INSTITUTO NACXONAL DE LA NUTRICION.

INSTITUTO NACXONAL DE LA NUTRICION.
SALVADOR
ZUBIRAN.
JCas
'
*
.
VALQRACION DE HETODOS ANALITICOS PARA LA DETERMINACION DE LA VITAMINA
C Y Cu AF'LICACION EN EL ANALISIS DE ALIMENTOS.
/-
ALMA PATRICI
CID M O W S .
7c
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/*
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......
. .
o
La vitamina C tiene e l 2 r i v i l e g i o de ser l a primera ma-cia
Y
?
nutri
d
tiva ,cuya carencia s e reconoció como causa de una enfermeW.Robabl=
memte,ya en 1700 se observb que l a f a l t a de fruta fresca ymrdurae,
-
moducla eacorbut0,y qpe eata enfermedad se podfa prevenir
J curar con
_una dieta adecuada.A esto sigui6 un reconocimiento gradual del “princl
pi0 antiescorbútico”. (32).
A p a r t i r del desaubrimiento f o r t u i t o de l a carencia inOhcid8 de vitamina C en e l cobayo
en 1907,se dieron paaoa gigantescos hacia l a iden
tificacidn de este principi0.A l a preparad& de extracto6 &a vitamina
C,cada vea mas concentrados,eigui6 el aislamiento del conpl.sto p r o y
la identificación de BU estructura.La actividad de l a vitlrfna C en l o a
alimentos y en los materialee biol8gicoe,eetb asociada a l contenido de
baiiio Gasc6rbico en éstos.( 17)
Acido ascorbico o vitamina C e8 e l Acido Lxifoaecbrbieo,@m también
se llama ácido cevitsmlnico,vitamins antieeicorbdtica,Bcfdo hexurbico,
escorbutamina y Redoxbn,6ate último nombre por
8u
relacióu eetructurai
.
ucm l a forma reduoida,el enol del hidroxiwetilglioxal (CM)$tCOB. CHO)
La vitamina C es una eustancia criatalina bleuicajaigunas de sus pro=piedades fisicas y qpfaicas son8 ( 17,32)
............................. ‘6%*6*
Peso molecular .
.
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.
.
.
fusión ....................
Fbrmula ompíriaa
76.12
O
..........~92
Rinto de
IZiaociacih acldica,pK1 ....................e.4.2
Disociacidn acídicr,p% ~~....................1~.6
Solubilidad
..................................
Soluble en a@a,mmta
nol,etmol,Inaoluble
-
en bter,rllol ,bemeno,
uloroformo,6ter de p.-
................
....................
.20°
RotaoiQl ospooíiica en agua
Rotaoidn eop.dfios en motanol.
AbaorofUn
pihim8
an -a
0.............48°
-1-
1
*
tról eo, eto.
265 f l , m e ñ a
35-
banda
8
i
r
.
”
1 .
-
‘-cry.w**
‘
.
al medir e1 b i d 0 ucbrbloo y el
b1016gitt00 errbws .PI aiiientolr
Ia vitamina natural eatá muy ertendida en l o s animales y
la plantas,,
probablemente en q p i l i b r i o con e l Acido dehidroaac6rbfco.Srr encuentraen cantidades relativamente grandes en l a corteaa suprarrend y e l cris&
talino de2 ojo.%tre
los alimentos r i c o s en eata vitamina
08th
l a col,=
e l gimiento,la espinsca,los chlcharo8,el tomate,el nabo,la rsoiacha,l&
eanahoria,el apio,la leohuga,la toronja,la haranja,el lim&n,h mandarina,
l a f r e s a , e i pldtano,el melacotbn,ia piña,la guayaba,la mostaz8,la papaya,
e l hígado,los a ~ a c a t e s , l o sejotes,el melón,el male t i e r n o , h fxwubUO8a,
..
laa caiabasas,las limas,las g r o a e l h s negraa,y l a s semilla. geminadaa.
.
'.
I /
!ib l a pr&ctica,lea frutos c l t r i c o a son l a mejor f'uenta de &&do aacórbi-
co,pies
en otro alinentoa ae dostmyen cantidadea apreoiablsll de l a
Vita
se panen en ccatanco con íg
dicioa de cobre.Ei &ido rscdrbico me extrae en escala industrial a P ~ I +
mina a l uoclnarlos en presencia de aim y
02
tir d e l rosal.( 17)
BL
&ciao asodrbioo no IO acumdla en grado considerable am e1 cuerpo;-
sin embargo,exiete una reserva vitamínica -es
-
e l Bs&orbuto humano por
* .
deficiencia de vitamina C en l a dieta,tarda agroxiaadamente tree o cuatro
meses en produciree.Pero,aunqpe
l a cantidad de ácido a8~idrbiCOnecesaria
para e v i t a r e l escorbuto e s f á c i l de determinar,es una tarea d l f i c i l avz
riguar l a cantidad necesaria para disfkwtar de una buena a d u d general.
Parece Qlte l a s necesidades de ácido aecórbico dependen de l a rapides del
aetabollsmo,de l a energis y,dol tamaño del cuerpo.( 25)
.
El eumínistro de eata vitamina hidrosoluble c m e l dimeato ea de gran
importancia para e l hombre.El escorbuto,tan temido en el parado,era debA
do a una carencia de vitamina C.La
característica principaf. de eata en-
fermedad ea l a deaintegracidn del t e j i d o coaiectioo que eo encuentra entre
laa pUwde8 de lata c6l.Ulas de diversoo tejido8 corporalee.Cumdo eeto
su,
ce.fe,en l a s paredes de l o s delgados capilares sangu€neois pisoro aparecen
pk4U8ña8
mancha. hemorrágicas debajo de l a piel ( psteeías) alrededor de
loa f O l h ~ l 0 8piloeoe y luego grandes moretones eepont6~sos.Jll paaimto88
vuelva d6bil e indiferente.l.8
finalmento
80
encías 80 Ponen blandas y eaporijoaai
.*
,
aflojan y cae l a dentadura.(l'?),
-
.
-3-
.
..
lh los lautantes,ios primeros signo8 de sangrado agareccim en l a regi&n
eltuada inoediataiente por enofma de lo8 hue808 largo8 y hag doior muy
f'uorte. ( 17)
..
.- _ 'I
,.
Ya que para l a formaci6n del t e j i d o conectivo se requiere k vitamina
C,la deficiencia de e l l a retrasa l a cicatrieacidn de lira herllha y e l
-
tejido de l a c i c a t r i e v i e j a p e d e aer deeintegrado. (17)
B1 escorbuto es e l resaltado f i n a l de un período prolonga& en que se
conaume una dieta muy deficiente en vitamina C,pero l o que r o e s t á my
-
claro es e1 lfmite para l a ingestibn de esta vitarnina.ActualriPte
e l ea-
corbuto se observa en muy raras ocasione;a, aunque existen dos ipu,wa de
personae que son marcadamente vulnerables,los lactantes y lm ancianos.
-
h s lactantes necesitan una fuente especial de esta vitanhsn puesto
que su alimentacidn habitual carece o contiene muy POCO de e.Ua.Debido 8
e l l o es necesario agregar a au dieta jugo de naranja o jugo ds uva.LOa
ancianos basan su alimentación principalmente en cereales f e a l e n t o s y
conaumen pocas frutas y verduroappor l o que también puedes s h . i r ; l a def i c i e n c i a de esta vitamina.( l?).
