Efecto del Depura sobre la Colitis Experimental en Ratas

Efecto del Depura sobre la Colitis
Experimental en Ratas
WIX, R. J., BARRIOS, A. C., GUTIÉRREZ, J. E., REMANTON, M.
Salus
RESUMEN
ABSTRACT
EFECTO DEL DEPURA SOBRE LA COLITIS
EN RATAS
EFFECT OF DEPURA ON COLITIS IN RATS
Se estudió el efecto del Depura, extracto de hierbas (Zarzaparrilla, Zábila, Ruibarbo, Manzanilla) sobre la inflamación
colónica inducida por ácido acético en ratas. Se utilizaron 3
grupo de 12 ratas machos Sprague-Dawley (210-300 g), tratadas por vía intrarrectal: a) grupo control 2 ml de agua, b) grupo
inflamado 1 ml de ácido acético al 10% más 1 ml de agua y c)
grupo medicado 1 ml de Depura más 1 ml de ácido acético, se
registró el peso corporal durante 4 días, se sacrificaron, se evaluó el intestinal macro y microscópicamente. El tratamiento con
Depura causó una significativa disminución de las lesiones
macroscópicas 40% de edema en el grupo medicado contra 93%
en el grupo inflamado (p<0,005), 32% de erosión en el grupo
medicado contra 65% en el grupo inflamado (p<0,06), 12% de
ulceración en el medicado contra 44% en el grupo inflamado
p<0,047), el grupo control no presentó lesiones. La severidad
de las lesiones microscópicas fueron significativamente menores en el grupo medicado, conservando la mucosa, mientras que
en el grupo inflamado perdieron el 90% de la mucosa. La pérdida de peso en los intestinos medicados fue de 44 % (p<2,4),
en el grupo control de 30 % y en el grupo inflamado de 64 %
(p<0,5). La pérdida de peso del grupo control fue de 21,5 g, el
grupo medicado 23 g y el grupo inflamado de 28 g. Estos hallazgos sugieren un efecto beneficioso del Depura sobre la inflamación experimental del colon.
PALABRAS CLAVES: Colitis. Depura. Inflamación. Ratas.
Traditional drugs used by people for many years in an intuitive
and empiric way have begun to be marketed in the country in
patented form. An extract of herbal agents, Depura (smilax,
aloe, rhubarb and camomile), is used for intestinal inflammation.
The objective of this research was to study the effect of Depura
in the colonic inflammation pattern induced by acetic acid in
rats. 36 male Sprague-Dawley rats (weight=300-350 g), to which
the drug was administered intrarectally, were divided into three
groups: control group, 2 ml of water; inflamed group, 1 ml of
acetic acid at 10% plus 1 ml of water; and a medicated group, 1
ml of extract of the herbal agent plus 1 ml of acetic acid at 10%.
Body weight was recorded during 4 days after which they were
killed. Macroscopical and microscopical evaluations were
carried out. Tissue edema was determined from the difference
between fresh and dry weight. Treatment with Depura caused a
significant decrease of the macroscopic lesions, 40% of the
edema, in the treated group against 93% in the inflamed group
(p <0,005); 32 % erosion in the treated group against 65% in
the inflamed group (p <0,06); 12% ulceration in the treated group
against 44% in the inflamed group p <0,047); the control group
did not present any lesions. The severity of the microscopic
lesions was significantly less in the treated group in which the
mucosa remained, while in the inflamed group 90% of the mucosa was lost. The control group did not have any lesions. There
was a 44% weight loss in the treated bowels (p<2.4); in the
control group, 30%; and in the inflamed group, 64% (p<0.5).
Weight loss of the control group was of 21.5 g; treated group,
23 g; and inflamed group, 28 g. This study shows a beneficial
effect of this patented traditional mixture of herbal agents, Depura, on experimental inflammation of the colon.
KEY WORDS: Colitis, Depura, inflammations, rats.
Departamento de Ciencias Fisiologicas. Universidad de Carabobo.
e-mail: [email protected]
Recibido: Feb 2002 • Aprobado: Nov 2002
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Salus •RevistadelaFacultaddeCienciasdelaSalud.UniversidaddeCarabobo•Diciembre2002•Vol.6-Nº3
EFECTO DEL DEPURA SOBRE LA COLITIS EXPERIMENTAL EN RATAS
INTRODUCCIÓN
La enfermedad de Crohn y la colitis ulcerativa son enfermedades inflamatorias intestinales humanas de etiología imprecisa (1). La patogenia es influida por el sistema
inmune, la constitución genética, la flora bacteriana intestinal y el medio ambiente (2). Los mecanismos que participan en la iniciación, progreso y cronicidad del proceso
inflamatorio son variados (3). La simulación en modelos
experimentales permite estudiar los mecanismos etiopatogénicos de una forma que no podría ser posible en humanos. Aunque la complejidad de factores no es totalmente
reproducible, los resultados experimentales pueden contribuir con estrategias a ser ensayadas en pacientes, complementando el conocimiento actualmente disponible.
