Trabajo Ebola - Universidad Complutense de Madrid

NUEVAS APROXIMACIONES
TERAPÉUTICAS CONTRA EL VIRUS
DEL ÉBOLA
José Clerigué Louzado
Laura Córdoba González
B. Victoria Fernández García
Estefanía Zhan Zhou
Marina Zorita Moreno
Facultad de Farmacia
Universidad Complutense de Madrid
Objetivos
• Definir brevemente la enfermedad producida
por el virus del Ébola.
• Dar a conocer las nuevas estrategias
terapeúticas de la enfermedad.
• Informar del desarrollo de las posibles
vacunas.
Material y métodos:
• Revisión bibliográfica
¿Qué es el Ébola?
-Virus RNA monocatenario (–) que causa
enfermedad mortal muy poco frecuente  Enf.
del virus del Ébola (EVE), Ébola (coloquial),
Fiebre Hemorrágica del Ébola (FHE).
-Descubrimiento 1976  Río Ébola (Rep.
Democrática Congo) Brotes esporádicos en
África  Europa, América…
Clasificación
Dominio:
Virus
Grupo:
Virus RNA monocatenario
negativo
Orden:
Mononegavirales
Familia:
Filoviridae
Género:
Filovirus
Especie:
Ebolavirus
-Tasa de letalidad 90%.
- 5 cepas.
Diagnóstico:
-Descartar:
paludismo, fiebre
tifoidea, cólera,
peste, meningitis,
hepatitis, fiebres
hemorrágicas víricas,
etc.
- Pruebas laboratorio:
ELISA, detección Ag,
seroneutralización,
RT-PCR, cultivo
celular.
- Muestras pacientes
 gran peligro
biológico
CONTROL!
Tratamiento:
Fármacos y vacunas en estado experimental para una epidemia sin
precedentes.
- Zmapp (Mapp Bio (Biopharmaceutical)) 3 anticuerpos monoclonales.
Probado por primeros infectados.
- Avigan (Toyama Chemical): antiviral para gripe. Inhibe reproducción del
virus. Prueba en roedores. Comprimidos.
- TKM-Ebola (Tekmira): probado en médico infectado en Nebraska. Evita la
replicación del virus.
- GBV006 (Globavir Biosciences): cóctel de moléculas ya aprobadas
individualmente (FDA).
- AVI-7537 (Sarepta Therapeutics): eficaz en monos, 1ª etapa test.
- Suero de convalecencia: anticuerpos de individuos curados.
- Vacunas: GSK (1ª etapa test humanos), VSV-EBOV, vacuna virus
Ébola/Marburg (probada en humanos, nueva prueba clínica prevista).
Artículo: UE ofrecerá beneficios de medicamento
‘huérfano’ a tratamientos contra el Ébola
- EMA: estatus de medicamento “huérfano” se concede a
fármacos experimentales contra enfermedades mortales ( - de
5/10000 personas en UE)  como Ébola.
- En proceso prioritario para ofrecer a los ttos y vacunas contra
Ébola los beneficios de medicamento “huérfano”
(>exclusividad en el mercado  alentar su desarrollo).
- Beneficios financieros  asesoramiento científico gratuito,
exenciones de impuestos y 10 años de exclusividad en
mercado.
MB-003
• Anticuerpos monoclonales quiméricos ratón/humano antiébola (c13C6, h13F6, c6D8) .
• Caracterización de tres mAbs de ratón dirigidos contra los
epitopos de tres glicoproteinas de EBOV.
• Se obtienen de células de ovario de hamster chino (CHO) o de
Nicotiana benthamiana.
MB-003
Método RAMP
• Vectores virales deconstruidos
• Introducción del vector mediante Agrobacterium tumefaciens
• Proceso rápido, cambio de escala fácil y no puede expandir el gen
recombinante en otros individuos.
• Nicotiana benthamiana: cepa transgénica con glicosiltransferasas
específicas inhibidas por RNAi = disminución ADCC.
Introducción vector
Obtención Ac monoclonales
ZMab
• Combinación de tres anticuerpos monoclonales que neutralizan
directamente la glicoproteína del virus del ébola (EBOV).
• Protección 50-100% administrado a las 48 o 24 horas tras la
exposición respectivamente.
• Administración intravenosa de tres dosis de ZMab con los mAbs
1H3, 2G4 y 4G7.
ZMapp
• Combinación de
anticuerpos
monoclonales c13C6,
c2G4 y c4G7.
• Mapp Biopharmaceutical
• LeafBio
• Defyrus Inc.
