clase 11 Estudio bacteriologico de liquido cefalorraquideo Dx Bacter 2015

CLASE N° 11
Estudio bacteriológico del líquido
cefalorraquídeo y líquidos de derrame.
Lic. Roberto Antonio Fuentes Palma
Departamento de Microbiología
Facultad de Medicina, UES, 2015
Objetivo general:
Que el estudiante al finalizar la clase, podrá de:

Interprete el proceso de diagnóstico
bacteriológico de agentes causantes de
meningitis y de los agentes presentes
en líquidos corporales normalmente
estériles
Objetivos específicos

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

- Distinga entre las definiciones de meningitis
- Describa de forma general la producción de LCR
- Describa las características epidemiológicas más
sobresalientes de los agentes de meningitis
más importantes
- Explique el tipo de muestra a obtener a partir de
una meningitis y su descripción
- Reconozca el tipo de medios empleados para
transporte, enriquecimiento y aislamiento en
este tipo de cultivo
- Explique el proceso de identificación de los agentes
mas frecuentes de meningitis y su respectivo reporte
al médico
- Reconozca el procesamiento de la muestra en casos
especiales y otro tipo de muestra, como líquidos de
derrame
Contenido

Muestras clínicas:
obtención y descripción.
Procesamiento.
Principales agentes de meningitis.
Reporte preliminar.
Aislamiento e identificación.
Reporte definitivo.
Meningitis

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

Cualquier infección o
inflamación de las
membranas que
envuelven el encéfalo y
la médula espinal y
liquido cefalorraquídeo
Normalmente es
estéril
Purulenta 90 a 95% y
es causada por
bacterias.
Aseptica otros
microorganismo
Crónica M. tuberculosis
y hongos
Encefalitis


Proceso inflamatorio del encéfalo. Normalmente,
la inflamación afecta a la médula espinal y al
encéfalo; de ahí que, en la mayoría de los casos,
el término más adecuado sea el de
meningoencefalitis.
Empiema:
Acumulación de pus entre la duramadre y
aracnoides una cavidad corporal, especialmente
en el espacio pleural, como consecuencia de una
infección bacteriana, como: tuberculosis.
Factores predisponentes
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Epidemiología: estación del año.
Antecedentes del paciente
Trauma
Otitis media o mastoiditis
Sinusitis
Sepsis dental
Trauma penetrante o post-neurocirugía
Absceso pulmonar, empiema o bronquiectasis
Endocarditis bacteriana
Enfermedad cardiaca congénita
Desconocido
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



SNC es estéril no microorganismos
Protección masa encefálica reduce al mínimo para
no pase microorganismos
Componentes sistema inmune tales como las
inmunoglobulinas, (proteínas muy grandes para
pasar el cerebro) complemento
90% secundario a una bacteriemia pasar la
barrera hematoencefálica, la infección inicia
porque coloniza e invade a nasofaringe y pasa a
sangre
Otras vías:
foco cercano o contigüidad: otitis media
mastoiditis, defectos congénitos,
focos lejanos: neumonía, faringitis
Agentes bacterianos
Edad
Microorganismos mas frecuentes
Morfología y reacción al
Gram respectivamente
0-4 semanas
Escherichia coli
Streptococcus del grupo B
Listeria monocytogenes
Bacilos gramnegativos
Cocos grampositivos
Bacilos grampositivos
4-12 semanas
Escherichia coli
Streptococcus del grupo B
Listeria monocytogenes
Haemophilus influenzae
Streptococcus peumoniae
Bacilos gramnegativos
Cocos grampositivos
Bacilos grampositivos
Bacilos gramnegativos
Cocos grampositivos
3 meses- 18 años
Haemophilus influenzae
Neisseria meningitidis
Streptococcus peumoniae
Bacilos gramnegativos
Diplococos gramnegativos
Cocos grampositivos
18-50 años
Neisseria meningitidis
Streptococcus peumoniae
Diplococos gramnegativos
Cocos grampositivos
Mayores de 50 años o
inmunocomprometidos
Neisseria meningitidis
Streptococcus peumoniae
Listeria monocytogenes
Bacilos gramnegativos
Diplococos gramnegativos
Cocos grampositivos
Bacilos grampositivos
Posquirúrgica
Staphylococcus aureus
Enterobacterias
Pseudomonas
Cocos grampositivos
Bacilos gramnegativos
Bacilos gramnegativos
CUADRO CLÍNICO
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Infección bacteriana reacción inflamatoria
Aguda fulminante (Neisseria meningitidis S. pneumoniae)
infección subaguda (focos distantes)
Triada meningitis (90%):
fiebre, cefalea y rigidez de nuca
Alteración del estado mental (75%):
confusión, coma y/o muerte
Otras: nauseas, vómito, fotofobia, convulsiones
Rigidez de nuca patognomónico irritación meníngea se
acompaña de: Brudzinski y Kernig
Aumento de la presión intracraneana:
complicación (meningitis), causa de retardo y coma
edema de papila y papila dilatada
Formación de hernias cerebral: MUERTE
Cubito sutil
Paciente con meningitis
EPIDEMIOLOGÍA, PREVENCIÓN Y
CONTROL
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Por su diversidad es de distribucion mundial
Grupo mas afectado: los niños
Emergencia médica
Diagnostico rápido
La meningitis meningocócica se presenta en
brotes
Resistencia de meningococos
Detectar a portadores asintomáticos
nasofaríngeos 5-30%
Importante reducir los contactos personales
en población con muchos portadores
Vacunación únicamente en poblaciones
seleccionadas
Diagnostico
Bacteriológico
de LCR
Introducción

