GUIA DE LABORATORIO ING

UNIVERSIDAD NACIONAL DE JULIACA
CARRERA PROFESIONAL: INGENIERIA AMBIENTAL
Y FORESTAL
CURSO: BIOLOGIA GENERAL
TEMARIO: PRÁCTICAS DE LABORATORIO
DOCENTE: Dr. Víctor C. Huanacuni Ajrota
INTRODUCCIÓN
La presente Guía de Prácticas para el Laboratorio de Biología Celular contempla
experimentos y actividades debidamente organizados de acuerdo al programa
establecido; que permitirá al estudiante vincular los aspectos estudiados en teoría
con actividades prácticas mediante la realización d e proyectos comunes.
Cabe mencionar que esta guía de Laboratorio de Biología Celular tuvo
un antecedente muy importante, ya que en el plan rígido también hubo un manual
de laboratorio para esta materia, pero debido a que el plan de estudios de la
Facultad de Química Farmacéutica Biológica en el año 2002 fue reestructurado
por consiguiente tuvo que ser modificado el contenido de esta
experiencia educativa y por lo tanto, las prácticas de laboratorio en su mayoría
cambiaron.
Por otra parte, la Biología Celular es una ciencia bien fundamentada,
reconocida como disciplina después de establecerse la teoría celular;
dotada de instrumentos de análisis cada vez más poderosos para explorar los
procesos internos de la célula. Su objetivo inicial fue describir con máxima
precisión todas las estructuras características de las células animales y vegetales
y de los seres unicelulares, las modificaciones en el curso de la vida de las
células, su diversidad dentro de estos seres o a lo largo del desarrollo
embrionario, etc.
La Biología Celular, se colocó con prontitud dentro de los campos más importantes
de la biología y constituyó un foco de convergencia y fundamento de todos los
métodos; sólo el estudio de las propiedades de las células individuales permitiría
comprender el funcionamiento y la constitución de las estructuras pluricelulares.
De ser una ciencia descriptiva, la biología celular se transformó en ciencia
experimental con el objetivo esencial de mejorar la comprensión de las estructuras
y de los mecanismos a nivel molecular. Actualmente sus principales metas de
estudio son: el tráfico membranario en el interior de las células, el citoesqueleto, la
biogénesis de los organelos llamados semiautónomos, las funciones de las
matrices extracelulares y la señalización de la membrana. Por ser una ciencia
integrativa y multidisciplinaria, la biología celular suprime las fronteras artificiales
entre diversos métodos y aporta una visión más completa de las estructuras y de
las funciones celulares; identifica a las moléculas constitutivas de los organelos,
ubica las enzimas en compartimientos, estudia las relaciones fisiológicas entre
ellas y mide los flujos metabólicos y energéticos en las condiciones físico-químicas
que se encuentran in vivo.
Los experimentos que aquí se incluyen están diseñados para realizarse con el
equipo de laboratorio con el que cuenta nuestra facultad, la metodología incluida
está centrada en el desarrollo de habilidades de ejecución y de razonamiento que
permitan al alumno tener un buen desempeño en un laboratorio de biología
celular; fomentando así, tanto el trabajo individual como colectivo.
Cada práctica incluye una breve revisión teórica, sin la intención de suplir los libros
de texto, que contienen información más detallada. En la evaluación del
aprendizaje se consideran la realización de prácticas, participación, entrega de
reportes escritos y exámenes teóricos. Además, ésta guía de prácticas para el
laboratorio de biología celular incluye un glosario de términos para que el alumno
alcance una mayor comprensión en su aprendizaje.
PRÁCTICA No. 01
USO Y CUIDADO DE UN MICROSCOPIO
OBJETIVO:
Conocer la importancia del microscopio en el campo de la Biología Celular, así
como las partes que lo integran, uso y cuidado del mismo.
FUNDAMENTO:
Un microscopio es un instrumento que permite observar objetos no perceptibles a
simple vista (Ver Fig. 1.1). Ello se consigue mediante un sistema óptico compuesto
por lentes de cristal, que al ser atravesadas por los rayos de luz reflejados por el
objeto, forman una imagen amplificada de él. (5)
Los microscopios se pueden clasificar desde un punto de vista muy sencillo en:
Simples y compuestos. Se le da el nombre de microscopio simple a todas aquellas
lentes con montura o sin ella, de distintos espesores y diámetros, biconvexas o
planoconvexas,
que
nos permiten
amplificar los
objetos,
comúnmente
conocidas como lupas. Un microscopio compuesto está constituido por
la combinación de dos sistemas de lentes convergentes. Uno, próximo
al ojo del observador, por lo cual se llama ocular y que actúa como
microscopio simple. Otro próximo al objeto denominado objetivo.(1)
Figura 1.1 Partes del microscopio Tornillo para fijar el condensador Transportador
del condensador Anillo para la abertura del diafragma del condensador
Objetivo Anillo de dioptría Ocular binocular Ocular Portaobjetos giratorio Base
Fuente de luz Botón de encendido Tornillo macrométrico Tornillo micrométrico
Platina Brazo Cabezal Tornillo del cabezal Tornillo del carro móvil
GENERALIDADES:
Descripción del microscopio compuesto: Sistema de soporte:
• Pie o base: la función de esta pieza es dar estabilidad al microscopio y soporte
a las demás partes que lo integran.
• P l a t i n a : es una pieza metálica cuadrada con un orificio en el centro por el cual
pasa la luz, posee a su vez un carro móvil con una pinza que sujeta la muestra
permitiendo su movilización para la observación.
• B r a z o : es el soporte que va desde la base hasta el sistema óptico, es el
sostén de dicho sistema. Sistema óptico.
• O c u l a r e s : son lentes que se encuentran en el cabezal d e l microscopio,
separados por un diafragma que permite el movimiento de estos para obtener una
imagen con mejor calidad y comodidad de visión.
• Objetivos (seco débil 10X, seco fuerte 40X e inmersión 100X): es la parte
mas importante del microscopio, se conforman por varias lentes que corrigen las
aberraciones, se encuentran en la parte baja del cabezal sujetos a un
carrusel o revolver que permite el cambio de un objetivo a otro. Sistema de
iluminación.
• F u e n t e l u m i n o s a : es la luz proporcionada por una lámpara ubicada en la
base del microscopio, la cual pasa a través de la platina proporcionando
iluminación a la muestra.
• Condensador: es un sistema de lentes con gran abertura, que se encuentra
entre la platina y la fuente de iluminación; puede subir o bajar dependiendo del
objetivo que se esté utilizando.
• Diafragma: se encuentra situado debajo de la platina y permite regular la
cantidad de luz que pasa por el condensador.
Sistema de ajuste:
• Tornillo macrométrico o de enfoque rápido:
se utiliza para conseguir un
ajuste aproximado de la imagen a observar.
• T o r n i l l o m i c r o m é t r i c o o d e e n f o q u e f i n o : su desplazamiento es
mucho más lento y permite enfocar claramente nuestra imagen.
• Tornillo de carro móvil: se utiliza para desplazar la laminilla sobre la platina
hacia los lados, hacia atrás y hacia delante.
MANIPULACIÓN DE UN MICROSCOPIO:
1.- El banco y la mesa deberán encontrarse a una altura que le permita al
bservador el uso del microscopio en posición vertical y d e manera confortable.
2.- Encender la fuente de iluminación.
3.- Montar la preparación que se desea observar.
4. Separar los binoculares ajustándolos a su propia distancia interpupilar.
5. Enfocar entre el ojo derecho y el izquierdo. Los tubos
porta oculares son
susceptibles de ajuste, esto se logra enfocando primero la imagen
con el objetivo de menor aumento, usando los tornillos macro y
micrométrico. Si la imagen no es clara, sube o baja el ocular
izquierdo mediante el movimiento del anillo que rodea el tubo
p o r t a o c u l a r h a s t a obtener una imagen nítida, así el microscopio
queda ajustado a su propia visión ocular.
6. Para enfocar con cualquier objetivo, específicamente el seco fuerte (40 X) y
con el de inmersión (100X), deberás acercar el objetivo a la
preparación, mirándolo de lado para controlar el descenso
h a s t a q u e l a lente frontal de dicho objetivo quede dentro de la distancia
focal. Solamente entonces deberás mirar por el ocular alejando lentamente el
objetivo hasta o b t e n e r
el
enfoque
correcto,
el
cual
se
o b t e n d r á m o v i e n d o e l t o r n i l l o micrométrico.
A) Objetivos de menor aumento (5X Y 10X): descender el condensador
afondo, bajar el objetivo sobre la preparación (sin tocarla), subir el objetivo
con el tornillo macrométrico hasta ver la imagen a través de los oculares.
Suba un poco el condensador en caso de que la iluminación sea
insuficiente.
B) Objetivo de gran aumento (40X): Colocar el condensador a la mitad de la
distancia, bajar el objetivo sobre la preparación (sin tocarla).
Subir el objetivo con el tornillo macrométrico muy lentamente hasta ver la
imagen e n
tornillo
el
campo
y
micrométrico.
perfeccionar
Mover
el
el
enfoque
condensador
hasta
con
el
obtener
iluminación suficiente.
C) Objetivo de inmersión: Colocar la preparación perfectamente
seca, p o n e r u n a p e q u e ñ a g o t a d e a c e i t e d e i n m e r s i ó n
s o b r e l a p a r t e a examinar, subir el condensador a tope.
O b s e r v a p o r l o s o c u l a r e s y enfoca con el tornillo micrométrico.
ABERTURA NUMÉRICA.
La abertura numérica (A.N.) de un objetivo es una cifra exacta calculada
matemáticamente a partir de su diámetro y su longitud focal equivalente,
pero a p e s a r d e s e r u n a c a r a c t e r í s t i c a i m p o r t a n t e , s ó l o e s
necesario saber que la abertura numérica se encuentra
m a r c a d a s o b r e l a l e n t e , q u e e x p r e s a e l tamaño del cono de
la luz y que de ella depende la cantidad que atraviesa la lente y en
particular su poder de resolución y su máxima amplificación útil.(5)
CUIDADOS PARA UN MICROSCOPIO.
• El microscopio deberá guardarse en un lugar seco y cubierto del polvo, ya que
éste además de dificultar la observación, daña las lentes cuando se frotan sin
que éstas se hayan limpiado.
