Morfología - Universidad Nacional del Litoral
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Universidad nacional del litoral Secretaría Académica Dirección de Articulación, Ingreso y Permanencia Año 2015 Morfología: de la célula al hombre como individuo. Conceptos básicos Marta Fuentes Larisa Carrera Alicia Costamagna Rosa Markariani (editoras) ISBN en trámite Unidad 1 Marta Fuentes y Rosa Markariani (teoría) María Florencia Peretti Bevilacqua y María Leandra Micocci (actividades) 1. El microscopio El término microscopio deriva del griego “micro”, pequeño, y “skopein”, observar. El microscopio es un instrumento de óptica que permite ver objetos muy pequeños o detalles estructurales imposibles de distinguir a simple vista, o sea, que están por debajo del límite del poder de resolución del ojo humano (70 a 100 µm). Recién a principios del siglo XIX se dispuso de buenos microscopios ópticos; ello permitió descubrir que los tejidos vegetales y animales estaban formados por agregados de células. El microscopio óptico fue inventado alrededor del año 1600 en Holanda por el fabricante de anteojos Zacarías Janssen. Posteriormente, se efectuaron incesantes perfeccionamientos en el aparato de iluminación y en la construcción de los objetivos y oculares. El Profesor de Física de la Universidad de Jena Ernest Abbé fue quien realizó en 1868 los cálculos previos para que el sistema óptico del microscopio diese el máximo de magnificación. El microscopio óptico usual no sirve simplemente para observar con aumento cualquier objeto (por ejemplo una mosca) –para ello se requiere el uso de estereomicroscopio–, sino que es preciso que lo que se desea observar sea siempre transparente y, de ser posible, se encuentre en un mismo plano. Las alas de una mosca son un buen ejemplo de ello. Esta condición impuesta al objeto que se pretende estudiar requiere, en la mayoría de los casos, de la obtención de la llamada preparación, que se realiza generalmente sobre una placa de vidrio –el portaobjetos, o simplemente “porta”– de 26x76 mm de superficie y 1 mm de espesor, cubierto con un vidrio sumamente delgado –el cubreobjetos, también llamado “cubre”– de diversos tamaños, y con un espesor de 0.17 mm. Cuando la luz atraviesa un material biológico cambia sus características y estas variaciones se hacen visibles por medio de los sistemas de lentes. El ojo puede diferenPrograma de Ingreso UNL / Curso de Articulación Disciplinar: Morfología 1 Morfología: de la célula al hombre como individuo / Unidad 1 ciar variaciones de intensidad de la luz (luz y sombra), y diferentes longitudes de onda (diferentes colores). Las células y los tejidos animales, además de ser pequeños, cuando no están coloreados, se captan en el microscopio como transparentes y faltos de color, con poca estructura interna, puesto que no presentan suficiente contraste. El conocimiento de sus diferentes estructuras fue posible gracias al hallazgo, a fines del siglo XIX, de colorantes que proporcionaban el contraste necesario para hacerlas visibles. • Límite de resolución de un microscopio: es la distancia mínima respecto de la cual dos objetos pueden verse separados. • Aumento: se define como la relación entre el tamaño de la imagen y del objeto en medidas lineales. 1.2. El microscopio óptico El poder de resolución del microscopio óptico oscila entre 0,2 y 0,4 µm. En términos prácticos, las bacterias y las mitocondrias que tienen aproximadamente 0,5 µm de diámetro son las estructuras más pequeñas que pueden ser observadas mediante el mismo. a) Microscopio simple o lupa: las lupas son consideradas microscopios simples, ya que están compuestas por una lente o un solo sistema de lentes convergentes biconvexas, que obran como una sola lente, de pequeña distancia focal, entre 5 y 10 cm. Amplían de 2 a 20 veces las estructuras observadas. • Distancia focal: es la distancia que se encuentra entre el foco de la lente y su centro óptico. • Foco: es el punto donde se cruzan los rayos luminosos luego de atravesar una lente. • Centro óptico: es el punto central de una lente en el cual los rayos pasan a través de él sin desviarse. b) Microscopio compuesto o fotónico: se lo llama también microscopio óptico de luz visible. Este microscopio emplea como fuente de luz las radiaciones del espectro solar visibles y no visibles, cuyas longitudes de onda van desde el ultravioleta hasta el infrarrojo. A diferencia del microscopio simple o lupa, está constituido por dos sistemas de lentes convergentes (ocular y objetivo) que forman la parte óptica del mismo. Estas lentes se encuentran ubicadas en un mismo eje dentro del tubo del microscopio. 