XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico

XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico
IDENTIFICACIÓN DE PEPTIDASAS DIGESTIVAS DEL TIPO CISTEÍNO DE LA
GLÁNDULA DIGESTIVA DE P. vannamei.
Kitzia Hernández Salazar. Universidad Politécnica del Valle de Toluca. [email protected]
Asesor Dra. Martha Patricia Hernández Cortés. Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, La Paz
BCS. [email protected]
Planteamiento del problema
El camarón blanco Penaeus vannamei es un crustáceo del cual se han caracterizado
varias enzimas digestivas pero no todas se han identificado en su totalidad. Se han
encontrado enzimas del tipo serino peptidasas (tripsinas y quimotripsinas) mediante
electroforesis y zimogramas, pero se ha observado que entre las quimotripsinas y
tripsinas hay peptidasas que no son del tipo serino y posiblemente sean del tipo cisteíno,
ya que se ha reportado que en este órgano se han encontrado actividad de catepsina B,
una cisteíno peptidasa (Stephens et al. 2012), es por ello que en este trabajo se
identificará a las peptidasas del tipo cisteíno presentes en la glándula digestiva de P.
vannamei con el fin ampliar el conocimiento de este organismo y posiblemente en un
futuro aplicar este conocimiento en el campo de biotecnología.
Metodología
Se preparó un extracto de glándula digestiva de P. vannamei y se cuantificó proteína
soluble por el método de Bradford. Posteriormente se obtuvo la actividad proteolítica
total y tomar estas unidades como referencia para saber la cantidad de inhibidor se iba a
utilizar. Los inhibidores utilizados fueron E-64 y TLCK; el primer inhibidor es para la
inhibición de proteasas del tipo cisteíno, este no inhibe proteasas del tipo serino excepto
tripsina; por otro lado el TLCK es para inhibir tripsinas. Finalmente las muestras se
separaron por SDS-PAGE 12% para observar si hubo inhibición de la tripsina y
corroborar que las enzimas encontradas en investigaciones anteriores sean peptidasas
del tipo cisteíno, cada gel se dejó en un sustrato de caseína pH 8 y hemoglobina pH 5.5;
finalmente se tiñeron con una solución de Coomasie. Los dos geles se destiñeron y se
escanearon.
Conclusiones
Las muestras revelan en el gel con el sustrato de caseína pH 8, el TLCK inhibió a las
tripsinas, esto concuerda con las indicaciones de este inhibidor ya que menciona que es
eficiente a un pH mayor a 7.5, mientras que en el gel con el sustrato hemoglobina pH
5.5 hubo una mayor inhibición de tripsinas y peptidasas del tipo cisteíno, especialmente
con el inhibidor E-64, con ello se observó que el pH es un factor importante para la
inhibición de peptidasas.
© Programa Interinstitucional para el Fortalecimiento de la Investigación y el Posgrado del Pacífico
Agosto 2014