COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 1. FECHA DE PROXIMA REVISIÓN 2017-02-17 Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 1 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 OBJETIVO Definir los criterios mínimos para llevar a cabo actividades de validación interna o confirmación de métodos que involucren mediciones fisicoquímicas y físicas cuantitativas y cualitativas, para presentar evidencia objetiva de que estos se pueden aplicar correctamente antes de utilizarlos para los ensayos analíticos. 2. ALCANCE Este documento debe ser aplicado por el personal de los laboratorios de ensayo aspirantes a terceros autorizados ante la COFEPRIS, para la validación interna o confirmación de los métodos fisicoquímicos volumétricos, gravimétricos, potenciométricos, espectrofotométricos, cromatográficos y pruebas físicas empleados en el análisis de agua, alimentos, juguetes, cerámicas, bebidas alcohólicas y no alcohólicas entre otros y, es factible establecer no conformidades con base en los criterios descritos en el mismo. 3. DEFINICIONES 3.1 ANALITO: Componente específico de una muestra, a medir en un análisis. 3.2 BLANCO DE REACTIVOS: Reactivos usados durante el proceso analítico (incluyendo los solventes usados en la extracción o disolución) los cuales son analizados para garantizar que la medición no es influenciada por los materiales utilizados durante el análisis. CONTROL DE EMISION Nombre Fecha y Firma Elaboró: Revisó: Autorizó: Guillermo Vega Rodríguez Raúl Zavala Morales Rosa María Soberanes Duran COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 2 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 3.3 BLANCO DE MUESTRA: Son matrices que no contienen el analito de interés. Son difíciles de obtener pero son necesarios para estimar las interferencias que pudieran encontrarse durante el análisis de las muestras de prueba. 3.4 CONFIRMACIÓN DEL MÉTODO: Evidencia objetiva para demostrar que al aplicar un método normalizado, se cumple con las especificaciones del mismo y se cuenta con la competencia técnica para realizarlo adecuadamente tomando en consideración sus propias instalaciones, equipo y personal. Tiene como objetivo, el comprobar que el laboratorio domina el método normalizado y lo utiliza correctamente. 3.5 CRITERIOS DE ACEPTACIÓN: Parámetros bajo los cuales el resultado de una prueba será considerado aceptable. 3.6 CURVA DE CALIBRACION: Es la representación gráfica de la señal medida como una función de cantidad del analito. 3.7 INCERTIDUMBRE: Estimación que caracteriza el intervalo de valores, dentro de los cuales se encuentra el valor convencionalmente verdadero de la magnitud medida. 3.8 INFORME DE CONFIRMACIÓN O VALIDACIÓN: Es en documento en el que los registros, los resultados y la evaluación completa del proceso de confirmación o validación están ensamblados y resumidos. 3.9 INTERVALO DE CONFIANZA: Intervalo en torno al valor estimado que contiene el valor real con una probabilidad determinada. 3.10 INTERVALO DE TRABAJO: Intervalo comprendido entre las concentraciones superior e inferior (incluyendo dichas concentraciones) y para las que se ha demostrado que el analito es cuantificado con un nivel satisfactorio de repetibilidad, recuperación y linealidad. 3.11 INTERVALO LINEAL: Es la capacidad de un método analítico para dar resultados que son directamente proporcionales a la concentración del analito dentro de un intervalo dado. COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 3 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 3.12 LIMITE DE CUANTIFICACIÓN: Es la concentración más baja a la cual el analito puede cuantificarse con una precisión y veracidad aceptables bajo las condiciones experimentales establecidas. 3.13 LIMITE DE DETECCIÓN: Es la concentración más baja a la cual puede detectarse el analito pero no necesariamente cuantificarse bajo las condiciones experimentales establecidas. 3.14 METODO NORMALIZADO: Proceso de medición robusto donde pequeñas variaciones en el procedimiento no deben producir de forma imprevista grandes variaciones en los resultados. 3.15 METODO NO NORMALIZADO: Método alternativo que demuestra o estima el mismo analito tal cual se mide utilizando el método normalizado. 3.16 MUESTRA ADICIONADA: Porción representativa del material a evaluar, a la que se le adicionan cantidades conocidas del analito de interés. 3.17 PARAMETRO DE DESEMPEÑO: Parámetro específico a evaluar en una confirmación o validación interna del método. 3.18 PRECISIÓN INTERMEDIA: Grado de concordancia entre resultados analíticos individuales, cuando el procedimiento se aplica repetidamente a diferentes porciones de una muestra homogénea por días, analistas o instrumentos diferentes, usando el mismo método. Es un parámetro cuantitativo para evaluar la precisión. 3.19 PROTOCOLO DE CONFIRMACIÓN O VALIDACIÓN: Documento que describe las actividades para llevar a cabo la confirmación o validación, incluyendo los criterios de aceptación para la aprobación del método de prueba. 3.20 RECUPERACIÓN: Cantidad del analito recuperada cuando la muestra de prueba es conducida a través del método analítico completo. Es un parámetro cuantitativo para evaluar la exactitud. COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 4 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 3.21 REPETIBILIDAD: Grado de concordancia entre resultados analíticos individuales, cuando el procedimiento se aplica repetidamente a diferentes porciones de una muestra homogénea por un solo analista, usando los mismos instrumentos y método en intervalos cortos de tiempo. 3.22 RESPUESTA ANALÍTICA: Lectura obtenida al aplicar un método analítico, como pueden ser el área o altura del pico en un cromatograma, lectura de absorbancia, cuentas de iones en un Espectro de Masas, lectura en mV, mL gastados en volumetría, diferencia de peso en un gravimétrico, entre otros. 3.23 RESULTADO DE ENSAYO: Valor de un mensurando obtenido tras la realización de un método de ensayo específico. 3.24 ROBUSTEZ: Es una medida de la efectividad del método analítico de que tan buen desempeño mantiene aún sin una implementación perfecta. 3.25 SELECTIVIDAD: Es la capacidad de un método analítico para medir solamente lo qué se pretende que se mida. 3.26 SENSIBILIDAD: Es el cambio en la respuesta del instrumento que corresponde a un cambio en la concentración del analito. 3.27 SESGO: Es la diferencia entre el valor promedio obtenido de los resultados de prueba con respecto a un valor de referencia aceptado o conocido. Es un parámetro cuantitativo para evaluar la exactitud. 3.28 VALIDACIÓN INTERNA: Es el proceso que establece, mediante estudios de laboratorio, que las características de desempeño del método, satisfacen los requisitos para su aplicación analítica COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 5 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 4. DOCUMENTOS APLICABLES 4.1 AOAC. Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods for Dietary Supplements and Botanicals. 2013. 4.2 CENAM. Guía para estimar la incertidumbre de medición. 2004. 4.3 Center for Drug Evaluation and Research (CDER) Reviewer. Guidance Validation of Chromatographic Methods. FDA 1994. 4.4 Directiva 96/23/CE. Funcionamiento de los Métodos Analíticos y la Interpretación de los Resultados. Agosto 2002. 4.5 Document No. SANCO/10684/2009. Method Validation and Quality Control Procedures for Pesticide Residues Analysis in Food and Feed. National Food Administration. 4.6 Entidad Mexicana de Acreditación. Manual de Procedimientos. Criterios de Aplicación de la Norma NMX-EC-17025-IMNC-2006/ISO/IEC 17025:2005. MP-FE005-10. 2014. 4.7 Entidad Mexicana de Acreditación. Política de incertidumbre de mediciones MP-CA005-05. 2013. 4.8 Eurachem/CITAG Guide CG 4. Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement. Third Edition. 2012. 4.9 FAO. Guidelines for Single-Laboratory Validation of Analytical Methods for Trace-level Concentrations of Organic Compounds. 4.10 FAO. The Codex Alimentarius Volume 3 “Residues of Veterinary Drugs in Foods” 2nd. Ed (1993). 4.11 FDA. Guidelines for the Validation of Chemical Methods for the FDA Foods Program. Version 1. 2012 4.12 GUM. Evaluation of measurement data-Guide to the expression of uncertainty in measurement. First edition. 2008. COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 6 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 4.13 Harmonized Guidelines for Single Laboratory Validation of Methods of Analysis (IUPAC Technical Report). Appl. Chem., Vol. 74, No.5, pp. 835-855. 2002. 4.14 Miller N. James y Miller C. Jane. Estadística y Quimiometría para Química Analítica. 4ª. Edición. Prentice Hall. 2002. 4.15 NMKL. Procedimiento No. 4 (2009). Validación de métodos de análisis químicos. 4.16 NMKL. Procedimiento No. 5 (2003). Estimación y expresión de la incertidumbre de la medición en análisis químico. 4.17 NMX-CH-140-IMNC-2002. Guía para la expresión de incertidumbre en las mediciones. 4.18 RILAA/INPAZ. Curso a distancia sobre Validación de Métodos Químicos. Buenos Aires, Argentina. 2005. 4.19 The Fitness for Purpose of Analytical Methods. A Laboratory Guide to Method Validation and Related Topics. Eurachem Guide. 1998. 4.20 Validation of Analytical Methods for Food Control. Food and Agriculture Organization of the United Nations. Rome, 1998. 5. RESPONSABILIDADES 5.1 Laboratorio Tercero Autorizado Aplicar este documento para la validación interna o confirmación de sus métodos según corresponda. 5.2 Padrón de evaluadores Aplicar este documento para el proceso de evaluación a laboratorios de prueba COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 7 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 6. CRITERIOS DE LA ACTIVIDAD 6.1 Criterio No. 1.- Clasificación del método 6.1.1 Método Normalizado es aquel método publicado como primera instancia en: Normas Oficiales Mexicanas (NOM´s) Normas Mexicanas (NMX´s) Como segunda instancia: 6.1.2 Métodos Oficiales del AOAC Standard Methods Environmental Protection Agency (EPA) Pesticide Analytical Manual (PAM) Collaborative International Pesticides Analytical Council (CIPAC) American Society for Testing Materials (ASTM) International Standard Organization (ISO) Codex Alimentarius Food and Drug Administration (FDA) Food and Agriculture Organization (FAO) European Commission (CE) United States Department of Agriculture (USDA) Método no Normalizado es aquel: 1. Desarrollado por el laboratorio (método propio). 2. Método obtenido de publicaciones científicas (Journals, tesis, etc). 6.1.3 Los métodos para propósitos de confirmación o validación interna se clasifican como: COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Categoría Tipo de prueba I Cuantificación del analito II Cuantificación del analito a nivel trazas III Presencia del analito a un límite (prueba límite) IV Física cuantitativa Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 8 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 Alimentos y agua Aditivos Nutrientes Metales pesados Residuos orgánicos Micotoxinas Biotoxinas Residuos veterinarios Contaminantes Plaguicidas Formaldehído Sales cuaternarias Oxidantes, Derivados clorados Grado alcohólico Color Turbiedad Conductividad pH Humedad, etc. 6.2 Criterio No. 2.- Confirmación de métodos 6.2.1 Se lleva a cabo para: Métodos normalizados. Modificaciones al método normalizado que no presenten diferencia significativa estadística. 6.2.2 Los parámetros de desempeño (dependiendo del tipo de prueba) para llevar a cabo la confirmación del método son: Clave: CCAYAC-CR-03/0 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Hoja: 9 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 Categoría I II III IV Contenido Trazas Límite Física Intervalo lineal SI SI NO NO Intervalo de trabajo SI SI NO NO Límite de detección NO NO SI NO Límite de cuantificación NO SI NO NO Recuperación SI SI NO NO Repetibilidad SI SI NO SI Precisión intermedia SI SI NO SI Incertidumbre SI SI NO SI Selectividad NO NO SI NO Parámetro de desempeño 6.3 Criterio No. 3.-Validación interna de métodos 6.3.1 Se lleva a cabo para: Métodos no normalizados. Modificaciones a un método normalizado que presenten diferencia significativa estadística. 6.3.2 Los parámetros de desempeño (dependiendo del tipo de prueba) para llevar a cabo la validación interna del método son: Clave: CCAYAC-CR-03/0 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Hoja: 10 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 Categoría I II III IV Contenido Trazas Límite Física Intervalo lineal SI SI NO NO Intervalo de trabajo SI SI NO NO Límite de detección NO NO SI NO Límite de cuantificación NO SI NO NO Recuperación SI SI NO NO Repetibilidad SI SI NO SI Precisión intermedia SI SI NO SI Incertidumbre SI SI NO SI Sesgo SI SI NO NO Selectividad SI SI SI NO Sensibilidad SI SI NO NO Robustez SI SI NO SI Parámetro de desempeño 6.4 Criterio No. 4.- Selección de la matriz 6.4.1 Para métodos individuales usar la matriz más solicitada o la más compleja y considerar todos los analitos señalados en el método. 