Actas Odontológicas Especificidad de cinco colorantes detectores de caries Parodi Estellano, G. Especificidad de cinco colorantes detectores de caries The specificity of five caries detector dyes on cavity preparation: an in vitro assesment Autor Gustavo Parodi Estellano Profesor de Clínica de Cariología y Prevención, Facultad de Odontología, Universidad Católica del Uruguay. Asistente de Investigación, Facultad de Odontología, Universidad Católica del Uruguay. Ex Profesor Adjunto, Cátedra de Operatoria Dental II, Facultad de Odontología, Universidad de la República. Entregado para revisión: 01 de junio de 2007 Aceptado para publicación: 02 de julio de 2007 Resumen Se investigó in vitro la especificidad de cinco colorantes detectores de caries, (fucsina básica al 0.5% en solución hidroalcohólica; fucsina al 0.5% en propilenglicol; rojo ácido al 1% en propilenglicol; pigmento verde FD&C en solución acuosa de glicol y pigmento rojo D&C en base de glicol), utilizando dientes permanentes sanos y cariados. En los dientes cariados, los colorantes solo tiñeron dentina infectada, la cual pudo ser fácilmente diferenciada de la dentina afectada. En los dientes sanos todos los colorantes tiñeron una fina capa (menos de 0.5 mm) de dentina circumpulpar. La dentina sana coronaria no fue teñida y el límite amelo-dentinario solo lo fue parcialmente en dos oportunidades en cavidades de clase I. Palabras-clave: diagnóstico de caries; colorantes detectores. Abstract The specificity of five caries detector dyes, (0.5% basic fuchsin in hydro-alcoholic solution; 0.5% fuchsin in propylene glycol base; 1% acid red in propylene glycol base; FD&C dark green in an aqueous glycol base and F&C red in a glycol base), was investigated in vitro using extracted sound and carious permanent teeth. On carious teeth, the dyes stained only infected dentin, which could be easily differentiated from affected dentin. On sound teeth, all five dyes stained a thin layer (less than 0.5 mm) of circumpulpar dentin immediately adjacent to the pulp. The DEJ was partially stained in two Class I cavities and sound coronal dentin wasn´t stained at all. Key words: caries diagnosis; dyes for caries detection. V OLUMEN IV / N ÚMERO 1 / E NERO - J UNIO 2007 / 29 - 38 ISSN 1510-8139 29 Actas Odontológicas Especificidad de cinco colorantes detectores de caries Parodi Estellano, G. detectores de caries con respecto a: límite ameloLa eliminación de caries es un procedimiento dentinario, dentina circumpulpar y dentina sana. quirúrgico que apunta a la remoción de los tejiAdemás, como objetivo secundario se comparará dos dentarios afectados por la progresión de la la capacidad de los colorantes para diferenciar las enfermedad caries previo a la instalación de un capas de dentina cariada, (Davis, 1917; Fusayama material que restaure forma, función y estética. & Terashima, 1972). Hoy la odontología encara la enfermedad caries desde un modelo médico y se afilia al paradigma de Operatoria Dental Mínimamente MATERIALES Y MÉTODOS Invasiva, (Tyas et al, 2000; Mount & Ngo, 2000; Se utilizaron 57 terceros molares sanos, extraíDunn, 2001), que exige como requisitos primordos por razones ortodóncicas. Inmediatamente de diales conceptos de diagnóstico preciso y mínima la avulsión se colocaron en suero fisiológico y se intervención. Se ha demostrado que el diagnósticonservaron bajo refrigeración por un periodo co preciso de los tejidos infectados es muy difícil máximo de 4 días. Luego fueron divididos basado únicamente en criterios ópticos y táctiles, aleatoriamente en cuatro grupos: (Kidd et al,1989; Anderson & Charbeneau, 1985; El grupo A constó de 25 dientes que fueron corCadalfach et al, 2001), especialmente a nivel de tados longitudinalmente en dos mitades por mepregrado. A tal efecto se ha aconsejado el uso de dio de un disco de diamante, bajo refrigeración de colorantes dentinarios capaces de teñir en forma agua lo que resultó en 50 piezas. selectiva, diferenciando la dentina En el grupo B, 12 dientes se corinfectada de las dentinas afectada taron en dos planos, axial y y sana, utilizando