1.2.1. Partes de un microscopio óptico El microscopio óptico está compuesto por dos partes: una mecánica y otra óptica. Programa de Ingreso UNL / Curso de Articulación Disciplinar: Morfología 2 Morfología: de la célula al hombre como individuo / Unidad 1 1.2.1.1. Parte mecánica pie Parte mecánica, estativo o montura del microscopio columna tubo platina subplatina • Pie: es el encargado de sostener el instrumento y tiene diferentes formas. Debe ser estable, sólido, amplio y con el peso necesario para darle estabilidad. • Columna: comprende el brazo y el pilar. Mediante el brazo se une al tubo y con el pilar se une al pie. También sostiene a la platina. La articulación con el tubo se efectúa por mando de acomodación, que permite movimientos de la platina en sentido vertical a fin de lograr el enfoque, está formado por dos botones o tornillos denominados: - Macrométrico: da un ajuste grueso con movimientos amplios de la platina. - Micrométrico: permite un ajuste fino con movimientos inapreciables de la platina, a nivel de micrones, logrando una imagen nítida del preparado • Tubo: es un cilindro hueco que está unido a la columna por una cremallera. En su parte inferior está provisto de su sistema de revólver, pieza metálica giratoria en la cual se ajustan a rosca los objetivos de distintos aumentos. Al hacer girar el revólver se colocan los diferentes objetivos en el eje óptico. En su extremo superior se ubican las dos lentes oculares . • Platina: tiene forma cuadrangular, se ubica perpendicularmente al eje óptico del microscopio, lleva un orificio central través del cual llegan los rayos del aparato de iluminación. Las preparaciones, habitualmente montadas sobre portaobjetos, se colocan sobre la platina y son sostenidas por medio de pinzas metálicas que pueden moverse en las direcciones X e Y por medio de dos tornillos; esto permite recorrer el preparado en sentido lateral y anteroposterior. • Subplatina: presenta una serie de aros y cilindros que sirven de soporte al diafragma, al condensador y a los filtros. 1.2.1.2. Parte óptica lentes objetivos Componentes ópticos lentes oculares condensador • Condensador: está constituido por una lente o sistema de lentes convergentes ubicadas en un soporte metálico. Su función es hacer eficiente la iluminación, concen- Programa de Ingreso UNL / Curso de Articulación Disciplinar: Morfología 3 Morfología: de la célula al hombre como individuo / Unidad 1 trando los rayos luminosos y proyectándolos sobre el preparado a través del orificio que posee la platina, de manera que entren en el sistema óptico propiamente dicho. Se mueve en sentido vertical por medio de una cremallera. En posiciones altas, concentra los rayos en un punto (disminuye el ángulo de apertura de los rayos lumínicos) • Sistema óptico propiamente dicho: consta básicamente de dos sistemas de lentes: oculares y objetivos, separados por una distancia fija. • Objetivos: están constituidos por un sistema de 4 ó 5 lentes convergentes de gran potencia que forman una imagen real invertida y de mayor tamaño respecto del objeto, esta imagen se forma entre la lente ocular y su foco. Están recubiertos por cilindros metálicos en los cuales está inscripto el coeficiente de aumento (o potencia) de esa lente objetivo; dicho valor se simboliza con un número, seguido de una X. Los objetivos se ubican en el sistema cambiador de objetivos, denominado revólver. Los objetivos pueden ser: a) Objetivos secos: sólo se interpone aire entre la preparación a observar y el objetivo. De acuerdo con su capacidad de aumento pueden ser: 1. débiles o de menor aumento: 4X ó 6X (también denominados lupa) y 1OX; algunos microscopios están provistos también de un objetivo de 20X. 2. fuertes: corresponden al objetivo de 40X, que es el de mayor magnificación que puede utilizarse en seco. b) Objetivos de inmersión: entre el objetivo y el preparado se interpone un medio líquido, cuyo índice de refracción sea aproximadamente igual al del vidrio, generalmente