DACTILOCICLINA A Y DACTILOCICLINA B(ES2053697)

k
OFICINA ESPAÑOLA DE
PATENTES Y MARCAS
19
k
ES 2 053 697
kInt. Cl. : C12P 1/06
11 N.◦ de publicación:
5
51
ESPAÑA
A61K 35/66
//(C12P 29/00
C12P 1:06
C12R 1:01)
k
TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA
12
kNúmero de solicitud europea: 88121311.0
kFecha de presentación : 20.12.88
kNúmero de publicación de la solicitud: 0 322 717
kFecha de publicación de la solicitud: 05.07.89
T3
86
86
87
87
k
54 Tı́tulo: Dactilociclina A y dactilociclina B.
k
73 Titular/es: E.R. Squibb & Sons, Inc.
k
72 Inventor/es: Aklonis, Carol Ann;
k
74 Agente: Elzaburu Márquez, Fernando
30 Prioridad: 24.12.87 US 137635
Lawrenceville-Princeton Road
Princeton New Jersey 08543-400, US
45 Fecha de la publicación de la mención BOPI:
01.08.94
45 Fecha de la publicación del folleto de patente:
01.08.94
Aviso:
k
k
Ax, Helen Anne;
O’Sullivan, Joseph;
Tymiak, Adrienne Anne;
Wells, Jerry Scott y
Kirsch, Donald R.
k
En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletı́n europeo de patentes,
de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina
Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar
motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de
oposición (art◦ 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas).
Venta de fascı́culos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, 1 – 28036 Madrid
1
2 053 697
cubando a 70◦ C durante 20 minutos. Seguidamente la suspensión se coloca en una placa en
un medio nutriente que ha sido completado con
cicloheximida. La composición del medio es:
DESCRIPCION
El cultivo de una cepa del microorganismo
Dactylosporangium sp., que ha sido depositado en
“The American Type Culture Collection” como
A.T.C.C. n◦ 53693, produce la sustancia antibiótica EM5586. EM5586 ha sido analizada y
se ha encontrado que está compuesta por cuatro componentes. Uno de los componentes es
7 - cloro - 4 - dimetilamino - 8 - metoxi 1,4,4a,5,5a,6,11,12a - octahidro - 3,4a,6,10,12,12a
- hexahidroxi - 6 - metil - 1,11 - dioxo - 2 - naftacenocarboxamida (denominado en lo sucesivo “4a
- hidroxi - 8 - metoxi - CTC”), un compuesto descrito en la solicitud PCT publicada WO87/00832,
publicada el 12 de febrero de 1987. Dos componentes adicionales, Dactilociclina A y Dactilociclina B, son activos contra bacterias gram positivas, incluyendo bacterias resistentes a la tetraciclina.
La figura 1 muestra el espectro de infrarrojos
de Dactilociclina A en bromuro de potasio.
La figura 2 muestra el espectro de masas por
bombardeo con átomos rápidos de Dactilociclina
A en el modo de ion positivo.
La figura 3 muestra el espectro de masas por
bombardeo con átomos rápidos de Dactilociclina
A en el modo de ion negativo.
La figura 4 muestra el espectro RMN de C13
a 67,5 MHz de Dactilociclina A en metanol deuterado.
La figura 5 muestra el espectro RMN de H1 a
400 MHz de Dactilociclina A en metanol deuterado.
La figura 6 muestra el espectro de infrarrojos
de Dactilociclina B en bromuro de potasio.
La figura 7 muestra el espectro de masas por
bombardeo con átomos rápidos de Dactilociclina
B en el modo de ion positivo.
La figura 8 muestra el espectro de masas por
bombardeo con átomos rápidos de Dactilociclina
B en el modo de ion negativo.
