Bio-VDRL - Grupo MexLab

Bio-VDRL
Código: 3001101
Prueba rápida cualitativa y cuantitativa para la detección de Treponema
Pallidum en placa por técnica de VDRL.
Para uso Profesional de Diagnóstico In Vitro.
USO DE LA PRUEBA
Bio-VDRL es una prueba Cualitativa y Cuantitativa en placa por
floculación para la detección de anticuerpos de Treponema
Pallidum.
RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA
Algunas pruebas serológicas se utilizan actualmente para detectar
anticuerpos del agente etiológico de sífilis en suero y en fluido
espinal, el Treponema Pallidum. La mayoría de estas pruebas entra
en dos categorías: Treponemales y No Treponemales. Las pruebas
No Treponemales incluyen precipitación, floculación y combinación
de métodos complementarios que utilizan antígenos derivados de
una extracción animal (por ejemplo, Cardiolipina, lecitina o
colesterol) en solución de alcohol. Las pruebas Treponemales
incluyen aglutinación, anticuerpos fluorescentes, inmovilización de
Treponemas y combinación de métodos que utilizan antígenos
extraídos de filtraciones de treponemas Pallidum virulentos.
PRINCIPIO DE LA PRUEBA
El principio de la prueba se basa en una reacción inmunológica entre
anticuerpos de Treponema Pallidum y un antígeno de Cardiolipina,
lecitina, colesterol (Antígeno VDRL) en una solución de alcohol. El
anticuerpo detectado se denomina “Reagin”.
MATERIALES SUMINISTRADOS
1. Antígeno VDRL
2. Solución Buffer VDRL
3. Instructivo.
MATERIALES REQUERIDOS PERO NO SUMINISTRADOS
1. Agitador rotativo ajustable a 180rpm.
2. Placa de vidrio transparente.
3. Micropipetas para medir volúmenes indicados
4. Microscopio.
ALMACENAMIENTO
Cuando un cambio inesperado ocurre en la reacción de la prueba,
revise el pH de la Solución Salina Buffer para determinar si éste ha
sido el factor de modificación. Soluciones Salinas Buffer fuera del
rango de pH de 6.0 +-0.1 deberán ser desechadas.
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
1. Para uso de diagnóstico In Vitro.
2. No utilice las Pruebas después de su fecha de expiración.
3. No abra el sobre metalizado hasta llevar a cabo la prueba y
hasta que éste se encuentre a temperatura ambiente.
4. Maneje todas las muestras de pacientes tal y como si fueran
potencialmente capaces de trasmitir enfermedades.
PREPARACIÓN DE LA PRUEBA
La temperatura de la solución Buffer Salina y del Antígeno deberá
estar entre 23° y 29°C al momento de la preparación de la
suspensión del Antígeno.
1. Pipetee 0.4ml de solución Salina Buffer dentro de un frasco de
30 ml.
2. Agregue 0.5 ml. del Antígeno agitando mediante la rotación del
frasco, continuando la rotación durante 10 segundos.
3. Agregue 4.1 ml. de solución Salina Buffer.
4. Cierre el frasco y agite de arriba hacia abajo durante 10
segundos.
Notas:
1. La suspensión de Antígeno está lista para usarse y puede ser
utilizada por un día.
2. Pruebe esta suspensión con suero control positivo para
corroborar su reacción satisfactoria.
I. PRUEBA CUALITATIVA DE SUERO EN PLACA
1. Pipetear 1 gota (50 microlitros) de suero en una placa de vidrio
transparente.
2. Agregue una gota (50 microlitros) del antígeno previamente
preparado.
3. Poner la placa en agitador mecánico durante 4 minutos a 180
RPM.
4. Lea las pruebas microscópicamente con objetivo 10X.
II. PRUEBA CUANTITATIVA DE SUERO EN PLACA
1.
Pipetear diluciones de la muestra 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32, etc.
con solución salina fisiológica y realizar para cada dilución la
prueba como se describe en el paso I.
2.
Reportar los resultados a partir de la dilución que produzca
resultados reactivos.
III. PRUEBA CUALITATIVA PARA LCR EN PLACA
1. Preparar una dilución 1:2 del antígeno anteriormente
preparado con solución fisiológica al 10%.
2. Agite vigorosamente y permita que repose 5 minutos o menos
de 2 horas antes de su uso.
3. Pipetee 1 gota (50 microlitros) de LCR en una placa de vidrio
transparente.
4. Agregue 1 gota (50 microlitros) del Antígeno diluido. Poner la
placa en agitador mecánico durante 8 minutos a 180 RPM.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
1. POSITIVA O REACTIVA. En caso de aparición de grumos o
aglutinación.
2. NEGATIVA O NO REACTIVA. En caso de ausencia de grumos
o Aglutinación.