aceite de cedro (índice de refracción 1,52), que impide la desviación de los rayos luminosos al pasar de un medio a otro. El punto de enfoque de esta lente es muy próximo al portaobjeto por lo que el aceite reemplaza la película de aire entre objetivo y portaobjeto. • Oculares: están constituidos por las lentes que recogen la imagen dada por el objetivo. Al igual que los objetivos, están recubiertos por un cilindro metálico donde consta el coeficiente de aumento (o potencia) de las mismas, que generalmente es de 5X, 1OX ó 15X. Están formados por un sistema de lentes en el que se destacan las lentes inferiores de campo o colectoras, y las lentes superiores u oculares, que actúan como una lupa. Aumento final del microscopio: el aumento total se obtiene multiplicando el coeficiente de aumento del objetivo, por el aumento individual del ocular; así, el objetivo de 1OX con el ocular de 1OX da un aumento total de 100 veces. Programa de Ingreso UNL / Curso de Articulación Disciplinar: Morfología 4 Morfología: de la célula al hombre como individuo / Unidad 1 1.2.1.3. Sistema o aparato de iluminación fuente de luz transformador Sistema lumínico potenciómetro diafragma filtros El sistema de iluminación se sitúa debajo de la platina • Fuente de luz: se encuentra empotrada en el pie del microscopio; son lámparas de filamento metálico de bajo voltaje y de diferentes características. • Transformador: reduce la tensión de la red eléctrica al requerido por la lámpara utilizada. • Potenciómetro: regula la intensidad de la iluminación. • Diafragma iris: se encuentra por debajo del condensador. Es una membrana que se abre o se cierra, su función es graduar la cantidad de rayos luminosos que llegan al objeto, eliminando los rayos periféricos que forman imágenes distorsionadas. • Filtros de luz: se colocan en los aros portafiltros que están situados debajo del condensador. Son cristales coloreados que dejan pasar radiaciones con una longitud de onda determinada y absorben las restantes. Fig. 1: Microscopio óptico. Partes Programa de Ingreso UNL / Curso de Articulación Disciplinar: Morfología 5 Morfología: de la célula al hombre como individuo / Unidad 1 1.3. Observación de muestras al microscopio óptico. Tipos de preparaciones Un microscopio funciona debido a que los rayos luminosos atraviesan la muestra y proporcionan una imagen. Una buena observación al microscopio óptico exige un espesor de la muestra inferior a 10 micrones. Si la muestra es más gruesa, los planos celulares superpuestos impiden el paso de la luz y las imágenes resultan confusas. Por esta razón la muestra o material a observar debe ser acondicionada constituyendo lo que se denomina un preparado. La forma en que se confecciona un preparado, depende de la muestra a observar y de las estructuras que se pretenden poner de manifiesto Tipos de Preparados No permanentes frescos (húmedos) frescos coloreados Semipermanentes (secos) Permanentes frotis extendidos improntas cortes histológicos 1.3.1. Preparados no permanentes o húmedos • Preparados frescos: el material es visualizado en condiciones naturales, tiene como objetivo mantener las estructuras sin ninguna modificación. Su concreción es muy rápida y consiste en tomar una muestra del material, colocarla sobre un portaobjetos limpio, desengrasado y seco; si éste es sólido, se deberá agregar una gota de agua o solución fisiológica y cubrirlo con un cubreobjetos. Este se coloca formando un ángulo de aproximadamente 45°, de tal manera que el líquido se distribuya por capilaridad en su borde, y se lo deja caer tratando que no queden burbujas de aire. • Preparados frescos coloreados: con el propósito de aumentar el contraste entre la estructura a observar y el medio, o bien el de algún componente en particular, se pueden realizar distintas coloraciones. Colorantes: Desde el punto de vista de su caracterización química son en su mayoría orgánicos y con estructura semejante al benceno o a sus derivados. El colorante debe unirse específicamente a algún componente celular, éste queda resaltado o diferenciado respecto del resto por el color que adquiere. Debido a la acción del colorante, las estructuras celulares dejan de funcionar normalmente, quitándole las propiedades de vida. Los colorantes se combinan con las diferentes estructuras por afinidad química: - Las sustancias ACIDAS se tiñen con colorantes básicos. - Las sustancias BÁSICAS son afines a colorantes ácidos. Programa de Ingreso UNL / Curso de Articulación Disciplinar: Morfología 6 Morfología: de la célula al hombre como individuo / Unidad 1 Los preparados frescos coloreados se realizan de la misma forma que un preparado fresco sin colorear, al cual se le adicionan unas gotas del colorante elegido previamente a la colocación del cubreobjetos. 