Sin embargo,el vaciamiento de l a s reservae de un ser hum-
antes de--
que aparezcan los sfntonas de carencia de ácido aacórbico se produce en-
cerca de s e i r meses.( 17).
-
Por definici$n,una unidad internacional (U.I.)
o una unidad UCP-XIV
de vitamina C,es l a actividad antiescorbdtica de 0.05 mg de &ido aecbrbico;por l o tantopun perno de ácido ascdrbico q y i v a l e a 20 u00 U.I.(v)
Se ha podido determinar que e l conBumo de vitamina C depcrrde en buena
parte de l a intensidad de los procesos metab6licos.Asl e l cocisumo de Vitamina C en e1 hombre aumenta en l a s enfermedadea infecciosam con l o s '-
descensos bruacoa de temgerotura,le agitacibn,etc.( 17).
El &&do ascdrbico no ea tdxico n i d n en d6sia relativamente elevadas
de l a vitamina.51 dnioo efecto observado cuando ae inyectan &ais
relrtL
vssentcs elevadas de l a vitua'ine ea l a diuresia y en l o s aniamios i n f e r i o
rea e1 aumento en l a presión sanguínea.( 10).
La determinación cuantitativa rápida del ácido a s c b r b i c ~en frutas yproductos naturales es de gran importanoia,ya que es e l nutrimento máa
-
aiectado a l procesar las frutas y l e a verduras Ig?e l o contianen y au retención se usa como un indicador de l o retenoi8n de otros matrimentoe
y
por tanto de 8u caiidad.Mea88 l e a funciones del Acid0 asodrbico como un
agente reductor,un antioxidanto y un agente secnrestrank da ietalee es
-
especáifioo p8ra wrstratoa alimenticios; tiene a c t l d d a d ftmcrional de uno-
o aAs tipom en aceite. vsgetalea,graeas .nimales,vit.niar A,orrotenoidei,
8,C~~8
aceite0 c f t r i c o e , p e a ~ d O , n ~ ~ i n 8 , l e ~ O , C e ~ % a , ~ n Ocuraüam,ph
iiport-te
00 OUL1
8
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J ? N t 8 8 f r ~ # C 8 ~ , C ~ g d a d 8 8O l I h t 8 d . i . I @ 8 b t r n t O
.:&o -,ic....;rl
*
- 3 t 3 i t o a j,'v'.:J::t-.-,%
(i
q t T a \ : ?
-4-
uao comercial en muchos de estos productoso( 18)
Las usos del Acid0 aec6rbic0,incluyendo aqpellos en alinerboa,contirnuan aumentando debido a l a combinacibn de l a actividad de lavitamina C
a s propiedades ú t i l e s y au b a j a toxicidad.Ad,el ácido L a a d r b i o o se
-
aiIade a f~tae,ver&ras,cerveee,vino y otras bebidas enlatadm o embote-
:.
. .
.
. .
...
-,
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lladaa para prevenir e l desarrolio de sabores y Olores o x i w , e s p e c i a &
mente durante l a pasteurizacidn,En
este caso,el oxígeno en d e s p a c i o de
cabeza ea reducido a agua por aecorbato.(21).
Algunos nietodos usados para reducir l a s p6rdidas de ácido Laacbrbico
en l o a alimentos sons( 10).
X6 todo.
-Limitando e l oxígeno.
-
Manera6 de lograrlo.
.Maminuyendo l a aereacidn par rocio,ebullicibn,o purgando con nitrógeno,
.Añadiendo glucosa oxidaea m b catalaeia.
.Añadiendo sulfito.
.. .
. . ...
,- ,.
~
.Añadiendo levaduras.
-Limitando e l Cu (111) y
e l Fe (111).
1
-Limitando e l complejoentre e l ibn metAlicoy el ácido Gasc&rbico.
. M t a n d o e1 latbn,bronce,acen, y hierro.
.Quelando con c i t r s t o , f o s f a t o a , ~ y
~ proteínas.
.Bajando l a actividad de
a aja nao e1
pH.
.Cubriendo e l ácido G a a c d r b i a t o usando
-
un derivado suatituyendo entrir 0-2.
.Añadiendo proteínas aelectaa.
h a siguientes cuadros muestran la8 necesidades nínimam &.&ido
rsc6;
bico aegdn l a ALdniinia$rrci&n de Alimento8 y Medicamentos y l8a cantidadea
(RBC) ,
por e1 Instituto Nacional de l a Nutrioidn !3alvador Z u b i r b (IlWSZ)t(L7,
dlet6tices recomendadas por e1 Consejo I?acionsr de Investig8cionee
y
35)
-.
i
CUADRO 2,Cantidades recomendada8 se&
e l ??RC en l a d i e t a .
.......... 75
...........
...............
.................
...............
............................. 35
Hombre moderadamente activo
mg.
Ehbaraeo,segunda mitad
100 mg.
Período de lactanoia
150 mg.
Niños menores de 1 año,
4-6 años
7-9 años
30 mg.
..............................
.............................
...........................
75
.................
................. 90
.................
mg.
50 mg.
60 mg.
10-12 años
&chacha8 13-20 año8
Muchachos 13-15
...,.
70 ng.
Mujer moderadamente activa
1-3 años
.
mg.
e0 mg,
Go8
Muchachos 16-20 d o s
380
100 mg.
CUADRO 3.Recomendaciones para e l consumo de nutrimentos ( m a i n d i d 0110snormales con dieta en condiciones de M$xico).
EDAD (Meees y d o s cumplidos)
Peso tedrico
Ace Ascórbico (mg).
Yiñoa ambos sex08.
(3-3 meses
40
4-Xi mesea
40
13-23 meses
10.6
2-3 d o 8
13.9
18.2
4-6 d 0 8
7-10 años
26.2
40
40
40
40
Adoleacentes Maeculinoa.
1 ~ 1 eñ08
3
14-18
39. 3
57.8
Adolescentes Femenino8.
11-18 años
Hokbrea
.
53.3
18-M MOU
65.O
$5-
65.0'
2ái j e r e i .
18Fhbarazrüae
55.0
w
. -,L
. . A continuación
-
se d&-.una:.lieta del contenido de ácido ascdrbico en a i
gunos productos de origen vegetal8 (35).
Producto.
iag,
de &ciao ascórbim,htIO g peso neto
Ea pinaca
40
Papa L..ri 11a
17
Guayaba (Promedio)
199
L i d n wia (jugo)
Manzana
51
B a r a j a (promedio)
76
lQar-fa (sum)
chi les
53
85
Tomate
11
4.
11
42
BíFp0303 DE ANALISIS DE ACIDO ASCGRBICO. (26)
E l ácido aacdrbico es une vitsniins importante que tiene una estruoturr
química que j u s t i f i c a BU clasificacidn como cerbohidrato,su rbsorcidn m&x&
8-245
do
8
ma( h i d o ) y 265 nm(neutro) .E1 áoido eacdrbico ea rgpiduaente oxid5
ácido dehidroascbrbico (U)par e l
OX$genO
y ionee metálico8 eni
me
dios alcalinos y Bcidoa,Ll ácido dshidroasc6rbico p e d e ser además o x i d e
do a dcido dicetogrl~nico.&a estntcrturas de estoa tres conpoestos se mu-
eatran a contimaci6nr
>::{
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COO&
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o
C=Q
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sh It. última ahcrda han aparecido numeroaarr publicacioneo d e s c r i b i d &
8ná3iiir p r r r e l &cid0 uoórbico en produotom e l i m e m t i o i o m , i u i o a u ~ t í o o ~
y mueitr8u biolbgicre.E.ta
LnsiirJtenctia en encontr8r nuevo8 &todo.
analf-
ticom reeniltr de 18 importanoia de l a vitamin8 en estudio8 atricionrlerr,
~iíai~r,f8ra8aol6gicoi induatrialea.