• Al trasladarlo de un lugar a otro debe tomarse del brazo con una mano y con la
otra sostenerlo de la base.
• Deberás de cerciorarte que las lentes se encuentran limpias de polvo
antes de utilizarlo, de no ser así, deben limpiarse cuidadosamente utilizando
para ello un papel especial para lentes, el cual se obtiene en las ópticas o
en las tiendas de artículos fotográficos.
• Las lentes no deberán quitarse del sitio que les corresponde para que no se llene
de polvo el interior del equipo, además es necesario desmontar partes internas
para limpiarlo.
• Cuando emplees aceite de inmersión deberás limpiar las lentes una
vez terminada la observación, ya que si llegara a secarse sería difícil de
limpiarse, esto puedes hacerlo con el mismo papel para las lentes.
• Nunca deberás desarmar un microscopio, ya que si lo llegaras a hacer sin tener
conocimientos de ello, podrás desajustarlo o dañarlo de sus partes. Es
por ello que existe personal especializado.
• Las lentes podrán limpiarse con agua destilada, partes metálicas o plásticas del
microscopio deberán limpiarse con un trapo de algodón y se les da brillo con
aceite mineral.
• Todas las preparaciones que se hagan y se tengan que teñir,
limpiarlas del
reverso para que no pierdan nitidez.
• Al terminar la observación, deberás limpiar perfectamente las lentes.
• En caso de tener alguna duda en el cuidado del equipo o alguna falla mecánica o
eléctrica, deberás de dar aviso al encargado del laboratorio.(6)
FACTORES QUE DAÑAN AL MICROSCOPIO.
1 . Lavar las lentes con alcohol.
2 . Mojar los objetivos con xilol o alcohol, o bien con alguna otra sustancia.
3. Usar papel ordinario para limpiar las lentes.
4 . Poner los dedos sobre las lentes.
5. Limpiar el soporte o la platina con xilol.
6.Limpiar el interior de las lentes con tela o papel, en caso de que sea
completamente necesario, utiliza un pincel de cerdas muy pequeñas y/o utiliza
papel seda.
7 . Dejar el microscopio sin oculares.
8.Guardar el microscopio con aceite de inmersión en el objetivo.
9. Transportar el microscopio con una sola mano.(3)
OTROS TIPOS DE MICROSCOPIOS:
• Microscopio de Contraste de Fases.
Su sistema está compuesto por lente ocular, anillo de fases, lente del
objetivo,
lente
del
condensador
y
diafragma
anular.
Tiene
una
amplificación de 1,000 a 2,000 nm. Permite observar estructuras muy
difíciles de distinguir. No requiere de una tinción.
• Microscopio de Fluorescencia.
Se compone de un primer filtro de corte o filtro de excitación, espejo dicroico,
segundo filtro de corte o filtro de emisión, fuente de iluminación y condensador. Se
observan muestras teñidas, inmunofluorescencia directa o indirecta.
• Microscopio de Interferencia.
Es un instrumento que permite la medida de la masa de regiones pequeñas y
transparentes de células vivas, obteniéndose datos de tipo cualitativo y
cuantitativo. Sus componentes son analizador rotable, un cuarto de longitud de
onda, objetivo de interferencia, condensador, polarizador y filtro de interferencia.
• Microscopio Electrónico de Barrido.
Está compuesto por un cañón de electrones (ánodo, cátodo y electroimán),
sistema de barrido y de lentes. Su resolución depende de la cantidad de
electrones emitidos, contando así con un límite de resolución. Tiene una
amplificación de 100,000 a 200,000 veces y una alta resolución en 3D.
• Microscopio Electrónico de Transmisión.
Está compuesto por cañón electrónico, lente condensadora, cámara de muestra,
lente objetiva, lente intermedia, proyector, pantalla fluorescente y cámara (placa
fotográfica). Utiliza electrones con una longitud de onda de 0.5 Å. Proporciona un
aumento de las células de 100, 000 veces aproximadamente. (4)
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1)¿Cuál es la diferencia entre un microscopio simple y uno compuesto?
2)¿Qué importancia tiene el uso del microscopio en la Biología Celular?
3)¿Por qué es necesario utilizar aceite de inmersión al utilizar el
objetivo del mismo nombre?
4 ) ¿ Qué significa resolución, poder de resolución y amplificación, así mismo de
qué factores depende cada uno de ellos? Presenta tus respuestas a manera
de tabla.
5 ) Realiza una tabla comparativa de todos los tipos de microscopios incluyendo:
fuente de iluminación, condensador, longitud de onda, tipo de tinción,
resolución, amplificación, tipo de lentes, etc.
BIBLIOGRAFÍA:
1. Bernis, M. 1998. Atlas de Microscopía. México D.F. Segunda edición. Editorial
Fernando Aldape Barrera. Págs. 95-107
2. Coll, J. 2000. Experimentos con el microscopio. México D.F. Primeraedición.
Ediciones Omega S.A. Págs. 63-65
3. L ó p e z , C . 1 9 8 7 . Microscopia en el laboratorio. X a l a p a . F a c u l t a d d e
Bioanálisis, U. V. Págs. 10-21
4. Nachtigall, W. 2002. Microscopía. Materiales. Instrumental. Métodos. México
D.F. Segunda edición. Editorial Omega. Págs. 8-13
5. Vovides, A. 2000. Microscopía óptica: para las ciencias biológicas. C h i a p a s .
U n i v e r s i d a d d e C i e n c i a s y A r t e s d e l E s t a d o d e C h i a p a s . Págs.
14-19
6. Wallis, T. 1998. Microscopía analítica. México D.F. Primera edición. Editorial
ACRIBIA. Págs. 9-23
PRÁCTICA No. 02
MICROTOMO
OBJETIVO:
Aprender a realizar cortes histológicos utilizando el microtomo.
FUNDAMENTO:
Los
microtomos
son
máquinas
o
instrumentos
empleados
para
obtener láminas muy delgadas (cortes) de los tejidos que serán
estudiados. Según el tipo de trabajo, la forma en que se hizo la preparación y
la inclusión del tejido, se emplean muchos tipos de microtom os; algunos
están adaptados para un trabajo especial (Ver Fig. 2.1)
índices de refracción, y a los cambios ópticos que se producen cuando el agente
aclarante penetra entre los elementos tisulares muy refractantes; es decir, el
índice de refracción de los agentes aclarantes es aproximadamente igual al de
los tejidos. La mayoría de las sustancias verdaderamente aclarantes son aceites esenciales.
Los buenos agentes aclarantes deben eliminar pronto el alcohol y aclarar rápidamente
sin endurecimiento; no deben disolver los colorantes de anilina, ni evaporarse
demasiado rápido en los baños de parafina.
Inclusión:
Este proceso comprende la impregnación de los tejidos con un medio que llene
todas las cavidades naturales, espacios o intersticios tisulares y aún los espacios
intracelulares, y que proporcione la consistencia firme necesaria para hacer
cortes bastante delgados sin provocar distorsión y sin alterar las
relaciones espaciales del tejido y los elementos celulares. Otra ventaja física más
en el caso de especímenes pequeños deriva de la maniobra de encerrarlos en un
bloque o una masa de material de inclusión, que permite manejar y fijar la muestra
al microtomo sin dañar el tejido en sí. Microtomo de deslizamiento:
Se dividen en un tipo en el cual la cuchilla se mantiene entre pinzas, y
en el cual la cuchilla es móvil. Este último no es muy satisfactorio, solo si
se mantiene la cuchilla bien controlada, la variedad de cuchilla fija, donde lo que
se desliza es la pieza de tejido. Este tipo demicrotomo es el más utilizado ya que
es rígido, resistente, de diseño y construcción sencillos, fácil de mantener, y que la
calidad de los cortes obtenidos con él es difícilmente igualada por cualquier otro
instrumento. Asimismo, permite obtener grandes cortes y resulta fácil hacer cortes
seriados.
Microtomo rotatorio:
En este microtomo solo puede emplearse una longitud de cuchilla
relativamente pequeña, y la cuchilla ocupa una situación peligrosa. Además, su
diseño y construcción son complicados, lo que significa un costo elevado. No es
conveniente para cortar bloques grandes como el de deslizamiento; la mayor
parte de los investigadores lo encuentran más rápido en caso de cortes
numerosos de bloques ordinarios.
Microtomo de balanceo:
Este tipo de microtomo es probablemente el m á s simple de todos, el bloque de
tejido se monta en el extremo de un brazo móvil de resorte y la cuchilla se
mantiene rígida en posición horizontal con el filo hacia arriba y ligeramente
inclinado hacia el bloque. Fácilmente pueden obtenerse con él series de 60 a 90
cortes; éstos, sin embargo, no son absolutamente plano, sino que muestran una
ligera curvatura.
Microtomo de congelación:
Posee una cremallera central sobre la cual se coloca el sujetador del
bloque, el cual es perforado y unido por un tubo a un cilindro conteniendo
bióxido de carbono. Una simple válvula permite la liberación de chorros rápidos e
intermitentes de bióxido de carbono que congelan el bloque y el tejido. La
cuchilla suele ir montada en un pivote por encima del bloque.
Microtomo para cortes ultra delgados: Para la microscopía electrónica,
los cortes deben tener de 50 a 120 µm; para ello existen microtomos
especiales.Suelen recurrir a expansión térmica para hacer avanzar el bloque.
MATERIAL:
• Microtomo de deslizamiento.
• Pincel
• Baño de flotación
• Portaobjetos
• Algodón
• Termómetro
REACTIVOS:
• Alcohol
• Xilol
• Parafina
TÉCNICA:
1) Para el manejo del tejido debe fijarse:
a. Si es procesado por perfusión, debe mantenerse el tejido en el fijador
durante 24 hrs.
b. Después se enjuaga con agua y se pone a deshidratar en alcohol,pasando por
diferentes concentraciones.
c . Después de la deshidratación se realiza el aclaramiento con xiloldurante 3 hrs.
d. Se pone a derretir la parafina, entre 52 y 54 °C.
e. Pasando el aclaramiento se coloca el tejido en un cassette conmarbete y se
coloca en la parafina durante 4 hrs., realizando 2 baños, uno para quitar el exceso
de xilol y otro para cubrir completamente el tejido. El molde debe rociarse con
alcohol paradesprender fácilmente, una vez endurecida la parafina.
f. Cuando el tejido ya está encapsulado en la parafina se realizanunos cortes
gruesos para quitar el exceso de la misma(desbastar).
