Richard-Allan Scientific Chromaview

ITALIANO
Thermo Scientific™ Richard-Allan Scientific Chromaview® – Tinción Avanzada
Tinción de verde Metil-Pironina Y
Instrucciones de uso
Análisis técnico
Comentarios técnicos
Microtomía
Realice los cortes de 4 a 6 micrones.
Fijación
La fijación de cortes congelados con metanol es el procedimiento y fijador de elección. El fijador de Carnoy
puede utilizarse para los cortes de parafina. La fijación del tejido con formol es adecuada para la demostración
de células plasmáticas.
Control de calidad
Debe utilizarse un corte que contenga múltiples células plasmáticas.
Cuando esta tinción se utiliza sin diluir, el tono de la Pironina Y se ve optimizado y la relación de contraste verde
a rojo se ve reducida. El tono verde puede volverse más rojo-violeta. Cuando los cortes congelados se fijan con
metanol, el ADN siempre adquiere una tonalidad verde y el ARN adquiere una tonalidad roja (presente tanto
en el nucléolo como en el citoplasma). Cuando el tejido se fija con Carnoy, los resultados son similares a los
procedimientos de cortes congelados fijados con metanol. Las extensiones de sangre o los frotis de médula ósea
deben secarse al aire, fijarse con metanol, secarse al aire nuevamente y teñirse usando el procedimiento para
cortes congelados. Pueden usarse tejidos fijados con formol para demostrar células plasmáticas, pero no es el
método de fijación de elección.
Probable modo de acción
Procedimiento técnico
Solución de trabajo de Verde Metil-Pironina Y
Verde Metil-Pironina Y...................................................... 5 ml
Agua desionizada ..........................................................50 ml
Protocolo de tinción para cortes congelados
1. Fijar los cortes en alcohol metílico durante 5 minutos.
2. Teñir los cortes en la solución de trabajo Verde Metil-Pironina Y durante 5 minutos, a temperatura ambiente.
3. Enjuagar bien los cortes con agua desionizada.
4. Deshidratar los cortes en dos cambios de alcohol anhidro durante 1 minuto cada uno.
5. Aclarar los cortes con tres cambios de absoluto aclarante durante 1 minuto cada uno y proceder al montaje.
Protocolo de tinción para cortes con parafina
1. Quitar la parafina e hidratar los cortes con agua desionizada.
2. Enjuagar los cortes con agua desionizada durante 1 minuto.
3. Teñir los cortes en la solución de trabajo de Verde Metil-Pironina Y durante 5 minutos, a temperatura
ambiente.
4. Enjuagar bien los cortes con agua desionizada.
5. Deshidratar los cortes con dos cambios de alcohol absoluto durante 1 minuto cada uno.
6. Aclarar los cortes con tres cambios de reactivo aclarante durante 1 minuto cada uno y proceder al montaje.
Existen dos tipos de ácidos nucleicos presentes en la cromatina nuclear de las células: ADN (ácido desoxirribonucleico) presente en los núcleos de las células y ARN (ácido ribonucleico) presente en los nucléolos. El ARN
también se encuentra presente en el citoplasma de las células. La técnica principalmente usada para distinguir el
ADN y ARN en los cortes de tejidos es el método de Verde Metil-Pironina Y.
El mecanismo probable de esta reacción se basa en la competencia entre la tinción lenta, pero con doble carga
de verde metilo, y la tinción más rápida, con carga única de Pironina Y. El Verde Metilo tiene dos grupos de carga
catiónica que se unen a los grupos funcionales del ADN. La Pironina Y desplaza el Verde Metilo de todos los sitios
de unión, excepto donde la doble carga le aporta una ventaja selectiva (polímero acídico, como el ADN). En consecuencia, el Verde Metilo tiñe el ADN y retiene su unión a esta sustancia contra la acción competitiva de la pironina
y. La Pironina Y tiñe el ARN menos polimerizado rápidamente y puede desplazar el Verde Metilo de las uniones
que tienen sustancias acídicas poliméricas más pequeñas (ARN).
Esta reacción se realiza a pH 4,2 – pH 4,3. La ventaja de un pH bajo es mantener los ácidos nucleicos en una
condición de carga y en su estado menos soluble.
Referencias
Resultados
1. Bancroft, J.D. y Stevens, A. Theory and Practice of Histological Techniques. Churchill Livingstone, New York,
NY, 1977.
2. Sheehan, D.C. y Hrapchak, B.B. Theory and Practice of Histotechnology, 2nd Edition. Mosby, St. Louis, MO,
1980.
3. Thompson, C.C. Selected Histochemical and Histopathological Methods. Springfield, IL, 1966.
4. Lillie, R.D., H.J. Conn’s Biological Stains. Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 1972.
5. Chayen, J.; Bitensky, L.; Butcher, R.G.; Poulter, L.W.; A Guide to Practical Histochemistry. J.B. Lippincott, 1969.
6. Carson, F. L. Histotechology: A Self-Instructional Text, 2nd Edition. ASCP Press, Chicago, 1997.
Ácido desoxirribonucleico (ADN): Verde a agua
Ácido ribonucleico (ARN): Rojo
Información para pedidos
Análisis
Producto
Tamaño
Cant.Ref.
Verde Metil-Pironina Y
125 ml
1
La solución de tinción de Verde Metil-Pironina Y debe almacenarse a temperatura ambiente. De ocurrir contaminación, deseche la solución. La solución de tinción de Verde Metil-Pironina Y es solo para uso “In Vitro”.
Consulte las Hojas de datos de seguridad de los materiales para conocer la Información de salud y seguridad.
Esta solución es estable y no debe formar precipitados de aplicarse los parámetros de almacenamiento habituales. Se recomienda que la solución de trabajo de Verde Metil-Pironina Y se deseche después de su uso. Todos
los colorantes utilizados en esta formulación están certificados por la Biological Stain Commission.
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