86498/86428 MonoclRH.Kphenotype - Bio-Rad

86439 DIRECT COOMBS (480003):86498/86428 MonoclRH.Kphenotype
ScanGel™
DIRECT COOMBS
86439
12 tarjetas
GELES FORMULADOS CON ANTIGLOBULINAS
MONOESPECÍFICAS DE ORIGEN POLICLONAL
O MONOCLONAL MÚRIDO
Test directo con l’antiglobulina
IVD
Todos los productos fabricados y comercializados por la sociedad Bio-Rad
se hallan bajo un sistema de garantía de calidad desde la recepción de las
materias primas hasta la comercialización de los productos finales. Cada lote
de producto final se somete a un control de calidad y sólo se comercializa si está
en conformidad con los criterios de aceptación. El fabricante conserva la
documentación referente a la producción y al control de cada lote.
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I - UTILIZACIÓN Y PRINCIPIO DE LA PRUEBA
Esta tarjeta está estrictamente reservada para uso profesional e in vitro.
Destinado a la prueba directa de antiglobulina (Coombs direct), este ensayo
se utiliza para estudiar la sensibilización in vivo de los glóbulos rojos por
anticuerpos IgG y/o por la fracción C3d del complemento.
Asocia los principios de aglutinación y de filtración en gel.
Una tarjeta ScanGel DIRECT COOMBS permite ensayar 2 muestras. Para
cada muestra deben utilizarse tres microtubos: IgG, C3d, Ctl .
La reacción se obtiene y se lee tras la centrifugación de unos microtubos
especialmente diseñados, rellenos de gel impregnado del reactivo antiglobulina.
La suspensión de glóbulos rojos se deposita en el pocillo de cada
microtubo y se centrifuga. Los glóbulos rojos no aglutinados se depositan
en el fondo del microtubo, mientras que los aglutinados se retienen por
todo el gel en función de su tamaño. Su posición en el gel determina la
intensidad de la reacción.
-
+
++
+++
++++
La capacidad del gel para separar los glóbulos rojos del suero elimina la
fase de lavado obligatoria en la técnica convencional de la prueba directa
de antiglobulina (Coombs Direct).
II - CARACTERÍSTICAS DE LOS REACTIVOS
El primer y el cuarto microtubos contienen cada uno un gel impregnado con
un reactivo antiglobulina anti-IgG. La fracción anti-IgG se prepara con
sueros de cabras hiperinmunizadas.
El segundo y el quinto microtubos contienen cada uno un gel impregnado
con un reactivo antiglobulina anti-C3d. La fracción anti-C3d es un anticuerpo
monoclonal múrido producido a partir del clon 053A714.
El tercer y el sexto microtubos contienen cada uno un gel sin reactivo
específico. Corresponden al control (Ctl).
Este reactivo contiene azida sódica (< 0,1 %) como conservante.
El código del producto y el número de paneles por caja se indican en la
etiqueta de la caja.
III - CADUCIDAD Y CONSERVACIÓN
La fecha de caducidad y las condiciones de almacenamiento se indican en
la caja.
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Los tajetas deben conservarse a temperatura ambiente, de +15°C a +25°C.
Las tarjetas deberán almacenarse verticalmente, protegidas de las fuentes de
calor, en un local con escasas variaciones de temperatura e higrométricas.
IV - PRECAUCIONES
La calidad de los resultados depende del respeto de las buenas prácticas
de laboratorio siguientes :
• No utilizar los reactivos después de la fecha de caducidad indicada en la
etiqueta.
• No utilizar tarjetas que muestren signos de desecación o burbujas, o si la
lengüeta de sellado muestra signos de deterioro o está parcialente retirada.
• Como los reactivos contenidos en los microtubos tienen una
naturaleza diferente, es indispensable tomar las precauciones
necesarias para no provocar contaminaciones inter-microtubos,
especialmente cuando se retira la lengüeta de aluminio y en las
etapas de distribución.
• Utilizar una punta de pipeta para cada muestra.
• Comprobar la precisión y el correcto funcionamiento de las pipetas y de
los otros equipos.
