Centro de Biotecnología, Vol. 2 Nro. 1. 2013 16 DIAGNÓSTICO DE

16 Centro de Biotecnología, Vol. 2 Nro. 1. 2013
DIAGNÓSTICO DE SIGNOS VISIBLES DE LA PRESENCIA DE ENFERMEDADES
INFECCIOSAS REPRODUCTIVAS EN EL GANADO BOVINO DEL CANTÓN LOJA
VISIBLESIGNSDIAGNOSISOF REPRODUCTIVE INFECTIOUS DISEASESINCATTLEOF
LOJACANTON
Franklin Román-Cárdenas1*, Jhuliana LunaHerrera1,
Centro de Biotecnología, Universidad
Nacional de Loja, Ciudadela universitaria
Guillermo
Falconí,
Loja,
Ecuador.
[email protected], jhuly-kath@
hotmail.com
1
*Autor para correspondencia
Resumen
El presente trabajo tuvo como objetivo la
realización de una encuesta epidemiológica
para identificar los sistemas de producción;
manejo reproductivo y manejo sanitario de
las ganaderías bovinas del cantón Loja. El
tamaño de la muestra lo constituye el 2,4%
de las Unidades Productivas Agropecuarias
bovinas de las parroquias urbanas y
rurales, donde se aplicaron ciento veinte
encuestas de treinta y cinco preguntas
cada una de carácter cerrado. Las áreas
de muestreos se georreferenciaron con la
utilización del Sistema de Posicionamiento
Global. Los resultados arrojaron que el
88% de las ganaderías son productoras
de leche, mientras que el 86% no tienen
certificado sanitario. La reproducción se
da por monta natural en un 95%, la que
presenta presencia de piometra postcoital
en un 8%. Se presentan abortos en el 19%
de las ganaderías, abortando una, dos y
hasta tres vacas, generalmente entre el 6to
y 7mo mes de gestación. Se registran partos
prematuros con nacimientos de terneros
débiles, mortinatos y fetos macerados,
retenciones placentarias, animales adultos
con higromas, orina con sangre, piel y
mucosas amarillas. En terneros recién
nacidos se detecta la presencia de órbitas
oculares salidas, incoordinación y parálisis
muscular. La presencia de signos visibles
de posibles enfermedades infecciosas es
alta por lo que se continúa con la etapa
de Inmunodiagnóstico de brucelosis,
leptospirosis, neosporosis y tuberculosis
bovina.Este estudio permite plantear medidas
preventivas y de control de las bacterias y
parásitos que podrían repercutir en pérdidas
económicas, ocasionar enfermedades al
personal de las instalaciones y consumidores
de los derivados.
Palabras claves: brucelosis, leptospirosis,
neosporosis, zoonosis, aborto.
Abstract
This study aimed to carry out an
epidemiological survey to identify production
systems, reproductive management and
health management of cattle in Loja Canton.
The sample size were 2.4% of bovine
Agricultural Production Units of urban and
rural parishes, where one hundred and twenty
surveys were applied including thirty-five
questions for each one with closed nature.
Sampling areas were georeferenced with
the use of the Global Positioning System.
The results showed that 88% of herds are
milk producers, while 86% have no health
certificate. Reproduction occurs by natural
mating in 95%, which shows the presence
of 8% postcoital pyometra. Abortions are
presented in 19% of herds, aborting one,
two or three cows, usually between the 6th
and 7th month of pregnancy. Preterm births
are registered with weak calf births, stillbirths
and macerated fetuses, placental retention,
adult animals with hygromas, bloody urine,
yellow skin and mucous membranes. In
newborn calves outputs of eye sockets
is detected, muscular incoordination and
paralysis. The presence of visible signs of
possible infectious disease is high, so that
we continue with immunodiagnostic step
Centro de Biotecnología, Vol. 2 Nro. 1. 2013 17
of brucellosis, leptospirosis, neosporosis
and bovine tuberculosis. This study allows
proposing preventive measures and control
of bacteria and parasites that could affect
economic losses, cause illness to facilities
staff and consumers of derivatives.
Key
words:
brucellosis,leptospirosis,neosporosis,
zoonoses, abortion
Introducción
Los trastornos reproductivos en el ganado
bovino en un 50% de los casos son de
origen infeccioso (Durán, 2004), pueden
ser de tipo bacteriano, vírico o parasitario.
