CIMA Memoria 2013 1 ÍNDICE 2 1 Presentación EL CENTRO 2 Estructura y funciones 3 Personal 4 Servicios INVESTIGACIÓN 5 Acuicultura - Dietas sostenibles para lenguado senegalés (Solea senegalensis). - Acción Multitrófricos (AMTI). - Cultivo en criadero, preengorde en batea y análisis de la diversidad genética de la coquina Donax trunculus en Galicia. - REsearch to improve PROduction of SEED of established and emerging bivalves species in European hatcheries. (REPROSEED) - Repoblación de especies marinas de interés comercial. Subproyecto I.– Repoblación de especies de interés comercial en la costa gallega. - Exploring the biological and socio-economic potential of new/emerging candidate fish species for expansion of the European aquaculture industry (DIVERSIFY). 6 Patología - Establishing the scientific bases and technical procedures and standards to recover the European flat oyster production through strategies to tackle the main constraint, bonamiosis. - Caracterización de la situación sanitaria del litoral español relativa a la infección por virus herpes en moluscos bivalvos y evaluación del impacto de la enfermedad. - Perkinsosis de la almeja: expresión proteínica en los hemocitos y plasma del hospedador y en el parásito durante su interacción. - Identificación de marcadores proteicos como indicadores de contaminación ambiental en la almeja fina (Ruditapes decussatus) y en el berberecho (Cerastoderma edule). - Estudio de la marteiliosis que afecta a los berberechos Cerastoderma edule en Galicia. - Nuevo programa de selección de ostra plana, Ostrea edulis, resistente a la bonamiosis, con especial énfasis en el estudio de las mortandades, de posible origen vírica, en las fases de cultivo larvario y preengorde de la semilla. (NOVOSOR). - Poblaciones bacterianas en los criaderos de bivalvos y su influencia en la producción: patógenos y probióticos. - Estudio epidemiológico de la almeja rubia (Venerupis rhomboides) en Galicia afectada por colonias procariotas intracelulares (CPI). Identificación de las CPI. Seguimiento de la estructura de tallas de poblaciones de almeja rubia de 4 bancos de la Ría de Vigo. CIMA Memoria 2013 3 7 Procesos oceanográficos costeros - Las biotoxinas marinas en las zonas de cultivo de mejillón, con especial atención a las toxinas emergentes: presencia en el mejillón y en el sedimento, desarrollo de métodos de detección y evaluación de la utilidad del sedimento para el análisis de riesgo. (TOSE). - Transportadores y metabolitos implicados en la depuración de la toxina ASP en bivalvos, con especial referencia a una especie de eliminación lenta, la vieira Pecten maximus (TRAIDA). Subproyecto 1.- Inhibición del transporte a través de membrana del ácido domoico en moluscos bivalvos. (INDOME). - Efecto de las biotransformaciones de toxinas de tipo diarreico (DSP) en organismos del intermareal sobre las diferencias de toxicidad estimada por LC-MS/MS y bioensayo de ratón y sus repercusiones para los cierres de explotación y la salud humana (ESTINFA). 8 Recursos marinos - Evaluación del crecimiento estacional y anual de navaja (Ensis arcuatus) y longueirón (Ensis silíqua) y longueirón vello (Solen marginatus) en los diferentes ambientes productivos de Galicia. Monitoring de estado reproductivo-gametogénico de estas especies. - Estudio de las especies exóticas presentes en las aguas costeras y rías de Galicia: evaluación de su distribución y abundancia, de sus repercusiones ambientales y socioeconómicas y medidas de prevención y protección. - Estudio de los bancos naturales de coquina: problemática de su desaparición en Galicia. DIVULGACIÓN 9 Artículos en revistas SCI 10 Libros 11 Ponencias y paneles 12 Edición de Publicaciones ASESORAMIENTO 13 Informes 14 Reuniones 15 Otros 15.1. Asesoramiento. Otros 15.2. Revisión de artículos en publicaciones científicas FORMACIÓN 16 Tesis doctorales 16.1. Dirección/Tutorización de tesis 16.2. Participación en tribunales de tesis 16.3. Tesis presentadas 4 17 Cursos 17.1. Cursos impartidos 17.2. Asistencia a cursos 18 Estancias 18.1. Estancias en el CIMA 18.2. Estudiantes en prácticas 18.3. TFM: Máster Interuniversitario Gallego de Acuicultura CUENTAS 19 Gastos 20 Fuentes de financiación CIMA Memoria 2013 5 1 PRESENTACIÓN El Centro de Investigacións Mariñas (CIMA) depende de la Consellería do Medio Rural e do Mar, está constituido por el Centro de Investigacións Mariñas de Corón, en Vilanova de Arousa (Pontevedra), y el Centro de Cultivos Mariños de Ribadeo (Lugo). La función básica de estos centros es el desarrollo de investigaciones encaminadas a conseguir una gestión racional y eficiente de los recursos marinos renovables en el ámbito geográfico de competencia de la Administración autonómica de Galicia. El CIMA actúa como organismo asesor de la administración pesquera gallega en las cuestiones de su competencia que