2) El microtomo cuenta con dos palancas una que acerca elportamuestras hacia el
cabezal, y la otra, la que mueve a la muestra dearriba hacia abajo para realizar los
cortes.
3) El botón micrométrico con el cual se calibra el grosor de l o s c o r t e s ,
e l c a b e z a l q u e p o r t a l a n a v a j a p a r a l a r e a l i z a c i ó n d e l o s cortes
puede ser fijo o moverse de izquierda a derecha, hacia el frente y hacia atrás.
Realización de los cortes:
4) Una vez que el tejido esté listo, se coloca de 5 a 10minutos en refrigeración
para la realización de los cortes.
5) E l e g i d o
secoloca
el
espesor
que
el portamuestras
se
a
desea
la
dar
distancia
a
los
cortes,
deseada
con
a y u d a d e l a s palancas y se desliza la cuchilla haciendo así el primer corte.
6) J u n t o
al
microtomo
se
tiene
preparado
el
baño
d e flotación a una temperatura de 2 °C debajo de la temperatura a la
quederrite la parafina (Ver Fig. 2.2).
Figura 2.2 Baño de flotación
Si el corte realizado sale completo, se toma por
u n extremo
con
la
ayuda
de
un
pincel
ligeramente
h u m e d e c i d o p a r a colocarlo en el baño de flotación.
8) E s t e b a ñ o t i e n e c o m o f i n e x t e n d e r l a p a r a f i n a p a r a colocarla en
el portaobjetos.
9) Teniendo ya el portaobjetos rotulado, se introduce en el baño por debajo de la
muestra y se levanta hacia la muestra para que secoloque sobre este, una vez frío y seco se
puede observar.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) ¿Qué es el microtomo y para que sirve?
2) ¿Qué precisión tiene el microtomo al realizar los cortes?
3) ¿Qué importancia tiene usar el baño de flotación?
4) ¿Por qué es necesario utilizar el proceso de fijación?
5) ¿Cuál es la importancia de utilizar el aclaramiento en una muestra?
FECHA DE REALIZACIÓN:
BIBLIOGRAFÍA:
1. L y n c h , M . 1 9 9 2 . M é t o d o s d e l a b o r a t o r i o . M é x i c o . S e g u n d a
e d i c i ó n . Editorial interamericana. Págs. 1129-1145
PRÁCTICA No. 03
PREPARACIONES TEMPORALESOBJETIVO:
Aprender a realizar una preparación temporal, útil en la observación dediversos
tipos de muestras.
FUNDAMENTO:
Las preparaciones pueden ser temporales, frescas y permanentes. Una
preparación temporal es aquella que es utilizada en el
m o m e n t o d e l a observación, ya que requiere que el medio de
m o n t a j e n o s e e v a p o r e t a n rápidamente y que sea posible que el
material biológico se conserve por un tiempo (algunos días) en
condiciones de ser observado; las frescas solo se u s a n d u r a n t e l a
práctica y posteriormente se lavan. Y las permanentes son
aquellas preparaciones que “duran para siempre”, por lo que se debe hacerse con
un material especial como el bálsamo de Canadá, para que el cubre objetos
permanezca perfectamente adherido al portaobjetos durante años (Ver
Fig.3.1).(2)
Fig. 3.1 Preparación temporal
Fig. 3.2 Material para montaje de muestras
GENERALIDADES:
En general una preparación microscópica se define como el resultado de una serie
de operaciones destinadas a colocar material de observación en una capa de poco
espesor, lo más pequeña y representativa posible. Pudiendo ser e n
seco,
líquido o en vivo, o en partes sobre una superficie
de
vidrio
transparente
(portaobjetos)
y
algunas veces con otra de menor a u m e n t o
d e l g a d a (cubreobjetos). (Ver Fig. 3.2)
cubierta
y
m á s
Los portaobjetos deben ser de vidrio lo más transparente posible, de un espesor
aproximado de 2 mm y de unas medidas estándar de 16 x 26 mm. Los bordes
pueden
ser
o
no
esmerilados.
Algunos
tienen
una
concavidad
circular e n s u c e n t r o d e s t i n a d a a r e c i b i r g o t a s d e l í q u i d o
con
elementos
para
su
estudio. Los cubreobjetos son de muchos
tamaños, los habituales son de 18 x 18m m , 2 0 x 2 0 m m y 2 2 x 3 2 m m
y d i v e r s a s f o r m a s , l o s m á s c o m u n e s s o n cuadrangulares. Su
espesor es aproximadamente de 0.25 mm. A manera de sugerencia, tanto el
portaobjetos como el cubre objetos antes de ser utilizados deberán limpiarse con
alcohol para eliminar la grasa y el polvo.(3)
MATERIAL:
• Microscopio compuesto.
• Portaobjetos.
• Cubreobjetos.
• Pipeta pasteur o gotero.
• Frasco gotero con agua.
• Aguja de disección.
MATERIAL BIOLOGICO:
• Hongo de pan.
TÉCNICA:
1. Colocar en un portaobjetos una gota de agua con el gotero.
2. Tomar una pequeña muestra con la aguja de disección del hongo de
pan
y
extiéndelo
sobre
la
gota
de
agua
que
a p l i c a s t e e n e l porta objetos.
3.Colocar
el
cubreobjetos
sobre
tu
muestra,
cuidando
q u e n o v a y a a tener aire al momento de que sea colocado.
4.Proceder a observar con el objetivo seco débil y seco fuerte,
cuidando que al momento de enfocar no rompas el cubreobjetos.
5.Dibuja lo que observaste en tu preparación.
Fig. 3.2 Material para montaje de muestras
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1) ¿Por qué son importantes las preparaciones temporales?
2) ¿Qué propiedades tiene este medio de montaje?
3) ¿Cuáles son las preparaciones que se pueden hacer en el laboratorio?
FECHA DE REALIZACIÓN:
BIBLIOGRAFÍA:
1. Alberts, B. 2006. "Introducción a la biología celular". Madrid. Segunda edición.
Editorial Médica Panamericana. Págs. 24-27
2.C u r t i s , H . 2 0 0 4 . B i o l o g í a . M é x i c o D . F . S e x t a
e d i c i ó n . E d i t o r i a l panamericana. Págs. 17-18
3.Johnson, G. 2006. “Biología Celular”. México D.F. Segunda edición.
Editorial Panamericana. Págs. 13-15
4.V i l l e e , C . 2 0 0 3 . B i o l o g í a . M é x i c o D . F . O c t a v a e d i c i ó n .
E d i t o r i a l M c Graw Hill. Págs. 43-45
5. Vovides, A. 2000. Microscopía óptica: para las ciencias
biológicas.C h i a p a s . U n i v e r s i d a d d e C i e n c i a s y A r t e s d e l E s t a d o
d e C h i a p a s . Págs. 14-19
6. Wallis, T. 1998. Microscopía analítica. México D.F. Primera
edición.Editorial ACRIBIA. Págs. 9-23
PRÁCTICA No. 02
MICROTOMO
OBJETIVO:
Aprender a realizar cortes histológicos utilizando el microtomo.
FUNDAMENTO:
Los microtomos son máquinas o instrumentos empleados para
obtener láminas muy delgadas (cortes) de los tejidos que serán
estudiados. Según eltipo de trabajo, la forma en que se hizo la preparación y la
inclusión del tejido,se emplean muchos tipos de microtomos ; algunos
están adaptados para untrabajo especial (Ver Fig. 2.1).
Generalmente se consideran cinco clases de microtomos:1 ) D e
deslizamiento2 ) R o t a t o r i o s 3 ) D e b a l a n c e o 4 ) D e
c o n g e l a c i ó n 5)Para cortes ultradelgados (microscopia electrónica)E s t o s
t i p o s p u e d e n s e r s u b d i v i d i d o s s e g ú n s u s c u c h i l l a s , y a s e a n móviles
o fijas, o también según el plano de sección, vertical u horizontal.
Los microtomos consisten básicamente en una base pesada que soporta
unasuperficie por la que se desliza una cuchilla, un tornillo que acerca el material yl o
ponga al alcance del filo de la navaja, de modo que siempre su
a v a n c e ofrezca la misma medida del material. (1)
índices de refracción, y a los cambios ópticos que se producen
c u a n d o e l agente aclarante penetra entre los elementos tisulares muy
refractantes; esdecir, el índice de refracción de los agentes aclarantes es
aproximadamenteigual al de los tejidos. La mayoría de las sustancias verdaderamente
aclarantesson aceites esenciales. Los buenos agentes aclarantes deben eliminar prontoe l
alcohol y aclarar rápidamente sin endurecimiento; no deben disolver
losc o l o r a n t e s d e a n i l i n a , n i e v a p o r a r s e d e m a s i a d o r á p i d o e n
l o s b a ñ o s d e parafina.
Inclusión:
E s t e p r o c e s o c o m p r e n d e l a i m p r e g n a c i ó n d e l o s t e j i d o s c o n u n medio
que llene todas las cavidades naturales, espacios o intersticios tisularesy a ú n l o s
espacios intracelulares, y que proporcione la consistencia
f i r m e necesaria para hacer cortes bastante delgados sin provocar distorsión y
sina l t e r a r l a s r e l a c i o n e s e s p a c i a l e s d e l t e j i d o y l o s e l e m e n t o s
c e l u l a r e s . O t r a ventaja física más en el caso de especímenes pequeños deriva de la
maniobrade encerrarlos en un bloque o una masa de material de inclusión, que
permitemanejar y fijar la muestra al microtomo sin dañar el tejido en sí.
Microtomo de deslizamiento:
Se dividen en un tipo en el cual la cuchilla semantiene entre pinzas, y en el
cual la cuchilla es móvil. Este último no es muy s a t i s f a c t o r i o , s o l o s i s e
mantiene la cuchilla bien controlada, la variedad de c u c h i l l a f i j a ,
donde lo que se desliza es la pieza de tejido. Este tipo
demicrotomo es el más utilizado ya que es rígido,
resistente, de diseño yconstrucción sencillos, fácil de
m a n t e n e r , y q u e l a c a l i d a d d e l o s c o r t e s obtenidos con él es
d i f í c i l m e n t e i g u a l a d a p o r c u a l q u i e r o t r o i n s t r u m e n t o . Asimismo, permite
obtener grandes cortes y resulta fácil hacer cortes seriados.