Aun cuando no existen preparaciones fitoquímicas para
el tratamiento de la enfermedad inflamatoria intestinal, la
medicina herbaria China ha sido empleada desde hace siglos en el tratamiento de los procesos inflamatorios intestinales (4). En este trabajo se ensayó el efecto anti-inflamatorio de un preparado comercial obtenido de extractos vegetales sobre la colitis inducida con ácido acético en ratas (5).
MATERIALES Y MÉTODOS
Inducción de colitis con ácido acético y preparación
del tejido. En tres grupos de 12 ratas machos adultas
Sparague-Dawley, de 210-300 g, tomando en cuenta las
recomendaciones internacionales para el uso de animales
de laboratorio (6), se instiló por vía rectal, los enemas:
Grupo Control: 2 ml de agua destilada.
Grupo Inflamado: 1 ml de agua destilada suplementada con 1 ml ácido acético al 10% (pH 2,6).
Grupo Medicado: 1 ml de ácido acético al 10% suplementado con 1 ml de Depura (compuesto de Smilax regelii,
Aloe perryi, Rheum affianale y Antheminis novilis).
usada para evaluar el edema, erosiones y ulceraciones en
esta área.
Peso de los intestinos. Los mismos 4 cm distales del
colon para el estudio macroscópico se pesaron en húmedo, luego se colocaron en estufa a 30 ºC por 24 h y se
pesaron en seco. La diferencia representó el peso de los
intestinos.
Histopatología. Se tomaron 4 cm distales del colon
para evaluación de las lesiones intestinales, mediante cortes teñidos con hematoxilina-eosina, se examinó: cantidad, tipos celulares presentes en la inflamación y dilatación de los vasos sanguíneos.
Análisis estadístico. Se utilizó el programa “Estadística para una comparación de frecuencia relativa”. Se tomaron los valores de P<0,05 como estadísticamente significativos de acuerdo al test de Student.
RESULTADOS
La Fig. 1 muestra el peso de ratas sometidas a inducción experimental de colitis con ácido acético y tratadas
con Depura, se aprecia una pérdida de peso progresiva en
los tres días de observación, y se destaca que las ratas control bajaron en promedio 21,5 g, mientras que las ratas
inflamadas 28 g y las ratas tratadas 23 g.
El estudio macroscópico de la colitis experimental tratada con Depura, muestra en la Fig. 2 una caída significativa del grado de edema (40%) y ulceración (12%) en ratas medicadas, cuando se compara con el edema (93%) y
ulceración (44%) de ratas inflamadas (p<0,005 y p<0,047,
respectivamente). La erosión no presentó diferencias
estadísticamente significativas (p<0,06) entre el grupo
inflamado (65%) y tratado (32%).
Después de 10 seg. en contacto de los enemas con la
superficie mucosa se hizo fluir 1 ml de agua destilada,
manteniendo la rata en posición vertical, cabeza abajo para
retener el enema. El lavado posterior con agua se realizó
para evitar perforaciones por la retención del ácido acético en un solo sitio (7). Los animales fueron pesados diariamente y al día 3 de la exposición al enema fueron sacrificados para evaluar la inflamación aguda. El colon distal
fue disecado, examinado macroscópicamente, 4 cm de tejido colónico tomado para la determinación de peso húmedo y seco y 4 cm de la porción distal para histopatología.
Durante el experimento las ratas tuvieron acceso ad libitum
a alimento y agua.
Estudio macroscópico de la colitis. Los 4 cm más
distales del colon fueron evaluados siguiendo la metodología descrita por otros autores (8); una escala de 0 a 6 fue
Figura 1. Peso total de ratas con colitis inducida con ácido acético
al 10% y tratadas con 1 ml de Depura. La curva (I) representa el
grupo imflamado; la curva (M) el grupo medicado; y la curva (C) el
grupo control. Las barras verticales representan la x ± DS.
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Wix, R. J.; Barrios, A. C.; Gutiérrez, J. E.; Remanton, M.
Figura 2. Grado porcentual de edema, erosión y ulceración intestinal
de ratas con colitis inducida con ácido acético al 10% (grupo
inflamado) y tratadas con 1 ml de Depura (grupo medicado). La
barras verticales representan x ± DS.
A
Microscópicamente la estructura histológica de los intestinos del grupo control fue normal y sin alteraciones
aparentes (Fig. 3B). En los intestinos del grupo inflamados (Fig. 3C), se encontró una pérdida de 90% de la mucosa con inflamación marcada desde la submucosa hasta
la serosa, dilatación de los vasos sanguíneos e infiltrado
celular de linfocitos y polimorfonucleares hasta la serosa.