demandan los diferentes sectores productivos a través de las direcciones generales y oficinas territoriales de la Consellería do Medio Rural e do Mar. También, mediante becas, se ocupa de la formación de nuevos investigadores (con tutorías y dirección de tesis doctorales) y de técnicos de laboratorio. La difusión de la investigación se realiza a través de la asistencia y participación en reuniones científicas de diverso carácter (congresos, seminarios, foros, workshops, etc.) y en numerosas publicaciones científicas de diferentes ámbitos. Durante 2013 el Centro de Investigacións Mariñas (CIMA) continuó su labor de investigación científica y tecnológica en temas marinos, orientada principalmente a la acuicultura de moluscos y peces, patología de moluscos bivalvos, bioacumulación y eliminación de toxinas fitoplanctónicas y a la dinámica de poblaciones de invertebrados marinos con interés comercial. Un trabajo cuyos resultados se muestran resumidos en la presente memoria anual de actividades (número 15 de la serie iniciada en 1999). 6 EL CENTRO CIMA Memoria 2013 7 2 ESTRUCTURA Y FUNCIONES La actividad científica del CIMA se reparte en cuatro áreas: Área de Recursos Marinos El objetivo es conocer la biología, ecología y dinámica de población de las especies marinas con interés comercial para mejorar la gestión sostenible de los recursos marinos vivos. Área de Acuicultura Su objetivo es desarrollar y mejorar los procedimientos de cultivo de las especies marinas consideradas de interés comercial. El ámbito de investigación abarca dos grandes líneas: cultivo de moluscos y cultivo de peces. Área de Patología El objetivo es estudiar las alteraciones patológicas que afectan a los moluscos bivalvos con interés comercial, para establecer estrategias eficaces de lucha que permitan minimizar los efectos patogénicos. Área de Procesos Oceanográficos Costeros El objetivo del área es el conocimiento de los aspectos de la oceanografía relacionados con la producción de los recursos pesqueros y marisqueros de Galicia. Las líneas de investigación se relacionan principalmente con los episodios de toxicidad originados por el fitoplancton. 8 3 PERSONAL Director: [email protected] Gerente: D. Barreiro Piñeiro, José (hasta 26.02.2013) [email protected] Centro de Investigacións Mariñas de Vilanova de Arousa Investigadores/as Dr. Blanco Pérez, Juan Carlos D. García Fernández, Antonio [email protected] [email protected] Dra. Cao Hermida, Asunción Dr. Guerrero Valero, Salvador asunció[email protected] [email protected] Dra. Carballal Durán, Mª Jesús Dr. Iglesias Estepa, David [email protected] [email protected] D. Cerviño Eiroa, Antonio Dña. Linares Cuerpo, Fátima [email protected] [email protected] D. de Coo Martín, Alberto Dra. López Gómez, Mª del Carmen [email protected] [email protected] Dr. Fuentes González, José Miguel Dr. Montes Pérez, Jaime [email protected] [email protected] CIMA Memoria 2013 9 D. No Couto, Edgar Dña. Cores González, Mª José [email protected] Dña. Meléndez Ramos, Isabel Dña. Pérez Acosta, Carmen Dña. Penas Pampín, Elena [email protected] Dña. Ramilo Álvarez, Andrea (hasta 31.03.2013) Encargado de mantenimiento [email protected] D. López Ares, Hermes D. Santos Piñeiro, Ignacio [email protected] Jefe de negociado administrativo Dr. Villalba García, Antonio D. García Paz, Gonzalo [email protected] [email protected] Investigadoras contratadas en prácticas Sistemas de información Dña. Martín Morales, Eva (hasta 30.11.2013) D. Carballal Fortes, Félix Manuel Dña. Rodríguez de la Ballina, Nuria [email protected] Analistas de laboratorio Biblioteca Dña. Buceta Barros, Ana Isabel (hasta 10.05.2013) Dña. Álvarez Francisco, Mª Esther Dña. Busto Loureiro, Beatriz [email protected] D. Fariña Iglesias, Juan Antonio D. Fernández Abuín, Isidro (hasta 31.03.2013) Auxiliares administrativos Dña. Fernández Besada, Mercedes D. Lago Torrado, José D. Giráldez Rivero, Ramón [email protected] Dña. González Fontela, Ana Isabel D. Álvarez Araujo, Pedro Pablo Dña. Gregorio Chenlo, Mª Victoria [email protected] Dña. Mariño Cadarso, Mª Carmen Dña. Martín Sánchez, Helena Subalternos-ordenanzas Dña. Martínez Verde, Gemma D. Agra Carregal, Luís Manel Dña. Méndez Pérez, Belén D. Cubiella Granda, Rubén Dña. Miranda Bamio, Mercedes (hasta 16.04.2013) D. Martínez Crespo, José Manuel Dña. Paz Márquez, Marta (hasta 31.05.2013) Limpiador Auxiliares de laboratorio D. García Gamallo, Luis Dña. Campaña Ferro, Emilia 10 Centro de Cultivos Mariños. Ribadeo Responsable de planta Dra. Martínez Patiño, Dorotea [email protected] Investigadores/as Dña. Fernández Álvarez, Aurora Oficial 1º de mantenimiento [email protected] D. Fernández Escudero, Antonio Dra. Nóvoa Vázquez, Susana [email protected] Oficial administrativa Dra. Ojea Martínez, Justa Dña. Neira Páez, Concepción [email protected] [email protected] Investigadora