Microtomo rotatorio:
En este microtomo solo puede emplearse una longitud de cuchilla relativamente
pequeña, y la cuchilla ocupa una situación peligrosa. Además, su diseño y construcción son
complicados, lo que significa un costoe l e v a d o . N o e s c o n v e n i e n t e
p a r a c o r t a r b l o q u e s g r a n d e s c o m o e l d e deslizamiento; la
mayor parte de los investigadores lo encuentran más rápido en caso de cortes
numerosos de bloques ordinarios.
Microtomo de balanceo
: E s t e t i p o d e m i c r o t o m o e s p r o b a b l e m e n t e e l m á s simple de todos, el
bloque de tejido se monta en el extremo de un brazo móvild e r e s o r t e y l a c u c h i l l a
se mantiene rígida en posición horizontal con el filo h a c i a a r r i b a y
ligeramente inclinado hacia el bloque. Fácilmente
puedeno b t e n e r s e c o n é l s e r i e s d e 6 0 a 9 0 c o r t e s ; é s t o s ,
s i n e m b a r g o , n o s o n absolutamente plano, sino que muestran una ligera
curvatura.
Microtomo de congelación:
Posee una cremallera central sobre la cual secoloca el sujetador del bloque, el
cual es perforado y unido por un tubo a un c i l i n d r o c o n t e n i e n d o
bióxido de carbono. Una simple válvula permite laliberación
de chorros rápidos e intermitentes de bióxido de carbono
q u e congelan el bloque y el tejido. La cuchilla suele ir montada en un pivote
por encima del bloque.
11
Microtomo para cortes ultradelgados
: Para la microscopía electrónica, loscortes deben tener de 50 a 120 µm; para
ello existen microtomos especiales. Suelen recurrir a expansión térmica para hacer
avanzar el bloque.
MATERIAL:
•
Microtomo de deslizamiento.
•
Pincel
•
Baño de flotación
•
Portaobjetos
•
Algodón
•
Termómetro
REACTIVOS:
•
Alcohol
•
Xilol
•
Parafina
TÉCNICA:
1)Para el manejo del tejido debe fijarse:
a.
Si es procesado por perfusión, debe mantenerse el tejido en el fijador durante 24
hrs.
b.
Después se enjuaga con agua y se pone a deshidratar en alcohol,pasando por diferentes
concentraciones.c . D e s p u é s d e l a d e s h i d r a t a c i ó n s e r e a l i z a e l
a c l a r a m i e n t o c o n x i l o l durante 3 hrs.
d.
Se pone a derretir la parafina, entre 52 y 54 °C.
e.
Pasando el aclaramiento se coloca el tejido en un cassette conmarbete y se
coloca en la parafina durante 4 hrs., realizando 2b a ñ o s , u n o p a r a q u i t a r
e l e x c e s o d e x i l o l y o t r o p a r a c u b r i r completamente el tejido. El molde
debe rociarse con alcohol paradesprender fácilmente, una vez endurecida la parafina.
f.
Cuando el tejido ya está encapsulado en la parafin a se realizanu n o s
cortes gruesos para quitar el exceso de la
m i s m a (desbastar).
2)
El microtomo cuenta con dos palancas una que acerca elportamuestras hacia el cabezal, y la
otra, la que mueve a la muestra dearriba hacia abajo para realizar los cortes.
3)
El botón micrométrico con el cual se calibra el grosor de l o s c o r t e s , e l
c a b e z a l q u e p o r t a l a n a v a j a p a r a l a r e a l i z a c i ó n d e l o s cortes puede ser fijo
o moverse de izquierda a derecha, hacia el frente yhacia atrás.
12
Realización de los cortes:4 ) U n a
v e z
q u e
e l
t e j i d o
e s t é
l i s t o ,
s e
c o l o c a
d e
5
a
1 0 minutos en refrigeración para
la realización de los cortes.
5)
Elegido el espesor que se desea dar a los cortes, secoloca el
p o r t a m u e s t r a s a l a d i s t a n c i a d e s e a d a c o n a y u d a d e l a s palancas y
se desliza la cuchilla haciendo así el primer corte.
6)
Junto al microtomo se tiene preparado el baño
d e flotación a una temperatura de 2 °C debajo de la temperatura a la que derrite
la parafina (Ver Fig. 2.2)
Figura 2.2 Baño de flotación
7)
Si el corte realizado sale completo, se toma por
u n extremo con la ayuda de un pincel ligeramente
h u m e d e c i d o p a r a colocarlo en el baño de flotación.
8)
E s t e b a ñ o t i e n e c o m o f i n e x t e n d e r l a p a r a f i n a p a r a colocarla en el
portaobjetos.
9)
Teniendo ya el portaobjetos rotulado, se introduce en el baño por debajo de la
muestra y se levanta hacia la muestra para que secoloque sobre este, una vez frío y seco se
puede observar.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:C O N C L U S I O N E S : CUESTIONARIO:
1)
¿Qué es el microtomo y para que sirve?
2)
¿Qué precisión tiene el microtomo al realizar los cortes?3)¿Qué importancia tiene usar el
baño de flotación?4)¿Por qué es necesario utilizar el proceso de fijación? 5)¿Cuál
es la importancia de utilizar el aclaramiento en una muestra?
FECHA DE REALIZACIÓN:
BIBLIOGRAFÍA:
13
Figura 2.2 Baño de flotación
1.
Lynch, M. 1992. Métodos de laboratorio. México. Segunda
e d i c i ó n . Editorial interamericana. Págs. 1129-1145
PRÁCTICA No. 03PREPARACIONES TEMPORALESOBJETIVO:
Aprender a realizar una preparación temporal, útil en la observación dediversos tipos de
muestras.
FUNDAMENTO:
Las preparaciones pueden ser temporales, frescas y permanentes. Unap r e p a r a c i ó n
temporal es aquella que es utilizada en el momento de
l a observaci ón, ya que requiere que el medio de montaje no se
e v a p o r e t a n rápidamente y que sea posible que el material biológico se
conserve por untiempo (algunos días) en condiciones de ser observado; las
frescas solo seu s a n d u r a n t e l a p r á c t i c a y p o s t e r i o r m e n t e s e l a v a n . Y
l a s p e r m a n e n t e s s o n aquellas preparaciones que “duran para siempre”, por lo que se
debe hacersecon un material especial como el bálsamo de Canadá, para que el
cubreobjetospermanezca perfectamente adherido al portaobjetos durante años
(Ver Fig.3.1).(2)
Fig. 3.1 Preparación temporal
GENERALIDADES:
En general una preparación microscópica se define como el resultado deuna serie de
operaciones destinadas a colocar material de observación en unacapa de poco espesor, lo
más pequeña y representativa posible. Pudiendo ser e n s e c o , l í q u i d o o e n
vivo, o en partes sobre una superficie de
v i d r i o transparente (portaobjetos) y cubierta algunas veces
con otra de menor a u m e n t o y m á s
d e l g a d a (cubreobjetos). (Ver Fig. 3.2)
Fig. 3.2 Material para montaje de muestras
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:CONCLUSIONES:CUESTIONARIO:
1)¿Por qué son importantes las preparaciones temporales?2)¿Qué propiedades tiene este
medio de montaje?3)¿Cuáles son las preparaciones que se pueden hacer en el laboratorio?
FECHA DE REALIZACIÓN:BIBLIOGRAFÍA:
1.
Alberts, B. 2006. "Introducción a la biología celular". Madrid. Segundaedición. Editorial
Médica Panamericana. Págs. 24-27
2.
Curtis, H. 2004. Biología. México D.F. Sexta edición.
E d i t o r i a l panamericana. Págs. 17-18
3.
Johnson, G. 2006. “Biología Celular”. México D.F. Segunda edición. Editorial
Panamericana. Págs. 13-15
4.
Villee, C. 2003. Biol ogía. México D.F. Octava edición. Editorial
M c Graw Hill. Págs. 43-45
16
PRÁCTICA No. 04
DIVERSIDAD CELULAROBJETIVO:
Establecer las semejanzas y diferencias entre las células vegetales y animales.
FUNDAMENTO:
La célula es la unidad básica funcional y estructural más pequeña de loso r g a n i s m o s
vivos. S e compone de partes características, cuyo trabajo
estacoordinado de tal manera que cada tipo de célula lleva a cabo
una funciónestructural bioquímica única. Las células realizan
numerosas reaccionesq u í m i c a s p a r a d a r o r i g e n a l p r o c e s o v i t a l
q u e s e l l e v a a c a b o d e m a n e r a compartimentalizada; es decir,
estructuras especializadas dentro de la célula efectúan reacciones químicas aisladas,
las cuales están coordinadas unas cono t r a s p a r a m a n t e n e r c o n v i d a t a n t o
l a c é l u l a c o m o l o s t e j i d o s , ó r g a n o s , sistemas y todo el
organismo.(4)R e g u l a n e l f l u j o d e e n t r a d a y d e s a l i d a d e l o s
m a t e r i a l e s a f i n d e asegurar las condiciones óptimas para el proceso vital
prevaleciente dentro deellas. Asimismo, utilizan su información genética para
guiar la síntesis de lamayoría de sus componentes y dirigir gran parte de sus
actividades químicas;entre éstas, la generación de ATP, por desdoblamiento
de los nutrientes, lasíntesis molecular, la transportación de las moléculas dentro y entre
las células,la remoción de los desechos y el movimiento parcial o incluso de toda la célula.
GENERALIDADES:
Las unidades básicas de todos los organismos tienen
m u c h a s características en común, pero no todas ellas poseen todo el
c o n j u n t o d e componentes. (1)Características de las células animales, células vegetales y
protistas.Las células animales se pueden distinguir fácilmente de las vegetales env i r t u d
de marcadas diferencias. Los animales poseen ciertos
sistemasorganizados característicos, son capaces de moverse
p o r s í m i s m o s y dependen completamente de sustancias preformadas para
obtener energía ycarbono; éstas son únicamente algunas de sus características
más notorias.