una terminología Se ha demostrado oclusal, el axial aproximadamenacuñada por Davis en 1917. que el diagnóstico preciso te en la mitad de la corona en senEl Uruguay tiene una tradición tido V-L y el axial a diferentes prode utilización de colorantes de los tejidos infectados fundidades. dentinarios que se remonta a la es muy difícil basado En el grupo C, 12 dientes fuedécada del ’40 cuando en las clíron tallados con cavidades de clanicas de la Facultad de Odontoúnicamente en criterios se I, usando fresa de diamante logía se utilizaba Solución de montada en turbina bajo abundanLugol, (Moirano, 2006). A fines ópticos y táctiles, te spray de agua. La profundidad de los ’50 comenzó a utilizarse en especialmente a nivel fue de aproximadamente 1 mm en forma experimental la fucsina en dentina. solución hidroalcohólica, en 1963 de pregrado. En el grupo D, 8 dientes se fracse publican los fundamentos de su turaron longitudinalmente con un uso, (Turell, 1963) y más tarde se golpe de cincel luego de marcar el esmalte con un protocoliza el procedimiento, (Dell’Aqua,1971; disco de diamante. Turell,1976). Resumiendo, por casi 60 años el Además se utilizaron 23 dientes con caries de control colorimétrico ha sido de rigor en la ensedistinta entidad con el mismo protocolo de conñanza y la práctica de la odontología en Uruguay. servación. Sin embargo, se han presentado algunas objeLa tinción de los especimenes se realizó según ciones respecto al desempeño y por ende a la utilos protocolos de los siguientes colorantes: (Figulidad de los colorantes. (Kidd et al, 1989; ra 1) (Tabla 1) Mc.Comb, 2000: Kidd, 2004). Se han realizado Test. Fucsina al 0.5% en propilenglicolestudios que ponen en duda su especificidad en Pharmadent. dentina sana y especialmente en las zonas de denSable Seek. Colorante FD&C (Food, Drug and tina circumpulpar y en el límite amelo-dentinario, Cosmetic) en solución acuosa de glicol - Ultradent. (Yip et al, 1994; Demarco et al,1998; Ansari et Seek. Colorante rojo D&C (Drug and Cosmetic) al,1999; Kazemi et al, 2002; Boston&Liao, 2004). en base de glicol - Ultradent. Detector. Rojo ácido al 1% en propilenglicolOBJETIVOS Densell. El objetivo primario de este trabajo es investiPara estos colorantes el protocolo fue el siguiengar in vitro la especificidad de cinco colorantes te: los colorantes fueron aplicados por 10 segun- 30 ISSN 1510-8139 V OLUMEN IV / N ÚMERO 1 / E NERO - J UNIO 2007 / 29 - 38 Actas Odontológicas Especificidad de cinco colorantes detectores de caries Parodi Estellano, G. Tabla 1. Colorantes reveladores utilizados. No se observó tinción en la dentina sana con ningún colorante. Se observó tinción de una delgada capa (menor a 1 mm) de dentina circumpulpar con todos los colorantes. (Figuras 2a y 2b) En un caso en particular, dos colorantes, fucsina básica en propilenglicol (Test) y rojo ácido en propilenglicol (Detector), tiñeron un espesor mayor (aprox. 2 mm) de dentina circumpulpar. (Figura 3). En aquellos dientes en los que se extendió el protocolo de la fucsina básica en solución hidroalcohólica de 10 a 15 segundos, no se verificó aumento apreciable de la intensidad de tinción. (Figura 4) Figura 1. Algunos colorantes utilizados en la investigación. dos a las cavidades o cortes por medio de una pequeña torunda de algodón. Luego fueron lavados con abundante agua destilada por lo menos por 10 segundos y finalmente secados con aire comprimido. Además se utilizó otro colorante: Fucsina - Fucsina básica al 0.5% en solución hidroalcohólica - Pharmadent. Para este colorante se utilizaron los siguientes protocolos: a) secado de los especimenes, teñido por 10 segundos, lavado con agua destilada, luego con alcohol y nuevamente con agua destilada, (Turell 1976). b) idem, pero con 15 segundos de tinción. Grupo E: Para la segunda parte de este trabajo se utilizaron 23 dientes con caries de distinta entidad con el mismo protocolo de conservación. Estos dientes fueron seccionados longitudinalmente con la misma técnica y cada mitad fue teñida con un colorante distinto según protocolo. Luego de ser procesadas, todas las piezas