-7-
I
,
6
:"1
-
Estos procedimientos han sido divididos en cuatro aecciona iayoresrEs
pectroscopio, electroquímica, anáLi s i s enzimático y cromatografSb.
-MBtodo~ E 8 ~ c t ~ 8 C dCoa.
p i ( 193 17 26 928 9 29 32)
i.
La qufnica cllisica asociada con métodos espeotrosc8picoe p d e div3riir
l o s en dos categorías generaleat (8)aquelloe que usan un inciiador redox
en
EU
-
forma oxidada y (ai)aquelloa que involucran l a formaci4n de cromdge-
nos por derivatieacibn.Ins indicadorea redox incluyen el; 2,64lcloroindcrfeno1,ionea metálicos y otros reactivos v a r i o 8 . h derivatieaddn fncluyel a reaccidn con l a 2,4-dini trofenilhidrazina,dia~otieacidn y I’ormacián de
quinoxalina.
( a) RePCCiOne8 redox.
2,6-Dicloroindofenolo-El reactiva redox estandar usado pam a n á l i s i s
-
de ácido ascórbico en un grui número de muestrarr es e l 2,6-dicloroindofenol( DCIP).Soluciones del reactivo son eeules a pH neutro y raeaa a pH &cA
d 0 . h reacción e8 r i p i d a y de prilier orden con respecto a c o a reactivo:
&aptbe de numeroaaa modifioacionea,el metodo consiste
en
Xe a&
sorbancia del DCIP a 518 na antea y de3puh de l a adioibn de l a muestra.
La8 limitaciones encontradas con l o a mátodos~del DCIP r e s u l t a de l a b a j a
especificiüad y l a inestabilidad del colorante.Huchas nol8ailaa (P.O.
noles,eulfidrilom y trioaas reductonas)’ y iones (p.o.
fe-
fiorro,cobre o mal-
fito) weden reducir e l 2,6-DCIP;f
étiWnaba,In*srfbmie. Tentativas por minirniear esta8 &k~@flmruoe5ro incluyen e l aislamiento cromatogT4fica delácido 88córbico y 18 remocidn de i o n e i de metalei peaado8 por precipita-cián con una s a l do mercaptan0 antes de l a reaccibn.0tra manma de mejorar
l a especificidad involucra el eeguisiento de l a cinetica de la reecoidn
-
entre l a vitanina y e1 DCIP. Beoien temento Hiromi y colaboradorea,ma~oraron
-el
límite i n f e r i o r a 2&
por reacción del ácido aac62bico en preeienci-
de un exceso de reactivo y usando uninterruptor de f l u j o del proceso Cing
ticoo
L.8
conveniencia8 de este tipo de metodologi8 depemde de los avancen
en loa m6todos de interrupoidn de f l u j o y l a neoeddad de
analizar muchaa
mreotraa.Batr aetodolo4r tien0 8cept8oibn en 18boratoriom d í n i c o e aon
analisadorem contrifuga..
-8-
-
-
.
-9-
P
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I
. . .. .
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I
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O
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-11-
- .2
-1 3-
.,
OW ETIVOS.
I
i.
1
;
. ...-
,.
i'
-Objetivo General4
Bncontrar un netodo apropiado para v a l o r a r l a vitamina C & acuerdo
a l a naturaleza tiel aSmento y eliminando a l mkimo l a influercia de
-
las interferencias en l a determinacidn.
-Objetivo Mediato.
Valorar y comparar distintos m6todos de c u a n t i f i c a c i b de vitamina-
C en base a su precisidn,rapidee,practicabilidad! y porcentaje de remperaci8n.
-Objetivo Inmediato.
üontar y estandariear loa distintos método8 a valorar.
.
.
:j
I
.j
DISE30 DEL TRABAJO.
de método8
II.-Elecci6n
a vglorar.
Espectroiotom6 trico
T i tu laci6n con
con molildato
aamnirr (5)
III.-Elecci¿h
de muestras a an&
f i z a r para vaiorar l o s métodos.
I
1
V.-Beauitado8
I
,
á o i ón oomparaci 6n
y valoración de resultadosb
=-interpret
I
obtenidos.
-14.
1
.
de
-
I
L,-ReVi s i 6n Bibliogrdf ica,
Ai comenzar e l presente proyecto se realizd una amplia revisidm bib l i o g r á f i c a acerea de l o s m6todos usados para valorar l a vitamina C en
alimentos,consultando para e l l o libros,revistas y tesis.
Con-?este prop690to se visitaron l a s siguientes bibliotecas
I
.Bibli(?teca del I.N,N,S.Z.
d b i i o t e c a de l a Universidad Autonoma Metropoli tana,Ietapalaps.
.Biblioteca de l a Facultad de Qufrnica,U.N.A.I.
,aibl%ote ca del In 8 ti tu to de Investigaciones Bi om6di cas Jn. A. A, I,
Biblioteca de l a Escuela de Ciencias Biol6girss.I,P.B,
,Biblioteca Centralf.de l a U.N,A,M.
Jnstituto de Investigaciones Ribliogr&ficas.U.N, A, M,
U.,-Elecci6n
2 métodos 3
valorar.
Como primera etapa del proyecto se eligieron como métodos a valorar
e l método de titulaci6n con 2,6-Dicloroindofeno1
y e l método espectro-
fotom6trico modificado con molibdato de amonio,en base a que su a p l i c z
cidn es de l a s más comunes para el a n á l i s i s de vitamina C además de que
son de f á c i l aplicacidn y reproducibles,
Por otra parte,estos m6todos pueden ser aplicados en cualquier lab0
ratorio ya que no requieren de equipo especial como en e l caso de losmétodos de exclusión ibnica,f luorométrico semiautomatizado y e l que uu t i l i e a l a HPLC;lo que hace que l o s métodos escogidos tengan un costorelativamente bajo,oon l o que se favoreció l a elección,
111,-ElecciQ
de l a s muestras para valorar los métodos,
-
Se trabajó,porurt,lsdo,con
ácido aacdrbico estandar y,por otro lado
se escogieron alimentos con a l t o contenido de vitamina C,de gran con-
mo,sin reperausión de interferencias,f&ciles de manejar y aptos para
-
analizarse por cada método.
f
-16-
'I
1V.-DISEÑO
PARA
LB
(2,6-DCIP
ESTANMRIZACIOW DE LOS METODOS,
Y MOLIBDATO
DE
AMONIO),
7
r
Mediciones r e p e t i t i +
Medici n d i a r i a porrentes alícuotaa
o-
a 20 v8ces).
F
(concentraciones de 4
vitamina C por tres-
ocasiones.
1
e
neral del
sistema
E
I
n
I
Conportamiento
1I
vas el mismo a8a (15
triplicado de dife-
Graficar Curvas est
+dar.
I
8
+Coef. cz
rrelación
+Rango de
linearida
Porcentaje de recupo-
I V ~ E a t a n d a r i z a c i d nde 108 rn6todos.
-Curva Patrón.