En la ganadería ecuatoriana entre las
enfermedades de la reproducción bovina
que han sido diagnosticadas están
brucelosis (Benítez, 2011) leptospirosis
(Baquero, 2011) neosporosis (Lozada,
2004) y tuberculosis bovina (Herrera, 2011),
que sin ser enfermedad exclusiva de la
reproducción ha adquirido importancia
sanitaria. Las patologías brucelosis,
leptospirosis y tuberculosis bovina alcanzan
mayor relevancia por ser transmisibles al
hombre (Who, 2013).
La
brucelosis
esuna
enfermedadprincipalmente
deganado
vacuno, cerdos, cabras, ovejas y perros, el
crecimiento más agudo en número de casos
se está registrando en países de Asia Central
y Sudoriental. (OIE, 2013). La infección
setransmite a los humanospor los animalesa
través del contactodirecto conmaterial
infectado, por la ingestión deproductos
de origen animaly por inhalaciónde
agentestransportados por el aire (OIE, 2008).
El consumo de lechecruda yquesoelaborado
con
leche
cruda(quesofresco)es
la
principal fuentedeinfecciónen el hombre
(Who, 2013). El agente etiológico Brucella
abortus es una bacteria con morfología de
cocos,gramnegativos, aeróbicos, no móviles
(Phac, 2001). En el Ecuador entre 1979 y
2008 se registra una prevalencia del 5% de
brucelosis bovina. La provincia de Loja ha
sido clasificada en la región epidemiológica 3
de baja prevalencia, con una prevalencia de
la enfermedad del 1,3 al 2,6 % (Agrocalidad,
2009).
La
leptospirosises
una
enfermedad
bacterianaque
afecta
tanto
aseres
humanos como a animales. Los seres
humanosse infectanpor contacto directo
conla orina de animalesinfectados oun
ambientecontaminado
conorina
(Ops,
2008). Esta bacteria perteneciente al
género Leptospira spp es parecida a un
sacacorcho y difiere de otras espiroquetas
por tener ganchos en los extremos (Ops,
2008). En Ecuador el diagnóstico rutinario
de leptospirosis bovina se basa en la prueba
de microaglutinación microscópica. En base
a este diagnóstico se tiene establecido
que el serovar que más afecta a la
ganadería lechera de la zona interandina es
principalmente el serovar L. wolffi seguido
de los serovares L. hardjo, L. canicola,
L. pomona, L. icterohaemorrhagiae,
L.bratislava entre otros (Carmona, 2010).
En el año 2007 se reportaron 195 casos
confirmados de leptospirosis bovina, para
un total de 6652 casos entre los años 2000
y 2007 (Inhtm, 2010).
El único signo clínico de neosporosis
observado en la vaca adulta es el aborto,
ya sea esporádico, endémico o epidémico.
La mayoría de abortos ocurre entre los 5
a 6 meses de gestación (Anderson, et al.,
1994). Esta enfermedad es producida por
Neospora caninum, un parásito protozoario
del Phylum Apicomplexa,cuyo hospedero
definitivo es el perro y el coyote (Gondim,
et al., 2004) fue aislado por primera vez en
1988 a partir de tejidos de cachorros de
perros (Dubey, et al., 1988). La infección por
transmisión horizontal del ganado bovino
adulto posiblemente tendría lugar por la
ruta orofecal (McAllister et al., 1998). En un
estudio realizado en Suecia muestreando
solo las hembras de un hato lechero desde
1994 a 1999 encontraron un incremento de
seropositivas de 63% a 87%, (Stenlund, et
al., 2003). En lo que se refiere al Ecuador,
en estudios realizados en el cantón Mejía
se reportó el 30% de seropositivos en 1240
18 Centro de Biotecnología, Vol. 2 Nro. 1. 2013
muestras (Ortiz, 2002) y en la zona centro
norte de la sierra el 42% de animales
seropositivos (Lozada, 2004).
La tuberculosis bovina es una enfermedad
bacteriana crónica que en ocasiones,
afecta a otras especies de mamíferos.