fueron examinadas con un estereomicroscopio a 10X y fotografiadas digitalmente. Figura 2a. Tinción de la dentina circumpulpar con cuatro colorantes. De izquierda a derecha: rojo ácido en propilenglicol; fucsina en solución hidroalcohólica; fucsina en propilenglicol y pigmento verde FD&C en solución acuosa de glicol. RESULTADOS Grupo A: No se observó tinción del límite amelo dentinario con ningún colorante V OLUMEN IV / N ÚMERO 1 / E NERO - J UNIO 2007 / 29 - 38 Figura 2b. Pigmento verde FD&C y pigmento rojo F&C en base de glicol. ISSN 1510-8139 31 Actas Odontológicas Especificidad de cinco colorantes detectores de caries Parodi Estellano, G. Figura 3. Corte longitudinal de un diente sano sometido a dos colorantes. La mitad izquierda, rojo ácido en propilenglicol, a la derecha fucsina en propilenglicol. En este diente se aprecia un mayor espesor de dentina circumpulpar teñida. Figura 5a. Especificidad con respecto a dentina sana. Las paredes axiales y pulpares no se tiñen. Colorantes empleados: a la izquierda, fucsina en solución hidroalcohólica; a la derecha, rojo ácido en propilenglicol. Figura 5b. Especificidad con respecto a dentina sana. Colorante: pigmento rojo F&C en base de glicol. Figura 4. Diente sano teñido con fucsina básica en solución hidroalcohólica con protocolo normal y extendido a 15 segundos. No se aprecia aumento de la intensidad de la tinción. Grupo B: Salvo en dos casos puntuales, la dentina sana de las paredes axiales no se tiñó con ningún colorante, (Figuras 5a, 5b y 6). La pared pulpar tampoco se tiñó salvo en el caso en que la cercanía del corte a la cavidad pulpar provocó la exposición de ésta, (Figura 7) De los dos casos en que sí se tiñeron ambas paredes, en el primero, (Figura 8), el colorante fue fucsina en solución hidroalcohólica, (Fucsina). En el segundo se tiñó la pared axial y especialmente la pared pulpar en todo su espesor (hasta la cavidad pupar). El colorante fue fucsina en 32 Figura 6. Especificidad con respecto a dentina sana. Serie con pigmento verde FD&C a distintas profundidades. Figura 7. Serie con distintos colorantes. El especimen Nro 80 se tiñó con un colorante en su pared pulpar. Es de hacer notar que el tallado involucra la cavidad pulpar. ISSN 1510-8139 V OLUMEN IV / N ÚMERO 1 / E NERO - J UNIO 2007 / 29 - 38 Actas Odontológicas Especificidad de cinco colorantes detectores de caries Parodi Estellano, G. en esos especimenes fueron fucsina básica en solución hidroalcohólica, (Fucsina), (Figura 12a) y colorante rojo en base de glicol, (Seek), (Figura 12b). En ambos casos la tinción del LAD fue parcial. Grupo D: Dientes fracturados. En este grupo algunos colorantes tiñeron zonas de dentina sana con un color pálido y notorio, pero de cualquier manera fácilmente diferenciable de la intensidad del respectivo colorante al teñir dentina cariada.(Figuras 13 a y 13b ) Grupo E: Dientes con caries. En casi todos los casos los colorantes establecieron un límite neto y Figura 8. Especificidad cor respecto a dentina sana. El colorante , fucsina básica en solución hidroalcohólica tiñó ambas paredes de esta pieza hígida. Figura 10. Especificidad con respecto al límite amelo-dentinario. En la inmensa mayoría de los casos no se tiñe. Colorante: Pigmento verde FD&C en solución acuosa de glicol. Figura 11. Salvo en dos especimenes, las cavidades de clase I no se tiñeron con ningún colorante, En esta serie se usaron: pigmento verde FD&C en solución acuosa de glicol; pigmento rojo F&C en base de glicol y fucsina en solución hidroalcohólica por 10 y 15 segundos. Figura 9. Especificidad con respecto a dentina sana. El colorante, fucsina en propilenglicol tiñó esta pieza hígida, especialmente su pared pulpar en todo su espesor. propilenglicol, (Test). (Figura 9) En estos cortes no se observó en ningún caso tinción del LAD (Figura 10) Grupo C: Las cavidades de clase I no se tiñeron con ningún colorante, (Figura 11), salvo dos casos en que se ve una ligera línea que corresponde al límite amelo dentinario. Los colorantes usados V OLUMEN IV / N ÚMERO 1 / E NERO - J UNIO 2007 / 29 - 38 Figura 12a y 