• Gobierno de EE.UU.
• Agencia de Salud Pública
de Canadá (PHAC).
siRNA
siRNA como tratamiento
Estudio de Geisbert W T et al. (2010).
Dianas de interés del EBOV
Genes que codifican 3 proteínas principales:
Complejo RNA
• VP35
polimerasa
• Proteína L: actividad RNA polimerasa RNA dep.
• VP34 (y VP35): efectos inhibitorios sobre la liberación de IFN por parte del
hospedador.
¿Qué propone el estudio?
•
Se utilizó una mezcla de 3 siRNAs, uno para cada proteína diana.
Encapsulación lipídica siRNA
•
SNALPS: Stable Nucleic Acid Lipid Particles =
Partículas lípidicas estables de ácido nucleico.
Se introducen los 3 tipos diferentes de siRNA en la
misma partícula lipídica.
• Formación espontánea de vesículas que deben ser
esterilizadas por filtración.
• Compuestas por:
•
o
o
o
o
•
Colesterol sintético
Dipalmitoilfosfatidilcolina
Ácidos grasos catiónicos (y otros)
PEG
La encapsulación protege al siRNA de:
o La degradación por nucleasas del plasma.
o El reconocimiento de receptores tipo Toll: activación de la
respuesta inmune y liberación de citoquinas
Resultados del estudio
Se propusieron 2 pautas de tratamiento:
• 4 dosis (30 min, 1, 3 y 5 días después de la infección): 2/3
macacos sobreviven.
• 7 dosis (30 min, 1,2,3,4,5 y 6 días p.i.) : 4/4 macacos
sobreviven.
• Resultados similares a los obtenidos para el virus de
Marburgo-Angola (también un filovirus), con nanopartículas
lipídicas con siRNA contra la expresión de su nucleoproteína.
• El futuro parece prometedor para este tratamiento.
Se necesita más investigación…
Obtener mayor información sobre:
•
•
•
•
•
Farmacología
Dosis
Posible toxicidad
Prevención de la respuesta inmune a SNALPS
Conocer cuántos días pueden pasar tras la infección
o tras los primeros síntomas para que el tratamiento
siga siendo efectivo
USO PMO
¿Qué es un PMO?
• OligoNT “antisense”bloqueo estérico de transcripción,
“splicing”…
• Anillo morfolínico, unión por enlaces
metilenfosforodiamidato
• Se han manifestado efectivos para proveer una protección
postexposición (o postinfección) frente a filovirus
• Pruebas sobre VP-35 y VP-24
Ventajas PMO
• Gran estabilidad (se puede formular en vehículos acuosos
habituales)
• Efectividad por diversas rutas de administración : buenas BDP
• Síntesis y diseño rápidos
Por ello: buenas características para uso en circunstancias
difíciles
• Además, no se degrada por RNasaH
Mejoras PMO(I)
Para soslayar resistencias:
• Uso bases promiscuas (inosina)
• Dirigir contra secuencias conservadas
• Dirigir contra secuencias claves en interacción hospedadorvirus
Mejoras PMO (II)
• PPMO: adición
o pequeños péptidos penetradores de células ( ricos en arginina) penetración mejorada.
o ácido 6-aminohexanoico: mejor estabilidad y escape endosomal
• PMOplus: adición entre bases de número limitado(2-5) de
cargas positivas:
o mejor cinética de unión y eficacia
o menos problemas de tolerabilidad que PPMO
Mejoras PPMO (III)
¿Es efectivo?
• Se ha visto eficacia en ratón , cerdo de Guinea y primates
• Bien tolerados en ensayos clínicos humanos podría usarse
para ttos. profilácticos para médicos y enfermeros en
situaciones de emergencia
• ¡Ojo! Se vio que hay poca homología VP-24 de cepa Zaire
(probada) a Sudán
Vacunas en evaluación
clínica
• La OMS ha concedido una gran prioridad a la evaluación
acelerada de todas las vacunas contra el virus del ébola
utilizando materiales aptos para uso clínico.
• Ya se cuenta con dos vacunas experimentales para uso clínico
que se están utilizando en ensayos clínicos de la fase 1.
- GSK/NIAID: cAd3-ZEBOV
- Newlink/PHAC: rVSV-ZEBOV
GSK/NIAID: cAd3-ZEBOV
• Ha sido obtenida por GlaxoSmithKline con la colaboración del
Instituto Nacional de Alergias y Enfermedades Infecciosas de
los Estados Unidos.
• Utiliza como vector un adenovirus obtenido del chimpancé al
que se la ha insertado un gen del virus del Ébola.