En el grupo tratado mostrado en la Fig. 3A, se encontró
una regeneración de la mucosa intestinal en 50% de los
casos, mientras que en el resto se observó regeneración
parcial, con inflamación de la mucosa, poca dilatación de
los vasos sanguíneos y una leve infiltración de polimorfonucleares hasta la lámina propia.
El peso de los intestinos en el grupo control mostró, el
día 3, un descenso promedio de 30%, mientras que en las
ratas inflamadas fue de 64% (p<0,05) y en el grupo
medicado fue de 44% (p<2,4) (Fig. 4).
B
C
Figura 3. Histopatología intestinal de ratas con colitis inducida con ácido acético al 10% y tratadas con 1 ml de Depura. (A) muestra el
grupo medicado, (B) grupo control y (C) grupo inflamado.
DISCUSIÓN
Figura 4. Disminución porcentual del peso de los intestinos de ratas
con colitis inducida por ácido acético al 10% (grupo inflamado) y
tratadas con 1 ml de Depura (grupo medicado).
2 0
En el presente trabajo se presentan los resultados sobre
el efecto antiinflamatorio de un extracto (Depura) de hierbas (Zarzaparrilla, Zábila, Ruibarbo y Manzanilla) que se
utilizó para tratar la inflamación de la mucosa del colon
inducida con ácido acético en ratas. Se demuestra que el
Depura tiene acción antiinflamatoria como se evidencia
por la menor pérdida de peso de las ratas y de los intestinos y la recuperación notable tanto macroscópica como
microscópica de la mucosa intestinal.
La inflamación del intestino es una reacción del huésped contra eventos nocivos como el trauma tisular o la
presencia de patógenos (9). Frecuentemente la inflamación intestinal se caracteriza por un franco daño al epitelio, sugiriendo que el Depura modula la respuesta
inflamatoria previniendo daños tisulares.
El peso de los intestinos de ratas tratados con Depura
fue menor que el de las ratas inflamadas, evidenciando un
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EFECTO DEL DEPURA SOBRE LA COLITIS EXPERIMENTAL EN RATAS
menor grado de inflamación y edema en las ratas tratadas,
como lo reportado por otros autores (10). Sin embargo este
efecto no parece relacionarse con una acción neutralizadora
del ácido acético ya que el Depura tiene un pH de 4,2.
Por otro lado, la zábila y el ruibarbo que componen el
Depura pueden tener acción catártica, y explicaría la disminución de líquido tisular acumulado en los intestinos de ratas medicadas. La disminución de peso de los animales puede explicarse además por una baja ingesta de alimentos por
las ratas inflamadas. La disminución en la ingestión de alimentos no se debe a un efecto sobre los sistemas de saciedad intestinal ya que estos se encuentran fundamentalmente en el duodeno, y el colon distal está fuera del sistema de
señalización de la saciedad intestinal (11).
Se ha demostrado que la ingesta calórica en ratas con
inflamación del colon por ácido acético está reducida entre
60 y 80% en los primeros tres días después de inducida la
colitis. La ingestión de alimento se normaliza al cuarto día
de post-tratamiento. La anorexia estuvo asociada con una
significativa pérdida de peso que permanecía durante el periodo de supresión de la ingesta de alimentos (11, 12).
Debido a que la inhibición en la ingestión de alimentos
se establece muy rápidamente se postularía que ello se debe
fundamentalmente al trauma y a las lesiones que resultan
de los procedimientos realizados al inducir la inflamación.
Sin embargo en varios experimentos se ha demostrado que
esta no es una explicación adecuada para la anorexia (1114). Por otra parte las ratas con colitis experimental no
muestran elevación de la oxitocina plasmática, un marcador de los tratamientos que suprimen la alimentación.
La relación importante de la anorexia y la inflamación
en el modelo de colitis inducida por ácido acético indica
que la pérdida de peso está asociada a la fase aguda de la
inflamación. Weingerten (12) ha confirmado que el período de anorexia se correlaciona significativamente con el
grado de inflamación tisular demostrado por los niveles
de mieloperoxidasa, de ahí que es lógico pensar que las
señales anorexígenas estén asociadas con algún factor liberado tempranamente en la cascada inflamatoria, como
postraglandinas o Interleuquina 1(IL-1). Es posible que la
IL-1 se exprese a nivel central y no en la periferia y es
consistente con estudios que evalúan la importancia relativa del factor de necrosis tumoral en la región periférica
y central en la anorexia y en la caquexia asociada con el
cáncer (15, 16). Se concluye que el Depura contribuye a
mejorar la inflamación intestinal, y confirma los efectos
beneficiosos de los medicamentos naturales en el tratamiento de enfermedades.
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