1.3.2. Preparados semipermanentes • Frotis: se utilizan para observar materiales heterogéneos, por ejemplo: mucosa bucal, bacterias, levaduras, materia fecal, flujo vaginal, orina, etc. El material se distribuye formando círculos en el centro del portaobjetos; la capa del material debe quedar pareja y tenue. • Extendido: se realiza para observar materiales homogéneos, por ejemplo: sangre. Para realizarlo se toman dos portaobjetos bien desengrasados, se coloca una gota de sangre sobre el extremo de uno de ellos, se apoya sobre la gota el borde del otro portaobjeto formando un ángulo de aproximadamente 45° y se desliza este último con un movimiento suave, rápido y parejo. • Impronta: este tipo de preparados se utiliza para aquellos materiales ricos en células aisladas, que se desprenden fácilmente del trozo de tejido como el timo o el bazo, Pa realizar una impronta se toma una porción del tejido y se apoya repetidamente sobre un portaobjeto a manera de sello, esto permite el depósito de las células sobre el mismo. Una vez distribuido el material sobre el portaobjeto, se procede a una fijación y posterior coloración. Fijación: consiste en provocar la muerte rápida de la célula tratando de mantener intacta su morfología y composición química. Impide que se produzcan los procesos de descomposición y también permite que los microorganismos y las células queden adheridos a la superficie del portaobjeto. Algunos agentes fijadores son: calor, congelamiento, etanol, metanol, formol, etc. Coloración: se coloca el portaobjeto con la muestra sobre una cubeta de coloración y se procede a colorearlo. Existen coloraciones simples en donde se utiliza un solo colorante y otras diferenciales en donde se utiliza una batería de colorantes. 1.3.3. Preparados Permanentes • Cortes histológicos: se denominan así puesto que se realizan a partir de cortes muy finos de tejido animal o vegetal. Se los pueden conservar por un largo tiempo debido a que no sufren alteración progresiva por descomposición o putrefacción puesto que la muestra recibe un tratamiento especial y es protegida por un cubreobjeto sellado en forma permanente que impide su alteración por uso o factores ambientales. La técnica histológica consiste en una serie de pasos secuenciales que se enuncian brevemente a continuación: Programa de Ingreso UNL / Curso de Articulación Disciplinar: Morfología 7 Morfología: de la célula al hombre como individuo / Unidad 1 a) fijación: se realiza de manera idéntica a la mencionada en la fijación de un frotis. b) inclusión: convierte a la muestra en un bloque fácil de seccionar, para ello, previamente se la deshidrata y luego se la coloca en un material que, a temperatura ambiente adquiera consistencia y permita cortarse; se puede usar parafina, gelatina, etc c) corte: se hacen cortes en láminas muy delgadas (entre 2 a 10 micrones de espesor) con un instrumento llamado micrótomo. Las laminas luego se recogen en agua y se adhieren a un portaobjeto. d) coloración: previamente se elimina la sustancia utilizada en la inclusión (por ejemplo la parafina) y se hidrata la muestra. Luego se coloca en una cubeta de coloración y se lo cubre con el/los colorantes seleccionados según la técnica de coloración, finalmente se lava y deja secar al aire. e) montaje: se sella el cubreobjeto con un medio de montaje, el más utilizado es el Bálsamo de Canadá y de esta manera el preparado ya coloreado se puede conservar indefinidamente. 1.4 . Pasos para realizar el enfoque y observación al microscopio 1. La posición descansada del cuerpo posibilita el trabajo cómodo. El observador debe sentarse frente al microscopio con la columna en posición recta, para lo cual debe seleccionarse un asiento con la altura adecuada. 2. Sujetar el preparado sobre la guía portaobjeto de la platina. Verificar que el preparado este hacia arriba. 