12b. Los colorantes no tiñeron el LAD salvo en dos casos en que se ve una ligera línea incompleta. Los colorantes usados en esos especimenes fueron fucsina básica en solución hidroalcohólica, y pigmento rojo en base de glicol. En ambos casos la tinción del LAD fue parcial. ISSN 1510-8139 33 Actas Odontológicas Especificidad de cinco colorantes detectores de caries Parodi Estellano, G. Figura 13a. La fucsina en solución hidroalcohólica tiñó muy ligeramente la dentina sana de estos ejemplares fracturados longitudinalmente. Figura 14a. Corte longitudinal de un molar con una pequeña cavidad cariosa oclusal. Se aprecia la extensión de la dentina pigmentada. Figura 13b. Dientes fracturados longitudinalmente con dentina sana muy ligeramente teñida con pigmento FD&C (arriba) y fucsina en propilenglicol, (abajo). Figura 14b. El mismo diente luego se ser sometido a dos colorantes: a la izquierda, fucsina en propilenglicol; a la derecha, rojo ácido en propilenglicol. Se puede apreciar la neta diferencia entre dentina infectada y afectada así como la correspondencia entre ambos colorantes. fácilmente diferenciable entre dos capas de dentina. Se encontró buena correspondencia entre los colorantes. (Figuras 14a y 14b). En una oportunidad, en un molar presentando caries crónica o detenida, dos colorantes fallaron en teñir y diferenciar las capas. (Figura 15). En dientes cariados en que se varió el protocolo para fucsina en solución hidroalcohólica llevando a 15 segundos la exposición al colorante, no se notó mayor intensidad de tinción, (Figura 16) DISCUSIÓN La dentina es un “composite biológico hidratado” que tiene una composición estimada de un 50% de fase mineral, un 40% de fase orgánica y un 10% de agua. Del total de la fase orgánica, el 90% en peso corresponde a colágeno, el cual es en su mayor parte tipo I y forma una red tridimensional mucho 34 más entrelazada que la del tejido óseo, con numerosos enlaces cruzados. La fase orgánica contiene además una gran cantidad de proteínas no colágenas, en su mayoría glicoproteínas ácidas (particularmente fosfoproteínas) y proteoglicanos, indispensables para inducir la nucleación de minerales y unirse al fosfato de calcio. El mineral de la fase inorgánica está compuesto por cristales de hidroxiapatita cálcica carbonatada que se localizan, o bien en los espacios entre las moléculas de colágeno o por fuera de ellas, (intra y/o extrafibrilar). Estos cristales pueden tener una morfología achatada o cilíndrica y sus dimensiones oscilan entre La zona del LAD 20 y 5 nm. Las propiedades mecánicas de la dentina son representa una estructura atribuidas a la densidad de compleja que une dos tejidos empaquetado de esas partículas minerales, (Kinney et al, 2001). disímiles en sus orígenes, Es necesario recordar alguen su histología y fisiología nas particularidades del colágeno para entender aspecy también en su función. tos de las alteraciones que su- ISSN 1510-8139 V OLUMEN IV / N ÚMERO 1 / E NERO - J UNIO 2007 / 29 - 38 Actas Odontológicas Especificidad de cinco colorantes detectores de caries Parodi Estellano, G. La otra zona conflictiva, la dentina circumpulpar, también representa una zona de menor mineralización. Existe allí una capa de predentina de espesor variable, que corresponde a zonas de dentinogénesis activa. Figura 15. Corte longitudinal de un diente con caries crónica. Ambos colorantes fallaron en diferenciar las capas. Sin embargo puede apreciarse la tinción de la dentina circumpulpar. (Izquierda colorante verde FD&C en solución acuosa de glicol; derecha pigmento rojo F&C en base de glicol). Figura 16. Corte longitudinal de un diente cariado teñido con fucsina básica en propilenglicol con el protocolo usual y el extendido. No se aprecia intensificación de la tinción. tres cadenas polipeptídicas de alrededor de 290 nm de largo, unidas entre si por puentes de hidrógeno y enlaces cruzados covalentes. Estas moléculas se sintetizan durante la dentinogénesis en el retículo endoplásmico del odontoblasto y son segregadas como una molécula de tropocolágeno en triple hélice. Cada molécula se ubica