TIPADO DE VPH: EXPERIENCIA EN ARAGÓN

TIPADO DE VPH: EXPERIENCIA EN ARAGÓN
Dr. Dr. Rafael Benito Ruesca. Departamento de Microbiología. Facultad de Medicina.
Servicio de Microbiología. Hospital Clínico Universitario Lozano Blesa. Zaragoza.
El cáncer de cérvix es la consecuencia a largo plazo de una ITS no
resuelta producida por ciertos tipos de VPH. La infección por VPH es
muy frecuente, subclínica de corta duración y se pueden producir
reinfecciones. El VPH es causa necesaria pero no suficiente de este
tipo de cáncer.
Los tipos de VPH por su relación con cáncer anogenital se
Dr. R. Benito
•
clasifican en (1):
De alto riesgo (AR) (22): 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59,
66, 67, 68, 69, 70, 73, 82, 85.
•
Y de bajo riesgo (BR) (20): 6, 11, 32, 40, 42, 44, 54, 55, 61, 62, 64, 71, 72, 74,
81, 83, 84, 87, 89, 91.
Son varios los métodos de diagnóstico microbiológico de VPH (2):
•
Cribado basado en la detección de ADN de VPH AR:
•
Hibridación.
•
PCR.
•
LAMP.
•
Tecnología con sondas invader.
•
Cribado por detección de ADN de VPH AR y tipos 16 y 18.
•
Genotipado por detección de ADN de VPH: PCR y LAMP
•
•
Hibridación reversa en line-blot.
•
Microarray.
•
Array en suspensión.
•
PCR.
•
Secuenciación.
Cribado por detección de ARNm de E6/E7 de VPH AR:
•
NASBA.
La técnica básica usada por el autor es la siguiente:
Muestra
Extracción
y purificación
Amplificación
del ADN
Visualización
Extracción
y purificación
de ADN
Citología
medio
líquido
Hisopo
Tejido en
parafina
• Hibridación de ADN
con primers
específicos.
• Enzimas de restricción y electroforesis
en gel.
• Hibridación sondas específicas: placa,
array, tira.
• Secuenciación.
Dentro de las PCR, el autor utiliza la PCR en matrices (array) de Genómica CLART® HPV2-, que detecta 20 genotipos de alto riesgo y 15 de bajo riesgo:
Microarray con
120 improntas
con sondas de
cADN.
Adición del
amplicón
(marcado con
biotina durante
la PCR) al
microarray.
Hibridación del
amplicón
marcado con las
sondas del
microarray.
Adición de
conjugado
estreptavidinaperoxidasa. Este
se une a los
amplicones por
la reacción entre
estreptavidinabiotina.
Reacción de la
peroxidasa del
conjugado con
TMB y aparición
de un producto
insoluble que
precipita en los
sitios de
hibridización del
array.
Esta técnica de Genómica emplea PCR multiplex y posterior visualización mediante
tecnología CLART®, basada en arrays de baja densidad. Permite, además, detectar
infecciones múltiples en una única muestra lo que facilita el seguimiento de las
pacientes a largo plazo. El test validado para la detección de los diferentes genotipos
de papiloma presentes en las siguientes muestras:
•
Citología líquida.
•
Torunda.
•
Tejido incluido en parafina.
Detecta los siguientes genotipos:
•
Alto Riesgo (AR) (20):
16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 67, 68, 69, 70, 73, 82 y 85.
•
Bajo Riesgo (BR) (15):
6, 11, 32, 40, 42, 43, 44, 54, 55, 61, 62, 64, 71, 72, 74, 81, 83, 84, 87, 89 y 91.
Utilidad del genotipado del VPH. Sirve para:
•
Pronóstico:
•
Algunos tipos tienen > riesgo oncológico y mortalidad.
•
Diagnosticar persistencia.
•
Diferenciar persistencia de reinfección.
•
Diagnóstico de infecciones mixtas.
•
Estudios epidemiológicos.
•
Evaluar el potencial oncológico de los distintos genotipos.
•
Detectar tipos de VPH BR en carcinomas.
•
Evaluación de eficacia de vacunas profiláctica.