• Llevar guantes y gafas de protección durante la manipulación de los
reactivos y de las muestras.
• No pipetear directamente con la boca.
• Evitar las salpicaduras. En caso de salpicaduras, limpiar las superficies
manchadas con lejía de 12°Cl diluida al 10% y secar con papel
absorbente. El material utilizado para la limpieza deberá ser desechado en
un contenedor especial para residuos contaminados.
• Producto y fungible que hayan estado en contacto con muestras o
reactivos que contenga material de origen humano deben ser descartados
una vez descontaminados.
• Las fichas de seguridad están disponibles bajo petición.
V - RECOGIDA Y TRATAMIENTO DE LAS MUESTRAS
La sangre debe obtenerse en condiciones de asepsia en un tubo sin o con
anticoagulante (EDTA).
Tras la obtención, la prueba debe realizarse lo antes posible. Las muestras
que no puedan analizarse rápidamente deberán conservarse entre +2°C y
+8°C para ser sometidas a prueba en las 48 horas siguientes.
Las muestras obtenidas en tubos secos deben ensayarse antes de la
refrigeración.
En ningún caso debe observarse hemólisis.
No calentar las muestras.
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VI - TÉCNICAS
Material suministrado
• Tarjetas ScanGel DIRECT COOMBS
Material necesario pero no suministrado
• ScanLiss : medio de suspensión de los glóbulos rojos
86441 ScanLiss 100 ml
86442 ScanLiss 500 ml
• Centrífuga : ScanGel Centrifuge
• Pipetas automáticas o semiautomáticas
• Puntas de pipetas
• Tubos de un solo uso
• Contenedor especial para residuos con riesgo biológico
• Lejía
• Guantes de látex
• Papel absorbente
• Gafas de protección
Controles
• Controles positivo (glóbulos rojos sensibilizados por un anticuerpo de
naturaleza IgG conocida y/o por la fracción C3d del complemento) y
negativo (glóbulos rojos no sensibilizados).
Procedimiento
Seguir estrictamente el protocolo propuesto.
Antes de su utilización, llevar todos los reactivos a temperatura ambiente.
Por centrifugación, separar el suero o el plasma de los glóbulos rojos de la
muestra a probar.
a) Preparación de una suspensión de glóbulos rojos
Para cada muestra :
• Poner 1 ml de ScanLiss en un tubo de un solo uso identificado.
• Añadir 10 µl del precipitado globular de la muestra.
• Mezclar.
• La suspensión de glóbulos rojos está lista para su uso.
b) Técnica
1. Identificar el panel con el nombre o el número de muestra correspondiente.
Retirar completamente la lengüeta de aluminio.
Resuspender los hematíes anted de usar.
2. Distribuir 50 µl de cada suspensión de glóbulos rojos en el pocillo de los
microtubos adecuados.
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3. Centrifugar inmediatamente 10 minutos en ScanGel Centrifuge. El
retraso entre el final de la distribución y el principio de la centrifugación
no debe exceder los 10 minutos.
4. Leer las reacciones. La lectura debe efectuarse durante la
siguiente hora tras el final de la centrifugación.
VII – INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
• La presencia de aglutinados (en la superficie o dispersos en el gel)
corresponde a un resultado positivo.
• Un sedimento de glóbulos rojos en el fondo del microtubo corresponde a
un resultado negativo.
• Una reacción positiva en uno de los microtubos sólo puede ser válida si el
microtubo Ctl es negativo.
Si el microtubo Ctl presenta una reacción positiva :
Lavar los glóbulos rojos con solución salina isotónica (NaCl 0,9%).
Repetir el procedimiento como se indica en VI.a y VI.b.
Si el microtubo Ctl da siempre una reacción positiva repetir la prueba
utilizando otra técnica que no sea la técnica de filtración en gel.
• Un resultado positivo en el microtubo IgG indica la presencia de IgG
detectable en los glóbulos rojos.
• Un resultado positivo en el microtubo C3d indica la presencia de C3d
detectable en los glóbulos rojos.
• Los resultados sólo son válidos si los controles positivo y
negativo dan los resultados esperados.