La figura 9 muestra el espectro RMN de H1 a
400 MHz de Dactilociclina B en metanol deuterado.
El microorganismo
El microorganismo utilizado para producir la
sustancia antibiótica EM5586 es una cepa de Dactylosporangium aislada a partir de restos de hojas encontrados en aguas pantanosas. Un subcultivo del microorganismo puede ser obtenido a
partir de la colección permanente de la “American Type Culture Collection”, Rockville, Maryland. Su número de acceso en esta autoridad
de depósito es A.T.C.C. n◦ 53693. Además del
microorganismo especı́fico descrito y caracterizado en la presente memoria descriptiva, debe entenderse que mutantes del microorganismo (por
ejemplo, mutantes producidos a través de la utilización de Rayos X, radiación ultravioleta, manipulación genética o iperita nitrogenada) pueden
ser cultivados también para producir EM5586.
El aislamiento de Dactylosporangium sp.
A.T.C.C. n◦ 53693 de los restos de hojas en los
que está presente puede efectuarse poniendo en
suspensión en primer lugar los restos de hojas en
un diluyente estéril (por ejemplo, solución salina
tamponada que contiene 0,01% de gelatina) e in2
2
5
K2 HPO4
KH2 PO4
MgSO4 .7H2 O
FeSO4 .7H2 O
ZnSO4 .7H2 O
MnCl2 .4H2 O
Agar
Quitina coloidal∗
10
15
Agua destilada
Cicloheximida∗∗
Gramos
0,7
0,3
0,21
0,01
0,02
0,0015
20
40 ml de una solución al 1,25%
960 ml
0,1
20
∗
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Preparada según se describe por Mekkar,
N.S. y T. Cross, J. Appl. Bacteriol., 52:209-218,
1982.
∗∗
Esterilizada con filtración y añadida al medio que ya ha sido esterilizado a 121◦ C durante
30 minutos.
Después de 8 dı́as de incubación a 28◦ C, las
colonias de Dactylosporangium sp. A.T.C.C. n◦
53693 son aisladas de la muestra de la placa y se
transfieren a un medio en agar compuesto por:
Glucosa
Almidón soluble
Extracto vacuno
Triptona
Extracto de levadura
CaCO3
Agua potable
Gramos
1
24
3
5
5
4
1 litro
El medio es esterilizado por tratamiento con
autoclave a 121◦C durante 20 minutos.
El Dactylosporangium sp. A.T.C.C. n◦ 53693
se caracteriza por la producción de esporangios
cortos en forma de dedo que se originan directamente a partir del micelio vegetativo en la superficie del agar. Los esporangios se producen abundantemente en agar de malato de calcio (Waksman, S.A., en “The Actinomycetes: a Summary
of Current Knowledge.” Ronald Press, New York
1967) y agar de extracto de suelo (Waksman,
S.A., en “The Actinomycetes.” Vol. II. Clasificación, identificación y descripción de géneros
y especies. Williams & Wilkins Co., Baltimore,
1961). Cada esporangio contiene una hilera recta
de 3 a 4 esporas que son móviles. El cultivo produce también cuerpos globulares surgidos lateralmente en el micelio vegetativo. Un examen microscópico de estos cuerpos globulares revela una
masa amorfa en cuyo interior no se produce un
desarrollo en forma de esporas. Las auténticas
esporas son predominantes en agar de malato de
calcio y agar de extracto de suelo; pocos cuerpos
globulares se observan es estos medios.
Un hidrolizado ácido de células completas contiene ácido meso-diaminopimélico y glicina, que
3
2 053 697
se originan en la pared celular. Xilosa y arabinosa
son los restos de azúcares predominantes de la
pared celular. Esta composición es indicativa de
una pared celular de Tipo II, según se describe
por Lechevalier y Lechevalier (Intern. J. Syst.
Bacteriol., 20:435-443, 1970).
Las caracterı́sticas morfológicas, es decir, la
producción de esporangios en forma de dedo y
cuerpos globulares asociados a una pared celular de Tipo II sitúan este organismo en el género
Dactylosporangium, un miembro de la familia Actinoplanaceae de acuerdo con la descripción del
género dada por Thiemann et al. (Thiemann, J.,
H. Pagani y G. Baretta, Archiv. fur Mikrobiol.,
58:42, 1967).