paralela a otra, solapándola en alrededor de un cuarto de su longitud para formar una microfibrilla de 4nm de diámetro, que a su vez se agregan para formar fibrillas y luego fibras que pueden variar entre 30 a 100 nm de diámetro. Esa disposición espacial de las fibrillas, combinadas con los espacios que quedan en los extremos de las sucesivas moléculas resulta en un bandeado característico, de una periodicidad de entre 60 y 67 nm dependiendo del estado de hidratación de la fibra, (Habelitz et al, 2002) Las imágenes SEM muestran que la mayoría de las fibras corren perpendiculares o ligeramente oblicuas a la dirección de los túbulos (Kinney et al 2001; Miguez et al 2004; Parodi,2005). (Fig 17) La alta resistencia de la fibra colágena a las tensiones, temperaturas y especialmente a los ácidos, se debe a la existencia de enlaces cruzados intermoleculares e interfibrilares. Dichos enlaces cruzados están compuestos por dihidroxilisilnorleucina, hidroxilisilnorleucina, hidroxinorleucina y dihidroxinorleucina, siendo los dos últimos precursores. Todos los colorantes utilizados Figura 17. Microscopía Electrónica de Barrido (MEB) de un túbulo dentinario cortado longitudinalmente. Se aprecia la trama colágena. La imagen muestra que la mayoría de las fibras corren perpendiculares o ligeramente oblicuas a la dirección del túbulo. establecieron límites precisos y fácilmente diferenciables entre dos capas de dentina. fre este tejido con la enfermedad caries, el envejecimiento y los procedimientos restauradores. La molécula de colágeno tipo I está compuesta por V OLUMEN IV / N ÚMERO 1 / E NERO - J UNIO 2007 / 29 - 38 ISSN 1510-8139 Al compararlos entre sí, hubo una correcta correspondencia entre ellos. 35 Actas Odontológicas Especificidad de cinco colorantes detectores de caries Parodi Estellano, G. La cromatografía de la denA pesar de estas características, tina sana demuestra un predoen la mayoría de los casos de El LAD no se tiñó minio de los enlaces cruzados este estudio in vitro, el LAD no completamente en ninguno sobre los precursores. Por el se tiñó. contrario, en la capa interna La otra zona conflictiva, la de los casos estudiados, (dentina afectada), se encuentra dentina circumpulpar, también un marcado viraje hacia los prerepresenta una zona de menor ya sea en cavidades de Clase I, cursores. Este viraje se considemineralización. Existe allí una cortes longitudinales o cortes ra reversible. La cromatografía capa de predentina de espesor de la capa externa, infectada y variable, que corresponde a en dos planos. considerada irreversiblemente zonas de dentinogénesis activa. dañada, revela que ambos, enSegún estudios realizados, en laces cruzados y precursores han disminuido noesta zona algunos colorantes serían capaces de teñir toriamente lo que indica un daño permanente en la dentina sana, aunque en una fina línea de menos la fibra colágena (Kuboki et al,1977; Nakornchai de 0.5 mm inmediatamente adyacente a la pulpa, et al, 2004 a,b). Por su parte la microscopía elec(Yip et al, 1999; Boston&Liao, 2004). También en trónica muestra que las fibras colágenas han pernuestro estudio, todos los colorantes tiñeron una dido su característica estructura en bandas (Ogushi/ fina zona de dentina circumpulpar. En términos prác& Fusayama, 1975) . ticos, sin embargo, profundidades de esa magnitud En esos estudios clásicos, Fusayama y sus colase alcanzarían solamente estando a punto de exboradores establecieron que es el colágeno desnaponer la pulpa, (Parodi et al, 2007). (Fig. 7, esp. turalizado de la capa de dentina necrosada o in80) fectada el que toma los colorantes. Por el contraCon respecto al grueso de la dentina sana, algurio, éstos no teñirían la dentina afectada cuyas finos estudios han mostrado una ligera tinción de la bras colágenas mantienen su integridad estructudentina recién cortada, (Demarco et al, 1998; ral, a pesar del viraje de algunos de los enlaces Kazemi et al, 2002). En nuestro estudio, este puncruzados a sus precursores. to no pudo ser dilucidado: la dentina sana no fue Este tejido tan especializado que es la dentina, teñida