UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO FACULTAD DE MEDICINA HUMANA ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA BIOLOGIA CELULAR INTEGRANTES - RUIZ GUARNIZ, JOSSELINE ALEJANDRA TURNO/NRC DOCENTE MARTES 6PM/5784 DR. LENNIS REYNA LÓPEZ - TRUJILLO MONTOYA, VIVIANA VALENTINA - VALDEZ SILVA, NICOLLE DE LOS ANGELES - VELASQUEZ MOSTACERO, MELERYN CRISTY - ZUMAETA CASAS KATIUSKA JACKELINE TRUJILLO-PERÚ 2021 – 10 Gene Expression - ClinicalKey Gene Expression - ClinicalKey Gene Expression - ClinicalKey https://biotechmind.wordpress.com/2014/08/26/transcripcion-adn-arn-dna-rna-transcription/ Gene Expression - ClinicalKey Gene Expression - ClinicalKey Gene Expression - ClinicalKey https://study.com/academy/lesson/alternative-splicing-of-genes-definition-mechanismregulation.html ENLONGACIÓN https://study.com/academy/lesson/alternative-splicing-of-genes-definition-mechanismregulation.html https://study.com/academy/lesson/alternative-splicing-of-genes-definition-mechanismregulation.html https://study.com/academy/lesson/alternative-splicing-of-genes-definition-mechanismregulation.html https://www.agenciasinc.es/Noticias/El-splicing-alternativo-un-importante-mecanismo-en-cancer El ADN (gen) se va a transcribir de tal manera que forme varias cantidades de ARNm El BRCA es un oncogén supresor de tumores, se le relaciona al cáncer de mamá. • Cooper, G. M.; Hausman R.E.La Célula2014. 6° ed. Editorial Marban. • Hoja informativa Mutación en BRCA: Riesgo de cáncer y pruebas genéticas [Internet]. Instituto Nacional del Cáncer. Cancer.gov; 2018 [Citado 2021 Jun 22]. Disponible en: https://www.cancer.gov/espanol/cancer/causas-prevencion/genetica/hoja-informativa-brca • Etapas de la transcripción (artículo) | Khan Academy [Internet]. Khan Academy. 2021 [citado 2021 Jun 22]. Disponible en: https://es.khanacademy.org/science/biology/gene-expression-centraldogma/transcription-of-dna-into-rna/a/stages-of-transcription • https://www.facebook.com/sag.micro. Prokaryotic Transcription- Enzymes, Steps, Significance | Molecular Biology | Microbe Notes [Internet]. Microbe Notes. 2018 [citado 2021 Jun 22]. Disponible: https://microbenotes.com/prokaryotic-transcription-enzymes-steps-significance/ UNIVERSIDAD PRIVADO ANTENOR ORREGO FACULTAD DE MEDICINA HUMANA ESCUELA DE MEDICINA HUMANA ASINATURA: Biología Celular DOCENTE: Lennis Reyna López TRABAJO PRÁTICO: Las Células INTEGRANTES: - Ruiz Guarniz, Josseline Alejandra - Trujillo Montoya, Viviana Valentina - Valdez Silva, Nicolle De Los Angeles - Velasquez Mostacero, Meleryn Cristy - Zumaeta Casas Katiuska Jackeline TRUJILLO-2021 1. INTRODUCCIÓN: La reacción en cadena de la polimerasa, es un método de reacción química en cadena propuesta por investigador americano Kary Mullis. Esta técnica se basa en el aumento exponencial del ADN a partir de una muestra muy pequeña. Para la realización de esta reacción primero se debe conocer la secuencia de nucleótidos correspondiente a los extremos del fragmento que se desea amplificar, para diseñar los 2 oligonucleótidos sintéticos de DNA complementarios a las secuencias de sus extremos 3´. Esta técnica brindó avances importantes en las ciencias biomédicas. Debido a que ayudo a el diagnóstico de enfermedades o las aplicaciones terapéuticas que puede llegar a ofrecer.En el presente informe se dará a conocer la descripción del proceso por el cual se lleva a cabo esta reacción, los resultados obtenidos y cómo se pudieron observar, y también la importancia que reside en su aplicación a la biomedicina, nombrando y explicando algunas de sus aplicaciones. 2. OBJETIVO GENERAL: Describir los procesos, resultados y las aplicaciones de la PCR. 3. OBJETIVOS ESPECÍFICOS: -Determinar los procesos por los cuales se ve sometido el DNA y los reactivos que se utilizarán en la PCR para la multiplicación exponencial del fragmento inicial. Así como los métodos aplicados. -Mostrar los resultados obtenidos al final de la experimentación. -Demostrar la importancia de la PCR en la aplicación biomédica. 