GSK/NIAID: cAd3-ZEBOV
Resultados Fase I
Objetivos
• Evaluar la seguridad y
tolerabilidad en adultos sanos
(18-50 años).
• Evaluar la respuesta de
anticuerpos a las 4 semanas
después de la vacunación.
• Evaluar las respuestas de las
células T específicas de la GP
del virus a las 4 semanas
después de la vacunación
•
•
•
•
La vacuna cAd3-EBO produce el
100% de protección a las 5
semanas
A los 10 meses, la protección es
del 50%.
cAd3-EBO + vacuna MVA-EBO
induce una protección duradera
del 100% a los 10 meses.
La vacuna sólo ha sido evaluada
para la profilaxis pre-exposición.
Newlink/PHAC: rVSV-ZEBOV
• Ha sido obtenida por el Organismo de Salud Pública del
Canadá en Winnipeg. La licencia para comercializarla es
propiedad de una empresa estadounidense, NewLink
Genetics.
• Utiliza un virus atenuado de la estomatitis vesicular, una
enfermedad del ganado, uno de cuyos genes ha sido
remplazado por un gen del virus del Ebola.
Newlink/PHAC: rVSV-ZEBOV
• Los vectores recombinantes basados ​en vacunas vesiculares,
que codifican una glicoproteína EBOV en lugar de la
glicoproteína de VSV, han demostrado 100% de eficacia contra
homóloga Sudán ebolavirus (SEBOV) o Zaire ebolavirus
(ZEBOV) en primates.
• En humanos se están realizando los estudios en Fase I de los
cuales no se han obtenido todavía datos del grado de
protección.
Vacunas
• Los ensayos se están realizando en voluntarios sanos y tienen la
finalidad de examinar la seguridad y la capacidad inmunógena, así
como seleccionar la dosis adecuada.
• Dos ensayos de la fase 1 de la vacuna cAd3-ZEBOV comenzaron en
septiembre de 2014 en los Estados Unidos y el Reino Unido, y el
primer ensayo de la fase 1 de la vacuna VSV-ZEBOV debió empezar
los primeros días de octubre en los Estados Unidos.
• Desde la OMS se ha pedido agilizar la realización de los ensayos
clínicos de la fase 2, que permitirán obtener más datos sobre la
seguridad y comprobar que las vacunas confieren protección.
• El próximo paso consistirá en distribuir esas vacunas tan pronto
como sea posible y en cantidades suficientes para proteger al
personal sanitario de primera línea y modificar la evolución de la
epidemia.
Conclusiones
• Importancia de desarrollar nuevos fármacos para
combatir esta enfermedad de alta letalidad.
• Necesidad urgente de realizar ensayos clínicos en
humanos de los posibles tratamientos.
• Controlar los focos con tratamientos seguros y
efectivos para impedir la expansión de la
enfermedad.
• Llevar a cabo el desarrollo de las posibles vacunas
para poder realizar una buena profilaxis.
Bibliografía
http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs103/es/ (OMS)
http://www.forbes.com.mx/ue-ofrecera-beneficios-de-medicamentohuerfano-tratamientos-contra-ebola/ (FORBES)
http://noticias.lainformacion.com/salud/tratamiento-de-salud/los-sietetratamientos-contra-el-virus-del-ebola_afdwPFD9CGtFlxaUnYgoc1/ (LA
INFORMACIÓN)
http://www.cdc.gov/vhf/ebola/spanish/preguntas.htmlv (CDC)
http://www.la-razon.com/index.php?_url=/sociedad/Virus-OMS-decretaemergencia-mundial-ebola_0_2103989603.html (LA RAZÓN)
http://blogs.unicef.org/2014/09/17/las-5-medidas-de-unicef-para-combatirel-ebola/ (UNICEF)
Bibliografía
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Warfield,1,† Travis K. Warren,1 Candace Lovejoy,2 Jed N. Hassinger,2 Gordon
Ruthel,1Robert E. Blouch,2 Hong M. Moulton,2 Dwight D. Weller,2 Patrick L.
Iversen,2,* and Sina Bavari1,
Advanced morpholino oligomers: a novel approach to antiviral therapy.
Warren TK1, Shurtleff AC, Bavari S.
VP35 knockdown inhibits Ebola virus amplification and protects against
lethal infection in mice.
Enterlein S1, Warfield KL, Swenson DL, Stein DA, Smith JL, Gamble
CS, Kroeker AD, Iversen PL, Bavari S, Mühlberger E.