OPU y FIV Juan David Arias Castellanos Cristian Sebastian Estupiñan Mendivelso ¿QUÉ ES? • La FIV consiste en realizar el proceso de fecundación fuera del tracto genital femenino (específicamente en laboratorio). • Se basa en la obtención de las gametas, la unión de las mismas para la producción de lo que llamamos embriones y finalmente, la transferencia del embrión a una hembra receptora de cualquier mérito genético para que lo geste y permita su nacimiento. MÉTODOS PARA LA RECOLECCIÓN DE OVOCITOS Recolección y transporte de los ovarios desde el matadero. • Se realiza a partir de hembras sacrificadas en el matadero, mediante la obtención de sus ovarios y la aspiración de los folículos con un diámetro comprendido entre 3 y 6 mm. OPU (Ovum pick-up) • Técnica de aspiración folicular transvaginal guiada por ultrasonografía • Propuesta por Callessen et al. en 1986, en Dinamarca. • Ganado vacuno en Holanda (Pieterse et al., 1988) • Empleada de forma rutinaria en reproducción asistida en 1994 (Kruip et al. 1994) Aumento del número de embriones y crías por donante (100 embriones /vaca/año, 50 terneros /vaca/año) Usada en: cíclicas, no cíclicas, durante el primer tercio de la gestación, en las que no responden a estímulos hormonales, en animales viejos con desórdenes reproductivos de origen no genético (Galli et al., 2001) y en terneras y novillas prepúberes a partir del 6 - 8 mes de edad (Taneja et al., 2000) Material genético de origen conocido Mayor descendencia posible de animales con alto valor genético y acelerar los procesos de selección y mejora animal. Metodología y técnica Tranquilización: xilacina 2% IM Procaína 2% Vía epidural Vaciamiento del recto, la limpieza y desinfección de la vulva y área perineal Introducción del transductor en la vagina, lubricado y protegido por una cubierta sanitaria de látex Ovarios se posicionan vía rectal aspiración de cada 3-4 folículos se realizará un lavado del fluido folicular en la aguja de aspiración y en el sistema de recolección con: heparina sódica (2’2 UI/ml) y suero fetal bovino (1%) El fluido obtenido de cada animal será inmediatamente filtrado, se pasará a una placa de Petri, en un estereomicroscopio se localizaran y evaluaran morfológicamente los complejos cumulos-ovocitos aspirados - Categoría I: Ovocitos con más de tres capas de células de cúmulo compactas y con citoplasma homogéneo uniformemente granulado. - Categoría II: Ovocitos con menos de tres capas de células del cúmulo y citoplasma generalmente homogéneo. - Categoría III: Ovocitos con una sola capa de células del cúmulo y citoplasma de aspecto irregular con áreas oscuras. - Categoría IV: Ovocitos denudados. - Categoría V: Ovocitos madurados in vivo, con cúmulo expandido. Factores que afectan 1) Factores técnicos: Geometría de la aguja y la presión del vacío. 2) Factores biológicos: Animal donante, pre-estimulación con FSH y frecuencia de la OPU y la experiencia del operador. PRODUCCIÓN DE EMBRIONES • El proceso de producción in vitro puede dividirse en tres pasos: - Maduración de ovocitos - Fecundación de ovocitos maduros - Cultivo de embriones MADURACIÓN DE OVOCITOS • “La maduración ovocitaria es un fenómeno complejo, durante el cual el ovocito progresa desde el estadio de profase de MI hasta el de MII (maduración nuclear) FECUNDACIÓN DE LOS OVOCITOS • Consiste en incubar los óvulos madurados con espermatozoides vivos y móviles durante un periodo de 6 a 24 horas. CULTIVO DE EMBRIONES • Embriones de 4 o más células son cambiados del medio de fecundación a un medio de cultivo embrionario donde continúan su división celular hasta llegar a mórulas y blastocistos. Co-cultivo Definidos-no definidos No secuenciales Secuenciales TRASFERENCIA DE EMBRIONES • En la actualidad se transfiere por la vía no quirúrgica a través del cuello del útero depositando directamente el embrión en el cuerno ipsilateral donde se encuentra ovulando la receptora. GRACIAS!! Bibliografía • https://www.arbiotech.com.mx/2020/02/26/tecnica-de-puncion-folicularovum-pick-up-opu-en-bovinos/ • https://www.researchgate.net/publication/260359949_Ovum_Pick_Up_OPU_ en_bovinos_Aplicaciones_en_Biotecnologia_de_la_Reproduccion • https://dspace.ucuenca.edu.ec/bitstream/123456789/3053/1/mv170.pdf • http://www.simposiotorozafra.org/index.php?codigo=522 • http://web.uchile.cl/vignette/avancesveterinaria/CDA/avan_vet_simple/0,14 23,SCID%253D8629%2526ISID%253D424%2526PRT%253D8625,00.html#:~:te xt=Tradicionalmente%20se%20han%20usado%20para,y%20col.%2C%201989) %2C • http://manualbiotecnologiareproductiva.blogspot.com/p/fert.html • https://es.slideshare.net/yaelfili/fertilizacin-in-vitro-en-bovinos