17
Las plantas superiores contienen el pigmento verde llamado clorofila, lo que lespermite
efectuar la fotosíntesis, son generalmente inmóviles y tienen sistemasorganizados de
manera peculiar.Un número considerable de organismos unicelulares exhiben
caracterestanto de plantas como de animales, a estos como poseen esta peculiaridad
losclasifican como protistas.(5)
Características exclusivas de la célula animal.
Centrosoma, cilios y flagelos. Virtualmente todas las células animales y un
escaso número de células vegetales muy primitivas o inferiores, tienen unae s t r u c t u r a
citoplasmática, llamada centrosoma. En la célula en reposo
s e presenta usualmente cerca del núcleo a manera de una pequeña región
masc l a r a c o n f i b r a s r a d i a d a s a m a n e r a d e u n a e s t r e l l a y u n a o d o s
p e q u e ñ a s granulaciones que se tiñen profundamente en su parte central, a las que se
lesh a d a d o e l n o m b r e d e c e n t r i o l o s . L a s c é l u l a s d e l a s p l a n t a s
s u p e r i o r e s n o tienen centrosoma, aunque en su lugar presentan dos pequeñas
áreas clarasd u r a n t e l a d i v i s i ó n c e l u l a r a l a s q u e s e l e s l l a m a
c a s q u e t e s p o l a r e s , q u e aparentemente tienen la misma función que el
centrosoma durante la división celular. Además, el centrosoma controla la actividad y
la formación de los cilios yf l a g e l o s , e s t r u c t u r a s c i t o p l a s m á t i c a s
f i l a m e n t o s a s y d i s t e n d i d a s q u e s e proyectan a partes de la sup erficie
externa de la membrana celular en cierto t i p o d e c é l u l a s . L o s c i l i o s s o n
r e l a t i v a m e n t e c o r t o s y s e p r e s e n t a n e n g r a n cantidad, mientras que los
flagelos son considerablemente más largos y enmenor numero. Ciertos
organismos unicelulares poseen un gran número decilios o flagelos que se
mueven rítmica y coordinadamente; pueden contarsepor cientos y son los
causantes de la movilidad de estas formas unicelulares. Ciertos epitelios que
tapizan las superficies internas del organismo, tales comola tráquea humana, poseen
grandes cantidades de cilios. Estos movimientos c o o r d i n a d o s o r i g i n a n
c o r r i e n t e d e f l u i d o s y d e a i r e h a c i a e l e x t e r i o r d e l a superficie
celular, expulsando partículas extrañas pequeñísimas que penetran al a t r á q u e a . L o s
flagelos también se encuentran en muchos
o r g a n i s m o s unicelulares y en la gran mayoría de las células espermáticas de
animales yv e g e t a l e s . S u a c c i ó n , a m a n e r a d e l á t i g o , f a v o r e c e l a
m o v i l i d a d d e e s t a s células (Ver Fig. 4.1)
Fig. 4.1 Célula animal
Caracteres exclusivos de la célula vegetal.
Pared celular. Esta, es una de las características más sobresalientes dela célula vegetal.
Consiste de una envoltura moderadamente rígida de materiali n e r t e , q u e r o d e a a
c a d a u n o d e l o s p r o t o p l a s t o s . A u n q u e e s s i n t e t i z a d a y secretada por el
citoplasma de la célula vegetal, estrictamente hablando no puede considerarse esta
pared celular como un componente de la célula, sinoc o m o u n d e p o s i t o
e x t r a c e l u l a r . E n l a m a y o r í a d e l a s p l a n t a s v e r d e s , e s t á compuesta
principalmente de un carbohidrato muy complejo llamado celulosa ysegún el tipo de célula
vegetal que se trate, además de la celulosa, puede tener varias sustancias, incluyendo sales,
lignina, sustancias parecidas a las grasasrepelentes de agua tales como ceras y suberina.La
pared celular varía considerablemente en grosor dependiendo del tipod e t e j i d o v e g e t a l
y d e l a s c o n d i c i o n e s d e c r e c i m i e n t o . E n c é l u l a s v e g e t a l e s maduras
consiste, por lo regular, de tres capas y casi siempre es mucho más g r u e s a
que la membrana celular ad yacente. A diferencia de la
m e m b r a n a celular, es permeable a la mayoría de las moléculas y no controla
el paso demateriales hacia dentro y hacia fuera de la célula. En efecto, la pared celular
escomo una especie de armazón que le sirve a la célula vegetal para
proteger,mantener y servir de apoyo a la célula y a la planta en general.Muchas células
animales también depositan materiales extracelulares a l r e d e d o r d e l a
superficie externa de sus membranas celulares.
E s t o s depósitos no contienen celulosa o cera, varían
c o n s i d e r a b l e m e n t e e n s u composición y se les llama sustancias intersticiales. A
diferencia de esta paredcelulósica, estas sustancias no tienen una organización
definida y no dan elefecto de una estructura a manera de una pared. En la
mayoría de los tejidosvegetales, la sustancia intersticial actúa como un cemento que
mantiene unidasa l a s c é l u l a s ; s e e x t i e n d e a l h i n c h a r s e l a c é l u l a ,
o f r e c i e n d o p o c a o n i n g u n a protección contra las rupturas del protoplasto. Cuando la
célula pierde agua seadapta a la forma que toma al contraerse. Por el contrar io,
las membranascelulósicas o paredes celulares de las plantas superiores,
bacterias y hongos,m a n t i e n e n m a s o m e n o s s u f o r m a y t a m a ñ o , a p e s a r
de los cambios en elv o l u m e n d e l p r o t o p l a s t o d e b i d o a l o s
c a m b i o s e n e l c o n t e n i d o d e a g u a , evitando así la ruptura del protoplasto
(Ver Fig. 4.2).(2)
Fig. 4.2 Célula vegetal
Son Plastos.
estructuras citoplasmáticas unidas que se encuentran en las células de
lasplantas superiores y en ciertos organismos unicelulares, pero nunca
e n l a s células de animales superiores. Aunque su tamaño, forma y color pueden variar de
manera considerable, según el tejido de que se trate, del organismo y de lascondiciones de
desarrollo, a menudo se presentan en forma de cuerpecillos discoides o esféricos que se
encuentran libremente en el citoplasma.(3)
MATERIAL:
•
Microscopio compuesto.
•
Porta y cubreobjetos.
•
Gotero con bulbo.
•
Corcho de botella.
•
Navaja de rasurar nueva.
•
Pinzas.
•
Hisopos estériles.
•
Lancetas estériles.
•
Torundas con alcohol.
•
Tubos al vacío Vacutainer de tapa morada.
•
Ligadura.
•
Pipeta pasteur.
•
Tubos de ensayo de 13 x 100 mm.
•
Centrífuga clínica.
•
Frascos de boca ancha limpios y secos.
MATERIAL BIOLÓGICO:
•
Bulbo de cebolla.
•
Sangre.
•
Semen.
•
Orina.
•
Polen.
REACTIVOS:
•
Solución salina isotónica.
•
Solución de Locke.
•
Azul de metileno al 1%.
•
Colorante de Wright.
•
Buffer de Fosfatos.
•
Aceite de inmersión.
TÉCNICA PARA LAS CÉLULAS DEL CORCHO:
1 . T o m a e l c o r c h o c o n l a m a n o i z q u i e r d a ,
s u j e t a f i r m e m e n t e y c o r t a una rebanada muy fina colocando
la navaja un poco oblicua a la superficie.2 . C u a n d o s e h a y a
o b t e n i d o e l c o r t e l o s u f i c i e n t e m e n t e d e l g a d o ,
s e coloca en un portaobjetos y se le agrega una gota de agua y se cubre.3 . D e b e
e v i t a r s e
l a s
b u r b u j a s
d e
a i r e . 4 . O b s é r v e s e c o n m e n o r a u m e n t o
s o b r e t o d o l a s o r i l l a s d e l c o r t e donde
habitualmente es más delgado.5 . D i b u j a u n a p e q u e ñ a p o r c i ó n
d e e s t e m a t e r i a l e i n d i c a l a f o r m a y e l tamaño de las
células.6 . R e s p o n d e
l o
s i g u i e n t e : a)¿Qué estructura se ve dentro de
ella?b)¿Qué parte de la célula es la que evita que el agua penetre
e n las células?
TÉCNICA PARA LAS CÉLULAS DE CEBOLLA:
1.Corta un bulbo de cebolla en 4 partes, se observará que cada parte
s e separa por sí sola en capas llamadas envolturas u hojas.2 . T o m a u n a d e e s t a s
e s c a m a s c o n l a s u p e r f i c i e c ó n c a v a y r ó m p e l a . Entonces
o b s e r v a r á s q u e s e d e s p r e n d e c o n f a c i l i d a d u n a c a p a m u y delgada y
transparente que es la epidermis.
3.
Toma un fragmento y colócalo sobre un portaobjetos con una gota deagua de
modo que la superficie que estaba en contacto con la escama quede hacia arriba.
Usa un fragmento de epidermis de no más de 1 cm
2
y cúbrelo con un cubreobjetos.4.Observa con menor aumento y contesta lo
siguiente:
a)
¿Cómo se aprecia la morfología de las células y sus paredes?
5.
Retira la preparación de la platina del microscopio y coloca una gota dea z u l d e
metileno de un lado de la preparación, en el borde
d e l cubreobjeto para que la solución entre por capilaridad. Observa con
unmenor aumento.
6.Contesta lo siguiente:
a)¿Cuál es el color y la forma del núcleo? Observa los
n ú c l e o s con seco fuerte.
b)¿Cuál es la ubicación de este organelo en la célula?
7.Alrededor del núcleo se encuentra una sustancia granular
q u e s e h a teñido ligeramente que es el citoplasma, descríbelo. Compara las célulasde la
cebolla con las del corcho.
a)¿En qué difieren?
b)¿En qué se asemejan?
c)¿Consideras que las formas y tamaños celulares
e s t á n relacionados con las funciones de las mismas?
TÉCNICA PARA LAS CÉLULAS DE POLEN:
1.Colocar unas partículas de polen sobre un portaobjetos.
2.Agregar una gota de agua y colocarle un cubreobjetos cuidando de
n o dejar burbujas de aire.
3.Observar la morfología al microscopio con el
o b j e t i v o d e m e n o r aumento.
