INT-R01.001.5030-030 Instructivo PISS

Instituto
Nacional de
Salud
PROCESO - REDES EN
SALUD PÚBLICA
Elaborado:
Jenny Lucero Zambrano
Fecha: Septiembre 2010
PREPARACION DE LOS
SUEROS CONTROL PARA
LA PRUEBA DE IDONEIDAD
DE SEROLOGÍA DE SIFILIS
INT-R01.001.5030-030
Revisado:
Kelly Alejandra Orozco Vargas
Profesional Grupo Microbiología
Fecha: Octubre 2010
Página 1 de 6
Versión:01
Fecha de la
próxima versión:
2014/08
Aprobado:
María Elena Realpe
Coordinadora Grupo
Microbiología
Fecha: Octubre 2010
1. OBJETIVO
El presente instructivo describe el procedimiento para preparación y empaque de los sueros control para la
prueba de idoneidad en serología de sífilis (PISS).
2. ALCANCE
Este instructivo fue diseñado, para el personal de salud responsable del proceso de elaboración de la PISS.
3. RESPONSABILIDAD
Es responsabilidad del profesional encargado de la PISS aplicar el instructivo para la elaboración y empaque
de los sueros control para la PISS y del coordinador del área verificar su cumplimiento.
4. DEFINICIONES
Prueba de idoneidad: es un programa, realizado por una institución externa, que permite evaluar en forma
imparcial el desempeño, en una de las áreas del laboratorio.
Evaluación externa directo del desempeño (EEDD): “Sistema de comparación retrospectivo y objetivo de
los resultados de diferentes laboratorios por medios de encuestas organizadas por un ente externo
independiente”. OMS/OPS 2002.
Laboratorios participantes: Laboratorios de Salud Pública, los laboratorios clínicos de los hospitales de III
nivel de la RNL y laboratorios clínicos de hospitales de II nivel de la red pública que han participado en la
prueba en los 3 últimos años y que tienen área de microbiología y buena cobertura de atención de pacientes.
5. CONDICIONES GENERALES
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Tratamiento del plasma
Recolectar suficientes bolsas de plasma reactiva y no reactiva para sífilis y negativa para VIH y
hepatitis de los bancos de sangre.
Realizar las pruebas de VDRL y RPR a los plasmas reactivos según la metodología descrita en el
manual de procedimientos “Diagnóstico serológico de la sífilis” del Grupo de Microbiología (REGR01.001.5030-119), y (REG-R01.001.5030-141).
Seleccionar los plasmas con reactividad similar (por ejemplo 4 y 8 dls). Dejar preferiblemente los
plasmas de reactividad alta y descartar los de reactividad baja
Mezclar los plasmas seleccionados en un matraz estéril, utilizando un agitador magnético durante 4
horas.
Dispensar 50 ml de las mezclas de plasmas en tubos de centrifuga estériles.
Incubar durante 30 minutos al baño de María a 37ºC
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PREPARACION DE LOS
SUEROS CONTROL PARA
LA PRUEBA DE IDONEIDAD
DE SEROLOGÍA DE SIFILIS
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Revisado:
Kelly Alejandra Orozco Vargas
Profesional Grupo Microbiología
Fecha: Octubre 2010
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Versión:01
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Aprobado:
María Elena Realpe
Coordinadora Grupo
Microbiología
Fecha: Octubre 2010
Adicionar a cada tubo con plasma 500µl de solución de trombina con Cloruro de Calcio e incubar
durante 10 minutos al baño de María a 37ºC.
Dejar a temperatura ambiente durante una hora (esto ayuda a la coagulación del plasma)
Congelar los plasmas a –20ºC durante 24 a 48 horas.
Descongelarlos a temperatura ambiente y luego pasarlos por un tamiz para retirar el coagulo.
Colocarlos en un matraz y adicionar 10g de kaolin por cada 100 ml de la muestra.
Mezclar en un agitador magnético durante 4 horas.
Dejar durante la noche en cuarto frío (2 a 8 ºC) en agitación a baja revolución (27r.p.m.)
Dispensar 50 ml de la mezcla en tubos Falcon, pesarlos para llevar a centrifugar a 4.000 r.p.m. por
45minutos.
Decantar
Guardar el sobrenadante en botella de vidrio con tapa estéril, claramente marcado y refrigerado.
Definición del título de reactividad
o Realizar las pruebas cualitativas y cuantitativas de VDRL y RPR según la metodología descrita en el
manual de procedimientos “Diagnostico serológico de la sífilis” NML del Grupo de Microbiología.
• Registrar los resultados en hoja de registro (REG-R01.001.5030-119), y (REG-R01.001.5030-141).
o Si los títulos son muy altos y se desea preparar una reactividad menor se mezcla con solución salina
estéril hasta alcanzar la reactividad deseada.
Esterilización
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Proceso de prefiltrado
Limpiar con alcohol las piezas del porta filtro y armarlo con el pre-filtro AP 25EM y la membrana de
0.45 µm.