Producción del antibiótico
El antibiótico EM5586 puede ser producido
cultivando Dactylosporangium sp. A.T.C.C. n◦
53693 a 28◦C o aproximadamente a esta temperatura, bajo condiciones de inmersión aeróbica
en un medio nutriente acuoso que contiene una
fuente asimilable de carbono y una fuente asimilable de nitrógeno. La fermentación se lleva
a cabo hasta que ha tenido lugar la producción
sustancial de la sustancia antibiótica deseada, habitualmente aproximadamente de 120 a 144 horas. Esto puede determinarse mediante un ensayo
diseñado para medir la inhibición de la sı́ntesis
de proteı́nas, es decir, la inhibición de la sı́ntesis
de novo de β-lactamasa por inducción mediante
penicilina G. Los procedimientos de aislamiento
posteriores pueden controlarse también mediante
esta técnica.
La Dactilociclina A y Dactilociclina B pueden ser aisladas mediante técnicas reconocidas en
el estado de la técnica a partir tanto del caldo
sobrenadante como de la masa celular después
de su separación por centrifugación. Para recuperar los antibióticos del caldo sobrenadante,
el pH es ajustado a aproximadamente 5 y seguidamente se extrae la materia activa con acetato de etilo. El extracto orgánico se concentra in vacuo para dar un residuo aceitoso que
seguidamente es purificado en resinas de intercambio catiónico y aniónico y a continuación
mediante cromatografı́a por centrifugación en
contracorriente para producir los componentes
EM5586 puros de Dactilociclina A y Dactilociclina B. La primera etapa de adsorción con resina es con la resina de intercambio catiónico
R
R
AGMP-50 (Bio-Rad
AGMP-50: reBio-Rad
sina copolı́mera de estireno-divinilbenceno macrorreticular con grupos -CH2 N+ (CH3 )3 enlazados, Laboratorios Bio-Rad, Richmond, CA.) en
la forma H+ , de la que son eluidos los componentes activos con piridina-acetonitrilo-agua. El producto eluido activo se adsorbe seguidamente en la
resina de intercambio aniónico Bio-Rad AGMPR
AGMP-1: resina de copolı́mero
1 (Bio-Rad
estireno-divinilbenceno macrorreticular con grupos -SO3 enlazados, Laboratorios Bio-Rad, Richmond, CA.) en la forma Cl− , y la elución
se efectúa con ácido acético-acetonitrilo-agua.
R
LHUna cromatografı́a posterior en Sephadex
R
20 (Sephadex LH-20: perlas de gel de dextrano
reticulado alquilado, Pharmacia Fine Chemical
AB, Uppsala, Suecia) con acetonitrilo-agua-ácido
5
10
15
20
25
30
35
4
trifluoroacético, separa los componentes EM5586
de Dactilociclina A, Dactilociclina B y Dactilociclina C del compuesto conocido, 4a-hidroxi8 -metoxi-CTC. Una cromatografı́a por centrifugación en contracorriente con la fase inferior de
cloroformo-metanol-agua sirve para separar los
compuestos nuevos, Dactilociclina A, Dactilociclina B y Dactilociclina C.
Dactilociclina A, Dactilociclina B y Dactilociclina C pueden obtenerse también a partir de
la masa celular mediante extracción con metanol.
El extracto metanólico es concentrado in vacuo.
La solución acuosa resultante se ajusta a pH 5 y
la materia activa se recupera mediante extracción
con acetato de etilo. Seguidamente se efectúa
otra purificación según se describió anteriormente
mediante cromatografı́a en resinas de intercambio
catiónico y aniónico, cromatografı́a LH20 y cromatografı́a por centrifugación en contracorriente.
Dactilociclina A y Dactilociclina B son activas contra bacterias gram-positivas, incluyendo
bacterias resistentes a la tetraciclina. Cada una
de ellas puede ser utilizada para tratar infecciones bacterianas gram-positivas en especies de
mamı́feros, tal como seres humanos.
