Procedimiento sintesis de nanoparticulas

Métodos de investigación
Dra. Millie L. Gonzalez
Procedimiento: Síntesis nanopartículas de plata
Materiales:
Matraces de Florencia o volumétricos (6) de 50 mL y 20 mL
3 neveras con hielo
Goteros (3)
Agua destilada autoclaveada (3 botellas de 100 mL)
Borohidruro de sodio (NaBH4 2.00 mM).
nitrato de plata (AgNO3)
pipetas de 2 mL, 10 mL y 5 mL (3 de cada una)
pipeteadores (3)
beakers de cristal de 50 mL (6)
agitadores de crital (3)
cuvetas de espectrofotómetro
espectrofotómetro
envases de cristal para guardar soluciones de nanoparticulas (3)
Balanzas
Papel de pesar
Kimwipes
1. Hacer cálculos y preparar soluciones de Borohidruro de sodio (NaBH4 2.00 mM) y
AgNO3 (1.00 mM)
2. Mezclar una solución acuosa de nitrato de plata (AgNO3) con un agente reductor, en
este caso el Borohidruro de sodio (NaBH4 2.00 mM).
3. A 30 mL de NaBH4 (2.00 mM) en agitación y colocado en baño de hielo, se le agrega
gota a gota una solución de 10 mL de AgNO3 (1.00 mM) durante un lapso de 3 minutos.
4. La reacción que se da durante este proceso es la siguiente:
4 AgNO3 + NaBH4 + 3 H2O ->4 Ag + H3BO3 + 3HNO3 + NaNO3 + 2 H2
5. Las soluciones deben ser analizadas con un espectrofotómetro con UV/Vis
para obtener la curva de absorbancia.Las bandas de absorción en el espectro alrededor
de longitudes de onda de 400 a 450 nm indica la presencia de nanopartículas metálicas
6. Colocar las nanoparticulas en 3 tubos de 15 mL con el mismo volumen cada uno.
7. Coloque las nanoparticulas en nevera a 4 grados en lab 105 para guardar hasta el
próximo dia de laboratorio.
8. Centrifugar los tubos con las nanoparticulas a máxima velocidad en la centrifuga del lab
105 por 15 minutos. Debe balancear los tubos.
9. Remover el sobrenadante con una pipeta suavemente y transferir el contenido del pellet
(nanoparticulas) a los microtubos. Debe tener al menos 1 ml total cada microtubo.
10. Luego centrifugar en la microcentrifuga pequeña que esta en el 105. Los tubos deben
estar balanceados. Centrifugue las nanoparticulas a 14,000 rpm, máxima velocidad por
5 minutos.
11. Remueva el sobrenadante con una micropipeta suavemente, luego transfiera el
contenido del pellet a un solo microtubo y que tenga en total 1ml de nanoparticulas.
12. Repita el paso 10.
13. Remueva con mucho cuidado todo el sobrenadante y resuspenda las nanoparticulas en
1 ml de caldo nutriente.
14. Proceda a esterilizar las nanoparticulas en el autoclave. Luego de esterilizadas
guárdelas en nevera del 105 para usarse en el próximo experimento con las bacterias.