OPU y FIV
Juan David Arias Castellanos
Cristian Sebastian Estupiñan Mendivelso
¿QUÉ ES?
•
La FIV consiste en realizar el proceso de fecundación fuera del
tracto genital femenino (específicamente en laboratorio).
•
Se basa en la obtención de las gametas, la unión de las mismas para
la producción de lo que llamamos embriones y finalmente, la
transferencia del embrión a una hembra receptora de cualquier
mérito genético para que lo geste y permita su nacimiento.
MÉTODOS PARA LA RECOLECCIÓN DE
OVOCITOS
Recolección y transporte de los ovarios desde el matadero.
•
Se realiza a partir de hembras sacrificadas en el matadero,
mediante la obtención de sus ovarios y la aspiración de los folículos
con un diámetro comprendido entre 3 y 6 mm.
OPU (Ovum pick-up)
• Técnica de aspiración folicular transvaginal guiada por ultrasonografía
• Propuesta por Callessen et al. en 1986, en Dinamarca.
• Ganado vacuno en Holanda (Pieterse et al., 1988)
• Empleada de forma rutinaria en reproducción asistida en 1994 (Kruip et al.
1994)
Aumento del número de embriones y crías por donante (100 embriones
/vaca/año, 50 terneros /vaca/año)
Usada en: cíclicas, no cíclicas, durante el primer tercio de la gestación, en las que
no responden a estímulos hormonales, en animales viejos con desórdenes
reproductivos de origen no genético (Galli et al., 2001) y en terneras y novillas
prepúberes a partir del 6 - 8 mes de edad (Taneja et al., 2000)
Material genético de origen conocido
Mayor descendencia posible de animales con alto valor genético y acelerar los
procesos de selección y mejora animal.
Metodología y técnica
Tranquilización: xilacina 2% IM
Procaína 2% Vía epidural
Vaciamiento del recto, la limpieza y desinfección de la vulva y área perineal
Introducción del transductor en la vagina, lubricado y protegido por una cubierta
sanitaria de látex
Ovarios se posicionan vía rectal
aspiración de cada 3-4 folículos se realizará un lavado del fluido folicular en la
aguja de aspiración y en el sistema de recolección con: heparina sódica (2’2
UI/ml) y suero fetal bovino (1%)
El fluido obtenido de cada animal será inmediatamente filtrado, se pasará a una
placa de Petri, en un estereomicroscopio se localizaran y evaluaran
morfológicamente los complejos cumulos-ovocitos aspirados
- Categoría I: Ovocitos con más de tres capas de células de cúmulo compactas y con citoplasma
homogéneo uniformemente granulado.
- Categoría II: Ovocitos con menos de tres capas de células del cúmulo y citoplasma generalmente
homogéneo.
- Categoría III: Ovocitos con una sola capa de células del cúmulo y citoplasma de aspecto irregular
con áreas oscuras.
- Categoría IV: Ovocitos denudados.
- Categoría V: Ovocitos madurados in vivo, con cúmulo expandido.
Factores que afectan
1) Factores técnicos:
Geometría de la aguja y la presión del vacío.
2) Factores biológicos:
Animal donante, pre-estimulación con FSH y frecuencia de la OPU y la
experiencia del operador.
PRODUCCIÓN DE EMBRIONES
•
El proceso de producción in vitro puede dividirse en tres pasos:
- Maduración de ovocitos
- Fecundación de ovocitos maduros
- Cultivo de embriones
MADURACIÓN DE OVOCITOS
•
“La maduración ovocitaria es un fenómeno complejo, durante el
cual el ovocito progresa desde el estadio de profase de MI hasta el
de MII (maduración nuclear)
FECUNDACIÓN DE LOS OVOCITOS
•
Consiste en incubar los óvulos madurados con espermatozoides
vivos y móviles durante un periodo de 6 a 24 horas.
CULTIVO DE EMBRIONES
•
Embriones de 4 o más células son cambiados del medio de
fecundación a un medio de cultivo embrionario donde continúan su
división celular hasta llegar a mórulas y blastocistos.
Co-cultivo
Definidos-no definidos
No secuenciales Secuenciales
TRASFERENCIA DE EMBRIONES
•
En la actualidad se transfiere por la vía no quirúrgica a través del
cuello del útero depositando directamente el embrión en el cuerno
ipsilateral donde se encuentra ovulando la receptora.
GRACIAS!!
Bibliografía
• https://www.arbiotech.com.mx/2020/02/26/tecnica-de-puncion-folicularovum-pick-up-opu-en-bovinos/
• https://www.researchgate.net/publication/260359949_Ovum_Pick_Up_OPU_
en_bovinos_Aplicaciones_en_Biotecnologia_de_la_Reproduccion
• https://dspace.ucuenca.edu.ec/bitstream/123456789/3053/1/mv170.pdf
• http://www.simposiotorozafra.org/index.php?codigo=522
• http://web.uchile.cl/vignette/avancesveterinaria/CDA/avan_vet_simple/0,14
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xt=Tradicionalmente%20se%20han%20usado%20para,y%20col.%2C%201989)
%2C
• http://manualbiotecnologiareproductiva.blogspot.com/p/fert.html
• https://es.slideshare.net/yaelfili/fertilizacin-in-vitro-en-bovinos
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