Apretar bien las abrazaderas y los tornillos del aparato con la llave suministrada para tal fin.
Introducir la mangera larga que sale de la parte superior del porta filtro en el canal de la bomba de
vacío, asegurarla y el extremo libre queda en la botella del suero que se va a filtrar.
La manguera corta que sale de la parte inferior del porta filtro va a la botella estéril vacía que recibirá
el plasma filtrado.
Prender la bomba de vacío y graduar la velocidad en 1 para evitar que la excesiva presión rompa las
membranas, evitar la entrada de aire a la manguera cuando la bomba este funcionando.
Dejar la válvula ubicada en la parte superior del portafiltros abierta (posición vertical) hasta que
empiece a gotear, esto indica que el suero está pasando adecuadamente, inmediatamente se debe
cerrar (bajar).
Cuando se ha terminado el proceso tapar la botella del suero filtrado y guardar en refrigeración.
apagar la bomba de vacío, liberar la manguera, desarmar el portafiltros e introducir las partes en un
recipiente amplio con desinfectante dejar actuar por 20 minutos, enjuagar con abundante agua y
secar con gasa y alcohol, las mangueras se secan con aire.
Proceso de filtrado
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Aprobado:
María Elena Realpe
Coordinadora Grupo
Microbiología
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Limpiar con alcohol las piezas del portafiltros y armarlo con el pre-filtro AP 25EM, la membrana de
0.45 µm y membrana de 0.22 µm.
Llevar el equipo a esterilizar, de aquí en adelante todo el trabajo se realiza en cabina y con
elementos estériles.
Repetir los pasos 2 a 7 del proceso de prefiltrado.
Adicionar por cada 100 ml del suero filtrado, 1 ml de una solución antibiótica penicilinaestreptomicina.
Tapar bien, sellar con papel parafilm y almacenar los sueros en refrigeración
Nota: el mismo procedimiento se realiza con los plasmas no reactivos, para la elaboración de los
sueros controles negativos.
EMPAQUE
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Preparación de los viales con los sueros controles
Cada panel de sueros controles de la PISS consta de 5 viales que contienen 1 ml de suero control
cada uno. Dos pareados y uno individual, de reactividad conocida.
Marcar los viales con el código correspondiente representado por el número del suero (1 al 5), el
número de la prueba y el año.
Envasar, en condiciones estériles, 1 ml. de cada suero control en el vial respectivo, utilizando una
jeringa dispensadora para cada lote de suero control.
Almacenar 1 vial de cada lote de suero en las cajas de envío. Cada caja de envío debe contener 1
vial de cada suero control.
Control de calidad del lote en el Grupo de Microbiología
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Seleccionar un vial de cada lote del suero control
Sembrar en agar sangre e incubar por 48 horas
Realizar las pruebas de VDRL, RPR y TP-HA
Registrar los resultados en la hoja de registro (REG-R01.001.5030-119),y (REG-R01.001.5030-141).
Comparar el resultado con los de las pruebas realizadas antes del almacenamiento, es posible que
se haya bajado en un titulo la reactividad de las pruebas no treponémicas.
Si los resultados son concordantes, los sueros control están listos para el envío, si el cultivo es
positivo se debe repetir el proceso de filtrado hasta que el cultivo sea negativo, pero si la reactividad
no es concordante se debe descartar el lote.
Registrar los resultados en la hoja (REG-R01.001.5030-119), y (REG-R01.001.5030-141).
Almacenar refrigerado de 2 a 8 ºC un vial de cada lote de sueros control para pruebas posteriores de
verificación y otro a temperatura ambiente para vericar la estabilidad física del suero y de la
reactividad por dos semanas.
Registrar el resultado en el formato de control de estabilidad sueros REG-R01.001.5030-113
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6. MATERIALES Y REACTIVOS
Materiales y reactivos
• Viales estériles de 2 ml
• Tubos de centrifuga de 50 ml
• Cajas de empaque
• Pipetas de 1ml y 5 ml estériles
• Plasmas reactivos y no reactivos
• Solución salina al 0,85%
• Estuches diagnósticos VDRL y RPR
• Trombina (Sigma T3068)
• Solución de cloruro de calcio 1M
• Solución de antibióticos de 5000 UI de penicilina y 5 mg estreptomicina por ml Kaolin (Sigma K7375)
• Solución de trombina en cloruro de calcio 1M a una concentración de 100 unidades/ml (guardar a –
20ºC en viales de 5ml)
7. EQUIPOS
Equipos
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Microscopio
Agitador de Mazzinii
Congelador a –20ºC
Baño María
Matraces
Agitador magnético
Centrifuga refrigerada de 4.000 r.p.m.
Filtro con presión de aire y con membranas de 0,45 µm y 0,22 µm
Cámara de flujo laminar
Dispensador automático
Micropipetas
8. CONTENIDO
PROCEDIMIENTO
Definición del título de reactividad
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Aprobado:
María Elena Realpe
Coordinadora Grupo
Microbiología
Fecha: Octubre 2010
Realizar las pruebas cualitativas y cuantitativas de VDRL y RPR según la metodología descrita en el
manual de procedimientos “Diagnóstico serológico de la sífilis” del Grupo de Microbiología.