VIII - COMPORTAMIENTO
La evaluación de las especificaciones se ha realizado con 677 muestras
(346 donantes, 108 pacientes, y 223 recién nacidos).
Cada resultado ha sido comparado con el obtenido en técnica de tubo o
filtración de gel.
Se ha ensayado la reproducibilidad de la aplicación y ha demostrado unas
buenas especificaciones tanto intra como interensayo.
LÍMITES
Los resultados anormales pueden ser consecuencia de :
• una contaminación bacteriana o química del suero, del plasma, de los
glóbulos rojos o del material.
• una medicación o un estado patológico del paciente que provoque una
reacción cruzada.
• el uso de un medio de suspensión para los glóbulos rojos diferente al
recomendado.
• una préparación de los glóbulos rojos diferente a la recomendada.
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• una resuspensión incompleta de los glóbulos rojos.
• una hemólisis de las muestras.
• a presencia de fibrina (imagen de un sedimento celular compacto en el
fondo de un microtubo acompañado de una fina banda rosada en la zona
superior del gel correspondiente a los glóbulos rojos retenidos por los
residuos de fibrina).
• contaminación entre microtubos.
• uso de otro procedimeinto del descrito anteriormente.
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IX - LITERATURE
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
Löw B, Messeter L. Antiglobulin test in low-ionic strength salt solution for
rapid antibody screening and cross-matching. Vox Sang. 1974; 26:53-61.
Kankura T, Kurashina S, Nakao M. A gel filtration technique for separation
of erythrocytes from human blood. J Lab Clin Med 1974; 83:840-844.
Rouger Ph, Salmon Ch. : La pratique de l'agglutination des érythrocytes et
du test de Coombs. Masson 1981.
ISBT/ICSH Working Party : International Reference Polyspecific AntiHuman
Globulin Reagents. Engelfriet CP, Voak D. Vox Sang.1987; 53:241-247.
Engelfriet C.P., Overbeeke MAM, Voak D : the antiglobulin test (Coombs
test) and the red cell ; In Cash, Progress in Transfusion Medecine. Churchill
Livingstone. 1987; vol2:74-98.
Voak D.: Coordinated report of studies on monoclonal antibodies to
complement. Rev. Fr. Transf. Immunhematolol. 1988; XXXI,367-376.
Voak D, Downie D.N. : Serological characterisation of monoclonal
antibodies to complement components of C3 and C4. Rev. Fr. Transf.
Immunohematol. 1988;XXXI,377-380.
Lapierre Y, Rigal D, Adam J et al : The gel test : a new way to detect red cell
antigen-antibody reactions. Transfusion 1990; 30:109-113.
Proceedings of the second international workshop and symposium on
monoclonal antibodies against human red blood cells and related antigens.
IgG/Complement. Lund. 1990;195-206.
Bromilov IM, Adams KE, Hope J, Eggington JA and Duguid JKM. Evaluation
of the ID-gel test for antibody screening and identification. Transfusion
Medecine 1991;1:159-161.
Salmon Ch, Cartron JP, Rouger Ph.: Les groupes sanguins chez l'homme.
2é ed. Masson 1991.
Pottier C, Quillet P, Baufine-Ducroq H.: Gel-test : Interpretation and value of
a new technique for the detection of irregular antibodies. Ann Bio Clin 1992;
50:679-685.
Deffune E, Le Pennec P.Y., Lascaux J.M., Rouger Ph.: Méthode d'étude des
réactifs anti-complément : utilisation d'hématies sensibilisées
congelées/décongelées. Rev. Fr. Transfu. Hémobiol. 1992; 35:299-309.
Burin des Rosiers N, Nasr O.: Recherche des anticorps irréguliers
érythrocytaires par la méthode du gel-test. Analyse de 35882 échantillons.
Rev. Fr. Transfus. Hemobiol., 1993; 36:391-399.
International Forum. What is the best technique for the detection of red cell
alloantibodies. Vox Sang 1995; 69:292-300.
Issitt P.D.: Applied blood group serology. 4th ed. Miami: Montgomery
Scientific Publications, 1998.
“Under license from DIAMED SA, 1785 Cressier-sur-Morat, Switzerland”
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10/2008
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