Resumen: E-041 UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDEST E Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2006 Comparación entre el contenido de benzoilecgonina en orina de: bebedores de te de hojas de coca y de coqueadores con el de adictos. Galassi, Fernando - Ramirez, Elena W. - Prada, Gerardo D. Instituto de Ciencias Criminalísticas y Criminología. UNNE. Catamarca 375. C.P. 3400. Corrientes. Argentina. Teléfono-Fax: 03783-422096. e-mail: [email protected] - Antecedentes: Coat-a-Count metabolitos de la cocaína, es un radio inmuno análisis en fase sólida diseñado para la determinación cuantitativa de benzoilecgonina en orina, su uso diagnóstico es estrictamente in vitro, en el contexto de un programa que involucra un análisis de confirmación; es decir, proporciona sólo un resultado de prueba analítica preeliminar. Cualquier resultado de un análisis de abuso de drogas debe someterse a consideraciones clínicas y a un juicio profesional cuando se trata de resultados preeliminares positivos. La cocaína (benzoilmetilecgonina), un ester del ácido benzoico y la ecgonina, se encuentra en las hojas de la planta de coca (Erythroxylon coca). En el organismo el metabolismo a ecgoninametilester ocurre por la acción de la colinesterasa sérica y hepática. En el organismo como en muestras acuosas la benzoilecgonina no se produce enzimáticamente sino por hidrólisis simple. La pérdida del metilester ocurre espontáneamente en un proceso dependiente del pH y la temperatura. Las colinesteresas pueden convertir la benzoilecgonina a ecgonina enzimáticamente. También se pueden producir otros metabolitos incluidos los metabolitos hidroxiaril. La vida media de la cocaína en sangre es de 30 a 120 minutos, mientras que la benzoilecgonina tiene una vida media de 7 a 9 horas. En la orina la benzoilecgonina es el principal metabolito que se detecta. Cabe recordar que la droga (cocaína) puede consumirse por vía oral o en forma intravenosa o por insuflación intranasal o inhalarse como un vapor. *Datos extraídos del Coat-A-Count (Cocaína Metabolito) D.P.C., y de la bibliografía consultad. Cabe aclarar que el trabajo que corresponde a los consumidores de te de coca fue realizado por la Becaria Lic. Elena Wilma Ramírez (perfeccionamiento) y el de los coqueadores fue realizado por el Becario Lic. Gerardo Damián Prada (iniciación). Luego ambos becarios hicieron un análisis de los consumidores de cocaína y analizaron los datos obtenidos en forma individual con los datos obtenidos en forma conjunta. - Materiales y Métodos: Materiales: 15 muestras de orina (primera de la mañana) de consumidores de te de coca. 15 muestras de orina (primera de la mañana) de coqueadores. 11 muestras de orina (primera de la mañana) de adictos. Pipetas graduadas de 5 ml Micropipetas automáticas de 25 microlitros Agua destilada. Espectrómetro. Marca α Nuclear Modelo MOS- Contador de Pozo Modelo M2. Kit de benzoilecgonine Coat-A-Count. Cocaine Metabolite de D.P.C. Técnica: Utilizar 6 tubos recubiertos para el trazado de la curva de calibración correspondiente a 0 – 100 – 300 – 900 – 2700 – 5400 nanogramos/mililitros. Tubos recubiertos para cada muestra a analizar. Pipetear directamente en el fondo de cada tubo 25 microlitros de los calibradores y de las muestras correspondientes según el caso, y cambiando la punta de la pipeta de muestra a muestra para evitar la contaminación por arrastre. Añadir 1,0 mililitro de benzoilecgonina marcada Mezclar en vortex Incubar durante 2 horas a temperatura ambiente (15-28 ºC) Decantar cuidadosamente Contar durante 1 minuto en un contador gama. Resumen: E-041 UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDEST E Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2006 - Resultados: Tipo de Consumo 26% 37% Infusión Coqueo Adicción 37% VALORES HALLADOS EXPRESADOS EN NANOGRAMOS/MILILITROS (ng/ml) Tipo de Consumo Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3 Muestra 4 Muestra 5 Muestra 6 Muestra 7 Muestra 8 Muestra 9 Muestra 10 Muestra 11 Muestra 12 Muestra 13 Muestra 14 Muestra 15 Infusión 840 2900 4500 3500 4000 2700 1950 2800 3200 2650 2500 1250 1450 1800 950 Coqueo 3700 4200 5400 1450 2300 4800 5400 2050 5400 5400 4450 1820 