contratada en prácticas Dña. Fernández Pardo, Alejandra (hasta 30.11.2013) Administrativa Dña. Cruzado Estévez, Ana [email protected] Analistas de laboratorio D. Álvarez Llamas, Luís Manuel (hasta 30.06.2013) Subalterna Dña. Bouzamayor Yánez, Mª Victoria Dña. Loureiro Rodríguez, Mercedes Auxiliares de laboratorio Limpiadora Dña. Cotarelo Jardón, Mª José Dña. Fernández Goás, Carmen D. Páez Pérez, Francisco Javier Dña. Ruíz Misioné, Mercedes CIMA Memoria 2013 11 Distribución del personal del CIMA por centros de trabajo CORÓN RIBADEO TOTAL PERSONAL DE PLANTILLA INVESTIGADORES/AS CONTRAT. PRÁCTICAS Investigadores/as 18 4 22 Apoyo a la investigación 18 5 23 Administración 4 2 6 Servicios generales 7 3 10 Inv. contrato prácticas 2 1 3 12 4 SERVICIOS Biblioteca El fondo bibliográfico está compuesto por más de 1.500 volúmenes y 160 publicaciones periódicas de las que 57 se reciben actualmente. Sala de lectura. El acceso es público pero de carácter restringido (presta servicio a usuarios internos y a usuarios externos autorizados). Horario de lunes a viernes: 9 a 14 horas. Salón de conferencias Con capacidad para 80 personas. El acceso es público pero de carácter restringido (presta servicio a usuarios internos y a usuarios externos autorizados). CIMA Memoria 2013 13 INVESTIGACIÓN 14 5 ACUICULTURA CIMA Memoria 2013 15 PROYECTO DE INVESTIGACIÓN EQUIPO TÍTULO: INVESTIGADORA PRINCIPAL: Dietas sostenibles para lenguado senegalés Linares Cuerpo, F. (Solea senegalensis). INVESTIGADOR: INICIO: mayo, 2013 IGAFA: Rodríguez Villanueva, J.L. FINALIZACIÓN: diciembre, 2014 APOYO A LA INVESTIGACIÓN: ENTIDAD FINANCIADORA: Cores González, M.J.; Méndez Pérez, B.; Paz Márquez, Dirección Xeral de Desenvolvemento Pesqueiro M. Consellería do Medio Rural e do Mar Código: PGIDIT-CIMA RESUMEN El objetivo fundamental de la acción de investigación divulgación y explicación de los objetivos y finalidades de “Dietas sostenibles para lenguado senegalés (Solea la acción entre los alumnos facilitando que estos puedan senegalensis)” es su contribución al desarrollo de dietas interactuar y comprender mejor el trabajo que se realiza. sostenibles para lenguado mediante la selección de Desde julio a noviembre de 2013 se realiza un ingredientes vegetales, que puedan ser utilizados como experimento en la fase de engorde del lenguado de sustitutos de la harina y el aceite de pescado y que reemplazamiento de harina de pescado por ingredientes permitan mantener buenas tasas de crecimiento y buena vegetales con macroalgas. Este experimento es el calidad del producto final reduciendo significativamente complemento del realizado en la fase de preengorde del el impacto ambiental del cultivo. lenguado con las mismas dietas en el marco del proyecto Iberomare. En ambos experimentos se prueban frente a Tras los buenos resultados obtenidos en el proyecto la dieta control (75% de reemplazamiento de harina de InterReg Iberomare en lo referente a sustitución en las pescado), 2 dietas que consisten en la sustitución del dietas por 10% de los ingredientes vegetales por harina de las ingredientes vegetales se plantean en esta acción los de lenguado de harina de pescado macroalgas Ulva y Undaria. El experimento se lleva a siguientes objetivos específicos: cabo en 9 tanques (tres con cada una de las dietas) de 1m2 en el IGAFA con 36 ejemplares por tanque de peso Valoración de la viabilidad de las macroalgas como medio 50,50g±0,38 en circuito cerrado y a una ingredientes de los piensos para lenguado. Influencia temperatura de 19±1ºC. Se realizan muestreos sobre el crecimiento, valor nutritivo, estado inmunológico mensuales de peso y talla de los ejemplares y se toman y valor sensorial de los peces. muestras por triplicado para análisis bioquímico de cuerpo entero, músculo, hígado, piel e intestino al Influencia de la sustitución de aceites de pescado por aceites vegetales sobre el crecimiento, principio y al final del experimento. Asimismo al final del estado experimento se realiza un ensayo de respuesta del inmunológico, respuesta al estrés, expresión génica y sistema inmune frente a la infección del parásito valor sensorial del lenguado senegalés. Philastérides y se toman muestras para análisis sensorial. Influencia de la substitución de aceites de pescado sobre la composición corporal y del músculo, hígado, Los resultados del experimento nos indican que el intestino y piel del lenguado senegalés. crecimiento de los ejemplares es más alto con el pienso control (150,09g±11,37) y con el pienso con Ulva Asimismo se plantea como objetivo de divulgación y (159,64g±3,19) que con Undaria (130,67g±8,82) (Fig. 1). docencia la participación de los alumnos del IGAFA en algunas de las actividades, tales como los muestreos y Al finalizar el experimento, los lípidos totales del músculo cálculos de la alimentación e índices de crecimiento varían entre el 1-3% del peso fresco de los ejemplares y realizando los investigadores del proyecto una labor de no existen diferencias entre las diferentes dietas. En el 16 hígado los ejemplares alimentados con la dieta control lípidos de la piel de los ejemplares no presentan presentan más contenido lipídico (10%PF) que los diferencias con las tres dietas y en el intestino los lípidos alimentados con la dieta con Ulva (5,7%PF) no habiendo son más altos con la dieta con Ulva seguidos de Undaria diferencias y menores con la dieta control. significativas entre los ejemplares alimentados con las dos especies de macroalgas. Los Figura 1.