Se realizaron tres curvas est8ndas.de vitamina C de c a 6 ~ i Q t o d oen
diferente8 dfaa con e l f i n de obtener e l comportamiento general del si0
tema,Por medio del método de ~dnimoacuadzados se obtuvo e l taeficiente de correlaci$n,pendiente y ordenada a l origen de ceda cuma..
.
-Reproducibilidad( P r e d s i b n )
Para e l l o se hizo e l anál5sia
de un alimento aon a l t o -tenido
de
vitamina C varisa veces can cada uno de loa metodos y se cStarlo l a
& a aritmdtica,Ia varianea,la desvisuón estandar,el coefiuente de
mz
e
riación y l o s límites de variación permitidos entre &plicados.
La media ea una
meüidm de l a teadenoia.o6ntral deli grupo de dam,-
se l e conoce tambib como promedio p permite vs1ora.r Iis exactitud delsi8 tema.
La varianaa y l a desviación eatsndar
-
son medidas de &ispbl.si&i;la
varianea mide l a dispersith con respecto a l a dieeminacidn de l o s va10
r e a alrededor de gu media y representa unidades cuadradasjb deaviación
eutandar representa esta d i a p e r s i b en términggl de l a s uni&des originales,ya que aimplemente es la rafe cuadrada de l a varianer,brPbas me%
daa permiten predecir e l comportamiento fituro del sistema.
E l coeficiente de variacidn e8 una medida de variacibn islativa que
expresa a l a d e s d a c i b i estandar como un porcentaje de 1aredis;sopesa
l a precisión del sistema.
-Porcentaje
de recuperaubn.
Se obtuvo paralelemente a l a r e p r o d u c i b i l i b d y8 que l 8 m e s t r a
88-
dividid en dos partes igualea,con una ae conooi6 l a p r e s i t i b y a l a
otra se le,agre& una cantidad conocida de ácido asobrbico estandar
ansliehdose ambas de i g u a l manera.=
porcentaje de recuparacibn
-
air-
ve para determinar que tan efectivo ea e l método en l a a r a t i f i c a c i d n -
del deido ascdrbico t o t a l de una determinada muestra.
-Praoticabilidad.
SO estimó COn8fdershdo
ef
tiempo y la faoiiidad en e l m á l i s i a de
lam muestras,gor cada netodo.
-18-
-
IV.i.-Descripcibn
L-BfBrtodo
métodos v8lorados.
titulacidn
2,6-DCIP0(A.O.A,C,)(
3).
(Aplicabls para determinar ácido aacdrbico reducido.No aplicable en
presencia de Hierro,Estsño,Cobre,Sulfi to o Tiosulfato)
-Fundamento
.
t
E l ácido ascórbico reduce por oxido-reduccidn e l indicador 2,6-DCIP
a una solución incolora.En e l -to
fina1,el colorante excesivo no re-
ducido es de color rosa en soluci6n á c i d a o l a vitamina
titulación
138 r e a l i z a
89
ertrafda y l a
i
en una solucibi de ácido m e t a f o s f ó r i d c i d o ace
tito o ácido metaiosfdrico-ácido ac6tico-ácido su1Hrico para mantener
-
l a acidee propia de l a reacción y para evitar l a autooxidacidn del dci
do aacórbico a un pH alto.
-Reactivos
- -- ’
t
a) Solucibi extractora de ácido metafosf6rico-8cido acético,-En
40 m l
de ácido acético y 200 m 1 de.agua destilada se disolvieron 15 g de 6do metafoafórioo en 1 e n t e j a s S e diiuy6 a 300 a i l y se f i l t r ó a través
de papel f i l t r o Whatman # 4.58 almacenó en refrigeracibn.(?-lO d a s
mkimo)
-
-
,
&)Soluci&n estandar de ácido ascdrbico 1 mg/ml.Se
pes-
exactame
te 50 mg de ácido ascdrbico estandar (almacenado em d e s e c a r y fuera-
d~ l o s rayos solares directos) y se colocaran en un matras voiumétrico
de 50 m1;ae aford con l a solución extractora inmediatamente antes do
-
usar.
o)Soluai&
soluoida de 50 m i de agua destilada-
de indofeno1.-Auuna
y 42 mg de bicarbonato de aodio se adicionaron 50 mg de a d s6dica de-
2,6-Dicloroindofsnol
(almacenado en desecador) disolvienüoire por a&
c i b vigorosa.9 diluy6 a 200 m l y so f i l t r 6 a una b o t e l l a bibar.Se
m a n t u v o bien tapado,fiera de l o a rayoa solares,en refrigowci6n.Pars
saber l a s condioionea en que
solucidn de 2,6-DCfP
88
preparada
to
-
-
encontraba e l indicsdor,a 15 m l de 1880
agregar621
-*
c
>io m l de la solución
t a n d a de ácido ascórbico i
ng/nl;ei l a solución se volvfa incolora
‘ I
80-
po
die USarSe,de l o contrario se adquiría una nueva p r o d s i b del indica-
dor,
. .
-
-Procedimiento
t
a)Valoracibn de l a solución de indofenol,
Se colocaran tres alfcuotas de 2
nil
cada una de l a aolu&&
estandar
-
de ácido ascdrbico en natraces erlenmeyer de 50 m l que con8iifan 5 m l
de solucidn ertractora.Se
t i t u l b con 2,ó-DCXi.P
hasta que se &ser&
-
un
l i g e r o color roaado.
Similarmente se titularon tres blancos compuestos de 7 8i de solu-
-
c i h extractors y un volumen de agua igual a l gaato o b t e n i b en Is titu
lación anterior.
Con l o s promedios de estandar y blanco se calculi3 yesxpmd l a concen
tracidn de l a solucibi de indofenol como miligramos de hi& ascbrbicoequivalentes a 1 m i l i l i t r o de l a s o l u c i b de indofenol,
b)Preparacibn de l a curva estandar.
Se prepararon soluciones estandar de ácido ascdrbico coa concentrado
ne8 de 0.2~,0.~0,1.0.1.5,2.0,,
y 2.5
mg de ácido ascdrbico por m l de so-
-
tomaron,por triplicado,alícuotas de 2 m1 de cadauna de l a s
&ción.le
concentraciones y se colocaron,x?n matraces erlenmeyer de 50 nl con 5 ma
de solución extractora.Se
VaS
.
titularon' con 2,6-XIP y se tr-
las
cur-
c)Cuantifícacibl de Pitamina C en muestras de jugo de li.61..
Se.:oWu.rr con un exprimidor e l jugo de varios 1imones.Se colocmon,en
un matraz erlenmeyer de 250 mE,100
al de jugo y 100 in1 de l a soluci6n-
extractora,ae f i l t r d a traves de gasa y luego a t r a d s de p p o l filtro. I
Whatran
#
4.Se tomaron alfcuotaa die 8 a l y
88
. . ..
titulb.
-
Hoffman y colaboradores han automatizado esto procedidento y l o
hanHussdo para determinar l a concentraci6n de ,ácido aacdrbico en jugos
da naranja y uva.0tra versibn autoinatisada fue.,intro&cid. por E g b e r e
y colaboradores y so aplicd en granos fortificados y bebiüa8,Intentoapara minimizar las interferencias incluyan el aislamiento cromatogr4Q
co y l a remooión de iones metAlicos por precfpitaoibn con una s a l de
-
morcaptano antes de l a reaccidn,Otra manera Bo aejorarrla especificidad
consiste en el seguiqiento de l a cinética de l a reaccibi sntre l a V i t s
mina y el dicloroindofeno1,Hiromi y colaboradores mejor-
e l límite-
inferior a 2)4( por reacaidn del Acid0 ascbrbico en prewaoia de un
=
-
ceno de reaotiro y usando un procedimfsnto de internipdbi del f l u j o
-20-
4.