3. Conectar la fuente de luz, ubicar una mano sobre el tornillo macro-micrómetro, y la otra mano en los comandos de las guías de los portaobjetos. 4. Para la primera observación se debe utilizar el objetivo de menor aumento (lupa) este le dará una visión integral del preparado y le permitirá elegir las mejores áreas para luego observar en mayor aumento. Al seleccionar el objetivo, no tocar con los dedos las lentes de los objetivos. 5. Seleccionar la iluminación correcta. El condensador se utiliza en posiciones intermedias a bajos aumentos y a posiciones superiores con el objetivo de inmersión. 6. El enfoque correcto del preparado se realiza girando el tornillo macro- micrómetro, ajustando la imagen del campo, moviendo la platina hacia arriba y hacia abajo. 7. El tubo binocular se ajusta con ambas manos a la distancia interpupilar del operador, hasta observar una sola imagen. 8. Al emplear el objetivo de inmersión se utiliza con una gota de aceite de inmersión entre el preparado y la lente. Se debe evitar la formación de burbujas de aire en la gota de aceite. Luego de utilizado el objetivo se debe limpiar con algodón o paño seco. Programa de Ingreso UNL / Curso de Articulación Disciplinar: Morfología 8 Morfología: de la célula al hombre como individuo / Unidad 1 1.5. Tipos de microscopios Compuesto, fotónico u óptico de luz visible de fondo claro y de campo oscuro De contraste de fase Microscopios De interferencia De polarización De fluorescencia Electrónico de Transmisión (MET) De barrido o scanning (SEM) Microscopio de fondo claro y de campo oscuro: esta división se relaciona con la forma en que se ilumina el objeto. En el primero, los rayos luminosos hacen incidencia directa sobre el objetivo. En cambio, en los microscopios de campo oscuro los rayos luminosos del sistema de iluminación son dirigidos desde la parte lateral, y se produce la difracción, refracción o reflexión de los rayos luminosos merced a un juego de espejos. En consecuencia, cuando se observa el objeto por el ocular, se verá intensamente iluminado sobre un campo oscuro, puesto que no se produce una incidencia directa de los rayos sobre el objetivo. Se lo emplea para el estudio de elementos vivos, tales como bacterias o espermatozoides. Permite ver las células en acción y estudiar los procesos de mitosis y migración celular. No es útil para observar detalles estructurales. Microscopio de contraste de fase: la manera más conveniente de establecer que una estructura existe en las células consiste en estudiarlas al microscopio mientras están vivas, sin ninguna fijación o tinción preliminar. Esto requiere de sistemas ópticos especiales diseñados para aprovechar las propiedades de difracción de las células. Este equipo transforma las diferencias de fase de la luz en diferencias de amplitud. Éstas son captadas por el ojo como diferencias de intensidad; para ello este microscopio tiene un dispositivo ubicado entre el diafragma y la platina que produce una variación en la longitud de onda de la luz de incidencia lateral respecto de la luz de incidencia central. El condensador también tiene un diafragma especial; esto permite lograr imágenes diferenciadas. La diferencia de desplazamientos ocurre según la luz atraviese una zona gruesa o fina de una célula o tejido. Es decir, cuando la luz pasa a través de una parte relativamente gruesa o densa de una célula, como por ejemplo el núcleo, se retarda y su fase queda desplazada en relación con la luz que ha pasado a través de una región más fina, por ejemplo el citoplasma. Con este tipo de microscopio quedan claramente visualizados muchos detalles de una célula viva. Microscopio de interferencia: su fundamento es el mismo que el de contraste de fase, por lo que se lo suele considerar un microscopio de fase perfeccionado. Tiene filPrograma de Ingreso UNL / Curso de Articulación Disciplinar: Morfología 9 Morfología: de la célula al hombre como individuo / Unidad 1 tros especiales que se intercalan en el haz lumínico y que producen un contraste de fase coloreado positivo o negativo. Los cambios de color facilitan la observación de las estructuras vivas como si estuvieran coloreadas. Microscopio de polarización: cuando algunos tejidos o componentes de nuestro organismo son atravesados por la luz ultravioleta, se produce un desdoblamiento de