- Crecimiento de lenguado con las tres dietas Las proteínas son significativamente más altas en el en este caso al igual que en el realizado con las mismas músculo de los ejemplares alimentados con la dieta dietas en la fase de preengorde el pienso control es ya control (24%PF) seguidos por la dieta con Undaria un pienso con alto grado de proteína vegetal y las (21%PF) y con Ulva (17%PF). En el hígado y la piel no diferencias observadas en la composición bioquímica en se presentan diferencias en las proteínas con las los diferentes tejidos con las tres dietas no parecen ser diferentes dietas y en el intestino las más altas se la causa de las diferencias en el crecimiento de los corresponden con Control y Undaria (12%PF) frente a ejemplares. Ulva (7%PF). El crecimiento alcanzado con el pienso control y con En lo referente al contenido de ácidos grasos (% total) pienso con Ulva es semejante al obtenido previamente no se encuentran diferencias en PUFA, Saturados, en el lenguado con piensos vegetales con bajo contenido Monoinsaturados, SumW3 y SumW6 en los tejidos lipídico. analizados (músculo, hígado, piel e intestino) de los ejemplares alimentados con las tres dietas variando en el Por otro lado, en colaboración con el Departamento de músculo, los PUFA entre el 29-42%, suponiendo el Microbiología de la Universidad de Santiago, se realizó SumW3 entre el 18 y 29% del total y los W6 el 11-12%, un ensayo con el fin de conocer si existen diferencias en los los la respuesta inmune del lenguado alimentado con dietas Saturados representan Monoinsaturados el 27-37%. el 30-34% y En el hígado, los PUFA con macroalgas. Para ello se sometió a los ejemplares a representan el 14-22% del total, suponiendo los W3 el 7- infección con el parásito Philastérides comprobándose 12% y los W6 el 7-11% del total de ácidos grasos, los que no existen evidencias en cuanto a la protección del Saturados el 35-40% y los Monoinsaturados el 43-45%. sistema inmune de los lenguados alimentados con las Las diferencias en la composición bioquímica que han dietas con macroalgas frente a los alimentados con la sido puestas de manifiesto en experimentos anteriores dieta control. de engorde de esta especie cuando se testaba un pienso control con harina de pescado frente a piensos con alto Asimismo y mediante la colaboración establecida con porcentaje Anfaco de reemplazamiento con ingredientes vegetales no se manifiestan en este experimento ya que se ejemplares CIMA Memoria 2013 realizaron análisis alimentados 17 con sensoriales las tres de los dietas comprobándose que no existen diferencias en cuanto a En el año 2014 en el marco de esta acción se realizarán los ensayos en las fases de preengorde y engorde del parámetros sensoriales entre los lenguados alimentados con las tres dietas. lenguado de evaluación de la inclusión de lípidos de origen vegetal en la dieta del lenguado. 18 ACCIÓN DE INVESTIGACIÓN EQUIPO TÍTULO: INVESTIGADORA PRINCIPAL: Acción Multitróficos (AMTI) Pérez Acosta, C. (Guerrero, S.) INICIO: septiembre, 2012 INVESTIGADORES/AS: FINALIZACIÓN: diciembre, 2014 CIMA: Cerviño Eiroa, A.; Linares Cuerpo, F.; Carballal Durán, M.J., ENTIDAD FINANCIADORA: Dirección Xeral de Desenvolvemento IGAFA: Andrés Rivas, M.C.; Pesqueiro. Lastres Couto, M. A.; Pérez Benavente, G.; Rodríguez Villanueva, J.L. Consellería do Medio Rural e do Mar. Xunta de Galicia UDC: Cremades Ugarte, J. Código: PGIDIT-CIMA 12/05 IEO: Salinas Morrondo, J.M. APOYO A LA INVESTIGACIÓN: Fernández Besada, M. RESUMEN La acuicultura multi-trófica integrada (AMTI) incorpora partir de octubre del 2013, se inició un segundo especies de diferentes niveles tróficos en el mismo experimento sistema, conectados por nutrientes y transferencia de crustáceos, concretamente el bogavante, se analizará el energía, creando un mini-ecosistema sostenible. beneficio del cultivo en suspensión en las proximidades introduciendo un cuarto nivel trófico: de la jaula y la batea, y será estudiado el ciclo completo Se persiguen dos objetivos concretos: por un lado, de las algas que el año pasado por razones de tiempo desarrollar a escala piloto un sistema de AMTI en mar apenas pudieron estudiarse. Dichos niveles se sumarán abierto en el que se integren al menos tres niveles al cultivo de peces y moluscos ya iniciado el año anterior. tróficos representativos de los tres tipos de acuicultura: la A continuación se dan los resultados del primer de alimentación (peces), la de extracción orgánica experimento. (moluscos) y la de extracción inorgánica (macroalgas). Se planteó utilizar para este primer estudio las RESULTADOS instalaciones existentes en el Igafa habilitadas para 1.