por ningún colorante en los cortes se une al esmalte en el límite amelo-dentinario. longitudinales, sin embargo la fucsina en sus dos Esta zona representa una estructura compleja que formulaciones en algunos casos tiñó paredes une dos tejidos disímiles en sus orígenes, en su axiales y pulpares sanas. (Figuras 8 y 9). histología y fisiología y también en su función. Por otra parte, algunos dientes en los cuales la Juega un rol crítico al ser la superficie de interacción dentina no fue cortada sino que fue fracturada, ameloblasto-odontoblasto durante la formación del tomaron los colorantes a baja intensidad, (Figuórgano dentario y luego volverá a ras 13a y 13b). Una explicación jugar un rol crítico en la integridad para esta variación podría surgir La dentina circumpulpar de ese órgano, (Marshall et al, de diferencias en la estructura 2003). Esta estructura está menos dentinaria producidas ya sea por tomó todos los colorantes mineralizada que el esmalte o la el corte con disco o la fractura. Debe considerados en este estudio, dentina, contiene una matriz orgátenerse en cuenta que cualquier acnica mayor y muy posiblemente ción sobre la dentina con instrumenen una fina capa de esté asociada a la primera capa de tos de desgaste va a producir cantidentina mineralizada, llamada dendades variables de barrillo aproximadamente medio tina de manto. En esta zona tan pardentinario, lo que no ocurriría en las milímetro de espesor, ticular, el esmalte y la dentina essuperficies fracturadas. De cualquier tán unidos por fibrillas paralelas de manera, el punto no es claro y por lo que la evaluación colágeno tipo I, de 80-120 nm de ameritaría estudios posteriores. de su efecto a tales diámetro que por un lado se inserLas capas de dentina afectada e tan directamente en el mineral del profundidades debe realizarse infectada fueron fácilmente diferenesmalte y por el otro se unen al ciadas por los todos los colorantes con mucha precisión. entretejido fibrilar de la trama orprobados, estableciendo una difegánica dentinaria, (Lin et al, 1993). rencia nítida y precisa. 36 ISSN 1510-8139 V OLUMEN IV / N ÚMERO 1 / E NERO - J UNIO 2007 / 29 - 38 Actas Odontológicas Especificidad de cinco colorantes detectores de caries Parodi Estellano, G. CONCLUSIONES Todos los colorantes utilizados establecieron límites precisos y fácilmente diferenciables entre dos capas de dentina. Al compararlos entre sí, tomando en consideración mitades homólogas de un mismo diente, hubo una correcta correspondencia entre ellos. Con respecto a dentina sana, ninguno de los 5 colorantes utilizados tiñó los cortes longitudinales, pero la fucsina en sus dos formulaciones fue capaz de teñir paredes sanas en dos casos puntuales. El LAD no se tiñó completamente en ninguno de los casos estudiados, (90), ya sea en cavidades de Clase I, cortes longitudinales o en dos planos. En dos casos puntuales se tiñó ligeramente y en forma incompleta. Por su parte, la dentina circumpulpar tomó todos los colorantes considerados en este estudio, en una fina capa de aproximadamente medio milímetro de espesor. Como conclusión se infiere que, bajo las condiciones de este estudio in vitro, los colorantes dentinarios representan una ayuda válida para la diferenciación y la eliminación de la dentina infectada ya que en la inmensa mayoría de los casos no tiñen estructuras sanas, especialmente en la zona del LAD. Por otra parte, al teñir una fina línea del dentina circumpulpar, la evaluación de su efecto a tales profundidades debe realizarse con mucha precisión. AGRADECIMIENTOS A los Dres. Raúl Presto, Lía Villamil, Laura Bezensoni, Luis Arrospide, José Crestanello, Claudio Fernández, por las piezas dentarias utilizadas para este estudio in vitro . A VK Import, por los colorantes gentilmente cedidos. REFERENCIAS Anderson MH, Charbeneau GT. (1985) A comparison of digital and optical criteria for detecting carious dentin. J Prosthet Dent;53:643-646 Ansari G, Beeley JA, Reid JS, Foye RH. (1999) Caries detector dyes–an in vitro assessment of some new compounds. 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