Registrar los resultados en el formato correspondiente (REG-R01.001.5030-119), y (REGR01.001.5030-141).
Sí los títulos son muy altos y se desea preparar una reactividad menor se mezcla con solución salina
estéril hasta alcanzar la reactividad deseada
Filtrar los plasmas tratados por membrana 45 µm y luego por membrana de 22µm.
Adicionar a 100 ml del suero, 1ml de una solución de penicilina estreptomicina en cámara de flujo
laminar.
Almacenar los sueros refrigerados a 4ºC.
Nota: el mismo procedimiento se realiza con los plasmas no reactivos, para la elaboración de los
sueros control negativos
Preparación de los viales con los sueros control
Cada panel de sueros control de la PISS consta de 5 viales que contienen 1 ml de suero control cada uno.
Dos pareados y uno individual, de reactividad conocida
•
•
•
Marcar los viales con el código correspondiente representado por el número del suero (1 al 5), el
número de la prueba y el año
Envasar, en condiciones estériles, 1 ml de cada suero control en el vial respectivo, utilizando un
dispensador automático para cada lote de suero control.
Almacenar 1 vial de cada lote de suero en las cajas de envío. Cada caja de envío debe contener 1
vial de cada suero control.
Control de calidad del lote en el Grupo de Microbiología
•
•
•
•
•
•
Seleccionar un vial de cada lote del suero control
Realizar las pruebas de VDRL y RPR
Registrar los resultados en los anexos 1 y 2
Comparar el resultado con los de las pruebas realizadas antes del almacenamiento
Sí los resultados son concordantes, los sueros control están listos para el envío
Almacenarlos refrigerados a 4ºC, un vial de cada lote de sueros control para pruebas posteriores de
verificación
9. DOCUMENTOS DE REFERENCIA
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Revisado:
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Profesional Grupo Microbiología
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Versión:01
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Coordinadora Grupo
Microbiología
Fecha: Octubre 2010
Desfibrination of blood plasma for use in the VDRL test for syphilis. Castro Arnold, Kikkert Sussan,
Fears Martha, Pope Victoria. Division of AIDS, STD and TB Laboratory Research, Centers for
Disease Control and Prevetnion, Atlanta GA.
Manual of test for syphilis, 9th edition. Larsen SA, Pope V, Johnson RE and Kennedy JR. American
Public Health Association, Washington, D.C. 1998
Manual de procedimientos “Diagnóstico serológico de la sífilis” del Grupo de Microbiología
10. CONTROL DE REGISTROS
CONTROL DE REGISTROS
IDENTIFICACION
ARCHIVO CENTRAL
ARCHIVO DE GESTION
ORDENACIO
N
DOCUMENT
AL
RESPONSAB
LE
formato de
resultado de
sifilis vdrlmha-tp
Se ordena
cronológicamen
te por programa
El profesional
responsable del
programa
Archivo
Satélite
del
grupo de
Microbiol
ogía
3 años
REGR01.001.5
030-119
formato de
resultado de
sifilis rpr-mhatp
Se ordena
cronológicamen
te por programa
El profesional
responsable del
programa
Archivo
Satélite
del
grupo de
Microbiol
ogía
3 años
REGR01.001.5
030-113
EED- Control
de producción
sueros PISS
Se ordena
cronológicamen
te por programa
El profesional
responsable del
programa
Archivo
Satélite
del
3 años
COD
NOMBRE
REGR01.001.5
030-141
LUGAR
TIEMPO
DE
RETENCI
ON
METODO
UTILIZAD
O
Se
mantiene
en el
archivo de
gestión de
Microbiolo
gía hasta
que pase al
archivo
central
Se
mantiene
en el
archivo de
gestión de
Microbiolo
gía hasta
que pase al
archivo
central
Se
mantiene
en el
ARCHIV
O
HISTÓR
ICO
RESPON
SABLE
TIEMP
O
METODO
UTILIZAD
O
Secretaria
del Grupo
de
Microbiolo
gía
5 años
Eliminación
Secretaria
del Grupo
de
Microbiolo
gía
5 años
Eliminación
Secretaria
del Grupo
de
5 años
Eliminación
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Profesional Grupo Microbiología
Fecha: Octubre 2010
grupo de
Microbiol
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próxima versión:
2014/08
Aprobado:
María Elena Realpe
Coordinadora Grupo
Microbiología
Fecha: Octubre 2010
archivo de
gestión de
Microbiolo
gía hasta
que pase al
archivo
central
Microbiolo
gía
11. REGISTRO DE REVISIONES Y APROBACIONES
VERSIO
N
00
01
FECHA
APROBACION
AA MM
D
D
201 10
29
0
201 08
19
1
12. ANEXOS
N.A
DESCRIPCIÓN
Creacio de Documento
Modificacion de Documento