- Cultivo de moluscos cultivo de bivalvos y peces. Se trabajó con besugo, Mejillón. El crecimiento en talla, en el muestreo final, fue mejillón, almeja rubia y babosa y la macroalga kombu de alrededor de un 4% mayor en la jaula que en la batea, azúcar. por el contrario los mejillones presentaron mayor contenido en carne en la batea (11% en peso fresco), Los beneficios de la integración fueron evaluados con diferencias más acusadas en términos de peso seco mediante la comparación de la productividad de los (19%). Tanto el peso vivo como el peso escurrido (animal distintos eslabones integrados en relación a las cifras de entero) fueron similares en ambos sistemas, aunque el referencia así como por el estudio analítico final de los contenido en agua fue ligeramente superior en la jaula. moluscos y macroalgas tanto a nivel patológico como Las diferencias fueron significativas tanto a nivel de talla bioquímico (glúcidos, proteína, lípidos totales y ácidos como de peso de carne, pero si bien fueron importantes grasos omega 3). Por otra parte, se validó la utilización en peso seco, en términos de longitud la diferencia de Saccharina latissima como biofiltro, mediante la apenas supone 3 mm. analítica comparada de la biomasa de algas. Respecto al rendimiento en carne obtenido, fue mayor en El primer experimento que incorporó tres niveles tróficos la batea (44%) que en la jaula (42%). diferentes: peces, moluscos y algas, cultivados en jaula y en batea, tuvo lugar entre octubre 2012- junio 2013 y a CIMA Memoria 2013 19 Almeja. Se observa una pequeña diferencia en el branquia fueron mayores en los mejillones cultivados en crecimiento de la almeja en las distintas ubicaciones la batea (60,0%) que en los cultivados en la jaula siendo más favorable este crecimiento en la semilla (46,7%) así como las prevalencias medias de los ciliados cultivada en la jaula donde se encuentran los peces. observados en el digestivo de mejillones cultivados en batea (16,7%) que en los cultivados en la jaula (11,1%). 2.- Análisis bioquímicos En ningún caso anteriormente citado las diferencias Mejillón (Mytilus galloprovincialis): La composición en encontradas fueron estadísticamente significativas. proteínas varía entre el 40-43% del peso seco en el muestreo medio y entre el 26-27% en el final y los lípidos Almeja rubia (Venerupis romboides). Las almejas totales entre 12-13% en el medio y 10-11% en el final no estaban muy poco parasitadas, lo que es normal en existiendo diferencias significativas entre los valores almejas de este tamaño. Los parásitos detectados son obtenidos en batea y jaula. comunes en estas almejas. En el control inicial, solo se observaron parásitos en branquia. En las almejas En general no existen diferencias significativas entre los cultivadas en batea se detectaron copépodos en dos tipos de cultivo en los grupos de ácidos grasos digestivo y metacercarias en el pie, ambos con muy baja (PUFA, saturados, MUFA, sum.W3 y Sum.W6) ni en los prevalencia, que no fueron detectados en las almejas ácidos grasos más importantes: 20:5n-3 (EPA), 22:6n-3 cultivadas en la jaula de peces. (DHA) y 20:4n-6 (ARA), observándose sólo ligeras diferencias en los MUFA en el muestreo final siendo más 4.- Experiencias realizadas con macroalgas altos en batea que en jaula. Outdoor: La integración del cultivo de Saccharina latissima tanto con los de peces en jaula como con los Almeja rubia (Venerupis rhomboides). Las proteínas y de moluscos en batea es muy positiva, ya que la especie los lípidos (%MSLC) varían en la almeja rubia al final del prácticamente duplica su contenido en proteína, lo que experimento 14,5-16% además de suponer una depuración real y activa del respectivamente, no existiendo diferencias significativas entre 31-33,5% y agua en formas de nitrógeno excretadas por los peces y en la almeja cultivada en batea y jaula. moluscos aumenta su valor comercial como alga alimentaria. Almeja babosa (Venerupis pullastra). No existen diferencias significativas en los valores de proteínas y Indoor: Tanto Saccharina latissima como Gracilaria dura lípidos obtenidos en los dos sistemas de cultivo (batea y pueden jaula) variando las proteínas entre el 38 y el 42% y los biológicos en sistemas IMTA en tierra con el fin de poder lípidos totales suponen el 13% (%MSLC). Los PUFAW3 cubrir todas las épocas del año. Además ambas suponen el 37% y los PUFAW6 el 2%. No existen especies por sus cualidades alimenticias y/o ser materias diferencias significativas en la composición de ácidos primas para la obtención de ficocoloides pueden servir grasos de ninguna de las almejas estudiadas. para obtener un rendimiento extra a las instalaciones. 