ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DEL CHIMBORAZO
FACULTAD: CIENCIAS
CARRERA: INGENIERÍA AMBIENTAL
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL
Nombre: Kiara Castillo Charcopa
Curso: 4to A Ingeniería Ambiental
Código: 225
2
:
Las enfermedades causadas por hongos en plantas son una
de las preocupaciones de mayor consideración en la
producción agrícola.
• Agar PDA
• Agua destilada
• Hipoclorito al 2%
Se han empleado alternativas como la “regulación
biológica” y se refieren al uso de microorganismos vivos,
nativos o introducidos, naturales o modificados
genéticamente, para el control de patógenos de plantas.
(Patiño, 2018)
• Agua destilada
• Hipoclorito al 2%
• Hipoclorito
sodio al 2 %
• Cámara
Húmeda
• Incubadora
de
• Muestra
vegetal
• Cajas Petri de
vidrio
• 1 Bisturí
Petri de
•• 1Cajas
lupa
• 1vidrio
porta y cubre
objetos
• 1 Lupa
• 1 porta y
cubre objetos
• 1 Bisturí
• Microscopio
• 1 Porta y
cubre objetos
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LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL
1.Escoger una muestra de planta fresca y rotular la
sintomatología y tipo de la planta.
2.Hacer una primera observación con una lupa, para ver
si se puede identificar el tipo de agente que causa este
tipo de sintomatología o si se debe hacer otro tipo de
estudio.
4.Dentro de una cámara de flujo laminar purificar el
aire, obteniendo un ambiente estéril para el material
que se desea cultivar.
3. La muestra se pone dentro de una cámara húmeda o
una campana de vidrio, que la mantiene en condiciones
propicias para que el patógeno prospere y se desarrolle.
5.Aislar el patógeno que afecta a la planta, haciendo
un corte pequeño en la zona de transición de la
muestra, es decir la mancha negra y el halo semi
amarillento de la hoja.
6.La sección cortada de muestra la lavamos durante
30 segundos en hipoclorito al 2%, para eliminar el
resto de partículas presentes sobre la hoja.
8.Secar la sección cortada de la muestra con papel de
cocina previamente esterilizado en autoclave. Es para
asegurar que la muestra a cultivarse tenga solo la
presencia del patógeno.
9.Luego a la muestra se la vuelve a cortar en diferentes
secciones y se la pone dentro de una caja Petri con agar
papa bien rotulada
12.Sacar una porción pequeña y ponerla en un
portaobjeto. Luego ver la muestra a detalle en un
microscopio e identificar el patógeno que causa esta
sintomatología para posterior recomendar maneras de
controlarlo.
7.Luego de hacer esa desinfección, pasamos la sección
cortada en dos enjuagues consecutivos de agua destilada
por 30 segundos cada una.
10.Una vez que se tiene la placa con el patógeno, se la
pone dentro de una estufa, que le brinda las condiciones
necesarias para que el patógeno se manifieste.
11.Después de realizar la siembra del patógeno en el
agar papa, se debe Esperar de 7 a 15 días para ver si
hubo crecimiento en la placa. (I. Montecarlo, 2019)
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LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL
INTERACCIONES ENTRE MACROMICETOS (IZQUIERDA) Y HONGOS FITOPATÓGENOS (DERECHA)
a. Inhibición al punto de contacto (TPI) b. Inhibición a la distancia (DI) entre c. Reemplazo después de inhibición a la
entre
Psilocybe
sp.
UPB6
y Stereum sp. y Moniliophthora roreri CH84 distancia (RPLDI) entre Xylaria sp. CH3 and
Moniliophthora roreri en PDA
en ST
Monilinia sp. en PDA
d. Reemplazo después de inhibición al e. Entremezcla parcial mutua (PMI) entre
punto de contacto (RPLTPI) entre Agrocybe sp. UPB1 y Rhizoctonia sp. en
Xylaria sp. CH3 y Fusarium oxysporum PDA
en PDA
f. Reemplazo después de inhibición a la
distancia (RPLDI) entre Agrocybe sp. UPB1
y Rhizoctonia sp. en ST donde el hongo
fitopatógeno crece sobre el macromiceto.
Las figuras son representativas de todas las
repeticiones del experimento.
(Patiño, 2018)
1. ¿Por qué se usa el medio de cultivo PDA en los hongos?
El PDA o Papa Dextrosa Agar, es un medio muy usado porque sirve para aislar todo tipo de hongos. EL
PDA tiene la infusión de papa como fuente de almidones y la dextrosa como la base para el crecimiento
de hongos y levaduras. El bajo pH (3.5) evita el crecimiento de las bacterias (PROBIOTEK, 2017).
La base del medio es altamente nutritiva y permite la esporulación y la producción de pigmentos. Los
carbohidratos y la infusión de papa promueven el crecimiento de mohos y levaduras, y el agar es
adicionado como agente solidificante. El pH debe ser ajustado a aproximadamente 3,5 ± 0.1 con ácido
tartárico al 10 %, para inhibir el crecimiento bacteriano. (Pérez, 2013)
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2. ¿Por qué se usa el azul de lactofenol en hongos?
El azul de lactofenol o azul de algodón como es un preparado con propiedades de colorante simples, es
utilizado en laboratorios clínicos para colorear principalmente estructuras fúngicas como, hifas, tubos
germinativos y esporas. La concentración de sus componentes hace que sea ideal para teñir a las
estructuras fúngicas, debido a que el fenol elimina al microbiota bacteriano acompañante, mientras que el
ácido láctico genera una película protectora alrededor de la estructura fúngica. Finalmente, el azul de
anilina tiene afinidad para adherirse a las estructuras del hongo. (Gil, 2019)
3. ¿Por qué es necesario ver a los hongos en el microscopio?
Es necesario ver a los hongos en el microscopio, debido a que se lo utiliza para detectar el tipo de forma
reproductiva (esporas) que estos tienen, además de su forma, tamaño, agrupamiento, color, etc. También
permite ver y describir las características de las hifas, la presencia o ausencia de tabiques, grosor, hifas en
raqueta, hifas en espiral. Tal observación puede realizarse desde el fondo hasta la parte superior de la
colonia. ya que permite manejar y observar la especie sin modificar su desarrollo. (MICOLOGIA, 2017)
Bibliografía
Gil, M. (2019). LIFEDER. azul de lactofenol. Obtenido de https://www.lifeder.com/azul-de-lactofenol/
I. Montecarlo. (2019). ¿Plantas enfermas? Cómo preparar muestras para el laboratorio [archivo de video].
Recuperado el Junio de 2020, de https://www.youtube.com/watch?v=9_dYwJYKmmU
MICOLOGIA. (2017). MICOLOGIA. MICROBIOLOGIA AMBIENTAL. Obtenido de
http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/microambiental/wp-content/uploads/2016/08/TP-8-Micolog%C3%ADa.pdf
Patiño, M. (12 de Octubre de 2018). ACTIVIDAD BIOCONTROLADORA IN VITRO DE MACROHONGOS. Obtenido
de https://revistas.unal.edu.co/index.php/actabiol/article/view/75303
Pérez, D. (2 de Mayo de 2013). UNIVERSIDAD DE CUENCA. Generalidades del maiz. Obtenido de
http://dspace.ucuenca.edu.ec/bitstream/123456789/479/1/TESIS.pdf
PROBIOTEK. (2017). Productos y Equipos Biotecnológicos. Agar de Dextrosa y papa. Obtenido de
https://www.probiotek.com/productos/reactivos/medios-de-cultivo-reactivos/agar-de-dextrosa-y-papa/
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