ADN, que es
una técnica ya aceptada y practicada por la comunidad científica hace muchos años, con lo que
no se cuenta es con una técnica fiable para la cronometría de las muestras biológicas forenses,
entonces, el objetivo de la investigación fue presentar un enfoque bioquímico utilizando las
hormonas circadianas para determinar el tiempo de deposición de algunas muestras biológicas
humanas.
En sí, la relevancia del estudio radica en que por medio de esa técnica se podría tener precisión
sobre en qué momento del día se depositó la muestra, lo que podría ayudar a confirmar o
generar duda respecto a la participación del individuo que se identifique por medio de ella.
Melatonina y cortisol
Bueno, como dije anteriormente, la investigación se basó en el estudio de las hormonas
circadianas, que vienen siendo la melatonina y el cortisol. Entonces, es súper sencillo, nosotros
nos regimos por los periodos de luz y oscuridad que se presentan durante las 24 horas del día,
esos periodos constituyen nuestro ritmo circadiano por medio de estas hormonas y otras que no
voy a mencionar porque no son parte del estudio. El caso es que las concentraciones de esas
hormonas varían dependiendo la hora del día, ya sea por la intensidad de la luz y la oscuridad.
Entonces, por ejemplo, la melatonina se va produciendo en muy pequeñas cantidades desde las
5-6 de la tarde, conforme pasan las horas va aumentando su concentración hasta alcanzar su
mayor pico masomenos a las 3 de la mañana, en cambio, el cortisol se va acumulando desde las
3 de la mañana y va aumentando su concentración hasta alcanzar su mayor pico a las 7 de la
mañana y a partir de ahí va a comenzar a descender su concentración poco a poco.
Materiales y métodos
Bueno, entonces lo que ellos hicieron fue recolectar las muestras biológicas que eran sangre y
saliva de varios individuos, entre hombres y mujeres con diferentes edades en diferentes
momentos del día para ver las concentraciones de esas hormonas, para estudiar la estabilidad de
esas hormonas y la biodegradación que tenían con el pasar del tiempo. Las muestras las
recolectaron en diferentes superficies, rugosas y lisas, que era algodón y Parafilm que es como
una especie de plaquita de vidrio que hay en los laboratorios para tener en cuenta si ese factor
incidía en las concentraciones de las hormonas, también guardaron las muestras de referencia en
tubos de ensayo sometidas a congelación, y algunas muestras que eran para estudio de
melatonina se mantuvieron en oscuridad y otras no para ver si los efectos de la luz cambiaban
las concentraciones. Ya en cuanto a los materiales pues como dije se utilizaron tubos de ensayo
para las muestras de referencia, el algodón, el Parafilm y para los ensayos de las
concentraciones de cortisol, melatonina y proteína total se utilizaron kits inmunoenzimaticos
ELISA (VENTAJA ECONÓMICA).
Las muestras biológicas utilizadas para el estudio fueron sangre y saliva de 6 individuos, de
hombres y mujeres entre 32 y 38 años de edad en diferentes momentos del día, para la
recolección de muestras desde las 11 de la noche hasta las 3 de la mañana se tuvo control de la
luz para evitar la supresión de la melatonina en los individuos. En cuanto al almacenamiento, las
muestras de referencia se almacenaron en tubos de ensayo, mientras que las muestras para el
estudio de la estabilidad y degradación de las biomoléculas se almacenaron en algodón y
parafilm. Un punto importante es que para un conjunto de las muestras depositadas en que eran
para estudio de la melatonina se tuvo control de la luz para evitar la degradación de la hormona,
el resto de las muestras se dejaron expuestas a luz natural. Por último, para los ensayos de
cortisol, melatonina y proteína total se utilizaron kits inmunoenzimaticos ELISA, lo cual era una
característica prometedora del estudio desde el punto de vista económico, ya que estos ensayos
son muy accesibles en el mercado y normalmente utilizados en los laboratorios.
Resultados
Hace un momento mencioné que además de ensayos para cortisol y melatonina hubo ensayos
para medir la proteína total en las muestras, este estudio se hizo con el fin de tener una
referencia o parámetro sobre las concentraciones normales de cortisol y melatonina en los
individuos. El resultado fue que todos los individuos tenían picos típicos de cortisol y de
melatonina a la hora de despertarse y en la última hora de la noche. (ESO FUE LLAMADO EN
EL ESTUDIO COMO EL PARÁMETRO DE NORMALIDAD). (Imágenes)
También se encontró que la proteína total en muestras secas y envejecidas como las
almacenadas en el algodón y el parafilm no varió con respecto a las muestras frescas en tubos de
referencia congelados. Por otro lado, la concentración de cortisol tuvo una disminución en
ambas muestras mientras que la melatonina no tuvo un descenso significativo y además se
obtuvieron valores similares para todos los conjuntos de muestras, independientemente de su
exposición a la luz. (Se determinó que la hormona de la melatonina seguía constante al ser
depositada aún estando bajo incidencia de luz natural).
En cuanto al análisis de los ensayos con la saliva, se encontró que establecer la concentración de
la proteína total fue inferior y más variable en comparación con la muestra de sangre, sin
embargo, se lograron generar perfiles circadianos para el cortisol y la melatonina. Asimismo, la
determinación de la concentración de proteínas en la saliva seca fue muy divergente, lo que hizo
poco exitoso su análisis. También mostró descenso significativo en cortisol y melatonina.
Debate
Se puede decir que sí se logró estimar el tiempo de deposición de la muestra biológica mediante
las hormonas circadianas, sin embargo, pues como dije anteriormente los resultados de estudio
sobre la saliva no fueron muy prometedores por la variación que hay en la proteína total de la
muestra y eso evitó que se pudieran estudiar los picos de melatonina y cortisol de forma
efectiva. Pero los resultados obtenidos del estudio de la sangre fueron muy exitosos, las
concentraciones de melatonina no disminuyeron significativamente durante el tiempo de
almacenamiento y no hubo variación entre las muestras expuestas a la luz y las que no. La
concentración de cortisol sí tuvo un descenso, aunque no estadísticamente significativo.
Entonces los autores sugieren que el uso de la técnica puede ser difícil si hay intervalos de
tiempo muy largos y se debe hacer una interpretación de resultados más estricta y obviamente
en conjunto con los demás EMP.
Limitaciones
Una de las limitaciones más evidente es que con la muestra de la saliva no se pudo establecer el
parámetro de normalización por la variación que había en la proteína total, entonces hasta que
no se pueda establecer un marcador proteico estable y constante durante 24 horas, no se
recomienda utilizar la técnica para aplicación forense de los biomarcadores circadianos.
Otra limitación es que para el estudio de la saliva se requiere una amplia cantidad de muestra, o
que algunos individuos tienen cronotipos extremos con perfiles significativamente desviados del
ritmo circadiano típico. También se puede incluir la relación que hay entre las concentraciones
de melatonina y la depresión o las concentraciones de cortisol con el trastorno de estrés
postraumático. Aunque todas estas limitaciones y relaciones siguen en constante investigación.