Puede afectar a los humanos en general,
por inhalación de aerosoles o ingestión
de leche no pasteurizada. (The Center for
Food Security and Public Health, 2010). La
situación de la TBB en el Ecuador no está
documentada ni cuantificada claramente
(Proaño, 2011). Estudios de la Asociación
Holstein Frissian del Ecuador reportó para el
2010 en base a un total de 16838 muestras,
36 positivos y una prevalencia de 0,214%,
utilizando la prueba diagnóstica PPD con
una cobertura nacional del 70,8%, para Loja
el diagnóstico reportó entre los años 2006
y 2010, 292 animales infectados con la
utilización de la misma prueba (AHF, 2011).
El objetivo general de la investigación es
“Estudiar la epidemiología y caracterizar
los microorganismos que afectan la
reproducción del ganado bovino en las
ganaderías del Cantón Loja”.
Materiales y métodos
El cantón Loja tiene 13 parroquias rurales
y 4 parroquias urbanas con gran diversidad
geográfica, lo que evidencia distintas
prácticas en el manejo del ganado bovino,
necesitándose hacer este estudio para
tener información epidemiológica de todo el
cantón.
Para realizar el trabajo se aplicaron 120
encuestas epidemiológicas de treinta y cinco
preguntas cada una y de carácter cerrado
repartidas en las parroquias rurales y
urbanas. Cada unidad agropecuaria bovina
fue georreferenciada y posteriormente a
través del Centro de Investigación territorial
fue levantado el respectivo mapa. La
información de las encuestas fue ingresada
en una plantilla Excel para ser tabulada e
interpretada, los principales parámetros
evaluados fueron; datos generales de la
explotación, sistema de reproducción, signos
observados que afectan la reproducción
bovina, diagnóstico de enfermedades en los
animales, diagnóstico de enfermedades en
el personal, programas de vacunación.
Resultados
Utilizando el Sistema de Posicionamiento
Global
las
Unidades
productivas
agropecuarias bovinas del cantón Loja
están ubicadas entre los 1674 y 2935
msnm. La imagen 1 muestra los sitios de la
aplicación de las encuestas epidemiológicas.
Constituyéndose en la primera vez que
se realiza un mapa de los sistemas de
producción; manejo reproductivo y manejo
sanitario de las ganaderías bovinas del
cantón Loja.
Centro de Biotecnología, Vol. 2 Nro. 1. 2013 19
1. Mapa de aplicación de las encuestas epidemiológicas.
El análisis de las encuestas aplicadas en
las diferentes áreas ganaderas arrojó que
la ganadería bovina del cantón Loja se
constituye en una ganadería con tres tipos
de explotación, el 88% para producción
de leche, el 3% para producción de carne
y una ganadería de producción mixta del
9%. El 86% de estas ganaderías no tienen
certificación sanitaria, los remplazos se
realizan con los mismos animales, se
adquieren en las ferias locales (feria de Loja
28%) de Quito y provincias aledañas como
Zamora Chinchipe y el Oro. Es frecuente la
movilización de animales a las partes altas
y a la provincia de Zamora Chinchipe y el
Oro. El 36% de la producción se destina a
consumo interno, el 41% venta a la localidad
y el 23% de venta a empresas lácteas.
El consumo de agua de los semovientes
es el 70% a través de vertientes naturales.
En el 78% de las ganaderías se registra la
presencia de roedores, de las cuales solo
se realiza control en el 30%. El 92% de los
ganaderos utilizan el estiércol para abono
de los pastos.
La reproducción en un 95% se da por monta
natural, en la que se registra un 8% de
piometra post coital. El 57% las ganaderías
disponen de un lugar específico para el
parto que generalmente es un potrero en
la parte plana y semiplana. Las ganaderías
de la parte alta son menos susceptibles a
las enfermedades. El 4% de las ganaderías
registran la presencia de partos prematuros,
tienen presencia de abortos el 19%. En
estas ganaderías han abortado una, dos y
hasta tres vacas.
20 Centro de Biotecnología, Vol. 2 Nro. 1. 2013
La Figura 2 muestra los porcentajes de abortos de acuerdo al mes en el periodo de gestación.
Es representativo el porcentaje de ganaderos que no saben en qué periodo de la gestación
abortó la vaca ya que no manejan registros.
Figura 2. Presentación de abortos por mes de gestación
Los abortos son enterrados o dejados en el campo en 35% en cada caso, los consumen los
perros en un 26% y un 4 % los consumen los humanos.
