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Universidad de Carabobo
Facultad de Ciencia y Tecnología
Escuela de Biología
TRANSFORMACIÓN DE CÉLULAS COMPETENTES DE
Escherichia coli XL-1 BLUE MRF COMO MÉTODO
ALTERNATIVO PARA EL ALMACENAMIENTO DE ADN
EXTRAÍDO DE VIRUS DE PAPILOMA HUMANO (VPH)
Autor:
Fernando González C.I. 20.170.668
Tutor:
Lic. Cesar Pacheco
Tutor Interno:
Prof. Eucandis Fuentes
Resumen
El Virus del Papiloma Humano (VPH) es un agente infeccioso que representa un
problema de salud pública debido a que provoca lesiones en el tejido epitelial que
pueden desarrollar tumores malignos. Para realizar un diagnóstico adecuado de
VPH se recurre a la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) la cual brinda
diagnósticos positivos con mayor precisión que los diagnósticos histológicos, el
problema es que para realizar este tipo de diagnóstico se debe contar con
muestras de ADN de VPH como control positivo para comparar con la muestra
problema pero cuando estos controles son almacenados mucho tiempo pierden su
viabilidad inutilizándolos, por eso al transformar cepas de células competentes de
Escherichia coli con el ADN del VPH se podrá almacenar de una forma más
segura y por períodos de tiempo más prolongados las muestras de ADN de VPH
que serán utilizadas para futuros diagnósticos por PCR. Las cepas de E.coli
utilizadas fueron el genotipo XLI-Blue-MRF, las cuales son células altamente
competentes, este estado de competencia serán inducido mediante la adición de
CaCl2, previamente se construirá un vector de transformación con el inserto de
VPH empleando el Kit comercial PGEM®Teasy, posteriormente se iniciará la
transformación implementando un choque térmico que permitirá la entrada del
nuevo material genético. El éxito de la transformación se evaluó realizando una
PCR de todas las colonias crecidas en los medios selectivos, empleando los
cebadores específicos MY09 y MY11 que amplifican una sección del genoma que
está altamente conservada y permite la identificación de diferentes tipos de virus
de alto y bajo riesgo. Sólo 7 de las 16 colonias presentaron una amplificación
exitosa, demostrando una transformación positiva. Considerando lo anterior
mencionado con las modificaciones necesarias, éste protocolo puede ser
adaptado para la transformación con el material genético de otros patógenos
importantes para la salud pública.
Palabras clave: Virus del Papiloma humano, diagnóstico por reacción en cadena
de polimerasa, MY09, MY11, región L1, electroforesis en gel de agarosa.