I.,
.,:, '
-
cin&tico;esta metodologfa tiene bastante aceptacidn en labomtorios ,
clSnicos que cuentan con analizadores centrífugos.
.-
...
.?
I .
'.Y
2,-M6fodo
modificado
del aolibdato
amonio.( Bajaj et. &)(
I
5)
,
. . ..
(Aplicable para determinar ácido ascdrbico tota1,Minimica l a s intef
ferencias por sustancias rechictoras como sulfitos,sulfatoe,Irferro I1
111, --aminoácidos y otraa.No aplicable en frutas o verduras con un cot
tenido mayor a 0.04$
:
I
.
*.
.
de comwestos fendlicos como catequinaa$cido g&-
i i c o , pirogalol y gaiotaninos.)
-Fundamen to
.
.
-
t
E1 molibdato de amonio a l reducirse en presencia de iones sulfato y
fosfato a l reaccionar con'8cido ascdrbico forma un complejo CBe molibde
no de color azu1,obedeciendo l a l e y de LambertBeer.L?a a d i d & de 0.5ml
de solucidn de ácido metaf'osfdrico-8cido.ac6tico reduce e l tiempo para
-
e l desarrollo del color,El procedimiento de extraccidn usando una solu
cidn de dcido oxdlico-EDTA es e l mbcl efectivo p e s e l EDTA quela l o s
-
iones metálicos libres.
.
-Aparatos#
Espectrofotometro Guilford con celda de 1
CP.
.
i
?
de longitud de trayee-
t o r i a y un volumen de 5 m1.
-Reactivos
s
Todos l o s reactivos son de grado analítico,
.Soluci&n de molibdato de amonio a l 5% m/V,
.Solucibn de ácido oxálico-0.05
MLPreparado recientemente y con O 2
I .
ml de EDTA.
','.
.Acid0 sulf'urico a l
V/Vp
.Solucidn de ácido metafoafórico-Qcido acético,preparado de igual
nera que en e l método anterior.
.Soluci&n estandar de ácido aacdrbico 0.01
$
m
z
-
m/V en solucidn de dci
do oxlllico-EDTA recién preparado.
-Procedimiento
I
a) Preparación de l a . curva estandar.
30 pipetearon allcuotas de 1,2,3,4,6,8,
y 9 n l de l a solucibi e&-
dar de ácido aaodrbico en matraces volum6tricoe de 25 m1,Sa eZadi8 solucidn de Acid0 oxAlioo-EPFA para dar un volumen total de u) ml,Se -2
I.
5
I.
-22-
.
-
@5 a cada matraz 0.5 m 1 de solucidn de ácido metafosf&rico-Wdo aceti
co y 1 m l de solución de ácido sulfúrico a l 5 $,seguido de.rQkE de socidn de molibdato de amonio.Se diluyó a l volumen con agua destilada.
D e ~ p u 6de
~ 30,minutos 8e midi6 l a absorbancia a 760 nm ccsitra un
U-
blanco preparado de l a misma manera,pero sin e l ácido ascbr'bico.Posteriomente 8e traed l a curva.
1$8etermAn&e2bavde -ácido 1-asabrbioo en f r u t a s y verQrak
Se tomaron 25 m l d e l jugo de P a t a a analizar y se e x t r a s e l ácido
ascórbico con 251111de solución de ácido oxálico-EIYl'A por cerca de 2 min
Se f i l t r ó e l jugo e x t r d d o a t r a d s de una doble capa de gam y poste-
riormente de papel f i l t r o Whatnian #lose colocaron alfcuotas de 5 m l en
matracea volum~tricos de 25
nil
y se desarrollo e l color como se descri
be en l a preparacidn de l a curva estandarOf)espt6ade 30 min ae f i l t r b
l a solucidn azul con papel Whatman
nn.Se
#
42 y se midid l a absorbancia
8
760
determinó l a concentracib de ácido asc6rbico por referencia a
-
l a curva estandar.
NOTAsPara l a s muestras de jugo de limón se dejó un tiempo de d e s a r o
110 de color de 2.5 horas,por contener una gran cantidad de ácido8 org b i c o s que retardan e l desarrollo del mismo,
-Modificaciones s
Ein e l metodo o r i g i n a l ae,usa una solucidn de ácido ascbrblíeo estandar 0.19 m/V;en
e l presente trabajo se usó una solución de &ido aseó;
bico 0.019 m/V con e l f i n de f a c i l i t a r y hacer inis exacta l a toma de,allcuotas.Aüem&s se aumentd e l tiempo de desarrollo de color de 15-30min,con l o que se dísminuy6 l a variación entre l a s repeticiones.
Por otra parte,primeramente ae trabajó con muestras de jugo de l i m b
y luego con mueatras de jugo de naranja y papaya,ples a l adicionar el-
ácido ascórbico estandar a las mueatras de jugo de limdn para obtenere l porcentaje d 4 recuperación se tenfan lecturas muy similares a aquel l a s obtenidas sin e l Acid0 ascbrbho estandartae obtuvo un porcentaje
ligeramente mayor a l trabajar con muestras de jugo de narauja y una d&
ferencia mayor a l t r a b a j a r con jugo de papaya.
Resmcto a esto dtlimo,en e l caso de la8 muestras de papaya se tom=
ron alícuota8 de 2 isl,pue€# a l tomar l a s de 5 m l
88
obtenfsh lecturas
-
m68 a l t a s a l a s obtenidas en l a CUrVaheetaTIdaT,Sit3ndO iapo8ible de l e e r
.L
m o o n trsoi6n:ioorrerpondimte.
-2 3-
V. -Re au 1t ado8 Obteni dos.
I
la. Curva Estandar.
Concentración vit.
.
I '
-. i
c
Gasto promedio de ~ , ~ - D C I(ni)
P
(mg/mi)
Cl-O 25
.
c2=o
50
c 3-1.o0
Los valores arriba anotados para gasto promedio tienen restado e l
-
v a l o r del blanco que fue de 0,225 m l y representan e l promedio de t r e s
lecturas.
Los valores obtenido8 para en gasto de 2,6-DCIP ( m l )
centracidn de los eatandares
(m$ial)
contra l a con-
se graElcaron@bte&ndose un fa-
tor de correlacibl r = 0,999928:
Así mismo,la ecuación r e a l t a n t e
88
l a siguiente :
Y = U U + ~
y
Eh donde
I
i 6 . i 7 0 8 ~ + 0.0827
~.
..
8
a
I
pendiente de l a curva
lb= ordenada a l origen
y = corresponde a los valores existemtes en e l eJe de l a s
abscisai,aiendo en este caso e1 gasto promedio de 2,6-MoloroindofenoL
x
correeponde a 10s valores existentes en e l e j e de las
ordenada8,siendo en este caso l a concentración de Vitamina c en mgJn1.
i:
..
-24-
.
J
.-
c
-25-
2a. -
Curva Estandar.
c
Concentraoión vit.
cl'o
c2-o
(ag/mi)
Carto promedio de 24-DCIP
25
MI- 4.150
50
M2= 8.m
.
(mi)
c3-1 .oQ.
c4=1.yl
c5-2.00
c6=2.50
Los valores a r r i b a anotados para gasto promedio tienen restado el!valor del blanco que fue de 0.200 i 1 y representa e l promedio..-do treslecturas.