El siguiente ejemplo ilustra la invención más
en detalle.
Ejemplo
Preparación de Dactilociclina A y Dactilociclina
B
Cultivos inclinados en agar compuestos por
2% de harina de avena y 2% de pasta de tomate
en agua potable fueron sembrados con Dactylosporangium sp. A.T.C.C. n◦ 53693 y se incubaron
durante 14 dı́as a 28◦C. El producto crecido resultante fue utilizado para inocular porciones de
100 ml de un medio acuoso contenido en matraces
Erlenmeyer de 500 ml. La composición del medio
de germinación fue:
40
45
Glucosa
Almidón soluble
Extracto vacuno
Triptona
Extracto de levadura
CaCO3
Agua potable frı́a hasta 1000 ml
Gramos
1
24
3
5
5
4
50
55
60
65
El medio, ajustado a pH 7,0, fue esterilizado a
121◦C durante 30 minutos antes de su utilización.
Los matraces germinadores inoculados fueron
incubados a 28◦ C en un agitador rotatorio durante 96 horas. El agitador funcionó a una velocidad de 300 rpm con un recorrido de 5,04 cm.
Se hizo una transferencia de un 1% de los matraces de germinación a porciones de 100 ml de reciente aportación del mismo medio contenidos en
matraces Erlenmeyer de 200-500 ml. Los matraces inoculados fueron incubados a 28◦C durante
144 horas en un agitador rotatorio que funcionó
a 300 rpm con un recorrido de 5,04 cm. La producción de materia bioactiva se midió mediante
un ensayo diseñado para medir la inhibición de
sı́ntesis de proteı́nas de novo, por ejemplo, βlactamasa. En este ensayo, la muestra a ensayar
3
5
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(250 µl) se añade a 2 ml de Caldo de Ensayo Antibiótico (BBL Laboratories, Cockeysville, Md.)
en un tubo estéril. También se añaden 0,5 ml de
un cultivo durante una noche en Caldo de Ensayo
Antibiótico de Bacillus licheniformis SC 9262 de
la “Squibb Culture Collection” y 100 µl de una
solución de penicilina G (100 µg/ml). Después
de incubación a 37◦ C durante 2,5 horas, 30 µl
de una solución que contiene 50 mg de una cefalosporina cromogénica, y se añade también ácido
(6R-trans)-3-[2-(3,4-dinitrofenil) -etenil]-8-oxo-7[(fenilacetil)amino]-5-tia-1-azabiciclo[4, 2,0]oct-2eno-2-carboxı́lico, disuelto en 5 ml de dimetilsulfóxido y diluido con 95 ml de solución tampón
de fosfato 50 mM de pH 7,0. Un cambio de color rápido de amarillo a rosa indica la hidrólisis
de la cefalosporina cromogénica por la enzima inducida, β-lactamasa. La inhibición del cambio
de color es una medida de la producción de los
antibióticos de esta invención ya que los mismos
inhiben la producción de la enzima, β-lactamasa.
En la recolección, los contenidos de los matraces fueron reunidos y los caldos reunidos se centrifugaron para producir aproximadamente 16 litros de un lı́quido sobrenadante y 5,5 kg de células
húmedas. El lı́quido sobrenadante, ajustado a pH
aproximadamente 5, fue extraı́do con tres porciones de 6,7 litros de acetato de etilo. Los extractos
de un total de 54 litros de caldo sobrenadante fueron combinados y concentrados in vacuo para dar
un sólido aceitoso (3,46 g). El sólido fue disuelto
en acetonitrilo-agua, 1:1 (70 ml) y fue aplicado a
una columna de AGMP-50, resina H+ , malla 200
-400 (1,5 x 13 cm), rellena con el mismo disolvente. Después de lavar la columna con 180 ml
del disolvente, los antibióticos fueron eluidos con
215 ml de un disolvente compuesto por piridinaacetonitrilo-agua 8:46:46. El producto eluido se
hizo pasar a través de una columna de 1,5 x 10
cm de AGMP-1, resina de Cl−, malla 100-200,
rellena con acetonitrilo-agua 1:1. Después de un
lavado inicial de la resina con 225 ml de este disolvente, los antibióticos fueron eluidos con 175
ml de disolvente que consiste en ácido acéticoacetonitriloagua, 2:49:49. El producto eluido activo fue concentrado in vacuo para dar un sólido
marrón, 0,28 gramos.