3.- Análisis patológicos 5.- Análisis de biomasa en jaula de peces Mejillón (Mytilus galloprovincialis). Todos los parásitos y El incremento de biomasa de besugo en 6 meses fue de alteraciones patológicas son comunes en los mejillones 800 kg con un suministro de pienso de 71 kg. ser alternativamente usadas como filtros cultivados en batea. Por su poder patogénico, destaca la presencia de Marteilia refringens, cuya prevalencia fue 6.- Mantenimiento y análisis del crecimiento de mayor en los mejillones cultivados en batea (16,7%) que crustáceos en cultivo semi-intensivo en los cultivados en la jaula de peces (6,7%). En los meses de abril y octubre, se llevaron a cabo dos cultivos larvarios de bogavante (Homarus gammarus) a En los mejillones cultivados en la jaula de peces, las partir de larvas obtenidas de dos hembras ovadas del prevalencias medias del copépodo Mytilicola intestinalis IGaFA. Las postlarvas obtenidas se llevaron hasta (63,3%) y del turbelario Urastoma cyprinae (50,0%) estadío V en tanques de nursery en tierra. fueron mayores que en los mejillones cultivados en batea (M. intestinalis 61,1% y U. cyprinae 42,2%). Las Cada lote fue cultivado por separado: el lote de prevalencias medias de los ciliados observados en la primavera, con juveniles en estadíos V obtenidos a partir 20 de las larvas nacidas en abril, que fueron puestos en medido previamente la longitud del cefalotórax. Las cultivo suspendido en junio y el lote de otoño, formado cuerdas fueron fondeadas a 8 m de profundidad (jaula) por los estadíos V de larvas nacidas en octubre, puestos para situarse justo por debajo del límite inferior de la en cultivo suspendido en noviembre. El cultivo fue jaula o a 5 m (batea), contados a partir de la parte realizado paralelamente en batea y en jaula. Para cada superior del grupo de cestos. lote (primavera y otoño) se dispusieron 3 cuerdas por tratamiento (3 cuerdas en jaula contra 3 cuerdas en Los resultados del 1º cuatrimestre para el lote de batea). Cada cuerda estaba compuesta por 8 pisos de primavera, indican un crecimiento y supervivencia similar cestos ostrícolas con 4 cuarterones con tapa por piso. En en ambos sistemas cada cuarterón se coloca un ejemplar al que se le ha CIMA Memoria 2013 21 y evolucionan normalmente. PROYECTO DE INVESTIGACIÓN EQUIPO TÍTULO: INVESTIGADORA PRINCIPAL: Cultivo en criadero, preengorde en batea y análisis de la Nóvoa Vázquez, S. diversidad genética de la coquina Donax trunculus en Proyecto coordinado Galicia. INVESTIGADORES/AS: INICIO: diciembre, 2010 Cerviño Eiroa, A.; Fernández Pardo, A.; Guerra FINALIZACIÓN: diciembre, 2013 Díaz, A. ENTIDAD FINANCIADORA: APOYO A LA INVESTIGACIÓN: Xunta de Galicia. Álvarez Llamas, L.M.; Bouzamayor Yáñez, V.; Dirección Xeral de Investigación, Desenvolvemento e Cotarelo Jardón, M.J.; Páez Pérez, J.; Ruíz Innovación. Misioné, M. RESUMEN Este proyecto coordinado ha sido financiado por la Xunta este período para así, adelantar la salida de la semilla y de Galicia dentro del programa sectorial de investigación facilitar su adaptación al medio natural evitando su aplicada e I+D en el Área de Medio Marino. Consta de preengorde en tres subproyectos: temperaturas y condiciones del medio no facilitan su meses de invierno, donde las crecimiento. Subproyecto 1. Análisis genético, llevado a cabo por el grupo XENOMAR de la Universidad de A Coruña (UDC). Para conseguir este objetivo se hicieron pruebas de: Subproyecto 2. Preengorde en batea, desarrollado por temperatura; de comparación de progenitores de dos la empresa Ameixa de Carril S.L. localidades Subproyecto 3. Cultivo larvario y postlarvario, llevado a determinación de una temperatura que garantice un cabo por el Centro de Cultivos Mariños de Ribadeo largo (CIMA). optimización de las condiciones de mantenimiento de los diferentes mantenimiento (Vilarrube en criadero y y Abrela); pruebas de de progenitores comparando dos sistemas (abierto y El objetivo principal, es contribuir a la recuperación y cerrado) y manteniéndolos con y sin sustrato. aumento de producción de la coquina Donax trunculus en Galicia y para ello, se han abordado y desarrollado Para las pruebas de temperatura se recolectaron dentro actividades ejemplares adultos de coquina en febrero del banco encaminadas a cubrir los objetivos propuestos y de los tres subproyectos, natural de Vilarrube (NO de Galicia). Las temperaturas específicos dentro de cada uno de ellos. seleccionadas para la experiencia de acondicionamiento, fueron: 21°C (temperatura máxima en el medio natural El Subproyecto 3 llevado a cabo por el CIMA, ha de la especie); 17°C (temperatura próxima