Los valores obtenidos para e l gasto de 2,6-DCIP
-
centración de los estandarea (mg/mi)
t o r de correlaci6n r
(mi)
contra l a con-
se graficaron,obteniendose un faoc
0.999920,
Así mismo,la ecuación resultante es l a siguiente
I
13 de J u l i o de 1989,
Factor de c o r r e l a c i h r
rdL 99992
Pendian te;
ai-16,1538
Ordenada al origen$
b=OlQ84.1
-
2,Curva Estandar.
Concentración vit,
c
(+ai)
Gasto promedio de 2,6-DCIP (nl)
5- 4.350
cl=o. 25
c2=o. 50
'h2- 8,050
cpoo
B13=160550
C4-l
M4-24
50
500
c5-2.00
M5=320400
Cg-2.5Q
#;5-40 400
i
~ valores
s
a r r i b a anotadas
__
-lor
deZ blanco que fue de 0.-1
para gasto promedio tienen restado e l y representa e l promedio de tres
-
lecturas.
Los valores obtenidos para el gasto de 2,6-DCIP (rol) contra La corncentración de l o s eatandarea. (mg/ml)
68
graf'icaron,abteniendose un f a z
tor de correlacibi r = 0,999886,
As3 mismo,.la ewaci6n resultante e8 l a siguiente
I
-29-
-
Contenido de vitamina C en v a r i a s repetioiunes de una i i s a a , u s e t r a :
'I
Nuestra
1
por
e l método del 2,6-DCIP0
Concentración vit.
470%)
2
3
4
5
6
7
8
9
48.11
10
11
47 50
12
48.11
1-3
14
15
16
17
18
19
20
c
(mg/1Oomi)
-Nedia o Promedio de l a s 20 repeticionee
-X
-Desviación
.
I
47.82
I
mg vit C
/
100 ml.
estandar s
-Varianea
m2 = 0,033932
-Coeficiente
de variacidn s
C.V.
-Porcentaje
de recuperacidn
$
= 0.365z
%
Con e l f i n de saber l a diferencia en-
t r e l a cantidad de ácido ascdrbico medido y l a crnth%d de ácido asc6z
bico del que ee p.rte,.se añadid una cantidad de ácido ascdrbico estandar conocia a l a muestra de lirndn y se procedió a su a n á l i s i s y cuan-
tificacidn;obteni&dose
-Estabilidad
un porcentaje de recuperacidn de 100.79
del 2,6-DCIP
$
.
s Como e l indicador que se u ~ es
a inesta-
b l e con e l tiempoee probó su estabilidad titulando una muestra de áci
do ascdrbico estandar- de concentracidn conocida con este reactivo,re@
tiendo este procedimiento hasta a l c a w de cinco meses de preparado e l
-
reactivo;tiempo durantewl cual. e l gasto del 2,6-DCIP no varió e i g i i f i
cativamente.Sin embargo se recomienda guardar l a so1ucib.i de 2,6-DCIP-
preparada en frascos dmbar,Fuera de los rayos solares,en e l r e f r i g e r a dor.
-
Se observó que l o que sí influye notablemente es l a eolucidn extrac
tora & ácido acético-&cido,rnetafosf6rico,pr
i
l o que se reoomienda
u s a r l a hasta cinco días,despues de preparada y des*&
-
desechar e l so-
bran$e y preparar una nueva soluci6n para evitar errores en l&Iectura.
W
d
*
ConeentraciQi ieLc. aecórbico (mg/ai)
-
-
(mg/mi)
Absorbancia promedio (760 nm)
2,-X6todo modificado d e l molibdato de u ~ o n i o .
l a , -- Curva Estandar,
7
Concentraoión vit,
c
c1=o.oo40
c*=o 0080
0
c 3=00o120
c4=0.0160
C5'o O 240
Cgdo0320
Ins valores a r r i b a anotados para l a absorbancia tienem
r e d a d o el-
valor del blanco y representan e l promedio de tree) lecturae).
Los valores obtenidos para l a absorbancia y l a concentracibn c8e losestandares; de ácido .,aecórbico (mg/ml) se graficaron,@bteaiendoee un8
curva patrón con un f a c t o r de correlsci&i r
-
0099520.
Así miemo,la ecuaci&n;reaultante es l a siguiente I
y=inx+b
y
lb donde
.
I
15.9340~
0,040715
I
E = pendiente de l a curva.
b = ordenada a l origen,
y = corresponde a l o s valores del e j e de l a s abscisasp-
siendo en este caso l a 8bsorbancia promedio,
x
I
correponde
8
l o s valores del e j e de l a s ordenadas,
-
siendo en este caso l a concentración de ácido ascórc
bico (mg/ml).
Factor de correlaci6na
-0.9952
Pendientes
rnL15.934
Ordenada al origen$
b o 4 O4 715
2a. Curva Estandar.
Concentraoión at.
CfO
c
(ng/il)
.O040
c2ro.mo
.
c 3=o o120
Cq-0.0160
C -0.0240
e
5
C61OOo 320
C7=000360
valor del blanco y representa e l promedio de tres lecturas,
A d mismo,la ecuación resultante es l a siguiente :
3
I
17.822~
0.037833
I
Factor de correlaciónr
r=O 9950
Pendiente1
iip17.8220
Ordenade al origen8
b=-0,03783
0,Of
0*02
Concentración ác, rlrabrbbo (=/mi)
0.04
Concentracibn v
it. C (ag/ml)
C10
' .O040
c2=o.oo80
c 3-o.0120
c4=o.o160
c -0,0240
5
Cs-O O 320
C7=0.0360
Los valores a r r i b a anotados para l a absorbancia tienen restado el
-
valor del blanco y representan el promedio de tres lecturas.
Los valores obtenidos para l a absorbancia y l a concentración de lo8
eatandarea de ácido ascórbico (mg/m1)
ae graficamn,obteniendose una
curva patrón con un f a c t o r de correlacibi
r
m
0.99695,
A s í mismo,la ecuacidn resultante es,la siguiente I
-37-
-
0.6
Ab*
760 a
0.5
Oe4
/
0.3
0.2
Factor de correlaciónt
-09970
Pen di en tet
m= 15.4550
Ordenada al origen8
b 4.o4591
0.1
I
oh1
#
0.'02
Concentricibi ace
I
ob3
asobrbiao (mg/ipl)
I
O
-64
-n
vitamina C en varias repetticiones de una misma muestra
Contenido
por
=
e l método modificado & molibtlato de-amonio.
Xues t r a
Absorbancia( 760 nm)
Concentración vit.
c
(&ni)
I
1
1
2
3
4
5
36.O0
6
34-75
7
36.20
8
910
1
1
12
13
14
36.20
15
36.65
1 Los cgEculos de concentración de l a muestra se hicieron interpoldo l a absorbancia obtenida en una curva es,OandSr corrida e l mismo-
día (GrBPica
IL .
.
^
.
.
I
u
.
.
# 8),
---
-39-
-- ------
-
I_
-. .
~
-Media o Promedio de las 15 repeticiones
8
-X = 35,8567
-Desviaci6n estandar
tag vit. C / l O
nil.
I
!
-Coeficiente
de variaci8n :
C.V.