El examen de LCR es una etapa
esencial para el diagnostico de
meningitis principalmente la
bacteriana, por esta razón importa
que el personal de laboratorio
considere siempre que las muestra
requieren especial prioridad y rápida
atención.
Características del LCR
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Normalmente estéril
De aspecto transparente (como agua de roca)
Contiene por lo general 3 o menos por mililitro
cúbico
Exento de hematíes
Su composición química y celular se modifica a
causa de inflamaciones meníngeas y encefálicas
Otro aspecto: velado, turbio (ligera mas de 200
celulas y 200 hematies por microlitro), purulento,
amarillo o xantocromico ( por hemólisis o
ictericia), sanguinolento, con filamentos o
película de fibrina
MUESTRA CLINICA
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LCR (por punción lumbar o cisternal)
Medico toma muestra
Entre 3ª y 4ª (L3 y L4) vértebra adultos
Entre 4ª y 5ª (L4 y L5) vértebra en niños
Cantidades de LCR depende de edad del paciente
( promedio entre 5 a 10 mL)
De 2 a 3 TUBOS para diferentes destinos:
citoquimico y microbiológico
Dos coloraciones: Gram y Zn
Reporte preliminar
Diagnostico
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Cuadro clínico
Diagnostico presuntivo
Punción lumbar
Diagnostico definitivo ( LCR)
Neuroimagenes: resonancia
magnética, TAC
Examen macro y microscópico
Preparación de la muestra
(transparente o turbio)
 Microscopia directa
 Tinciones

Diagnostico bacteriológico
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Procesar LCR
Agar sangre
Agar chocolote
Agar MacConkey
Caldo de tioglicolato
Pruebas de tamizaje
Pruebas de identificacion
Antibiograma
Agentes bacterianos
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
Género Neisseria
Especie meningitidis (Nm)
ESTRUCTURA ANTIGÉNICA
Polisacáridos capsulares
Serogrupos más relacionados con enf. en el
humano: A, B, C, Y y M135
Antígenos meningocósicos en sangre y en LCR de
pacientes
Proteínas clase 1, 2 o 3. Definen 20 serotipos. 2 y
15 epidémicos
Lipooligosacárido (LOS)
PATOGENIA Y PATOLOGÍA
N. meningitidis
•
La nasofaringe es
la puerta de
entrada (form Ac)

Se adhiere a
células epiteliales
por pili, liberando
endotoxina y
moléculas de LPS