6.4.2 Para métodos generales que apliquen a diferentes matrices: residuos orgánicos, metales contaminantes, plaguicidas, etc. Se debe seleccionar una matriz representativa por categoría: COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 11 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 Para alimentos de origen vegetal: Grupo Alto contenido de humedad Bajo contenido de humedad Alto contenido de grasa Alto contenido ácido Alto contenido de azúcar Categoría Frutas y vegetales Granos de cereales Semillas oleosas y nueces Frutas cítricas Frutas secas, miel Lúpulo, miel, café, cocoa y sus productos, té, especias Difíciles Para alimentos de origen animal: Grupo Carne Leche y sus productos Huevos Miel Categoría Carne roja Carne blanca Pescado Menudencia Grasa de carne Leche Queso Yoghurt Crema Mantequilla Huevo Miel 6.4.3 Para métodos multiresiduos, si estos consideran más de 20 analitos, puede elegirse un número de analitos representativos en base a la probabilidad de encontrarlos como residuos en las muestras y a sus propiedades fisicoquímicas, como por ejemplo los que den la respuesta más pobre o más variable. COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 6.5 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 12 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 CRITERIO No. 5.-Preparación de muestras 6.5.1 Utilizar blancos de muestra o muestras en una cantidad equivalentes a la indicada por el método. 6.5.2 Cuando no se dispone de un blanco de muestra, determinar el contenido promedio del analito en una muestra comercial. Preparar estas muestras utilizando una cantidad equivalente a la mitad de la muestra que originalmente requiere el método y adicionar diferentes niveles de concentración de estándar. 6.5.3 Cuando no sea posible adicionar de manera directa el analito a la muestra, la adición puede ser llevada a cabo en alguna etapa del método, de preferencia en las primeras etapas. 6.5.4 Los blancos de muestras o muestras adicionadas deben ser preparados por un mismo analista. 6.5.5 Para las pruebas físicas cuantitativas no se adicionan muestras, estas se utilizan con el contenido original de analito. COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 6.6 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 13 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 CRITERIO No. 6.-Evaluación de los parámetros de desempeño Parámetro Muestras Repeticiones Calcular/determinar a) Graficar respuesta analítica (y) vs. nivel de concentración adicionado (x) a) Utilizar los niveles establecidos en la curva de calibración ó considerar la tabla guía contenida en el anexo 7.1. b) Confirmar visualmente la existencia de linealidad del intervalo. b) Los niveles de concentración deben estar igualmente espaciados en el intervalo de interés. c) Elaborar gráfico de residuales. d) Confirmar aleatoriedad de los residuales alrededor de la recta Blancos de muestra (matriz) o muestras adicionadas Intervalo lineal Mínimo 5 niveles diferentes de concentración Cada nivel por triplicado Observaciones e) Calcular el intervalo de confianza del intercepto c) Considerar en el intervalo el valor de la especificación y/o los valores de aceptación y rechazo y estar en la medida de lo posible al centro de este. d) Reportar el intervalo de concentraciones obtenido en las unidades establecidas por el método. COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 Parámetro Intervalo de trabajo Límite de detección (pruebas cualitativas) Muestras FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Repeticiones Utilizar los datos obtenidos en la estimación del intervalo lineal Blancos de muestra (matriz) o muestras adicionadas. Mínimo 5 niveles diferentes de concentración. 10 réplicas de cada nivel Calcular/determinar a) Calcular la cantidad recuperada para cada nivel b) Considerar los niveles que cumplen con los criterios de recuperación y repetibilidad establecidos. c) Graficar la concentración obtenida (y) vs. la concentración adicionada (x) d) Calcular el coeficiente de correlación (r ) y el intervalo de confianza de la pendiente. Elaborar tabla de respuesta de resultados positivos y negativos con respecto a la concentración Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 14 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 Observaciones Reportar el intervalo de concentraciones obtenido en las unidades establecidas por el método Establecer como límite de detección , la concentración mínima en la cual se obtienen 10 resultados positivos COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 Parámetro Muestras FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Repeticiones Calcular/determinar a) Límites de detección y cuantificación Recuperación y sesgo Utilizar los datos obtenidos en la estimación del intervalo lineal Utilizar los datos obtenidos en la estimación del intervalo de trabajo b) Calcular la pendiente (m) y la desviación estándar de la ordenada al origen (sbo) a partir de la respuesta analítica (y) vs nivel de concentración adicionado (x) Estimar los límites con las siguientes ecuaciones: LD 3.3 * sbo m LC 10 * sbo m Determinar el intervalo de confianza de la recuperación. Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 15 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 Observaciones a) Reportar los límites estimados estadísticamente en las unidades establecidas por el método. b) Considerar como límite práctico de cuantificación el nivel inferior estimado en el intervalo de trabajo. Reportar el intervalo de confianza del % de recobro COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 Parámetro Repetibilidad y precisión intermedia Muestras Blancos de muestra o muestras adicionadas. FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Repeticiones Cada nivel por triplicado. Calcular/determinar a) Considerar los resultados obtenidos (% de recobro) para los niveles inferior, medio y superior estimados en el intervalo de trabajo como los datos para el analista 1, equipo 1 o día 1 b) Analizar las muestras por un analista diferente (3 niveles/triplicado /analista). Obtener el % de recobro. c) Niveles inferior, medio y superior estimados en el intervalo de trabajo Combinar todos los resultados y de ser necesario verificar la sospecha de valores anómalos por nivel, aplicando la prueba de Grubbs. d) Efectuar el análisis de ANOVA de dos factores. Verificar la significancia estadística. e) Obtener la media de todos los datos y calcular los coeficientes de variación de la repetibilidad (CVr) y precisión intermedia (CVR). Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 16 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 Observaciones a) Si solo se dispone de un analista, analizar las muestras en dos días diferentes o con dos equipos diferentes (tres niveles/triplicado /día o equipo). b) Reportar coeficientes variación obtenidos los de Clave: CCAYAC-CR-03/0 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 Parámetro Muestras Hoja: 17 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Repeticiones Calcular/determinar Observaciones a) Especificar el mensurando. b) Identificar las fuentes de incertidumbre Incertidumbre No aplica Utilizar la información obtenida en el proceso de confirmación o validación interna. c) Cuantificar los componentes de la incertidumbre (u) Reportar la incertidumbre expandida con un factor de cobertura k=2 y una nivel de significancia del 95 %. d) Calcular la incertidumbre estándar combinada (uc) e) Calcular la incertidumbre expandida(Uexp) a) Sensibilidad Utilizar los datos obtenidos en la estimación del intervalo de trabajo b) Graficar la respuesta analítica (y) vs la concentración adicionada (x) Calcular pendiente recta (m) de la la Reportar la relación entre el cambio de respuesta analítica por unidad de concentración. COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 Parámetro Muestras FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Repeticiones Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 18 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 Calcular/determinar Observaciones Comparar las mediciones de las soluciones Para métodos cromatográficos verificar adicionalmente la pureza del pico de interés utilizando un detector de arreglo de diodos o espectrometría de masas y su resolución Solución estándar y blanco de muestra o muestra adicionada Selectividad Para métodos cuantitativos a una concentración equivalente al nivel medio del intervalo de trabajo estimado. Para métodos cualitativos a una concentración por encima del límite de detección. COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 Parámetro Muestras FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Repeticiones Calcular/determinar Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 19 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 Observaciones a) Identificar de 4 a 7 factores que puedan tener un efecto significativo en el desempeño del método y variar ligeramente cada uno ellos. b) Efectuar una serie de 8 combinaciones de valores nominales con variaciones deliberadas (combinaciones de Youden) Blancos de muestra o muestras adicionadas Robustez Concentración equivalente al nivel medio estimado en el intervalo de trabajo 8 muestras c) Analizar una muestra por duplicado con cada serie de combinaciones d) Calcular las diferencias de las mediciones de los subgrupos. a) Reportar los factores que más influyen en el resultado final. b) Establecer si el método es robusto frente a las variaciones establecidas. e) Graficar en una línea los valores de las diferencias de menor a mayor. f) Calcular la desviación estándar de las diferencias (sDi). Nota 1. Para la determinación de: intervalo lineal y de trabajo, límites de detección y cuantificación, recuperación, sesgo, repetibilidad, sensibilidad y robustez se debe aplicar el método de ensayo específico por un mismo analista (el de más experiencia en el análisis) bajo las mismas condiciones. Nota 2. Para pruebas físicas cuantitativas la repetibilidad y precisión intermedia se calculan en base a la lectura directa. COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 6.7 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 20 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 Criterio No. 7.- Criterios de aceptación Parámetro Intervalo lineal Intervalo de trabajo Límite de cuantificación práctico Límite de cuantificación estimado Recuperación Repetibilidad Precisión intermedia Sesgo Robustez Criterio de aceptación a) b) c) a) b) Comportamiento lineal en la gráfica de concentración vs respuesta analítica. Datos aleatorios en el gráfico de residuales El intervalo de confianza del intercepto debe incluir el cero Coeficiente de correlación r= 0.98 a 1.00 El intervalo de confianza de la pendiente debe incluir el valor de la unidad Nivel inferior estimado en el intervalo de trabajo Menor o igual al nivel inferior estimado en el intervalo de trabajo Los establecidos en la referencia original del método. Si no se dispone de estos datos utilizar como guía las tablas contenidas en los anexos 7.3 y 7.4. El intervalo de confianza del % de recobro debe incluir el valor de 100 % Si sDi < sR el conjunto de los factores no influye en el resultado y por tanto el método es robusto. La muestra no debe presentar ningún tipo de señal que interfiera con la señal que se encuentra para el estándar a) Cromatografía Resolución apropiada del analito de interés El analito debe eluir en el tiempo de retención típico de la sustancia de referencia en las mismas condiciones experimentales Selectividad b) Espectrofotometría Los máximos de absorción en el espectro del analito presentaran las mismas longitudes de onda que los de la sustancia de referencia. c) Prueba límite Muestra sin analito: negativa. Muestra con analito: positiva. Sustancia de referencia: positiva. Nota 3.- Utilizar estos criterios como una guía y no de forma rígida. En algunos casos como matrices complejas, concentraciones muy bajas del analito (dioxinas, orgánicos persistentes) y métodos para multiresiduales pudieran no ser alcanzados. COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 6.8 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 21 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 Criterio No. 8.- Protocolo de confirmación o validación interna 6.8.1 Elaborar un protocolo que incluya lo siguiente: Título 1.Objetivo 2. Campo de aplicación 3. Método de ensayo 4. Equipo 5. Materiales 6. Reactivos 7. Muestras 8. Desarrollo experimental 9. Resultados 10. Criterios de aceptación Protocolo de confirmación o validación interna (según aplique). Señalar asimismo el nombre y clave del método que se pretende validar. Considerar los parámetros de desempeño a evaluar y el analito a determinar Indicar el tipo de producto (s) para los cuales aplica la validación Elaborar un diagrama de flujo simplificado, que señale la metodología empleada para cuantificar el analito (método interno) Descripción general del equipo a utilizar en la validación. Indicar los materiales a utilizar separando como material de uso general y material volumétrico a) Indicar el nombre de los reactivos a utilizar y su grado. b) Señalar los patrones a utilizar con su grado de pureza o concentración. c) Detallar la preparación de las soluciones de trabajo (soluciones que no requieren de un valor de título exacto). d) Detallar la preparación de la soluciones de referencia (soluciones que requieren de un título exacto, soluciones stock, curva de calibración, etc.). Indicar las características, forma de almacenamiento y cantidades de muestra estimadas para llevar a cabo la validación. Detallar la preparación de los blancos de muestra o muestras adicionadas. Detallar las instrucciones para cada uno de los parámetros de desempeño a ensayar. Propuesta de formato de registro Establecer los criterios de aceptación que deben cumplirse con su respectiva referencia bibliográfica. 6.8.2 Debe incluir los parámetros de desempeño de acuerdo al tipo de prueba para los diferentes tipos de procedimientos analíticos y los criterios de aceptación predeterminados. 