manera que de un rayo luminoso a la entrada obtenemos dos rayos que se denominan polarizados. Esto sucede porque esos componentes tienen un ordenamiento determinado de sus átomos. Tales cuerpos o componentes poseen lo que llamamos un estado cristalino, en tanto que las sustancias que no poseen dicho estado se conocen como cuerpos amorfos monorrefringentes o isotrópicos. En estos cuerpos isotrópicos la luz se propaga siempre a la misma velocidad, sin importar la dirección que siga dentro de los mismos. Por lo tanto, ese cuerpo amorfo tendrá un solo índice de refracción. Por el contrario, en los cuerpo cristalinos, anisotrópicos o birrefringentes la luz variará su velocidad dependiendo de la dirección de su propagación. Esto da origen a lo que se llama fenómeno de doble refracción. Así, desde un solo rayo refractado se originan o producen dos rayos polarizados en forma rectilínea. En el microscopio de polarización se utiliza un cristal polarizador de la luz, localizado entre el foco luminoso y el espécimen observar, que deja pasar solamente la luz polarizada rectilíneamente y elimina el rayo ordinario. Otro cristal polarizador se coloca entre el espécimen y el ojo del observador. Si se coloca un cuerpo amorfo en la platina, la luz no sufrirá ninguna modificación, pero lo contrario sucederá si el cuerpo es cristalino o birrefringente: la luz brillará con mayor o menor intensidad. De este modo se pueden diferenciar sustancias monorrefringentes y birrefringentes. Microscopio de fluorescencia: emplea una fuente de luz ultravioleta (UV) y filtros capaces de impedir que la radiación que incide sobre la lámina lesione el ojo del observador. Este tipo de luz permite que sustancias tales como la Vitamina A o los carotenos, constituyentes normales de algunas células, emitan radiaciones brillantes. Estos componentes aparecen brillantes sobre un campo o fondo oscuro, el cual no es fluorescente; esto se conoce como fluorescencia primaria. Cuando se colorean células con colorantes especiales –como el tiocianato de fluoresceína, naranja de acridina o tiocianato de rodamina B, éstos se fijarán si determinadas estructuras celulares adquieren una fluorescencia que se denomina secundaria. Microscopio electrónico de transmisión (MET): el límite de resolución impuesto por la longitud de onda de la luz visible (microscopio óptico) puede ser reducido utilizando electrones en lugar de fotones, ya que los electrones tienen una longitud de onda mucho más reducida. El poder de resolución real del microscopio electrónico es de 0,1 nm (1 Angstrom), es decir 100 veces superior a la del óptico. Programa de Ingreso UNL / Curso de Articulación Disciplinar: Morfología 10 Morfología: de la célula al hombre como individuo / Unidad 1 La fuente de iluminación es un filamento de tungsteno situado en la parte superior de una columna cilíndrica que emite electrones. Para poder conseguir un haz lineal de electrones primero se debe bombear el aire hacia afuera de la columna para producir vacío. Luego, los electrones son acelerados desde el filamento mediante un ánodo cercano, de forma que pasan a través de un agujero diminuto y forman un haz de electrones que se dirige hacia la parte inferior de la columna. Unas bobinas magnéticas situadas a intervalos a lo largo de la columna focalizan el haz de electrones, al igual que las lentes focalizan el haz de luz en el microscopio óptico. La muestra se coloca en el vacío y luego se expone al haz de electrones. Algunos electrones son dispersados y no aparecen en la imagen, otros pasan a través de regiones densas y aparecen como áreas de flujo electrónico bajo respecto de las áreas de las regiones menos densas. En el microscopio electrónico los electrones reemplazan a la luz y los campos magnéticos a las lentes ópticas, de manera que se obtienen imágenes electrónicas en lugar de imágenes luminosas. El contraste depende del número atómico de los átomos de la muestra: cuanto más elevado sea el número atómico, mayor número de electrones serán dispersados y tanto mayor será el contraste obtenido. Las moléculas biológicas están compuestas por átomos de número atómico bajo (C, O, H); por consiguiente, para conseguir que los cortes ultrafinos de materiales biológicos sean visibles, se contrastan mediante la exposición a sales de metales pesados