La Figura 3 nos ilustra los porcentajes de algunos signos relacionados al parto, tales como;
retención de placenta, nacimiento de terneros débiles, mortinatos y presencia de maceración
fetal en las ganaderías del cantón Loja.
Figura 3. Algunos signos presentes en las ganaderías relacionados al parto
La Figura 4 nos muestra la presencia de otros tipos de signos observados en los animales
adultos expresados en porcentaje.
Centro de Biotecnología, Vol. 2 Nro. 1. 2013 21
Figura 4. Otros signos observados en animales adultos de ganado bovino
En terneros recién nacidos también ha
sido observado el 9% de incoordinación
muscular, el 5% de parálisis muscular y en
un 1% orbitas oculares salidas.
El 79% de los ganaderos vacunan para
fiebre aftosa, el 49% la triple bovina, el 2%
para brucelosis y leptospirosis y el 1% para
neosporosis.
El 23% de los ganaderos se realizan
chequeos periódicos los mismos que
manifiestan no han sido diagnosticados de
enfermedades zoonósicas.
Discusión
La presencia de signos clínicos como
abortos, retenciones de placenta, nacimiento
de terneros débiles, mortinatos, maceración
fetal en las hembras en etapa reproductiva
hacen suponer que en el cantón Loja se
están registrando enfermedades de tipo
infeccioso.
Los signos que observan los ganaderos
en sus animales inducen pensar en
enfermedades de la reproducción como
brucelosis que causa en hembras bovinas
abortos, retención de placenta con la
subsiguiente metritis; lesiones generales en
el útero e infertilidad, mastitis, disminución
de la producción láctea (Cevallos, 2007) otra
enfermedad que cursa con signos parecidos
es leptospirosis que se caracteriza en los
bovinos por producir septicemia, abortos,
mastitis, mortinatos y nacimiento de crías
débiles que mueren al poco tiempo de
nacidos (Rodríguez, 2010) la enfermedad
neosporosis causa aborto en vacas de todos
los continentes (Anderson et al., 2000). Sin
descartar otras enfermedades que cursan
con signos parecidos. (Rivera, 2004).
Otros signos observados por los ganaderos
del cantón Loja en sus animales son
Higromas, orina con sangre, piel y
mucosas amarillentas, tos suave y
persistente, aumento de ganglios linfáticos,
enflaquecimiento progresivo, tumefacción de
la glándula mamaria, con algunos de estos
signos también pueden cursar brucelosis,
leptospirosis, neosporosis, mientras que
los signos clínicos de tuberculosis bovina
generalmente se manifiestan con signos
inespecíficos como caída de la producción
lechera y deterioro del estado general de
salud con debilidad progresiva, pérdida
de apetito, pérdida de peso, tos seca
intermitente, diarreas frecuentes (Cano,
2011) . Estos signos también son indicio
de la posible presencia de enfermedades
infecciosas en el ganado bovino.
22 Centro de Biotecnología, Vol. 2 Nro. 1. 2013
La Organización Mundial de Sanidad
Animal clasifica a las enfermedades
brucelosis y tuberculosis bovina dentro de
las enfermedades de declaración obligatoria
(OIE, 2013) por ser enfermedades
transmisibles y que se consideran
importantes desde el punto de vista
socioeconómico y/o sanitario; mientras
que leptospirosis forma parte de la antigua
clasificación categorizada en la lista B que
son enfermedades de declaración obligatoria
(OIE, 2013).
Estas
enfermedades
(brucelosis,
leptospirosis, neosporosis, tuberculosis
bovina) pudieran diseminarse porque no
existen procedimientos implementados
para realizar la certificación sanitaria de las
ganaderías de bovinos en el país, son pocos
los ganaderos que realizan una certificación
sanitaria de su predio, no existe petición de
certificado sanitario al momento de comprar
los animales de remplazo. Estos animales
son adquiridos por lo general en las ferias
locales sin realizar una revisión general
del bovino, son llevados a los predios sin
someterlos a periodos de cuarentena.