-Porcentaje
-
3.78
$0
de recuperación : Con e l f i n de saber l a diferencia en-
t r e l a cantidad de ácido ascórbico medido y l a cantidad de ácido ascóz
a l a muestra de liar& y se procedi6 a su a n á l i s i s y cuanti
-
bico del que se parte+e
co estandar
d a d i 6 una cantidad conocida de ácido ascbrbi
ficacibn;obteni6ndose un porcentaje de recuperacibn de 50.00
$I
.
Dado que e l porcentaje de recuperación obtenido con l a s muestras de
jugo de limón f i e muy bajo,se procedió a trabajar con muestras de jugo
de naranja y papaya,resultando un porcentaje de recuperacih de 63.7%
y
76.56 $ respectivamente.
-40-
+
--
Oe6
Oo4--
002
Pactor de correlaci6nr
--
r-fOC084
Pendi ente :
001
--
mt21.9 3
/
Ordenada
81
origen#
b=-9,0456 5
I
8
c003
0.04
Concentracidn dc, ascórbico (mg/mi)
111562
-41-
'
*
*
a
a
Concen traoi ón Bc. ascdrbi eo (mg/ml)
Coaparacidn
resultados
método modificado
amonio para l a detaininad6n
método be titulaciónjcon 2.6-DCIPy
molibüato
ácido aso6rbic0,
-
Muestrat JUGO DE UMW.
Método del ~ , ~ - D C I P
47.82
Metodo del molibdato.
Media o promedio
35.86
(mg vit. C/~OO m l )
15-20 repeticiones.
O. 18
-
Desviación estandar.
i,36
0.03
Variaaea
1.84
-
Coeficiente de varia-
3.79
del
Entandar
t
ACID0 ASCORBIC0 USP.
H6todo del M o l i W & .
YItOdo dol 2p6-DCIP
0,ggg
Coef i c i en te de corre-
0 996
lación,
101 ( j u g o de limón)
Porcentaje de recuperación
3-4 horas
Tiempo de análisis,
7-8 horas
(10 muestras por dup%k
cado)
,
-
SI
-
Influenoia de interfe
Henor,
-
Costo estimado,
ren c i as.
SI
-
Mayor,
i
ai dander
-X1,Sl
y n l corresponde a l grupo de datos con l a mayor media
33091
Fm- s1
s2
En don des
S1 correaponde a l a varianza mayor,
F=
= 54.3274
@*o339
&lo=
ndl
n2-1
I -
14
19
De ambas pruebas ae obtiene como resultado f i n a l s
P777 0 . m
-45-
GWICA
&10,
Comparación del coeficiente de oorrelacibl d e l iihtodo del
i o l i b d a t o de amonio y del m6todo del 2,6-M=IP.
1.OOC
Factor d
orrelaci
Om5975
0.9950
0,9925
0.9900
-
la, curva
Rolibdato de A.
50$
1Iedir.
tn trac i ón
Lscórbf co
hi)
40
a-
30
--
20
--
lo
a -
-
'T
100
Coeficiente de Variación.
b
rem peraci 6I
t
Wolibdato de Antonio.
,guridad.
Tiempo de mlPli8ie.
Costo. b
a
I
arbitraria,- t i h i n o 8 de
peligro en e1 manejo do reactivos,matea.-Bscala
matarial y reactivos
U8(UIOSo
m scUs1on.
Del & & l i s i a de l a s curvas estandar de ácido ascdrbico obtenidas por
e l metodo de titulación con 2,6-DCXP (Gráficas 1,2 y 3) es posible a f i r
mar que e l sistema siguió una respuesta lineall en concentraciones coprendidas entre 0-2.5
me Qc. aacórbico/ml$~sto es, a l aumentarr l a con-=
centracidn de vitamina C
aumenta e l gasto de 2,6-DCIP)
te de correlación f i e my cercano a l,I@alnente,la
y e l coeficien-
pendiente es muy
SA
milar en l a 8 tres curvas debido a que e l aiempo transcurrido entre l a
-
obtencidn de una curva y otra (1 día mkimo) no influyó en l a estabilidad del 2 , 6 - ~ = 1 p .
Así miamo,podemoa ver que e l método presenta una mayor precisión yaque a l observar l a distribución de l o s resultados en l a s muestras de 32
go de limón (gráfica
4) se encuentran dentro de dos des~iaCiOne8estan-
dar formando una curva de Gauss.
Por otro lado,el coeficiente de variación
se encontr6del orden de l o s
decimales l o que implica que e l método es confiab1e.b anterior se c o r o
bora con el porcentaje de recuperaci6n que a l ser de11100p indica que se
está cuantificando e l total del ácido ascdrbico existeate en l a s muestras
de jugo de l i m b .
DI cuanto a l a estabilidad del indicador de
~ , ~ - I ] C I P , Bcomprobó
~
que
puede mantenerse en condiciones adecuadas para ma u80 por un periodo de
hasta cinco mesea,sienpre y cuando se almacene en francos bbar,bien ta
paüos y en refrigeraci~n;mientrasque la solución extractora de ácido
ac#tico-dcido metafosfórico debe usarse reci6n preparada para obtener
mejores resultados.
Respecto a la8 curvas estandar de ácido ascórbico obtenidas por e l
método modificado de molibdato de amonio (Gráficas
5,6
y 7) ee ptede
-
-
concluir que e l sistema presenta también una resmeata l i n e a l aunque err.
límites de concentración de vitamina C más pequeños en comparaci8n con-
-
el método del 2,ó-DCIP (0,004-0.04) ,con un coeficiente de correlaoidn
cercano a 1 y una pendiente semejante en l o s , t r e s casos.
La distribución de l a s muestras de jugo de limdn analizadas por esto
método ( g r á f i c a 9) se encuentran dentro de l a a doe distribuciones estd=,ain
embargo no es una c l a r a distrikicibn de Gaua8,lo que resta pr6..
cisíón a l método.
-49-
._
Dado que e l coeficiente de variación fue pequeño (menor d 5%) es
PO-
-
s i b l e decir que e l método es confiable.Sin embarga,los resultrrdos del
..
,
i
poroentaje de recuperaci6n para este metodo son muy variabllsil y bastante
bajos;es posible que esto se deba a l a presencia de dcidos e i c o s em
l a s f r u t a s , l o s que retardan e l desarrollo del color,o a La m r a en que
-
reaccionam e l acid0 ascorbic0 estandar y e l jugo'de fnrta,qw impide una
extraccidn total del ácido sscbrbico.Adem~s *&la
-
estarse m e n t a n d o
una reaccidn entre e l fósforo,el molibdato de amonio y el -do
:
aecórbico
u
e
ya que estos reactivos se usan para l a determinación cuantitativa y c
-
l i t a t i v a de l o s fosfátos y - d e l fósforo ( e l ácido sulfdrico Satorece l a
reacción anterior)
DI resumen,de l a comparacibn del método de tihilaci6n cam 2,.6-DCZP
~ñ
e l método espectrofotométrico con molibdato de smonio,obtenaios l o a l & =
te 8
Ambos métodos son precisos y confiables,teniendo una memr variacione l método de titulacibi con 2,6-DCIP,ambos métodos tienen usis respuestalineal,,con un coeficiente de correlacidn cercano a l a unidskEl hecho de
-
que el coeficiente de correlación sea más cercano a uno por el métodcc
-
dei 2,6-DCIP y de ique l a variacidn estandar sea mayor en e l método del
molibdato de amonio se debe a que l a absorbancia obtenida par e l eepectrg
fotómetro ea mucho más exacta que l a lectura obtenida en l a h r e t a y por
e l l o l o a errores que se tienen durante e l manejo de l a s muestra8 se ref22
jan de mejor manera en e l método del moliOdato de amonio,
La media o promedio obtenida por e l método del 2,6-DCIP coincide
coi^
l o s a r e a informados en l a literatura,mientras que,la media obtenid-
por e l método
de molibdato de amonio para jugo de lim6n ea menor a2 dd
tablasjmas sin embargo l o s valores
medios para jugo de nasenia y Papaya
coinciden con lo8 informado8 en tablas (51 y 49 mg/100 ,ml),Eeto ae ve r=
lacionado con e l porcentaje de recuperacidn ya que para las muestras de
jugo de limdn analizadas por e l método de titulaoidn con 2,6-DCIP
see
vo un porcentaje de recuperacidn del 100$,mientras que para Las aaiaipae-
muestra8,pero por e l metodo de molibdato de,amonio e l porcantaje de recuperación obtenido ee del 50$,con l o que es lógico que los valores o b
tenidos por e l método del 2,6-DCIP coincidan con los de tcLblaeeEh ea%rengldn ea importante hacer notar que el contenido de goida ascórbico
puede v a r i a r de un lotende fruta a otro,ya que 6ate contenido depende
-
-
. ..