680 750 650 Adicción 900 1250 950 340 430 670 1300 165 174 99 670 x x x x Tratamiento estadístico: Se puede observar en el grafico correspondiente a las muestras de orina de personas que consumieron te de coca, que se pueden hallar valores en todos los rangos de concentraciones, menos en el último que corresponde al de mayor Resumen: E-041 UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDESTE Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2006 concentración. El rango donde se encuentra el mayor número de muestras es el que va de 2001 a 3000 nanogramos por mililitro de Benzoilecgonina. Se puede observar en el grafico correspondiente a persona que practican el Coqueo, se ecuentran valores de concentraciones de Benzoilecgonina todos los rangos. Pudiéndose observar que el mayor número de muestras se encuentran en el rango de mayor concentración de Benzoilecgonina que va desde 5001 a 6000. Se puede observar en el grafico correspondiente a la personas que consumen cocaína (adictos), que los valores de Benzoilecgonina hallados en las muestras de orinas analizadas, son muy bajos con respecto a los coqueadores y los tomadores de te de coca y no superan los 2000 nanogramos por mililitros. El mayor de número de muestras analizadas se encuentra en el primer rango que va de 0 a 1000 nanogramos por mililitros. (Se debe tener en cuenta que los adictos se encontraban bajo tratamiento, al momento de recolección de la muestra) Resumen: E-041 UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDESTE Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2006 Gráfico Comparativo entre Infusión (Serie 1), Coqueo (Serie 2) y Adicción (Serie 3) Número de Muestras 10 9 8 7 6 Serie1 Serie2 5 4 Serie3 I 3 2 1 500 1- 600 0 -5 000 400 1 0 400 130 0 300 0 1200 -2 000 100 1 0- 100 0 0 Rango de Concentraciones en ng/ml - Discusión: Si bien el trabajo realizado no contiene la suficiente cantidad de muestras como para analizarlos estadísticamente en forma adecuada, se puede observar que en el caso de la adicción las concentraciones de Benzoilecgonina en las muestras analizadas son menores que los que se encontraron en las muestras que corresponden a los consumidores de te de coca, y los coqueaderes, encontrándose en éstos últimos valores muy elevados. También se puede observar que existe una superposición de concentraciones del derivado de la cocaína (Benzoilecgonina) en los diferentes tipos de consumo, lo cual no nos permite encontrar los parámetros que estamos buscando para poder diferenciarlos. - Conclusiones: Tratándose de un trabajo preeliminar, en el sentido que el número de muestras procesadas son escasas, no podemos llegar a una conclusión definitiva, por lo que es necesario seguir procesando muestras con el objeto de encontrar los parámetros que permitan diferenciar: un consumidor de te de coca ó coqueador de un adicto a la cocaína, teniendo en cuenta que la metodología aplicada proporciona sólo un resultado de prueba analítica preliminar. - Bibliografía: Appel TA, Wade NA, Screening of blood and urine for drugs of abuse utilizing diagnostic products corporation’s Coat-A-Count radioimmunoassay Kits, J. Anal. Toxicol., 1989, 13 [5]: 268-273. Cone EJ, Validaty testing of commercial urine cocaine metabolite assays: III Evaluation of an enzyme-linked immusorbent assay (ELISA) for detection of cocaine metabolite, J Forensic Sci., 1989,34 [4]: 991:995 Farina M, Yonamine M, SilvaOA, One-step liquid-liquid extraction of cocaine from urine samples for gas chromatographic analysis, Forensic Sci Int., 2002, 127 [3]: 204-207. Fernandez P, Lafuente N., Bermejo AM, Lopez-Rivadulla M, Cruz A, HPLC determination of cocaine and benzoylecgonine in plasma and urine from drug abusers, J. Anal. Toxicol., 1996,20 [4]: 224-228. Garside D, Goldberger BA, Preston KL, Cone EJ, Rapid liquid-liquid extraction of cocaine from urine for gas chromatographic-mass spectrometric analysis, J. Chromatogr.B Biomed.Sci.Appl., 1997, 692 [1]: 61-65. Jeanville PM, Estape ES, Needham SR, Cole MJ, Rapid confirmation/quantitation of cocaine and benzoylecgonine in urine utilizing high performance liquid chromatography and tendem mass spectrometry, J.Am.Soc.Mass Spectrom., 2000, 11 [3]: 257-263.