6.8.3 Debe ser aprobado previo a su uso y en su caso los cambios efectuados antes de su implementación. Incluir firmas de quien elaboró, revisó y aprobó. COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 6.9 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 22 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 Criterio No. 9.- Informe de resultados 6.9.1 Elaborar un informe de resultados que incluya lo siguiente: Título 1.Objetivo 2. Campo de aplicación 3. Método de ensayo 4. Equipo 5. Materiales 6. Reactivos Informe de resultados de confirmación o validación interna (según aplique). Señalar asimismo el nombre y clave del método que se validó. Considerar los parámetros de desempeño evaluados y el analito determinado. Indicar el tipo de producto (s) para los cuales aplicó la validación Elaborar un diagrama de flujo simplificado, que señale la metodología empleada para cuantificar el analito (método interno) Descripción del nombre, marca, modelo, número de serie, número de identificación e intervalo de trabajo del equipo utilizado en la validación Descripción de: a) Nombre, marca y lote del material de uso general utilizado. b) Nombre, marca, clave, volumen nominal y volumen real del material volumétrico empleado a) Indicar el nombre, marca, grado, pureza, presentación y lote de los reactivos utilizados b) Indicar el nombre, marca, pureza o concentración, presentación y lote de los patrones de referencia utilizados c) Detallar la preparación de las soluciones de trabajo (soluciones que no requieren de un valor de título exacto) que se emplearon d) Detallar la preparación de la soluciones de referencia (soluciones que requieren de un título exacto, soluciones stock, curva de calibración, etc.) que se utilizaron. Indicar las características, forma de almacenamiento, marca, presentación, caducidad y cantidades de muestra utilizadas para llevar a cabo la validación. 7. Muestras Detallar la preparación de los blancos de muestra o muestras adicionadas utilizados. Detallar como se llevaron a cabo los ensayos de cada uno de los parámetros de 8. Desarrollo experimental desempeño. Presentación de resultados en forma de tablas, señalando fechas de inicio y 9. Resultados término, analistas, laboratorio, analito, matriz, unidades y clave de bitácora o registro primario Presentar en forma de tabla los criterios de aceptación considerados y los 10. Análisis de resultados resultados obtenidos y hacer las observaciones correspondientes. Efectuar una conclusión final en donde se señale que el método se ajusta al uso 11. Conclusión propuesto 12. Bibliografía Referencias utilizadas. COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 23 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 Los que aplique: 13. Anexos Bases de datos utilizadas Cromatogramas, espectros, resultados impresos, etc. Certificados de análisis o pureza. Certificados de trazabilidad Certificados de calibración de material. Formatos de verificación de material Gráficos de control, etc. 6.9.2 Los resultados deben ser evaluados, analizados y comparados contra los criterios de aceptación. 6.8.4 La conclusión del informe debe indicar si los parámetros fueron acordes y por tanto el método puede utilizarse. Si no se cumple con los criterios de aceptación, los resultados deben ser investigados, o si se aceptan deben ser justificados. Incluir firmas de quien elaboró, revisó y aprobó. COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 24 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 7. ANEXOS 7.1 Guía para considerar los niveles del intervalo lineal Categoría Tipo de prueba Intervalo recomendado I Cuantificación del analito Cuantificación del analito a nivel trazas 80 a 120 % el valor de la especificación II 0 a 150 % el valor de la especificación 7.2 Valores críticos de G (p=0.05) para un contraste de dos colas Tamaño de muestra 3 4 5 6 7 8 9 10 Valor crítico 1.155 1.481 1.715 1.887 2.020 2.126 2.215 2.290 Referencia.- Outliers in Statistical data, Vic Barnett and Toby Lewis, 2nd Edition, 1984, John Wiley & Sons Limited 7.3 Criterios de aceptación para la recuperación Concentración del analito 100 % 10 % 1% 0.1 % 0.01 % Intervalo 98-101 % 95-102 % 92-105 % 90-108 % 85-110 % Referencia.- AOAC. Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods for Dietary Supplements and Botanicals. 2013 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Concentración del analito ≥ 100 µg/kg ó µg/L (ppb) ≥ 10 100 µg/kg ó µg/L (ppb) ≥ 1 10 µg/kg ó µg/L (ppb) ≤ 1 µg/kg ó µg/L (ppb) Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 25 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 Intervalo 80-110% 70-110 % 60-120 % 50-120 % Referencia.- The Codex Alimentarius “Residues of Veterinary Drugs in Foods” Joint FAO/WHO Food Standards Program. 1993 7.4 Criterios de aceptación para repetibilidad y precisión intermedia Concentración del analito 100 % 10 % 1% 0.1 % 0.01 % Coeficiente de variación CV 2% CV 3 % CV 4 % CV 6 % CV 8 % Referencia.- AOAC. Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods for Dietary Supplements and Botanicals. 2013 Concentración del analito > 1000 µg/kg ò µg/L (ppb) > 100 ≤ 1000 µg/kg ò µg/L (ppb) > 10 ≤ 100 µg/kg ò µg/L (ppb) >1 µg/kg ò µg/L (ppb) ≤ 1 µg/kg ò µg/L Coeficiente de variación CV 10 % CV 15 % CV 20 % CV 30 % CV 35 % Referencia.- FAO. Guidelines for Single-Laboratory Validation of Analytical Methods for Trace-level Concentrations of Organic Compounds. COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 26 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 7.5 Combinaciones de Youden (Robustez) Número de corrida 1 2 3 4 5 6 7 8 Combinación de factores B C D E F B c D e f b c d E f b c d e F B C d e F B c d E f b C D e f b c D E F A A A A a a a a 7.6. Fórmulas estadísticas a) Media _ x x n a) Desviación estándar (s) s x x n 1 2 b) Coeficiente de variación (CV) CV s *100 x d) Pendiente (m) m n xy x y n x 2 x 2 G g g G g G G g COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 e) Ordenada al origen (bo) bo y m x n f) Coeficiente de correlación (r) r n xy x y n x x n y y 2 2 2 2 1/ 2 g) Media general (x) x x1 x 2 x 3 x 4 ..... x n n h) Desviación estándar de la repetibilidad (sr) s r MSd i) Coeficiente de variación de la repetibilidad (CVr) CVr sr _ * 100 x j) Desviación estándar de la precisión intermedia (sR) s R MSd MSe Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 27 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 k) Coeficiente de variación de la precisión intermedia (CVR) CVR sR _ * 100 x l) Intervalo de confianza (IC) IC promedio t (0.05) * s n m) Desviación estándar de la regresión (sy/x) sy / x y yˆ i 2 i n2 n) Desviación estándar de la ordenada al origen (sbo) sbo s y / x 1 n x 2 x2 x 2 n o) Desviación estándar de la pendiente (sb1) sb1 sy / x x 2 x 2 i Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 28 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 p) Intervalo de confianza de la pendiente IC(b1) IC(b1 ) b1 t (0.05) * sb1 q) Estadístico G _ valor sospechoso x G s 7.7 ANOVA (repetibilidad y precisión intermedia) Nivel Analista, día o equipo 1 2 100.23* 102.77 Inferior 99.11* 101.97 Medio 101.85* 99.00* 99.73* 98.12* 99.33* 102.01 102.06 100.21 102.14 101.85 Superior 99.75* 100.60 99.36* 100.40 *Datos obtenidos de la prueba de intervalo de trabajo Clave: CCAYAC-CR-03/0 Hoja: 29 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 Clave: CCAYAC-CR-03/0 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 Hoja: 30 de 30 SUBSTITUYE A: CCAYAC-P-058/0 FECHA: 2011-02-16 FECHA DE PROXIMA REVISIÓN: 2017-02-17 Análisis de varianza de dos factores con una sola muestra por grupo RESUMEN Cuenta Suma Promedio Varianza Fila 1 Fila 2 Fila 3 Fila 4 Fila 5 2 2 2 2 2 203 201.08 203.86 201.06 199.94 101.5 100.54 101.93 100.53 99.97 3.2258 4.0898 0.0128 4.6818 0.1152 Fila 6 2 200.26 100.13 8.0802 Fila 7 Fila 8 Fila 9 2 2 2 201.18 200.35 199.76 100.59 100.175 99.88 3.1752 0.36125 0.5408 Analista 1 9 896.48 99.60888889 1.05238611 Analista 2 9 914.01 101.5566667 0.82435 ANÁLISIS DE VARIANZA Origen de las variaciones Suma de cuadrados Grados de libertad Niveles 7.80331111 8 Analista 17.0722722 1 Error 7.21057778 8 Total 32.0861611 17 Promedio de los cuadrados F calculada Probabilidad F tablas MSd= 0.975413889 1.08220331 0.45688708 3.43810123 MSe= 17.07227222 18.9413639 0.00243816 5.31765507 0.901322222 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CONTROL DE CAMBIOS DE DOCUMENTOS DEL SISTEMA DE GESTIÓN DE LA CALIDAD VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 PÁGINA CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS NUMERAL PÁRRAFO Todo el documento Título 1/20 1/20 1.Objetivo 2.Alcance CLAVE: CCAYAC-CR-03/0 CLAVE: CCAYAC-P-058 FECHA: 2011-02-16 O CAMBIOS: Adición, eliminación Cambia de procedimiento a criterios Criterios para la validación interna y confirmación de métodos fisicoquímicos Definir los criterios mínimos para llevar a cabo actividades de validación de métodos no normalizados interna o confirmación (validación parcial) de métodos normalizados que involucren mediciones fisicoquímicas y físicas cuantitativas y cualitativas, para presentar evidencia objetiva de confirmar que estos se pueden aplicar correctamente antes de utilizarlos para los ensayos analíticos Aplica a los métodos fisicoquímicos volumétricos, gravimétricos, potenciométricos, espectrofotométricos, cromatográficos y pruebas físicas empleados en el análisis de agua, alimentos, fármacos, materia prima, producto a granel, producto terminado, productos biológicos, juguetes, cerámicas, bebidas alcohólicas y no alcohólicas entre otros. Este documento debe ser aplicado por el personal de los laboratorios deensayo aspirantes ante la COFEPRIS a terceros autorizados, para la validación de sus métodos y por los miembros del padrón de evaluadores para el proceso de evaluación a laboratorios de prueba y es factible establecer no conformidades con base en los criterios descritos en el mismo. Este documento debe ser aplicado por el personal de los laboratorios de ensayo aspirantes a terceros autorizados ante la COFEPRIS, para la validación interna o confirmación de los métodos fisicoquímicos volumétricos, gravimétricos, potenciométricos, espectrofotométricos, cromatográficos y pruebas físicas empleados en el análisis de agua, alimentos, juguetes, cerámicas, bebidas alcohólicas y no alcohólicas entre otros y, es factible establecer no conformidades con base en los criterios descritos en el mismo. 1/20 4/20 3.Definiciones 4.Documentos aplicables Se agregan definiciones para Confirmación del método, informe de confirmación o validación, intervalo de confianza, protocolo de confirmación o validación y validación interna. Se eliminan los conceptos matriz o placebo, fortificada, reproducibilidad y validación parcial Center for Drug Evaluation and Research (CDER) Reviewer. Guidance Validation of Chromatographic Methods. FDA 1994. CCAYAC-F-001/5 Página 1/10 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CONTROL DE CAMBIOS DE DOCUMENTOS DEL SISTEMA DE GESTIÓN DE LA CALIDAD VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS CLAVE: CCAYAC-CR-03/0 Document No. SANCO/10684/2009. Method Validation and Quality Control Procedures for Pesticide Residues Analysis in Food and Feed. National Food Administration. Entidad Mexicana de Acreditación. Manual de Procedimientos. Criterios de Aplicación de la Norma NMX-EC-17025-IMNC-2006/ISO/IEC 17025:2005. MPFE005-10. 2014. FAO. Guidelines for Single-Laboratory Validation of Analytical Methods for Tracelevel Concentrations of Organic Compounds. FAO. The Codex Alimentarius Volume 3 “Residues of Veterinary Drugs in Foods” 2nd. Ed (1993). FDA. Guidelines for the Validation of Chemical Methods for the FDA Foods Program. Version 1. 2012 GUM. Evaluation of measurement data-Guide to the expression of uncertainty in measurement. First edition. 2008. Miller N. James y Miller C. Jane. Estadística y Quimiometría para Química Analítica. 4ª. Edición. Prentice Hall. 2002. NMKL. Procedimiento No. 4 (2009). Validación de métodos de análisis químicos. NMKL. Procedimiento No. 5 (2003). Estimación y expresión de la incertidumbre de la medición en análisis químico. Validation of Analytical Methods for Food Control. Food and Agriculture Organization of the United Nations. Rome, 1998. CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analíticas que emplean la técnica de medición de conductividad electrolítica. Abril 2008. CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analíticas que emplean las técnicas de Espectrofotometría de Absorción Atómica y de Emisión y Atómica con Plasma Acoplado Inductivamente. Abril 2008. CCAYAC-F-001/5 Página 2/10 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CONTROL DE CAMBIOS DE DOCUMENTOS DEL SISTEMA DE GESTIÓN DE LA CALIDAD VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS CLAVE: CCAYAC-CR-03/0 CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analíticas que emplean las técnicas de Cromatografía de Gases (GC) y Cromatografía de Líquidos de Alta Resolución (HPLC). Abril 2008. CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analíticas que emplean la técnica de Gravimetría de Masa. Abril 2008. CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analíticas que emplean la técnica de medición de pH. Abril 2008. CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analíticas que emplean la técnica de Titulación volumétrica. Abril 2008. CENAM-EMA. Guía técnica sobre trazabilidad e incertidumbre en las mediciones analíticas que emplean la técnica de Espectrofotometría de Ultravioleta-Visible. Abril 2008. Colegio Nacional de Químicos Farmacéuticos Biólogos. Guía de Validación de Métodos Analíticos. Edición 2002.