TÉCNICA PARA CÉLULAS ANIMALES:
1.Coloca una gota de solución salina isotónica en un portaobjetos limpio, con
un hisopo frota ligeramente la cara interna de la mejilla y el materialque obtengas mézclalo
con movimientos rotatorios junto con la solucións a l i n a i s o t ó n i c a h a s t a
o b t e n e r u n m a t e r i a l c o n a s p e c t o l e c h o s o homogéneo. Agrega una
gota de azul de metileno y cubre la preparacióncon un cubreobjetos.
2.Con el objetivo seco débil, localiza las cé lulas y compáralas con
l a s d e las plantas. Vas a encontrar algunas células asociadas, otras dobladas orotas. Busca
una o dos que estén completas con el objetivo seco fuerte.E l n ú c l e o e s c l a r a m e n t e
v i s i b l e s i s e a j u s t a l a l u z c o n v e n i e n t e m e n t e , también se podrá observar el
citoplasma.
TÉCNICA PARA PUNCIÓN VENOSA:
1 . U n a v e z s e l e c c i o n a d o e l s i t i o d e
p u n c i ó n , c o n u n a t o r u n d a s e frota perfectamente el
lugar elegido, sin pasar la torunda por el mismo sitio.Con esto se eliminan suciedad y
detritus celulares y se evita la introducciónde gérmenes al puncionar.
2 . M i e n t r a s
e l
a l c o h o l
s e
s e c a ,
s e
a p l i c a
u n
t o r n i q u e t e
c o n
l a ligadura, unos
7 centímetros por encima del sitio de punción. No se debe dejar muy apretado
pues provocaría éxtasis venosa que podría modificar losv a l o r e s h e m á t i c o s .
D e s d e l u e g o q u e e l t o r n i q u e t e n o d e b e s e r m u y apretado, pues podría
ser molesto para el paciente. Se invita al paciente aapretar el puño, con lo que favorece la
fijación de la vena además de que lac o m p r e s i ó n m u s c u l a r a u m e n t a e l f l u j o
v e n o s o c o n l a d i l a t a c i ó n d e l a s venas.
3. Se fija la vena en posición, sosteniendo el brazo del paciente conl a m a n o m i e n t r a s
s e e s t i r a n y c o m p r i m e n l o s t e j i d o s b l a n d o s s i t u a d o s debajo de donde se
va a puncionar. Se toma el maneral del vacutainer yhaciendo un ángulo de 15
°
con el brazo, se perfora la piel a lo largo de lacara lateral de la vena. Se hace
avanzar la punta de la aguja debajo de la piel de 0.5 a 1 cm y luego se perfora la
pared de la vena. La introducción sehace con suavidad pero con suficiente rapidez
para reducir las molestias.U n a v e z q u e e s t é s a l i e n d o l a s a n g r e , s e
r e t i r a l a l i g a d u r a p a r a e v i t a r hemólisis.
4 . C u a n d o l a a g u j a h a y a p e n e t r a d o l a
v e n a , s e i n t r o d u c e e l t u b o e n el maneral de sujeción, el
que se mantiene fijo con la otra mano, hasta queel tapón del tubo sea atravesado por
la aguja situada dentro del maneral.Una vez que el tubo se llenó, se extrae y
se repite la operación con tantos tubos como sea necesario.
5 . S e i n v i t a a l p a c i e n t e a a b r i r s u p u ñ o . La
a g u j a s e r e t i r a e n s e n t i d o inverso a como se introdujo
t a m b i é n d e m a n e r a s u a v e p e r o c o n u n s o l o movimiento. De inmediato, se
coloca una torunda impregnada de alcohol enel sitio de punción, ejerciendo presión
sobre la zona y manteniéndola asípor lo menos de 3 a 4 minutos para evitar la
formación de hematomas.
6 . U n a
v e z
e x t r a í d a
l a
m u e s t r a ,
e s
i n d i s p e n s a b l e
m e z c l a r l a , invirtiendo la
muestra para que se mezcle con el anticoagulante y de esta manera evitar una
posible coagulación de la misma.
FROTIS DE SANGRE:
1.Coloca una gota de sangre en el extremo de un portaobjetos y con
otroextiende hacia el otro extremo.
2.Seca el frotis al aire.
3.Una vez seco el frotis se coloca en un puente de tinción, para realizar
lat i n c i ó n d e W r i g h t d e l a s i g u i e n t e m a n e r a : c o n u n g o t e r o ,
a g r e g a r colorante de Wright a todo el frotis y dejarlo reposar 5 minutos, una
vezp a s a d o e l t i e m p o a g r e g a r s o b r e e l m i s m o c o l o r a n t e c o n o t r o
g o t e r o buffer de fosfatos y dejarlo reposar durante 15 minutos, a intervalos de 5minutos,
soplar sobre el frotis con una pipeta pasteur hasta observar la presencia de capa
verde metálica.
4.Una vez cumplido el tiempo, quitar el colorante al
c h o r r o d e a g u a durante 5 ó 30 segundos.
5.Después del lavado, quitar el exceso de agua inclinando el
f r o t i s y tocando con un papel secante el borde inferior. Limpiar la parte posterior del
portaobjetos.
6.Secar las preparaciones al aire.
7.Para montar la preparación al microscopio, se deberá agregar una gotade
aceite de inmersión y observar a 100X.
8. I m á g e n e s d e l a s d i f e r e n t e s c é l u l a s s a n g u í n e a s q u e
p u e d e n s e r observadas en un frotis (Ver Fig. 4.3).
a) Neutrófilo segmentado (37)
b) Basófilo (56)
c) Eosinófilo (50)
d) Monocito (59)
e) Linfocito (78)
TÉCNICA PARA LA OBTENCIÓN DEL SEMEN:
1.
La muestra deberá obtenerse por masturbación y depositarla en
u n frasco de boca ancha el cual deberá estar perfectamente limpio.
Estamuestra preferentemente deberá estar lista pocos minutos antes de
lar e a l i z a c i ó n d e l a p r á c t i c a , p a r a o b s e r v a r l a
m o v i l i d a d d e l o s espermatozoides (Ver Fig. 4.4).2 . U n a v e z q u e s e
t i e n e l a m u e s t r a , c o l o c a r u n a g o t a d e s e m e n e n e l centro
de un portaobjetos, agregar una gota de azul de metileno al 1% ycubrirla con un
cubreobjetos.3 . O b s e r v a r l a m u e s t r a a 1 0 y 4 0 X , r e a l i z a n d o d i b u j o s d e
l a s e s t r u c t u r a s observadas.
Figura 4.4 Partes del espermatozoide
Figura 4.5 Células del epitelio pavimentoso
TÉCNICA PARA LA PREPARACIÓN DE MUESTRA DE ORINA:
1.
Obtener una muestra de orina (aproximadamente 10 a 15 ml) en
u n frasco de boca ancha perfectamente limpio sin restos de detergente.
2.
Colocar en un tubo de ensayo de 13 x 100 mm, aproximadamente 5 ml.de orina y
centrifugarla durante 5 minutos a 2,500 rpm.3 . U n a v e z p a s a d o e l
tiempo, saque el tubo de la centrífuga y
p o r decantación eliminar el sobrenadante, resuspenda el
s e d i m e n t o y agregue unas de azul de metileno, espera 5 minutos y agrega una gotade
la solución de orina con azul de metileno a un portaobjetos y cúbrelacon un cubreobjetos.
4.
Observa al microscopio con el objetivo seco débil y seco fuerte (Ver Fig.4.5).
5.
Realiza dibujos de las estructuras observadas en cada preparación
NOTA:
Resuelve cada una de las preguntas anteriores.
Elabora una tabla comparativa de las células observadas.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1)¿Qué diversidad celular se encuentra en el frotis de sangre?2)En el frotis de semen ¿Qué
células identificas? ¿Todos son normales?3)¿Qué función tienen cada una de las células
sanguíneas?4 ) ¿ Q u é a n a l o g í a e s t r u c t u r a l e x i s t e e n t r e l o s
e s p e r m a t o z o i d e s y l o s protozoarios?
FECHA DE REALIZACIÓN:
BIBLIOGRAFÍA:
1.
Johnson, G. 2006. “Biología Celular”. México D.F. Segunda edición. Editorial
Panamericana. Págs. 42-47
2.
Margulis, L. 2000. El origen de la célula. Barcelona; México. Segundaedición. Editorial
Reverté. Págs. 23-29
3.
Nason, A. 1990. El mundo biológico. México D.F. Primera
e d i c i ó n . Editorial Limusa. Págs. 176-184
4.
Villee, C. 2003. Biología. México D.F. O ctava edición. Editorial
M c Graw Hill. Págs. 56-58, 121-124, 128
5.
Young, A. 2001. Biología II. México D.F. Primera edición.
E d i t o r i a l Nueva Imagen. Págs. 101-108
PRÁCTICA No. 05
CÉLULAS PROCARIÓTICAS Y EUCARIÓTICASOBJETIVO:
Establecer algunas diferencias morfológicas entre células procarióticas ye u c a r i ó t i c a s ,
así como entre células vegetales y animales mediante
l a observación de las mismas.