A veces
bacteriemia
y causar
meningitis
CARACTERÍSTICAS FISIOLÓGICAS Y DE
CRECIMIENTO DE N. meningitidis
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Diplococos
gramnegativos
Agar chocolate
Agar Thayer-Martin
modificado
Atmósfera capnófila:
5-10% de CO2 con
humedad
36±1ºC
24-48hs
Utilización de CHO
Producen oxidasa
Streptococcus pneumoniae
Diplococo grampositivo
lanceolado
Hemolisis alfa
Taxo P
Prueba de Quellum
(hinchazón)

Streptococcus pneumoniae
Parte de la flora normal de nasofaringe
FACTORES DE VIRULENCIA
Cápsula antifagocítica por
opsonización, complemento, etc.
OTROS
Favorecen la colonización y migración:
adhesinas y proteasas de IgA
neurominidasa disuelven el moco
ENFERMEDADES
Neumonía, sinusitis, otitis media,
meningitis. Septicemia
Tipos 1-8 en adultos. Niños 6, 14, 19 y
23 más frecuentes causas de
neumonía. Importancia
Listeria monocytogenes
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Bacilo corto grampositivo
No esporulado
Móvil a 28º C
De 1 a 5 flagelos perítricos
Anaerobio facultativo
Catalasa positiva
Oxidasa negativa
Produce ácidos a partir de glucosa
Hidroliza la esculina
No hidroliza urea ni gelatina
No desdobla triptofano
No produce H2S
CLASIFICACION ANTIGENICA
Serotipos Ia, Ib y IVb, son más del 90% de los aislados
en humanos
La mayoría de casos en los extremos de la vida
Individuos c/factores predisponentes: deficiencia inmcel, transplante de órganos, linfomas, el SIDA y otras
Meningitis, encefalitis y septicemia y anniotitis y
aborto prematuro
Listeria monocytogenes
SUSTANCIAS BIOLOGICAS
QUE PRODUCE
1. Internalina
promueve la
fagocitosis
2. Listeriolisina,
provoca la lisis de la
membrana del
fagolisosoma
3. Actina, impulsa a la
bacteria hacia la
membrana celular del
huésped y forma
filópodos
Haemophilus. GENERALIDADES
H. influenzae, 6 serotipos,
b es el mayor causante de
enf. invasivas
Morfología e identificación
 Cocobacilo corto
gramnegativo pleomórfico
 El tipo b causa:
meningitis, neumonía y
empiema, epiglotitis,
celulitis, artritis séptica

H. influenzae EL PRINCIPAL PATOGENO
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

El principal factor de virulencia de
cepas invasoras es el polisacárido
capsular: fosfato de polirribosa,
enfermedad pte. en niños
Produce enzimas que degradan a la
IgA
Entra por vías aéreas respiratorias
superiores
Puede haber diseminación local
c/afección de senos paranasales y
el oído medio
Por sangre puede llegar hasta
meninges y articulaciones
Haemophilus influenzae
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Bacilos gramnegativos
Catalasa positiva
Oxidasa positiva
Requerimiento V, X
Especies
Requerimientos
Hemólisis
X
V
H.influenzae
+
+
-
H. parainfluenzae
-
+
-
H. ducreyi
+
-
-
H. haemolyticus
+
+
+
H. parahaemolyticus
-
+
+
H. aphrophilus
-
-
-
Muestra de LCR
Meningitis bacteriana
Proteínas en LCR, 100-500 mg/dl; la tinción
de Gram suele ser positiva
Meningitis tuberculosa
Proteínas en LCR, 50-300 mg/dl; reacción
celular mixta típica
Meningitis fúngica
Proteínas en LCR, 50-300 mg/dl; tinciones
especiales útiles
Meningoencefalitis vírica
Proteínas en LCR usualmente por debajo de
100 mg/dl
Otros líquidos de derrame
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Liquido ventricular
Craneal
Fluido abdominal (peritoneal, dialisis, bilis)
Pleural y empiema (obtenido del torax)
Pericardico
Sinovial
Medula osea
Sangre
amniótico
Partes del reporte de laboratorio
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Preliminar ( coloración de Gram, ZN,
montaje al fresco)
Reporte definitivo
antibiograma