} Eurolab. Measurement Uncertainty in Testing. A short introduction on how to characterize accuracy and reliability of results including a list of useful references. Techical Report No. 1/2002. June 2002. Se cambia por: 5. RESPONSABILIDADES 5.1 Laboratorio Tercero Autorizado 5/20 5. Descripción de Aplicar este documento para la validación interna o confirmación de sus métodos la actividad según corresponda. 5.2 Padrón de evaluadores Aplicar este documento para el proceso de evaluación a laboratorios de prueba 5/20 5.1.1 Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos (FEUM) United States Pharmacopoeia (USP) British Pharmacopoeia (BP) CCAYAC-F-001/5 Página 3/10 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CONTROL DE CAMBIOS DE DOCUMENTOS DEL SISTEMA DE GESTIÓN DE LA CALIDAD VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 6/20 CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS 5.2 y 5.3 Categoría Tipo de prueba I Cuantificación del analito II Cuantificación del analito a nivel trazas III Presencia del analito a un límite (prueba límite) IV Física cuantitativa CLAVE: CCAYAC-CR-03/0 Alimentos y agua Aditivos Nutrientes Metales pesados Residuos orgánicos Micotoxinas Biotoxinas Residuos veterinarios Contaminantes Plaguicidas Formaldehído Sales cuaternarias Oxidantes, Derivados clorados Grado alcohólico Color Turbiedad Conductividad pH Humedad, etc. Se elimina el contenido de los criterios no. 2 y 3 Se divide en dos criterios. Criterio No. 2.- Confirmación de métodos Se lleva a cabo para: Métodos normalizados. Modificaciones al método normalizado que no presenten diferencia significativa estadística. 8/20 5.4 Criterio No. 3.-Validación interna de métodos Se lleva a cabo para: Métodos no normalizados. Modificaciones a un método normalizado que presenten diferencia significativa estadística. La tabla se divide en dos partes. CCAYAC-F-001/5 Página 4/10 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CONTROL DE CAMBIOS DE DOCUMENTOS DEL SISTEMA DE GESTIÓN DE LA CALIDAD VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS CLAVE: CCAYAC-CR-03/0 Física Gravimétrica Volumétrica Potenciométrica Cromatográfica Parámetro de desempeño Espectrofotométrica Tipo de prueba Categoría Parámetro I II III IV de desempeño Contenido Trazas Límite Física Seleccionar el tipo de matriz a evaluar conforme a: 9/20 5.5 1. La más solicitada. 2. La más compleja. 3. Para métodos generales que apliquen a diferentes matrices; FEUM, Residuos orgánicos, metales contaminantes, etc. Se debe seleccionar una matriz representativa por grupo (alimentos, principio activo, tipo de presentación, entre otros) a. Alimentos: lácteos, cárnicos, productos de la pesca agua, cereales, frutas, vegetales, productos de panificación, miel, productos de confitería, especias, entre otros. b. Medicamentos: cápsula, gragea, tableta, suspensión, jarabe, ungüento, colirio, espuma, gel, supositorio, parche, jalea, ovulo, entre otros. Para métodos individuales usar la matriz más solicitada o la más compleja y considerar todos los analitos señalados en el método. Para métodos generales que apliquen a diferentes matrices: residuos orgánicos, metales contaminantes, plaguicidas, etc. Se debe seleccionar una matriz representativa por categoría: Para métodos multiresiduos, si estos consideran más de 20 analitos, puede elegirse un número de analitos representativos en base a la probabilidad de encontrarlos como residuos en las muestras y a sus propiedades fisicoquímicas, como por ejemplo los que den la respuesta más pobre o más variable. CCAYAC-F-001/5 Página 5/10 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CONTROL DE CAMBIOS DE DOCUMENTOS DEL SISTEMA DE GESTIÓN DE LA CALIDAD VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS 10/20 5.6 Intervalo lineal 10/20 5.6 Intervalo de trabajo 11/20 5.6 Límites de detección y cuantificación 11/20 5.6 Recuperación y sesgo CLAVE: CCAYAC-CR-03/0 Se agregan dos tablas para alimentos de origen vegetal y animal Calcular el intervalo de confianza del intercepto Se cambia Anexo A por 7.1 Utilizar los datos obtenidos en la estimación del intervalo lineal Cada nivel por triplicado Calcular la cantidad recuperada para cada nivel Calcular la pendiente (m), el coeficiente de correlación (r) y el intervalo de confianza de la pendiente Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas Mínimo 5 niveles diferentes de concentración. Cada nivel por triplicado Graficar la respuesta analítica (y) vs la concentración adicionada (x) Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas. Mínimo 5 niveles diferentes de concentración Cada nivel por triplicado Calcular la concentración recuperada para cada nivel de concentración adicionado. Para el sesgo, efectuar la resta aritmética de la concentración añadida menos la concentración recuperada Determinar el intervalo de confianza de la recuperación. Reportar el intervalo de confianza del % de recobro Se conjuntan en una sola columna Se elimina el concepto reproducibilidad Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas. Tres niveles diferentes de concentración (niveles inferior, medio y superior estimados en el intervalo de trabajo) Cada nivel por triplicado sextuplicado 12/20 Analizar las muestras por un mismo analista (analista 1) en 2 días diferentes (3 5.6 Repetibilidad y niveles/triplicado /día). reproducibilidad Analizar las muestras por un analista diferente (3 niveles/triplicado /analista). Obtener el % de recobro Utilizar la información obtenida en la estimación del intervalo de trabajo como los datos para el día 1 (cada nivel por triplicado por día). Considerar los resultados obtenidos (% de recobro) para los niveles inferior, medio y superior estimados en el intervalo de trabajo como los datos para el analista 1, equipo 1 o día 1 CCAYAC-F-001/5 Página 6/10 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CONTROL DE CAMBIOS DE DOCUMENTOS DEL SISTEMA DE GESTIÓN DE LA CALIDAD VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS CLAVE: CCAYAC-CR-03/0 Combinar todos los resultados y de ser necesario verificar la sospecha de valores anómalos por nivel, aplicando la prueba de Grubbs. Efectuar el análisis de ANOVA de dos factores. Verificar la significancia estadística. Calcular la media (x), desviación estándar (sr) y el coeficiente de variación (CVr) de los % de recuperación obtenidos para cada nivel adicionado Combinar estos resultados con los datos obtenidos en la estimación de la repetibilidad y calcular la media (x), desviación estándar (sR) y el coeficiente de variación (CVR) de los % de recobro para cada nivel Obtener la media de los todos los datos y calcular los coeficientes de variación de la repetibilidad (CVr) y precisión intermedia (CVR). Si no se cuenta con dos analistas o dos equipos para estimar la reproducibilidad, estimar solo la repetibilidad con el mismo analista pero utilizando un tercer día. Si solo se