Una porción de 0,14 gramos del sólido, disuelta en 2 ml de acetonitrilo-agua-ácido trifluoroacético, 66:33:0,1, fue sometida a cromatografı́a
en una columna de 2,5 x 40 cm de Sephadex
LH-20, rellena con la misma mezcla disolvente.
Las primeras fracciones activas fueron recogidas,
reunidas y concentradas in vacuo para producir
37 mg del complejo de Dactilociclina. La segunda parte con un valor máximo de materia activa a eluir fue también recogida y concentrada
in vacuo para dar 75 mg del compuesto conocido,
4a-hidroxi-8 -metoxi-CTC.
El complejo de Dactilociclina (115 mg), obtenido según se describió anteriormente, fue disuelto en 4 ml de una mezcla disolvente difásica
compuesta por cloroformo-metanol -agua, 7:13:8
y se sometió a cromatografı́a en este sistema disolvente en un Separador-Extractor de Espiral
Multi-Capas Ito (P.C. Inc., Potomac, Md.) que
funcionaba a 800 rpm utilizando una espiral de
tubos (1,6 mm d.i.) de teflón multicapas con un
4
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
6
volumen de 330 ml. La elución se efectuó con la
fase móvil superior. Después de la recogida de
565 ml de fase móvil, la fase inferior fue recuperada y las fracciones se combinaron según el bioensayo. Se recuperaron cuatro partes con valores
máximos de materia activa, siendo tres de Dactilociclina A, Dactilociclina B y Dactilociclina C y
la siendo la cuarta 4a-hidroxi-8-metoxi-CTC residual. El orden y la cantidad de cada producto
recuperado fueron: Dactilociclina C (2,7 mg, 110115 ml), Dactilociclina A (26,3 mg, 125 -150 ml),
4a-hidroxi-8-metoxi-CTC (11 mg, 355-485 ml) y
Dactilociclina B (13,7 mg, 785-885 ml).
La Dactilociclina A tiene unos valores
máximos de absorción ultravioleta en metanol (E1% ) a 369(160), 261(170) y 238(200) nm
además de la absorción final. No se detectan
cambios en los valores máximos de absorción
por adición de un ácido. Los valores máximos
de la absorción cambian a 386(150), 279(170) y
243(210) nm por adición de una base. El espectro de infrarrojos de la Dactilociclina A en
bromuro de potasio se muestra en la figura 1.
Son destacables los siguientes valores máximos:
1677, 1609, 1384, 1241, 1204 y 1136 cm−1 . El
espectro de masas por bombardeo con átomos
rápidos (FAB) en ion positivo en dimetilsulfóxidoditiotreitol-detioeritritol-glicerina (en lo sucesivo
denominado DDDG) se muestra en la figura 2. El
espectro de masas FAB en ion negativo en DDDG
se muestra en la figura 3. La medida de la masa
de alta resolución en el ion M+H produjo una
masa de 698,2282 daltons. El espectro RMN de
C13 a 67,5 MHz de la Dactilociclina A en metanol
deuterado se muestra en la figura 4; el espectro
RMN de H1 a 400 MHz en metanol deuterado se
muestra en la figura 5. La Dactilociclina A es soluble en metanol, mezclas de acetonitrilo-agua y
dimetilsulfóxido, pero no es sustancialmente soluble en acetonitrilo, cloroformo, benceno o agua.