•
Evaluación de la eficacia terapéutica.
•
Caracterización de poblaciones en ensayos con vacunas.
El VPH en Aragón
Características de la población:
Periodo de estudio: 2003-2013
Edad:
Muestras:
8088
•
11-25 a: 1426
Mujeres:
7901 (97,69%)
•
26-35 a: 2701
Muestras cervicales: 7647 (94,55%)
•
36-45 a: 2039
Origen:
•
46-55 a: 1238
•
56-65 a: 306
•
> 65 a:
•
España:
6671 (82,49%)
•
Otros países: 1417 (17,51%)
80
Desconocida 298
Distribución por países
País
Alemania
Angola
Argelia
Argentina
Bélgica
Bielorusia
Bolivia
Brasil
Bulgaria
Burkina Faso
Cabo verde
Camerún
Chequia
Chile
China
nº
2
2
26
9
1
1
9
40
51
2
1
6
4
9
13
País
Colombia
Costa Marfil
Cuba
Dominica
Ecuador
EEUU
Eslovenia
Francia
Gambia
Georgia
Ghana
G. Btrtaña
Guninea B.
Guinea B.
Guinea E.
nº
95
2
5
1
143
2
5
9
10
1
12
5
2
3
21
País
Honduras
Hungría
Indonesia
Israel
Italia
Jordania
Liberia
Lituania
Mali
Marruecos
Méjico
Moldavia
Mozambiqe
Nicaragua
Nigeria
nº
7
2
1
1
4
1
1
3
1
77
9
3
1
40
11
País
Noruega
Pakistán
Palestina
Paragua
Perú
Polonoa
Portugal
R.Dominicana
Rumanía
Rusia
Senegal
Suiza
Ugrania
Uruguay
Venezuela
Resultados de infección
Muestras totales (8088)
Positivas
Infecciones tipo “Gardasil”
Infecciones tipo “Cervarix”
Infecciones múltiples
Infecciones múltiples tipo no “Gardasil”
Infecciones España
Infecciones no España
Número
2649
1448
891
1041
450
%
32,75
54,66
33,63
39,30
16,98
31,34
39,65
nº
1
2
1
4
24
15
14
32
575
26
8
3
15
5
23
Tipos de VPH en Aragón (2003-2013)
Tipo
Número
Tipo
Número
9
11
16
18
26
31
33
35
39
40
42
43
44
45
51
52
53
54
49
138
716
175
15
252
124
60
51
20
56
0
32
45
325
199
258
49
56
58
59
61
62
66
68
70
71
72
73
81
82
83
84
85
89
Total HPV
83
223
100
202
110
236
148
108
16
21
4
78
100
55
108
13
4
4543
1449/2649
(57,70%)
Evolución temporal de los tipos incorporados en las vacunas
Años
Tipo
6
11
16
18
2003-2007
Nº
%
137
79,73
40
210
77
2003-2009
Nº
%
244
67,20
84
347
118
2003-2010
Nº
%
275
62,52
98
439
129
2003-2013
Nº
%
419
54,66
138
716
175
Influencia de los datos demográficos
Periodo/años
2003-2007
2003-2009
2003-2010
2003-2013
Total casos
1569
3465
4448
8088
228
449
465
282
81
22
42
548
1008
899
634
145
34
157
717
1348
1165
789
175
44
230
1426
2701
2039
1238
306
80
298
40 (2,55%)
98 (2,82%)
144 (2,56%)
187 (2,31%)
191 (12,17%)
483 (13,92%
681 (15,31%)
1416
(17,50%)
Edad
<25
26-35
36-45
46-55
56-65
<65
Desconocida
Sexo
Varón
Origen
No España
Carga de trabajo de microbiología
En conclusión:
El tipado de VPH es importante desde los puntos de vista:
•
Clínico y
•
Epidemiológico.
Bibliografía
(1) Dunne E et al. Prevalence of HPV infection among females in the United States. JAMA
2007; 297: 813-819.
(2) Rodríguez-Iglesias M. Diagnóstico molecular del papilomavirus humano: nuevos desafíos
en un escenario diferente. Enferm Infecc Microbiol Clin 2012; 30: 223-224.