4. MATERIALES Y REACTIVOS: -Reactivos: • Muestra de DNA de interés • Cloruro de magnesio (cofactor de la polimerasa) • DNA polimerasa (Taq polimerasa) • Primers (forwards o reverse) • Desoxirribonucleótidos trifosfatos • Buffer, Buffer de carga • Sí hay abundante cantidad de CG se requieren coadyuvantes: Dimetilsulfóxido (DMSO), Glicerol, Formamida, Seroalbuminalobina (BSA) • Gel agarosa • Colorantes: gelenosianol o cromofenol, para el DNA: Bromuro de etidio -Materiales e Instrumentos: • Tubos de ensayo • Termociclador • Sistema de electroforesis 5. PROCEDIMIENTO: El procedimiento se resume en tres etapas para la amplificación del DNA que son las siguientes: la desnaturalización, la hibridación y la extensión. Estos tres procesos serán detallados a continuación. Sin embargo, previo a estos procesos, se tiene que colocar las muestras en los tubos de ensayo y prepararlas antes. Por este motivo primero se coloca a la DNA polimerasa en el termociclador a 94 °C por 1 a 5 minutos, esto se hace con el fin de la separación del anticuerpo de esta, ya que es muy común que las polimerasas comerciales vengan con su respectivo Ac. Luego de esto se puede iniciar con el proceso: Desnaturalización: Aquí se separan las hebras de DNA por la ruptura de los puentes de hidrógeno. Este proceso se realiza a una temperatura de 90-94°C durante 30 a 60 segundos. Si no se logra que el DNA se desnaturalice completamente se tiene que re naturalizar, cosa que dificulta la etapa de hibridación Hibridación: Aquí la temperatura se disminuye entre 30 y 60 °C durante 30 a 60 segundos nuevamente para permitir la unión de los cebadores, ocurriendo la alineación que permite la formación de enlaces de hidrógeno con la muestra de DNA Extensión: Aquí la DNA polimerasa va uniendo a los dNTPs, emparejándolos con la hebra que funciona como molde. Aquí la temperatura se eleva a 70 °C durante 30 a 60 segundos de nuevo. Este proceso, hablando esencialmente del proceso de amplificación del DNA, se puede repetir hasta 30 veces, siendo 30 ciclos que generan cantidades enormes de amplificaciones de DNA, aumentando exponencialmente por cada cantidad de ciclo 2n, n siendo la cantidad de ciclos. Finalmente, para llegar a visualizar los resultados se cargan las muestras en un sistema de electroforesis (gel agarosa) mezcladas con un buffer de carga con glicerol o sustancias que permitan que la sustancia no se disperse. Luego se añaden colorantes como el gelenosianol para teñir el DNA y este último migra al polo positivo por su carga negativa. Finalmente se tiñe al DNA con bromuro de tidio que se intercala en las hebras, que al estar en contacto con rayos ultravioletas libera fluorescencia. 6. RESULTADOS: 7. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN: Como pudimos observar en los resultados, cada secuencia de DNA obtenida puede ser comparada por el tamaño de pares de bases que se muestra a la izquierda, esto nos permite diagnosticar la presencia de patógenos, ya sean bacterianos o víricos con alta sensibilidad. Con todo esto se puede evidenciar la importancia de la PCR en la detección de elementos patógenos, como, por ejemplo, para la detección e identificación del virus de la inmunodeficiencia (VIH). 8. CONCLUSIÓN: -Se determinaron los procesos por los cuales se vio sometido el DNA y cada reactivo que se utilizó en la PCR. -Se mostraron los resultados de experimentación y los métodos que se utilizaron. -Se demostró la importancia del PCR, mostrando algunos casos en la aplicación biomédica. 9. BIBLIOGRAFÍA: • Alfonso calvo. Biología Celular Médica [internet]. España: S.A. ELSEVIER ESPAÑA; 2015]. Disponible en: https://drive.google.com/file/d/1ryMlSaClBgo6xCjJ4cvKLn8nV9zkEh Co/view CADENA A ARNm cadena A GGA-AUU-GUU-GAA-CAA-UGU-UGC-ACU-UCU-AUA-UGU-UCU-CUG-UAC-CAG-CUU-GAA-AAC-UACUGU-AAC Primera hebra de ADN de la cadena A: CCT-TAA-CAA-CTT-GTT-ACA-ACG-TGA-AGA-TAT-ACA-AGA-GAC-ATG-GTC-GAA-ATT-TTG-ATG-ACA-TTG Segunda hebra de ADN de la cadena A: GGA-ATT-GTT-GAA-CAA-TGT- TGC-AGT-TCT-ATA-TGT-TCT-CTG-TAC-CAG-CTT-TAA-AAC-TAC-TGT-AAC CADENA B ARNm cadena B UUC-GUG-AAU-CAG-CAU-CUA-UGC-GGA-UCC-CAC-UUA-GUU-GAA-GCU-UUA-UGG-UUA-GUU-UGUGGU-ACU-AAA-CCU-ACU-ACU-UAU-UUC-UUU-GGC-CGG-GAA-GGU Primera hebra de ADN de la cadena B AAG-CAC-TTA-GTC-GTA-GAT-ACG-CCT-AGG-GTG-AAT-CAA-CTT-CGA-AAT-ACC-AAT-CAA-ACA-CCATGA-TTT-GGA-TGA-TGA-ATA-AAG-AAA-CCC-GCC-CTT-CCA Segunda hebra de ADN de la cadena B TTC-GTG-AAT-CAG-CAT-CTA-TGC-GGA-TCC-CAC-TTA-GTT-GAA-GCT-TTA-TGG-TTA-GTT-TGT-GGT-ACTAAA-CCT-ACT-ACT-TAT-TTC-TTT-GGC-CGG-GAA-GGT