dispone de un analista, analizar las muestras en dos días diferentes o con dos equipos diferentes (tres niveles/triplicado /día o equipo). Calcular el % de recuperación de los 6 resultados para cada nivel Reportar la desviación estándar obtenidos (sr) o coeficiente de variación (CVr) máximos Reportar los coeficientes de variación obtenidos 13/20 5.6 Sensibilidad 13/20 5.6 Selectividad Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas. Mínimo 5 niveles diferentes de concentración Cada nivel por triplicado Blancos de muestra o muestras adicionadas con cantidades conocidas de interferencias, productos de degradación o impurezas Solución estándar y blanco de muestra o muestra adicionada :Para métodos cuantitativos a una concentración equivalente al nivel medio del intervalo de trabajo estimado. Para métodos cualitativos a una concentración por encima del límite de detección. Por duplicado Comparar las mediciones de las soluciones Evaluar si la presencia de las interferencias, impurezas o productos de degradación inhiben o incrementan la detección del analito. Pueden emplearse técnicas confirmatorias para asegurar la identidad del analito como son la utilización de detectores de espectrometría de masas, arreglo de diodos o CCAYAC-F-001/5 Página 7/10 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CONTROL DE CAMBIOS DE DOCUMENTOS DEL SISTEMA DE GESTIÓN DE LA CALIDAD VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS CLAVE: CCAYAC-CR-03/0 infrarrojo. Cuando no se tienen estándares de interferencias o impurezas se pueden aplicar las siguientes condiciones de degradación: a) Temperatura: 70-120 °C o 20 °C por debajo de su punto de fusión, durante 2 a 4 semanas. b) Luz UV, luz fluorescente y/o humedad relativa por un tiempo apropiado. c) pH 1 a 2 y/o 10 a 12 y someterlas a 60-80 °C por un tiempo apropiado. d) Para líquidos y semisólidos adicionar peróxido de hidrógeno. Para métodos cromatográficos verificar adicionalmente la pureza del pico de interés utilizando detector de arreglo de diodos o espectrometría de masas y su resolución 14/20 5.6 Robustez 15/20 5.6 incertidumbre 15720 5.6 16/20 5.7 Criterios de aceptación Se elimina los conceptos de placebo y por duplicado Utilizar la información obtenida en el proceso de confirmación o validación interna. Puede utilizarse como guía los criterios establecidos en las referencias 2, 12, 14, 16 y 18. Reportar la incertidumbre expandida con un factor de cobertura k=2 y una nivel de significancia del 95 %. Se elimina la nota 1 El intervalo de confianza del intercepto debe incluir el cero Pendiente: valor cercano a 1 Coeficiente de correlación: r 0.98 para cuantificación de residuos e impurezas r 0.99 para cuantificación de contenido e ingrediente activo Coeficiente de correlación r= 0.98 a 1.00 El intervalo de confianza de la pendiente debe incluir el valor de la unidad Límite de detección Selectividad La muestra no debe presentar ningún tipo de señal que interfiera con la señal que se encuentra para el estándar Cromatografía Resolución apropiada del analito de interés El analito debe eluir en el tiempo de retención típico de la sustancia de referencia en las mismas condiciones experimentales Espectrofotometría Los máximos de absorción en el espectro del analito presentaran las mismas longitudes de onda que los de la sustancia de referencia. Prueba límite CCAYAC-F-001/5 Página 8/10 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CONTROL DE CAMBIOS DE DOCUMENTOS DEL SISTEMA DE GESTIÓN DE LA CALIDAD VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS 16/20 17/20 5.8 5.9 CLAVE: CCAYAC-CR-03/0 Muestra sin analito: negativa. Muestra con analito: positiva. Sustancia de referencia: positiva 10. Análisis estadístico Establecer para cada parámetro de desempeño la herramienta estadística a utilizar para su evaluación Debe incluir los parámetros de desempeño de acuerdo al tipo de prueba para los diferentes tipos de procedimientos analíticos y los criterios de aceptación predeterminados. Debe ser aprobado previo a su uso y en su caso los cambios efectuados antes de su implementación. Incluir firmas de quien elaboró, revisó y aprobó. 3. Antecedentes Hacer una breve explicación de las características del analito, su importancia sanitaria o nutricional, así como las especificaciones nacionales e internacionales establecidos para este. Los resultados deben ser evaluados, analizados y comparados contra los criterios de aceptación. La conclusión del informe debe indicar si los parámetros fueron acordes y por tanto el método puede utilizarse. Si no se cumple con los criterios de aceptación, los resultados deben ser investigados, o si se aceptan deben ser justificados. Incluir firmas de quien elaboró, revisó y aprobó. Se otorga un periodo de transición de 180 días contados a partir de la fecha de publicación para que los laboratorios que se encuentren autorizados o en proceso del mismo se apeguen a estos criterios. 18/20 6.0 Notificación de Para los laboratorios que soliciten autorización posterior a la fecha de vigencia publicación, deberán cumplir estos criterios de inicio. Estos criterios se aplicarán en todos los procesos de evaluación que se realicen a los 180 días naturales, a partir de la fecha de publicación del documento en la página web de la COFEPRIS. CCAYAC-F-001/5 Página 9/10 COMISIÓN DE CONTROL ANALÍTICO Y AMPLIACIÓN DE COBERTURA CONTROL DE CAMBIOS DE DOCUMENTOS DEL SISTEMA DE GESTIÓN DE LA CALIDAD VIGENTE A PARTIR DE: 2014-02-17 CRITERIOS PARA LA VALIDACIÓN INTERNA Y CONFIRMACIÓN DE MÉTODOS FISICOQUÍMICOS Determinación Intervalo recomendado Contenido o principio activo 80 a 120 % del contenido del marbete o especificación Cuantificación de una impureza 50 a 120 % el valor de la especificación Uniformidad de contenido 19/20 Anexo A CLAVE: CCAYAC-CR-03/0 Prueba de disolución Residuos y contaminantes Categoría 70 a 130 % la concentración declarada en el marbete Mínimo 20% el intervalo establecido 0 a 150 % el valor de la especificación. Tipo de prueba Intervalo recomendado 80 a 120 % el valor de la especificación Cuantificación del analito a 0 a 150 % el valor de la II nivel trazas especificación Se modifica el contenido dela tabla de recuperación para residuos y contaminantes en alimentos y agua. I 19/20 Anexo B Cuantificación del analito Se elimina la tabla de recuperación en productos farmacéuticos. Se cambia el concepto de reproducibilidad por precisión intermedia Se modifica el contenido dela tabla de repetibilidad y reproducibilidad para residuos y contaminantes en alimentos y agua. Se elimina la tabla de repetibilidad y reproducibilidad en productos farmacéuticos Se agregan referencias a las tablas Se agregan a los anexos: Valores críticos de G Combinaciones de Youden Fórmulas estadística ANOVA (repetibilidad y precisión intermedia) CCAYAC-F-001/5 Página 10/10