La Dactilociclina A tiene un valor de Rf
de 0,33 cuando se somete a cromatografı́a en
placas (200 µm) de capa fina en fase inversa
Whatman KC18 con un disolvente que consiste en dimetilformamida-acetonitrilo-solución
tampón, pH 4,2, 3:4:3. La composición de la solución tampón es: ácido etilendiaminotetracético
0,5 mM, sal de disodio, ácido cı́trico 15 mM, citrato de sodio 20 mM y nitrato de potasio 50 mM.
La Dactilociclina A tiene un tiempo de retención
de 3,28 minutos cuando se somete a cromatografı́a
por HPLC en una columna (0,45 x 30 cm) de fenilo Waters µBondapak con un caudal de 1 ml
por minuto. Este sistema utiliza justo el mismo
disolvente descrito para el análisis cromatográfico
en capa fina.
La Dactilociclina B tiene unos valores
máximos de absorción ultravioleta en metanol (E1% ) a 373(190), 262(200) y 238(240) nm
además de la absorción final.
Los valores
máximos de la absorción cambian a 368(180),
261(220) y 238(240) por adición de un ácido. Los
valores máximos de la absorción cambian a 385(180), 281(200) y 243(260) nm por adición de una
base. El espectro de infrarrojos de la Dactilociclina B en bromuro de potasio se muestra en la
figura 6. Son destacables los siguientes valores
7
2 053 697
máximos: 1725, 1606, 1546, 1382, 1240, 1102 y
993 cm−1 . El espectro de masas FAB en ion positivo de la Dactilociclina B en DDDG se muestra
en la figura 7. El espectro de masas FAB en ion
negativo de Dactilociclina B en DDDG se muestra en la figura 8. El espectro de masas de alta
resolución en el ion M+H produjo una masa de
712,2165 daltons. El espectro RMN de H1 a 400
MHz de la Dactilociclina B en metanol deuterado
se muestra en la figura 9.
La Dactilociclina B tiene un valor de Rf
de 0,11 cuando se somete a cromatografı́a en
placas (200 µm) de capa fina en fase inversa
Whatman KC18 con un disolvente que consiste en dimetilformamida-acetonitrilo-solución
tampón, pH 4,2, 3:4:3. La composición de la solución tampón es: ácido etilendiaminotetracético
0,5 mM, sal de disodio, ácido cı́trico 15 mM, citrato de sodio 20 mM y nitrato de potasio 50 mM.
La Dactilociclina B tiene un tiempo de retención
de 4,85 minutos cuando se somete a cromatografı́a
mediante HPLC en una columna (0,45 x 30 cm)
de fenilo Waters µBondapak con un caudal de
1 ml por minuto. Este sistema utiliza justo el
mismo disolvente descrito para el análisis cromatográfico en capa fina.
La Dactilociclina C tiene unos valores
máximos de absorción ultravioleta en MeOH
(E1% ) a 381(120) y 275(170) nm además de la
absorción final.
Actividad biológica
Se utilizó la metodologı́a siguiente para determinar la concentración inhibitoria mı́nima (denominada en lo sucesivo MIC) de los compuestos
de esta invención. Los organismos de ensayo se
hicieron crecer en 20 ml de Caldo de Ensayo Antibiótico (Difco) inoculando el caldo (en tubos)
con un asa de siembra del organismo a partir de
un cultivo inclinado en agar BHI (Difco). Los tubos inoculados fueron incubados a 37◦ C durante
18 a 24 horas. Estos cultivos se supone que contienen 109 unidades formadoras de colonias (CFU)
por ml. Los cultivos fueron diluidos 1:100 para
dar un nivel de inóculo final de 107 CFU; las diluciones fueron hechas con Caldo Vacuno de Levadura (Difco). Los compuestos de ensayo fueron
disueltos en un diluyente apropiado a una concentración de 1000 µg/ml. Se hicieron diluciones al
doble en Caldo Vacuno de Levadura (Difco) que
resultaron en un intervalo de 1000 µg/ml a 0,5
µg/ml. Una porción de 1,5 ml de cada dilución
se colocó en platos de petri individuales a los que
se añadieron 13,5 ml de agar K-10. La composición de agar K -10 es:
5
10
15
20
25
8
Extracto vacuno
Extracto de levadura
Peptona
Dextrosa
Agar
Agua destilada
La concentración de fármaco final en el agar
varió en el intervalo de 100 µg/ml a 0,05 µg/ml.