. ...
.
L .
...
;
-50-
:
+
,.'
.
de d l t i p l e s factores como madure%-,estacibn del año en que %mrecolectó,
variedad, tamaño,e&c.
De acuerdo a l o a valores de t y F (33.91 ~ i54.33'
'
respectivamente) a b
tenido8 a los nivelees de eignificsncia
evaluados de
e>>
Q.OOl:
e s pos.
'
J,
.
- ,
.
+
bie afirmar que loa resultados &tenidos por un método y otn, tienen-una
diferencia realmente significativ8,por l o que e s recomendable comtinuareste estudio,con e l f i n de conocer l a s causas de esto.
E l tiempo de = & l i s i a
es mayor en e l método de molibdato de amonio ya
que requiere de la adici6n de un ndmero mayor de reactivos 3 de v a r i a s
filtracionea9ademá8 de un tiempo adicional para el desarrollo adecuado
-
-
del color.
E l costo del m6todo del molibdato de amoni0 es más eI8varcáO p e s requiz
r e de equipo especial (espectrofotbmetro) p a y o r número de recrctivoa
de
material en general,
En cuanto a la seguridad,,es
menor
en e l rn6todo del moltbdato de a m d o
ya que se trabaja con un ndmero mayor,de reactivos,entre d l o s e l ácido
sulPdrico que plede ocasionar graves lesiones s i no ea manejado con
we-
cauci&r.
!
^^
111502
-51-
,
, >
CONCWSIONESo
%)Se monta-
y estandarizarm. l o s métodos para l a cuantificacidn-
de vitamina C Ó ácido ascórbico por t i t u l a c i b con 2,6-DCIPy espectfotométrico con molibdato de amonio.
2)El método de titulación con 2,6-DCIP es un método sencillo,de ba=
j o costo,repmducible,con una respaesta l i n e a l en concentradones de
0-2.5
mg vitamina C/dh,cSa un porcentaje de recuperación muy cercano
-
--.
a l 100% en análisis de muestras de jugo de limón que no contienem sustancias coloridas o con interferrvicias.
3)El método espectrofotométrico con molsbdato de aatonio tiene..una
r e a p e s t a l i n e a l en concentraciones de 0.005-0.04
es preciso,sencillo y aunque l a inversión i n i c i a l
-
mg de vitrrina C / m b
es mayor por e l equg
po que se requiere,el costo no es m y alto.
4)Bxiste una diferencia s i g n i f i c a t i v a entre loa resultados obtenidos
por ambos métodos,para muestras de juga de limbn.
5) Los resultados eitadf80hoa obtenidos son los siguientees
Ma todo 29 6-DcIP
Media o promedio.( m g / i P i )
47.82
Método k l i b d a t o
35.86
Desviación estandar.
0.18
1.
Vari an ea
0.03
1.04
0. 39
3.79
.
Coeficiente de variacibn.
-52-
%
.
Se recomienda seguir trabajando con e l método de m o l M a t o de amonio
usando l a s mismas muestras (lirnón,naran j a y papaya) y realizstdo los
-
mismos anSlisis con el f i n de obtener el coeficiente de variación,rnedia
o promedio,desviación estandar,varianza y porcentaje de recuperación gI.8
r a de esta manera saber,por medio de l a s pruebas t y F y del valor p,si
exi ste diferencia s i gni f i cativa entre las mues tras. Post e r i oraen te, en cz
80
de haber diferencia realmente significativaldebe verse para que tipo
de muestras ea adecuado este método.
Por
otro lado,es adecuado r e a l i z a r l a s mismas pruebas con e l método-
de titulacidn con 2,6-DCIP para lograr un estudio comparativo comphto.
Eaijo l a denominacidn de vitamina C se engloban dos sustanci,as,sl &
ácido ascdrbico y su pr4mer producto de oxidacibn,el Bcido d d i d r o a e c&rbico,Ambos constituyen un sistema redox de gran importancia en e l
-
organismo.
E l ácido ascórbico se encuentra fundamentalmente en fnrtaa y verduras,pero su contenido en un mismo producto es a s t i n t o segdn l a variedad que ae considere;lo que j u s t i f i c a l a heterogeneidad de lsar datos
-
existentes en l a b i b l i o g r a f í a en cuanto a l contenido de vitamina C enproductos vegetales frescos.
La determinación cuantitativa )&pida del ácido ascórbico en productos naturales es de gran importancia,ya que e l nutrimento m B e afectado
a l proceaar lau frutas y verduras ea e l ácido ascdrbico y su r e t e n d &
se usa como indicador de otros nutrimentos.I~almente importrinte es su
uso comercial en frutaa,verduraa,cerveza,~ho y otras bebidas enlatadas
o embotelladas para prevenir e l desarrollo de sabores y olorss oxidados
, a s í como en estudios nutricionales,clínicos,farmacoiógicos e indus-triales ,
Ins métodos
aqu€,raQortados pars l a determinacidn de vitarina C en-
alimentos vegetales (frutas y ver&ras)
ción con 2,6-Dicloroindofenol
incluyenrel método de titula-
y e l método espechrofotométrice modifica
do de molibdato de smonio,Se evaluó l a confiabilidad de ambos a través
de l a curva patrbi,y otras medidas como l a media,desviacidn estandar,varianta,,coeficiente de variacibi y porcentaje de re&peraci&,Tambih
se evaluó l a practicabilidad de ambos-
E l método de titulación con 2,6-DCIP está sujeto a interferencias
-
por otras sustancias reductoras,.el indicador requiere estandarieacibiantes de usarse y es inestab1e;además de que se cuantifica tbicamenteácido ascórbico reducido,M&s sin embargo, tiene una respuesta l i n e a l ,em
preciso, coniiable,de bajo costo, seguro y rápido,
E l método modificado con molibdato de amonio presenta un porcentaje
de recupersoidn muy bajo y se recomienda seguir su estudio,ya que
miza l a s interferencias
,cuantifica ácido ascórbico
plbL
totai,tiene una
respuesta linea1,es preciso y de un costo relativamente bajo.
-
LITERA'IUIIA CITADA*
F. GAXIA
l.,-APARICIO,&
& C.
GARCIAOttNotapretnatVitciliina C es
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