a la desarrollado los siguientes objetivos a lo largo de estos gametogénesis) y 13°C (temperatura del medio natural tres años: durante la recolección de los ejemplares). La prueba duró 22 días y para evaluar el estado de desarrollo a) Definir las condiciones de acondicionamiento de gonadal, cada 2 semanas, se realizaron muestreos los reproductores separando la gónada del resto del cuerpo del individuo Según estudios previos realizados con reproductores de para el estudio histológico. Se calculó también el Donax trunculus (Linnaeus, 1758), se sabe que el siguiente Índice de condición gonadal: ICG = (Peso período de madurez y puesta abarca de marzo a agosto. fresco gónada/Peso fresco concha)*100. A medida que Por su avanza el tiempo de acondicionamiento, se produce una acondicionamiento es para obtener desoves antes de evolución en el desarrollo gonadal siendo más acusado estrategia de cultivo, el interés de 22 en los individuos tratados con temperatura más elevada Dos meses después, en enero, se empezó con esta (21°C). Estos resultados son menos positivos en los prueba con individuos de Vilarrube que se mantuvieron a adultos acondicionados a 17ºC pero a los 14 días, tienen 17ºC. Con esta prueba se pudo concluir que la lugar puestas de aproximadamente 6 millones de larvas maduración gonadal es más rápida en progenitores en los tanques tratados a 17°C y 21°C. La maduración que parten con mayor Índice de condición; la gonadal en coquinas acondicionadas a 21°C es más temperatura de 21ºC es una temperatura que expone rápida y las puestas son más abundantes, con todo, a los progenitores a problemas de mortalidad en el porcentaje de supervivencia es menor (28%). acondicionamientos largos, se selecciona 17ºC como la mejor para un acondicionamiento largo o para La prueba de comparación de localidades se inició en el mantener a los progenitores en criadero durante más mes de noviembre y los individuos, procedentes de tiempo y, noviembre, podría ser un mes excelente de Vilarrube y de Abrela, se mantuvieron a 21ºC y 17ºC. El acondicionamiento para lograr adelantar las puestas muestreo inicial indica que, la mayor parte de los y que la semilla salga al medio natural en los meses individuos, se encuentran en estadío E1 (inicio del de primavera. desarrollo gametogénico). Los índices de condición son altos aunque en mayor proporción en los progenitores Para procedentes del banco de Vilarrube. Las supervivencias acondicionamientos más ensayando nuevos sistemas de finales, mantenimiento fueron de un 15% en los progenitores concluir este de los objetivo se progenitores hicieron dos (sistema recirculación), controlando un nuevo parámetro como es de Abrela, a pesar de esto, se observa que en los la tasa de oxígeno y, comprobando su mortalidad y la individuos procedentes del banco de Vilarrube, la eficacia en la madurez gametogénica manteniéndolos maduración gonadal se produjo de un modo más rápido con y sin arena. Se puso a punto un nuevo sistema, de y los índices de condición se mantuvieron más elevados. recirculación, para acondicionar adultos en el que las Por los características a destacar son, por una banda, el mayor progenitores procedentes del banco de Vilarrube para las todos estos motivos, se seleccionaron aprovechamiento del fitoplancton añadido para su siguientes pruebas de acondicionamiento. alimentación y, por otra, la aireación del agua se obtuvo provocando que su caída fuera en cascada (Figura 1). Fitoplancton Cascada Figura 1. Esquema del sistema de recirculación y del abierto utilizados para probar el efecto de la alimentación en el acondicionamiento de Donax trunculus de procedentes de Vilarrube y un 20% en los procedentes Agua SIST. RECIRCULACIÓN SIST. ABIERTO Renovación agua Fitoplancton CIMA Memoria 2013 23 Con la misma cantidad de fitoplancton, se compararon En este sistema se realizó una prueba en diciembre, con mortalidades individuos individuos de Vilarrube, para corroborar la eficacia de su mantenidos en sistema abierto y en sistema de y mantenimiento con sustrato. En uno de los tanques se recirculación donde, esta misma cantidad de alimento, mantuvo la coquina en arena y en el otro sin ella y, a lo no se pierde puesto que retorna al tanque donde se largo de un mes, se comprobó la mortalidad y la eficacia encuentran los madurez gonadal individuos. Según en resultados para conseguir la madurez gonadal (figura 2). Los obtenidos de Índice de condición y madurez gonadal, el resultados obtenidos al cabo del mes que duró el sistema más eficaz es el de recirculación ya que, con experimento muestran que, los individuos mantenidos en la misma cantidad de alimento, no se pierde como ocurre arena presentan una mortalidad más baja que los que en el sistema abierto y los individuos maduran antes. estaban sin arena y, además, alcanzan un Índice de Con todo, se pone de manifiesto