tales como uranio o plomo. De este modo, por ejemplo, los lípidos tienden a teñirse de oscuro revelando la localización de las membranas celulares. Con este equipo puede observarse la estructu- Fig. 2: Microscopio Electrónico de Transmisión ra interna de la célula (ultraestructura). La imagen final se puede observar sobre una pantalla fluorescente o por medio de una placa fotográfica. Con microscopio se pueden obtener aumentos de hasta 200.000, 300.000 veces o más, los que por medio de las ampliaciones fotográficas pueden llegar hasta 1.000.000 o aún más. Microscopio electrónico de barrido (SEM): el microscopio electrónico de barrido revela la disposición tridimensional de los componentes celulares. Esto se produce debido a que el haz de electrones se refleja sobre la superficie de la muestra en lugar de atravesarla como sucede en el anterior. La muestra a analizar se fija y seca al vacío, Programa de Ingreso UNL / Curso de Articulación Disciplinar: Morfología 11 Morfología: de la célula al hombre como individuo / Unidad 1 proceso conocido con el nombre de sombreado. Luego es barrida por un haz focalizado de electrones: cuando el haz choca con la muestra se producen electrones “secundarios” en la superficie metalizada y éstos son detectados y convertidos en una imagen sobre una pantalla de televisión, la que puede también ser fotografiada. Puesto que el grado de dispersión de los electrones depende del ángulo relativo entre el haz y la superficie, la imagen tiene puntos brillantes y puntos oscuros. El poder de resolución de este microscopio es de 10 nm. La siguiente figura pone de relieve las similitudes del diseño general de los tres microscopios. Los dos tipos de microscopio electrónico requieren que la muestra sea colocada en el vacío. Fig. 3: Rasgos principales de un microscopio óptico, un microscopio electrónico de transmisión y un microscopio electrónico de barrido Programa de Ingreso UNL / Curso de Articulación Disciplinar: Morfología 12 Morfología: de la célula al hombre como individuo / Unidad 1 Actividades capítulo 1 1. Mediante un cuadro compare determinados categóricos de los microscopios óptico, electrónico de transmisión y electrónico de barrido: fuente de iluminación, preparación de la muestra, poder de resolución, etc. 2. Establezca diferencia entre los siguientes términos: a) Poder de resolución/ límite de resolución b) Portaobjeto/ objetivos 3. ¿Cómo se calcula el aumento final de un microscopio? 4. Haga una clasificación de las lentes que conforman el sistema de lentes mencionando la función de cada uno. 5. Decida cuáles preparados corresponden a observaciones con microscopio óptico y cuáles corresponden a observaciones en microscopio electrónico. Fundamente la decisión a) Tejido adiposo Programa de Ingreso UNL / Curso de Articulación Disciplinar: Morfología 13 Morfología: de la célula al hombre como individuo / Unidad 1 b) Célula de hígado de rata c) Tendón d) Granos de polen e) Célula epitelial cilíndrica con cilios asociados Programa de Ingreso UNL / Curso de Articulación Disciplinar: Morfología 14 Morfología: de la célula al hombre como individuo / Unidad 1 Bibliografía Bibliografía básica Bibliografía complementaria Audesirk, T. (2003): Biología. La vida en la Tierra. 6° ed. Printice Hall. Alberts, B. y otros (1998): Biología molecular de la célula. 3° ed. Omega. Bazán, N.; Caro, G.; Lassalle, A.; Maldonado, A. y otros. Botto, J. (coord.) (2006): Biología. Tinta Fresca. Códigos Ifaa Clasificación Internacional Anatomía [en línea] Http://www.Salutia.Com.Ar/ Sitio/Sp/Servicios/Datos_Utiles/Ifaa/Ifaa_Index. Htm (Consulta: 06 de junio de 2004). Bocalandro, N.; Frid, D. (1999): Biología humana y salud. Estrada. Curtis, H. y otros (2000): Biología. 6° ed. Editorial Médica Panamericana. Keith L. Moore Dalley (2003): Anatomía con orientación clínica. 4° ed. Editorial Médica Panamericana. Purves, W. y otros (2003): Vida. La ciencia de la Biología. 6° ed. Ediotrial Médica Panamericana Comité Federal Sobre Terminología Anatómica. (2001). Terminología Anatómica Internacional. Ed. Médica Panamericana. Gartner, L. y Hiatt, J. (1997): Histología. Texto y atlas. Mc Graw-Hill Interamericana. Geneser, F. (2002): Histología. 3° ed. Editorial Médica Panamericana. Healeay, J.M. 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