RESULTADOS ESPERADOS
Aquellos pacientes que contienen el agente etiológico de sífilis
Treponema Pallidum, van a reaccionar en cierto grado al antígeno
Bio-VDRL.
LIMITACIONES DE LA PRUEBA
Se llegan a presentar reacciones inciertas ocasionalmente. Este tipo
de reacción es demostrada cuando ocurre inhibición parcial o total
con suero no diluido y se obtiene una máxima reacción con un suero
diluido. Dicho fenómeno puede ser tan pronunciado que únicamente
un resultado débil o NO REACTIVO es producido en la prueba
Cualitativa con un suero que es fuertemente reactivo cuando se
diluye. Por lo anterior, se recomienda que todos los resultados
débiles, no reactivos se reevalúen bajo procedimientos cuantitativos
antes de emitir resultados definitivos. Una vez llevado a cabo dicho
procedimiento y en caso de encontrar Reactiva una muestra bajo el
segundo procedimiento, se recomienda brindar el resultado como
Positivo, incluyendo el nivel de dilución.
Mientras que es aceptado que la mayoría de las reacciones
serológicas positivas obtenidas con antígenos lípidos no específicos
son debido a la presencia de Sífilis, las pruebas empleando dichos
antígenos han sido criticadas en su metodología bajo el argumento
de que reacciones serológicas positivas se han dado en individuos
no sifilíticos biológicamente falsos.
Un individuo Biológicamente falso que proporcione resultados falsos
positivos se puede deber a:
1. La presencia de sustancias a las que producen los anticuerpos
en enfermedades sifilíticas.
2. Un incremento o alteración en la fracción seroglobulina.
3. Un incremento o alteración en alguna sustancia química
contenida en la sangre. Desórdenes que incluyen resultados
pseudo-sifilíticos positivos incluyen infecciones respiratorias,
hiperproteinemia, varicela, infecciones de proteínas tales como
tétanos, hepatitis infecciosa, malaria, lepra, tuberculosis,
linfopatía venérea, leishmaniasis o fiebre escarlatina. Una
reacción positiva puede ocurrir con espiroquetosis, una recaída
de fiebre u otras infecciones por espiroquetas. Más aún,
resultados biológicamente falsos presentan gran dificultad para
ser identificados bajo métodos serológicos.
CARACTERÍSTICAS DE COMPORTAMIENTO
Existen factores externos como el equipo, reactivos, sistemas de
medición, tiempos transcurridos, temperaturas y órdenes de
procedimientos que pueden influir en el comportamiento de la
prueba. Los usuarios finales que llevan a cabo cambios arbitrarios
en la técnica de uso asumen completa responsabilidad en los
resultados.
Adicionalmente, se recomiendan evaluaciones periódicas interlaboratorio e intra-laboratorio, tales como revisiones a fin de
mantener la uniformidad de resultados a la misma usanza de un
laboratorio de referencia.
REACTIVOS
Bio-VDRL contiene un antígeno incoloro en una solución de alcohol
conteniendo 0.03% de Cardiolipina, 0.9% de colesterol y suficiente
lecitina para producir una reacción estándar.
El Bio-VDRL contiene una Solución Buffer de Diluyente, con pH 6.0
+- 0.1 con la siguiente composición:
Formaldeido Neutral
0.5 ml
Fosfatasa de Sodio secundaria
0.037 gr.
Fosfatasa de Potasio primaria
0.170 gr.
Cloruro de Sodio
10.0 gr.
Agua destilada
1,000 ml.
REFERENCIAS
1. Stout, G.W.: Prueba para Sífilis Treponema y No Treponema.
Amer. J. Med. Tech. 27:67-75, 1961.
2. Manual de pruebas Serológicas para Sífilis. U:S Dept. of Health
Education and Welfare, US Government, Washington D.C.
1964.
3. Harris, A., Rosenberg, A.A., & Riedel, L.M., Una prueba por
microfloculación para sífilis utilizando antígeno de cardiolipina.
Reporte preliminar, J. Ven. Dis. 27:169-174, 1946.
4. Harris, A., Rosenberg, A.A. & Del Vecchio, E.R.: La prueba
VDRL por Floculación para Sífilis. Un reporte suplementario.
29:72-75, 1948.
5. Duncan, W.P., Bossak, H.N., and Harris. A.: Una prueba de
Sífilis por Fluido Espinal. Am. J. Clin. Path. 35:93-93, 1961.
6. Manual de pruebas para Sífilis: 1969, U.S. dept. of Health.
Center for Disease Control, Atlanta, Ga. 30333.
7. Ríen, CHA.: Serodiagnosis de Sífilis. 11th. Ed. St. Louis, Mo.,
the C.V. Mosby Co., pp 430-437, 1956.
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Rev. 10-2016