Placas testigo de crecimiento del organismo que
contienen solamente agar fueron preparadas e
inoculadas antes y después de las placas de ensayo. El organismo fue aplicado a la superficie de
agar en cada placa con un Inoculador Multipunto
Denly, que suministra aproximadamente 104 CFU
en la superficie de agar.
Las placas fueron incubadas a 37◦C durante
18 horas y se determinaron las MICs. La MIC
es la concentración más baja de compuesto que
inhibe el crecimiento del organismo.
Los organismos de ensayo escogidos para este
estudio son parejas de cepas sensibles a la tetraciclina y resistentes a la tetraciclina. Los resultados, que se muestran a continuación, demuestran
que hay una falta de resistencia cruzada entre los
compuestos nuevos de esta invención y la tetraciclina.
30
Organismo∗
35
40
45
50
1,5 g
3,0 g
6,0 g
1,0 g
15,0 g
c.s. para 1 litro
MIC (µg/ml)
Tetra- Dactilo- Dactilociclina ciclina A ciclina B
Staphylococcus
aureus SC2399
0,4
Staphylococcus
aureus SC10016 100
Staphylococcus
aureus SGB 42
0,2
Staphylococcus
aureus SGB 45
100
Staphylococcus
epidermidis
SC9052
0,8
Staphylococcus
epidermidis
SC 9087
50
Staphylococcus
faecalis SC9011
1,6
Staphylococcus
faecalis SC9776 >100
1,6
6,3
6,3
3,1
1,6
3,1
3,1
3,1
6,3
3,1
3,1
3,1
25
6,3
25
6,3
55
60
65
5
9
2 053 697
REIVINDICACIONES
1. Un procedimiento par preparar un compuesto, Dactilociclina A, que tiene el espectro de
infrarrojos en bromuro de potasio según se muestra en la figura 1, el espectro de masas por bombardeo con átomos rápidos en el modo de ion positivo según se muestra en la figura 2, el espectro
de masas por bombardeo con átomos rápidos en
el modo de ion negativo según se muestra en la figura 3, el espectro RMN de C13 a 67,5 MHz según
se muestra en la figura 4, y el espectro RMN de
H1 a 400 MHz según se muestra en la figura 5,
caracterizado por cultivar Dactylosporangium,
sp. A.T.C.C. n◦ 53693.
2. Un procedimiento para preparar un compuesto, Dactilociclina B, que tiene el espectro de
infrarrojos en bromuro de potasio según se muestra en la figura 6, el espectro de masas por bom-
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bardeo con átomos rápidos en el modo de ion positivo según se muestra en la figura 7, el espectro
de masas por bombardeo con átomos rápidos en
el modo de ion negativo según se muestra en la
figura 8 y el espectro RMN de H1 a 400 MHz
según se muestra en la figura 9, caracterizado
por cultivar Dactylosporangium, sp. A.T.C.C. n◦
53693.
3. Un método para preparar una preparación
farmacéutica, que comprende combinar una cantidad farmacéuticamente efectiva de Dactilociclina A según la reivindicación 1 con un vehı́culo
farmacéuticamente aceptable.
4. Un método para preparar una preparación
farmacéutica que comprende combinar una cantidad farmacéuticamente efectiva de Dactilociclina
B según la reivindicación 2 con un vehı́culo farmacéuticamente aceptable.
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NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva
del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposición Transitoria del RD
2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicación
del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a España y solicitadas antes del
7-10-1992, no producirán ningún efecto en España
en la medida en que confieran protección a productos quı́micos y farmacéuticos como tales.
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Esta información no prejuzga que la patente esté o
no incluı́da en la mencionada reserva.
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