FUNDAMENTO:
Desde que Robert Hooke observó las celdas de corcho, otros científicoss e d i e r o n a l a
t a r e a d e i n v e s t i g a r c ó m o e s t a b a n f o r m a d o s l o s s e r e s v i v o s . Fueron tres
de ellos quienes conformaron lo que conocemos ahora como la Teoría Celular: el
botánico Matthew Schleiden quien propuso a la célula comola unidad estructural de
las plantas, el zoólogo Theodor Schawn que hizo lo mismo con los animales, y el
médico y fisiólogo Rudolph Virchow que conjuntólas propuestas anteriores y propuso que
la célula se origina de otra célula.(4)Existen dos tipos de células en la naturaleza: las
procarióticas como lasb a c t e r i a s , q u e e s t á n c o n f o r m a d a s p o r u n a m e m b r a n a
c e l u l a r , c i t o p l a s m a , material genético y ribosomas (Ver Fig. 5.1). Y las eucarióticas
como las de losprotistas, hongos, plantas y animales, que además de las
estructuras de lasbacterias, tiene organ elos membranosos, con material
genético encapsulado e n u n n ú c l e o ( V e r F i g . 5 . 2 ) . T o d o e s t o s e c o n o c e
g r a c i a s a l a m i c r o s c o p í a electrónica.(1)
GENERALIDADES:
Las células comparten muchas características estructurales, pero hay una clara
diferencia entre la organización de las células procarióticas y la de lase u c a r i ó t i c a s . E n
particular, las células de los procariotes (bacterias, algas v e r d e azules y algas herbiverdes) son pequeñas y simples. Tienen
u n a membrana citoplásmica, generalmente delimitada por una pared celular rígida;u n
nucleoide que consta de una sola molécula de ADN
c i r c u l a r y q u e representa todos los genes del organismo
(genoma); y un citoplasma quec o n t i e n e r i b o s o m a s y u n a g r a n
v a r i e d a d d e m o l é c u l a s q u e m e d i a n e l metabolismo pero carecen de
membranas internas permanentes. Al carecer deestas membranas sus células no poseen un
núcleo, no poseen mitocondrias, nic l o r o p l a s t o s , n i r e t í c u l o e n d o p l á s m i c o , n i
a p a r a t o d e g o l g i , n i l i s o s o m a s , n i peroxisomas, ni vacuolas. Si bien,
algunas bacterias poseen flagelos, estos c o n s t a n d e u n s o l o f i l a m e n t o ,
a m a n e r a d e u n s o l o m i c r o t ú b u l o . N o e s t á presente, pues, el
o r d e n a m i e n t o m u l t i f i l a r q u e s e e n c u e n t r a e n l o s c i l i o s y flagelos de otros
organismos.(3)
El término procariótico se utiliza a menudo para distinguir las células delas bacterias y
de las algas, de las células provistas de núcleo o eucarióticas, d e t o d o s l o s
demás organismos. Todos los procariotes son
o r g a n i s m o s unicelulares.
En contraste, las células de los cuatro reinos de los
o r g a n i s m o s eucarióticos (protistas, hongos, animales y vegetales) son más grandes y
estáncaracterizadas por muchos compartimientos membranosos (Ver Fig. 5.3,
5.4).L a c a r a c t e r í s t i c a p r i m a r i a d e l a s c é l u l a s e u c a r i ó t i c a s e s e l
n ú c l e o c o n s u s cromosomas. E l c i t o p l a s m a q u e r o d e a a l n ú c l e o ,
l i m i t a d o a s u v e z p o r l a membrana, incluye una variedad de organelos,
teniendo cada clase su propia organización estructural y función o funciones
particulares en la célula. Ademásde los organelos membranosos, como el retículo
endoplásmico, al aparato de G o l g i , l a s m i t o c o n d r i a s , l o s l i s o s o m a s ,
l o s c l o r o p l a s t o s ( e n l a s c é l u l a s fotosintéticas) y otros, también
h a y r i b o s o m a s , c e n t r i o l o s , m i c r o f i l a m e n t o s , microtúbulos y una
multitud de proteínas suspendi das en la porción citosólica del citoplasma.
Célula animal
Célula vegetal
Una membrana rodea al citoplasma y ésta misma puede estar delimitadapor una pared celular
rígida o por cubiertas superficiales de otras clases. Enmuchas células la superficie
celular incluye especializaciones características, como los cilios o flagelos, las
microvellosidades y las uniones con otras célulasen los tejidos. (2)Los eucariontes pueden ser
unicelulares o multicelulares; ser sexuales oa s e x u a l e s , o b i e n v a r i a r
c o n s i d e r a b l e m e n t e e n s u f o r m a e x t e r n a . L a s relaciones
evolutivas entre los tipos de las células modernas no están todavía muy claras,
pero los procariontes son, sin duda, más antig uos y comparten unancestro común
con los organismos eucarióticos . Todas las células ofrecen s i m i l i t u d e n l a
estructura de su membrana, en sus mecanismos
p a r a almacenamiento y transferencia de información y en su metabolismo; de modoque es
posible que estos aspectos hayan evolucionado muy temprano y hayansido retenidos desde
entonces en todos los linajes descendientes. Los nuevos m é t o d o s d e l a n á l i s i s
molecular podrán aclarar estos hechos
e v o l u t i v o s fundamentales.(5)
MATERIAL:
•
Lupa.
•
Microscopios.
•
Porta y cubreobjetos.
•
Hisopos estériles.
•
Mechero Bunsen.
•
Caja petri.
•
Gotero.
•
Aguja de disección.
•
Navaja.
•
Palillo de dientes.
MATERIAL BIOLOGICO:
•
Agua de estanque o de acuario (agua verde).
•
Pan y frutas con mohos.
•
Sarro dentario.
REACTIVOS:
•
Lugol.
•
Fucsina básica.
•
Cristal violeta.
•
Alcohol de 90
°
.
•
Azul de metileno.
TÉCNICA PARA LA OBSERVACIÓN DE BACTERIAS:
1 . D i s o l v e r e n u n a g o t a d e a g u a s o b r e u n
p o r t a o b j e t o s , u n a p e q u e ñ a porción de sarro dentario
y c o n é s t a s e r e a l i z a u n f r o t i s o e x t e n s i ó n . Enseguida fijarlo a la
llama de un mechero bunsen, para esto pasar varias veces el portaobjetos sobre la
flama cuidando que no hierva la preparación.2 . C o l o c a d e n t r o d e u n a
c a j a p e t r i e l p o r t a o b j e t o s , c u b r i é n d o l o c o n
l a solución de cristal violeta por un minuto. Lavar al chorro de agua
cuidandoque no se arrastre la muestra.3 . A g r e g a
u n a
g o t a
d e
l u g o l ,
d e j a r
1
m i n u t o
y l a v a r
a l
c h o r r o
d e agua.
4.
Decolorar con alcohol de 90
°
. E s t a o p e r a c i ó n d e b e s e r r á p i d a para que no se elimine todo el
colorante.5 . C u b r i r c o n f u c s i n a b á s i c a p o r m e d i o
m i n u t o . E s c u r r i r e l c o l o r a n t e y lavar al chorro de
agua.6 . D e j a r
s e c a r
l a
p r e p a r a c i ó n
a l
a i r e
7 . O b s e r v a r
a l
m i c r o s c o p i o
c o
o b j e t i v o d e
i n m e r s i ó n .
A l g u n
verán teñidas de color rosa y otras de violeta.8 . H a c e r e s q u e
l a s o b s e r v a c i o n e s , s e ñ a l a n d o c o n s u
estructuras que se puedan distinguir.
n
a s bacterias se
m a s d e
n o m b r e las
TÉCNICA PARA LA OBSERVACIÓN DE PROTOZOARIOS Y ALGAS:
1.
Colocar sobre un portaobjetos una gota de agua verde de estanque o bien raspar
las paredes de un acuario con un portaobjetos.
2.
Colocarle un cubreobjetos para observar en el microscopio con
l o s objetivos seco débil y seco fuerte.3 . R e a l i z a r e s q u e m a s d e l o s
o r g a n i s m o s o b s e r v a d o s y s e ñ a l a r l o s nombres de las
estructuras que se puedan visualizar.
T É C N I C A
P A R A
L A
O B S E R V A C I Ó N
D E
M O H O S
( H O N G O S PLURICELULARES):
1.Colocar algunas hifas sobre un portaobjetos (desprender el moho
delpan y verduras mediante una aguja de disección, con
m o v i m i e n t o s suaves para no destruirlo).2.Cubrirlas con una solución de azul de
metileno por 2 minutos.3 . E s c u r r i r e l c o l o r a n t e c o n c u i d a d o y c o l o c a r
u n c u b r e o b j e t o s s o b r e l a s hifas. Observar a seco débil. Realizar los
esquemas correspondientes,señalando las estructuras visibles.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:CONCLUSIONES:CUESTIONARIO:
1) ¿Cuáles fueron las diferencias que observaste al microscopio entre lascélulas
eucariontes y procariontes?
2)Clasifica las células observadas en:
Células procariotas
Células eucariotas
3)Mencionar una diferencia estructural entre las células
v e g e t a l e s y animales observadas al microscopio.
FECHA DE REALIZACIÓN:BIBLIOGRAFÍA:
1.
Alberts, B. 2006. "Introducción a la biología celular". Madrid. Segundaedición. Editorial
Médica Panamericana. Págs. 53-57
2.
Callen J. 2003. Biología celu lar: de las moléculas a los organismos. México, D.F.
Segunda edición. Editorial Continental. Págs. 41-46
3.
Cooper, G. 2002. La célula. Segunda edición. Editorial Marbán. Págs.23-25
4.
Nelson J. 2002. Principios de Biología. Enfoque humana. México D.F.Segunda edición.
Editorial Limusa, S.A. Págs. 10-12
5.
Madigan, M. 2003. Biología de los Microorganismos. Madrid. Décima edición.
Editorial Prentice-Hall. Págs. 17-22
PRÁCTICA No. 06OBSERVACIÓN DE ORGANELOS CELULARESOBJETIVO:
Identificar las estructuras que integran las células vegetales y animales como
plastos, núcleo, etc., mediante la observación de las preparaciones.
FUNDAMENTO:
L o s o r g a n e l o s s o n estructuras especializadasque tienen formas
características yrealizan funciones específicas en elcrecimiento, mantenimiento
yr e p r o d u c c i ó n d e l a s c é l u l a s ( V e r Fig. 6.1). Muchas
reaccionesq u í m i c a s o c u r r e n e n u n a c é l u l a simultáneamente, sin
embargo hayp o c a i n t e r f e r e n c i a e n t r e l o s distintos tipos
de reaccionesp o r q u e o c u r r e n e n d i f e r e n t e s organelos.
Figura 6.1 Organelos celulares
•
Mitocondria: Constituye la central energética de la célula. Una célulapuede
tener unos pocos cientos o miles de mitocondrias. Las células con actividad
fisiológica tienen un gran número de mitocondrias porqueusan ATP en grandes
cantidades. Una mitocondria está limitada por dos membranas, cada una de
las cuales es similar en estructura a lamembrana plasmática. Las mitocondrias
se autorreplican, un procesoque ocurre cuando se incrementa la demanda de energía o
antes de ladivisión celular. (3)
MATERIAL:
•
Aguja de disección.
•
Vasos de precipitado.
•
Tubos de ensayo de 13 x 100 mm.
•
Cubreobjetos y portaobjetos.