Hay que considerar que a pesar de que el
porcentaje de remplazos es mínimo desde
ganaderías de la provincia de Pichincha
se debe tomar en cuenta que en esta zona
se han realizado múltiples estudios y se
han diagnosticado estas enfermedades
(Agrocalidad, 2009). Para la compra y
venta de animales, se debería presentar un
certificado de salud de los animales donde
conste, pruebas de las enfermedades
reproductivas y de tuberculosis bovina
(Herrera, 2011)
Conclusiones
En el cantón Loja se han podido identificar
mediante la aplicación de la encuesta
epidemiológica la posible presencia de
enfermedades infecciosas en las hembras
bovinas en edad reproductiva ocasionada
en su mayoría por el poco conocimiento
de parámetros reproductivos, medidas
sanitarias, planes y programas de
vacunación.
Con esta investigación se ha podido
establecer un mapa de los sistemas de
producción, manejo reproductivo y manejo
sanitario de las ganaderías bovinas del
cantón Loja, el cual servirá de guía para
futuras investigaciones de las enfermedades
de la reproducción bovina.
Este trabajo nos permite continuar con la
siguiente fase de la investigación que es
la realización de Inmunodiagnóstico, para
brucelosis, leptospirosis, neosporosis y
tuberculosis bovina.
Agradecimientos
Expresamos
nuestros
sinceros
agradecimientos a la Universidad Nacional
de Loja, al personal de la Dirección de
Investigación y del Centro de Biotecnología,
por el apoyo al financiamiento del proyecto
de investigación. Al Centro Internacional
de Zoonosis de la Universidad Central del
Ecuador.
Dr. Ramiro Córdova Técnico de la UNL,
al Ing. Fabián Sotomayor del Centro de
Investigación Territorial de la UNL, por su
colaboración y apoyo brindado en esta
fase de la investigación y nuestro especial
agradecimiento a los señores ganaderos del
cantón Loja.
Referencias bibliográficas
Anderson, M. et al. 2000 Neosporosis in
cattle. Animal Reproduction 417-431.
Agrocalidad. 2009 Programa Nacional de
Control de Brucelosis Bovina Disponible:
http://www.agrocalidad.gob.ec/agrocalidad/
images/Agrocalidad/Contenido/.
Sanidad Anima l/docs/programa_nacional_
brucelosis _ bovina. pdf(consultado abril 08,
2013).
Ahfe. 2011. Buiatria bovina 2011 http://
www.google.com.ec/#hl=es&sclient=psyab&q=tuberculosis+BOVI
Centro de Biotecnología, Vol. 2 Nro. 1. 2013 23
NUADOR&oq=tuberculosis+BOVINA+EN+
EL +ECUADOR (consultado marzo 29,2013).
Colombia. Ediciones Grupo Latina. p. 197,
199-201.
AMSE. 2011. Leptospirosis-Epidemiología
y situación mundial (en línea) URL: http://
www.Amse.es/index. php?option=com_co
ntent&view=article&id=184:leptospirosisepidemiologia-y-situacion-mundial&catid=
42
:inf-epidemiologica&Itemid=50
(consultado marzo 29,2013).
Gondim, L., et al. 2004 Coyotes (Canin
latrans) are definitive hosts of Neospora
caninum. Int. J. Parasitol. 34: 159-161.
Baquero, M. 2011. Evaluation of a
polymerase chain reaction for the diagnosis
of leptospirosis in cattle Tesis de maestría
en Microbiología Universidad San Francisco
de Quito.
Benítez, J., 2011 Evaluación de la incidencia
de brucelosis bovina e las haciendas “El
Prado” y “Aycha picho”, localizadas en la
provincia de Pichincha-Ecuador, mediante
aplicación de técnicas inmunodiagnós ticas
Tesis Médico Veterinario http://dspace.udla.
edu.ec/handle/123456789/667(consultado
abril 08,2 01 3).
Cano, C., 2011 Tuberculosis bovina
Universidad
Autónoma
de
México.
Departamento de rumiantes. www. Fmvz.
unam.mx/fmvz (consultado abril 08,2013).
Cevallos, O., 2007 Implementación de la
PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa)
Para el Diagnóstico de la Brucelosis de
Bovinos en el Ecuador Laboratorio de
Biotecnología, Unidad de Investigación
de Ciencia y Tecnología. Universidad de
Guayaquil. Guayaquil, Guayas, Ecuador.
Dubey, J., et al., 1988 (a). Neonatal Neospora
caninum infection in dogs: Isolation of
the causative agent and experimental
transmission. J. Am. Vet. Med. Assoc. 193:
1259-1263.
Dubey, J., et al., 1988 (b). Newly recognized
fatal protozoan diseases of dogs. J. Am. Vet.
