Práctica N°17: Virología: Sistemas de Propagación Viral. Efecto Citopático 1. Descripción del Proceso Experimental En esta práctica se debió inocular el virus de Influenza a un huevo embrionario de gallina de entre 7-11 días sin rajaduras, el saco de aire a un extremo del huevo y con el embrión sin estar pegado a las paredes del huevo. Esta inoculación debió realizarse a 34°C, la temperatura óptima para el desarrollo del virus en una atmósfera húmeda. No obstante, al no obtenerse embriones viables para esta práctica todo lo que se mencionará será meramente teórico y bibliográfico. En la actualidad sigue utilizándose huevos de gallina como modelo para el estudio de virus, como en el trabajo de Kandeil donde se determina la importancia de enzimas proteolíticas para la replicación vírica (Kandeil, y otros, 2014). 2. Descripción del Efecto Citopático Si bien puede darse crecimiento viral sin evidencia citopática, otros tienden a matar las células hospedadoras generando monocapas infectadas con evidente daño celular, esto último denominado efecto citopático (CPE). Para su adecuada distinción debe agregarse colorantes en diferentes tejidos embrionarios, como es la fucsina en la membrana corioalantoidea y el azul de metileno en la cavidad amniótica. Tras la incubación viral es posible distinguir cuerpos de inclusión, sincitios y otros detalles de la monocapa de gran relevancia para un diagnóstico adecuado sobre el virus citopatogénico en cuestión. Para el caso de la infección por el virus de la influenza H1N1 se identificó efecto citopático a nivel alveolar evidenciado como necrosis, hiperplasia epitelial o metaplasia escamosa (Mauad, Hajjar, Callegari, & Saldiva, 2010). 3. Resultados Hipotéticos Debió observarse efecto citopático de tipo sincitio, lo que se traduciría en un desorden de la monocapa con una respectiva aglomeración de células al punto de la fusión y así formación de una célula morfológicamente diferentes al resto, grande y multinucleada; todo ello teñido con fucsina. (Imagen 1.) Imagen 1. 4. Cuestionario Diferencie entre línea celular primaria y secundaria. La línea celular primaria es aquel cultivo desde un tejido celular que con tiempo de vida limitado in vivo, pero con reproducción de las células in vitro, en el cultivo. Por otro lado la línea celular secundaria o continua es aquel cultivo desde un tejido celular inmortal (tumores, por ejemplo). 5. Aplicaciones Como a partir de la inoculación de un huevo embrionado de gallina se puede incubar virus y luego recuperarlos a concentraciones más elevadas que permitan mayor versatilidad en el uso de las muestras, aplicaciones usuales con respecto a esta técnica son: El estudio de virus acerca de la evolución característica de los virus. (Neumann, Noda, & Kawaoka, 2009) El desarrollo de vacunas atenuadoras del efecto viral. (Chen, y otros, 2009) Las bibliografías anexadas muestran estas aplicaciones para el virus de la influenza A/H1N1el cual llegó a ser una pandemia el 2009 y absorbió la atención de muchos investigadores alrededor del mundo.
