Prueba de citrato
Alumno: Braulio Durán Oliver
Profesora: Claudia Montalvo Paquini
Principio:
Determinar si un M.O. es capaz de utilizar el citrato como única fuente de
carbono para el metabolismo y el crecimiento con alcalinidad resultante.
Objetivo:
El citrato es parte del grupo de pruebas IMViC. Para la identificación de la familia
Enterobacteriaceae, de microorganismos Gram negativos relacionados y de
bacterias no fermentadoras.
Bioquímica:
La energía puede ser proporcionada a algunas bacterias en ausencia de
fermentación o producción de ácido láctico, por la utilización del citrato como
única fuente de carbono, mismas que utilizan como fuente de nitrógeno a las
sales de amonio.
En condiciones normales, el metabolismo del citrato involucra una condensación
de acetilo con coenzima A y oxalacetato para ingresar al Ciclo de Krebs.
Citrato
Oxalacetato + acetato
Piruvato + CO2
Los productos del metabolismo del citrato dependen del pH del medio; a un pH alcalino, se
producen más acetato y formato, y disminuye la producción de lactato y CO2.
A un pH por encima de 7.0 no existe producción de lactato y los productos son:
citrato - ácido fórmico + + 2 ácido acético + CO2
A un pH ácido, los principales productos del metabolismo del citrato son
acetilmetilcarbinol (acetoína) y lactato. Sin tener en cuenta los productos finales
producidos, el primer paso metabólico en la fermentación del citrato produce
piruvato. La degradación del piruvato depende entonces del pH del medio:
pH Alcalino :
piruvato
acetato + formato
pH ácido :
2 piruvato
acetato + lactato + CO2
2 piruvato
Acetoína + 2 CO2
Medios y Metodología
Agar Citrato de Simmons (pH 6.9 +- 0.2)
1.- Ingredientes:
Sulfato de Magnesio, MgSO4 . 7H2O
0.2 g
Fosfato monoamónico, NH4H2PO
1g
4
Fosfato dipotásico, K2HPO4
1g
Citrato de Sodio, Na3C6H5O7 . 2 H2O
2g
Cloruro de sodio, NaCl
5g
Agar
Azul de bromotimol (BTB)
Agua desionizada
15 – 20 g
0.8 g
1000 ml
2.-Indicador de pH : Azul de Bromotimol
3.-Metodo de preparación:
a) Pesar la cantidad con precisión como se indica en el rotulo.
b)Rehidratar con agua destilada o desmineralizada.
c)Calentar suavemente la solución
d)Distribuir en tubos alrededor de 4.0 -5.0 ml en cada tubo (pico de flauta largo,
extremo inferior corto)
4.-Método de esterilización: autoclave, 121ºC, 15 lb, 15 min.
5.-Dejar que el medio solidifique en posición inclinada.
6.-Enfriar ante de su uso y conservar en refrigerador (4 – 10 ºC)
7.-
Inoculación:
a)Crecimiento a partir de un cultivo puro de 18 a 24 h en agar con hierro de
Kliger (KIA) u otro medio adecuado; no se recomiendan las suspensiones en
caldo.
b)Llevar los medios a temperatura ambiente antes de la inoculación.
c)Inóculos livianos; se recomienda una aguja de inoculación.
d)Estriar sólo en el pico de la flauta (estriado simple)
8.-Incubaciòn: Con las tapas flojas (la reacción requiere oxígeno), 35ºC, 24 – 48 h
(puede requerirse una incubación prolongada de hasta 4 días)
Interpretación de resultados
A. Medio de citrato de Simmons
1.-Positivo (+) : Crecimiento con un intenso color azul en el pico de la flauta.
2.-Negativo (-) : ausencia de crecimiento y ningún cambio en el color (verde)
Referencias:
0