Med. Assoc. 192: 1269 – 1285.
Duran. 2004. Manual del ganadero actual.
Herrera, E., 2011 Diagnóstico de tuberculosis
bovina, mediante la prueba intradérmica
cervical comparada en cinco hatos lecheros
en la Ciudad de Otavalo, provincia de
Imbabura Tesis de Médico Veterinario
Universidad de las Américas.
Inhtm. 2010. Instituto nacional de Higiene.
Programa de vigilancia epidemiológica de
Leptospirosis.
Lozada, E. 2004. Determinación de la
presencia de anticuerpos a Neospora canimun
en hatos lecheros de la sierra Centro Norte
del Ecuador, por prueba Inmunoenzimatica.
Tesis de doctor en Medicina Veterinaria y
Zootecnia, Universidad Central del Ecuador.
McAllister, M., et al. 1998. Dogs are definitive
Hosts of Neospora caninum. Int J parasitol.
Paredes, J. 2010. Incidencia y/o prevalencia
de Leptospira hardjo- bovis en Hatos Lecheros
(en línea) URL: http://www.engormix.
com/MA-ganaderia-leche/sanidad/foros/
incidencia-prevalencia-leptospira-hardjot9672/165-p0.htm(consultado
marzo
29,2013).
OIE. 2008. Manual de la OIE sobre animales
terrestres Capítulo 2.4.3. Brucelosis
bovina http://www.oie.int/fileadmin/Home/
esp/Health_standards/tahm/2.04.03.%20
Brucelosis%20bovina.pdf.
OIE. 2013 (a). Enfermedades, infecciones
e infestaciones de la Lista de la OIE
en vigor en 2013 (en línea) URL: http://www.
oie.int/es/sanidad-animal-en-el-mundo/
enfermedades-de-la-lista-de-la-oie-2013/ en
vigor en 2013 (consultado marzo 29,2013.
24 Centro de Biotecnología, Vol. 2 Nro. 1. 2013
OIE. 2013 (b). Brucelosis (en línea) URL:
http://www.oie.int/fileadmin/Home/esp/
Media_
Center / docs/pdf/Disease_cards/BCLS-ES.
pdf (consultado marzo 29,2013).
OPS/OMS. 2008. Leptospirosis humana:
guía para el diagnóstico, vigilancia y
controlOrganización Mundial de la Salud Rio
de Janeiro: Centro Panamericano de Fiebre
Aftosa –VP/OPS/OMS.
Public Health Agency of Canada PHAC,
2001. Brucella spp. (B. abortus, B. canis,
B. melitensis, B. suis) - Material Safety
Data Sheets (MSDS) (en línea) URL: http://
www.phac-aspc.gc.ca/lab-bio/res/psds-ftss/
msds23e-eng.php (consultado marzo 29,
2013).
Rivera. H. 2004. Enfermedades de la
reproducción. Etiología del aborto bovino
Universidad Mayor de San Marcos, LimaPerú www. producción-animal.com.ar.
Rodríguez, A. 2010. Leptospirosis bovina,
diagnóstico, tratamiento y control Cedivep
s.r.l Sanidad Animal en la producción
Ganadera Paraguay.
Stenlund, S., et al. 2003. A long- term Study
of Neospora caninum infection in an Swedish
Dairy Herd. Vet Scan; 44 (2): 63-71.
Proaño, F., et al. 2006. Preliminary
observations on Mycobacteriumspp. in
dairy cattle in Ecuador The American
journal the tropical medicine and hygiene.
(en línea) URL: http://www.ajtmh.o1111rg/
content/75/2/318.abstract
(consultado
marzo 29,2013).
The center for food security y public health.
2010. The center for food security y public
health. Tuberculosis bovina (en línea) URL:
http://www.cfsph.iastate.edu/Factsheets/es/
tuberculosis_bovina.pdf (consultado marzo
29,2013).
Who. 2013 (a). Zoonoses and veterinary
public health (en línea) URL: http://www.
who.int/ zoonoses /diseases /brucellosis/
en/ Zoonoses and veterinary public health
(consultado marzo 29,2013).
Who. 2013 (b). Leptospirosis (en línea) URL:
http://www.who.int/topics/leptospirosis/en/
Leptospirosis (consultado marzo 29,2013).