•
Microscopio compuesto.
•
Navajas.
•
Algodón.
•
Frasco de boca ancha.
MATERIAL BIOLÓGICO:
•
Elodea.(
Elodea canadensis,
planta acuática)
•
Geranio.(
Pelargonium grandiflorum
)
•
Jitomate.
•
Cultivo de paramecios.
•
Nopal.
•
Sandía.
•
Insecto.
REACTIVOS:
•
Azul de metileno.
•
Alcohol absoluto.
•
Éter.
•
Solución de yodo.
•
Solución de lugol.
•
Cristal violeta.
TÉCNICA PARA CÉLULAS VEGETALES:
1.
Coloca entre el cubreobjetos una hoja de Elodea con una gota de agua,selecciona una célula
y cuenta el número de cloroplastos. Haz lo mismoen diez células y obtén el promedio.
Observa su forma y localización.
2.
Haz la misma operación en células de corte de nopal.3.Preparar con 48 horas de
anticipación una planta de geranio expuesta a la luz y otra a la oscuridad.
35
4.
Haz un corte transversal de una hoja de la planta de geranio expuesta ala luz y otra expuesta
a la oscuridad.
5.
Observa y compara el contenido de cloroplastos en cada una.6 . H a z u n c o r t e
delgado de pulpa de jitomate y colócalo entre porta
y cubreobjetos. Obsérvalo al microscopio y anota su forma, color y tamañode los
cromoplastos. Puede observarse lo mismo macerando en agua elpétalo de una flor colorida.
7.
Observa a seco débil y seco fuerte una preparación de un corte delgadod e l a p a r t e
blanca de la sandía para identificar la presencia
d e leucoplastos.8 . E s q u e m a t i z a l a p o s i c i ó n q u e o c u p a n l a s v a c u o l a s y e l
n ú m e r o d e e l l a s . Se recomienda teñir con cristal violeta.9 . D e l a s p r e p a r a c i o n e s
a n t e r i o r e s e s q u e m a t i z a l o s n ú c l e o s y c o n t e s t a l o siguiente:a ) ¿ C u á l e s l a
localización de los núcleos?b)¿Llena el citoplasma toda la
c é l u l a ? c)Con respecto al geranio ¿Qué podrías concluir?
TÉCNICA PARA CÉLULAS ANIMALES:
1.
Coloca una gota del cultivo de paramecios en un portaobjetos y encimaun
cubreobjetos.2.Localiza un paramecio de buen tamaño y trata de apreciar las
vacuolas.
3.
Coloca en un frasco un insecto con un algodón impregnado con un pocod e é t e r y
t a p a e l f r a s c o . C u a n d o y a n o t e n g a n i n g ú n m o v i m i e n t o , extírpale
uno de los músculos de la pata; desmenúcela con una navaja ydeseque con calor suave.
Coloca algunas fibras en un portaobjetos conuna gota de suero fisiológico y examina a seco
fuerte.4 . O b s e r v a l a f o r m a , e l t a m a ñ o y e l n ú c l e o d e l a s c é l u l a s
y c o n t e s t a l o siguiente:
a)
¿Son semejantes las estructuras observadas en las células vegetales alas del
insecto?NOTA: Para realizar un cultivo de paramecios se puede conseguir agua
deflorero de panteón o bien colocar un poco de paja en un frasco con agua por lomenos
con una semana de anterioridad y verificar al cabo de este tiempo la presencia
de paramecios.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:CONCLUSIONES:
36
CUESTIONARIO:
1)Realiza un cuadro sinóptico describiendo cada organelo y su función dentro
de la célula.
2)
Elabora una tabla comparativa de organelos entre la célula animal y lavegetal.
FECHA DE REALIZACIÓN:BIBLIOGRAFÍA:
1.
Johnson, G. 2006. “Biología Celular”. México D.F. Segunda edición. Editorial
Panamericana. Págs. 71-82
2.
Nason, A. 1990. El mundo biológico. México D.F. Primera
e d i c i ó n . Editorial Limusa. Págs. 162-175
3.
Weisz, P. 2000. La Ciencia de la Biología. México D. F.
S e g u n d a edición. Editorial Omega, S.A. Págs.69-75
4.
Ramírez, I. 2000. Biología celular. México D.F. Primera
e d i c i ó n . Educación superior tecnológica. Editorial dgeta. Págs. 10-17
5.
Villee, C. 2003. Biología. México D.F. Octava edición. Editorial
M c Graw Hill. Págs. 52-56
6.
Young, A. 2001. Biología II. México D.F. Primera edición.
E d i t o r i a l Nueva Imagen. Págs. 64-73
PRÁCTICA No. 07 PERMEABILIDAD CELULAR
OBJETIVO:
Observar y comparar el efecto de diversas sustancias químicas a travésde la difusión en una
membrana celular por medio de la hemólisis.
FUNDAMENTO:
Existen varios métodos para medir la presión osmótica celular; la mayor parte son físicos.
Algunos de éstos métodos son utilizando tanto a la zanahoriacomo al celofán, por lo
que es conveniente comparar los anteriores modelos utilizando células vivas, como
en este caso serán glóbulos rojos.(1)
GENERALIDADES:
El movimiento de agua de adentro hacia afuera de las células
e s t á influído por la semipermeabilidad de la membrana celular, o sea, su capacidadde
permitir el paso de ciertas moléculas o bien impedírselo (Ver Fig. 7.1).(3)
Figura 7.1 Permeabilidad de la membrana
Figura 7.2 Mecanismos de transporte
El término ósmosis se deriva de la palabra griega que significa empujar.L a t e n d e n c i a d e
empujar sus moléculas desde la porción más concentrada h a c i a l a
menos concentrada, puede ser el resultado de una fuerza
q u e llamamos presión osmótica. Puesto que la presión osmótica depende de
lac o n c e n t r a c i ó n d e l o s m a t e r i a l e s e n s u s p e n s i ó n , m i e n t r a s m á s g r a n d e
e s l a concentración mayor es la presión osmó tica y, el objetivo de esta es igualar
laconcentración de las moléculas de agua en ambos lados (Ver Fig. 7.2).(2)
En los líquidos de cualquier célula viva se encuentran sales, azúcares yotras sustancias en
solución; el liquido tiene, pues, cierta presión osmótica. Cuando la célula se sumerge en
un líquido con la misma presión osmótica, nohay movimiento neto de moléculas de agua dentro ni
fuera de la célula; esto esque la célula ni se hincha ni se encoge, por lo que se dice que se
encuentra enun medio isotónico o isosmótico respecto a la célula. Normalmente el
plasmasanguíneo y todos los líquidos del organismo son isotónicos pues contienen lamisma
concentración de sustancias disueltas que en las células.(1)
Si la concentración de las sustancias disueltas en el líquido circundantees mayor que la existente
dentro de la célula el agua tiende a salir de la célula,por lo que esta se contrae. Este líquido
es hipertónico respecto a la célula, es decir, que tiene una concentración mayor de solutos.
Si el líquido tiene menoss u s t a n c i a s d i s u e l t a s q u e l a c é l u l a , e s h i p o t ó n i c o , e s
d e c i r q u e t i e n e m e n o r concentración de solutos.C u a n d o u n a c é l u l a s e
c o l o c a e n u n a s o l u c i ó n n o i s o t ó n i c a , p u e d e ajustarse al nuevo medio por
modificación de su contenido de agua, para lograr f i n a l m e n t e l a m i s m a c o n c e n t r a c i ó n
q u e e l m e d i o ; a e s t o s e l e c o n o c e c o m o regulación del volumen intracelular.
Muchas células pueden impeler agua ociertos solutos hacia uno u otro lado de la
membrana plasmática, de manera q u e e n e s t a f o r m a m a n t i e n e n u n a p r e s i ó n
o s m ó t i c a d i s t i n t a d e l a d e l m e d i o ambiente.(4)
MATERIAL:
•
5 tubos de ensayo 13 x100 mm.
•
1 gradilla.
•
2 pipetas graduadas de 5 ml.
•
1 cronómetro.
•
Equipo para venopunción.
MATERIAL BIOLOGICO:
•
Sangre.
REACTIVOS:
•
Glicerol 0.5 M.
•
Glucosa 0.5 M.
•
Solución de urea 0.5 M.
•
Solución de etilenglicol 0.5 M.
•
Solución salina isotónica.
TÉCNICA PARA DETERMINAR EL PESO MOLECULAR:
1 . P r e p a r a r u n a s e r i e d e 4 t u b o s m a r c a d o s
d e l a s i g u i e n t e m a n e r a , utilizando la sangre
que se extrajo por venopunción con
p r e v i a s indicaciones del Maestro.
Tubo N°
1
2
3
4
2 ml de solución Peso Molecular
0.5 M
Urea
Etilenglicol
Glicerol
glucosa
Suspensión
eritrocitos
2 gotas
2 gotas
2 gotas
2 gotas
de Tiempo
Hemólisis
2.
Es importante utilizar una pipeta limpia y diferente para
c a d a sustancia.
3.
Centrifugar a 2500 rpm durante 5 minutos y observar
t a n t o macroscópica como microscópicamente si se presenta la lisis.
OBSERVACIONES CON DIBUJOS:
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO:
1)¿Por qué se dice que la membrana tiene permeabilidad selectiva?
2)
¿Por qué se dice que la bicapa de la membrana constituye una barreranatural?
3)
¿Cuáles con los factores que afectan la velocidad de difusión a través de la
membrana celular?
4)
¿Cómo esta constituida la membrana celular de tal manera que permitela permeabilidad?
FECHA DE REALIZACIÓN:
BIBLIOGRAFÍA:
.
Madigan, M. 2003. Biología de los Microorganismos. Madrid. Decima edición.
Editorial Prentice-Hall. Págs. 63-68
2.
de
Margulis, L. 2000. El origen de la célula. Barcelona; México. Segundaedición. Editorial
Reverté. Págs. 55-61
3.
Oram, R. 2002. Biología. Sistemas vivientes. México D.F.
P r i m e r a edición. Compañía editorial continental. Págs. 89-91
4.
Villee, C. 2003. Biología. México D.F. Octava edición. Editorial
M c Graw Hill. Págs. 34-39
PRÁCTICA No. 08 FRAGILIDAD OSMÓTICA DE LOS ERITROCITOS