que, no es la condición más alto (10,2 frente a 7,9) llegando a la temperatura el factor más determinante, sino la madurez y puesta mucho antes. Los que permanecieron alimentación. En esta especie se consigue avanzar su en arena tienen su primera puesta a los 47 días con una estado gametogénico, si se garantiza una cantidad de mortalidad del 48%, pero los que quedaron sin arena no alimento de desovan hasta el día 73 y con una mortalidad del 73%. Recirculación, asegura su mayor aprovechamiento con Comprobada la eficacia del sistema de recirculación, los el consiguiente ahorro que ello supone. resultados de acondicionamiento y mortalidad son abundante por lo que, los el sistema mejores si los adultos se mantienen enterrados en arena. Figura 2. Esquema del sistema de recirculación ensayado para el acondicionamiento COQUINA CON ARENA COQUINA SIN ARENA de D. trunculus Renovación agua Adicción fitoplancton TANQUE DE RENOVACIÓN Y DE ADICCIÓN DEL ALIMENTO b) Optimizar el cultivo en criadero indiv./mL, con agua de mar filtrada a ±21ºC y aireación Cultivo Larvario constante. La alimentación se basaba en una dieta mixta Inicialmente y, como base de dicho protocolo que se fue de microalgas cultivadas en el sistema continuo de mejorando con sucesivas pruebas de densidades, fitoplancton ya mencionado. Cada dos días se realizaban temperaturas y alimentación, la metodología del cultivo los cambios totales del agua, momento en el que se era la siguiente: los huevos de los desoves obtenidos, tomaban muestras para determinar la mortalidad, el tanto de forma natural como de forma inducida, realizan crecimiento y los cambios morfológicos de las larvas. el tanques Cuando se observaba que, el 50% de los individuos del troncocónicos de 200 litros, a una densidad de 10 cultivo presentaban pie, se continuaba su cultivo en los desarrollo embrionario y larvario en 24 mismos tanques pero, dentro de cilindros con fondo de de agua, se toman muestras de aproximadamente 100 malla a los que se les incorporaba una pequeña cantidad larvas que se observan al microscopio óptico para de arena para facilitar su metamorfosis o transformación determinar los cambios morfológicos y para obtener a postlarva. datos de crecimiento. También se realiza un conteo de individuos a lo largo del desarrollo larvario para A lo largo de estos tres años que duró el proyecto se conseguir datos de supervivencia. Según los resultados realizó el seguimiento de todos los desoves obtenidos, obtenidos, las larvas alimentadas con la dieta 3, son las con eso se pretendió ajustar y describir un protocolo de primeras en alcanzar la fijación a los 26 días de cultivo, cultivo larvario en criadero para D. trunculus. Así mismo, con una talla de 303,08 µm. Tres días más tarde, a los para la obtención de los desoves, se mejoraron las 29 días de cultivo, alcanzan la fijación las alimentadas técnicas de inducción. con la dieta 2, con una talla de fijación de 323,05 µm. Las larvas alimentadas con la dieta 1, son las que más En relación a la inducción de los desoves, los mejores tarde fijan (32 días de cultivo y su talla de fijación es de resultados se obtuvieron manteniendo a los progenitores 318,15 µm). En cuanto a la supervivencia, la dieta 3 es la en seco durante períodos de por lo menos 8 horas y que presenta un porcentaje mayor, 36%. Le sigue la mediante shocks térmicos comprendidos entre los dieta 2 con un 23,2% y es la dieta 1 la que presenta una 15º y 18ºC. Con respecto a los resultados de elevada mortalidad, llegando a la fijación sólo un 4% de crecimiento, analizando todos los datos obtenidos de los la cantidad inicial de larvas. Se puede decir que, una desarrollos larvarios durante estos tres años, se puede dieta que incorpore la especie Chaetoceros en una decir que: la duración aproximada del cultivo larvario alta proporción, va a provocar mejores rendimientos de la coquina es de un mes, llegando a la fijación en en 23-30 días con tallas de ±300 µm, momento en el que mortalidad. los cultivos tanto de crecimiento como de se debe añadir un sustrato en el sistema de cultivo, para facilitar su metamorfosis. Para continuar evaluando otros parámetros de cultivo que pueden mejorar la producción de postlarvas en los Conocidos estos datos, quedaban aún parámetros que cultivos larvarios, se realizaron pruebas con tres podrían mejorarse y uno de ellos era la dieta. En general densidades distintas: 3 larvas/mL, 5 larvas/mL y 10 se observaba que la mezcla de varias especies larvas/mL. Según los datos, las densidades de 3 y 5 microalgales (dietas mixtas) tenía un efecto positivo larvas/mL, parecen crecer de un modo más rápido. Sus sobre el crecimiento de larvas de bivalvos marinos, en porcentajes de supervivencia fueron de un 18% y un comparación, con las dietas monoespecíficas puesto 25% respectivamente y ambas, fijaron a los 25 días de que, las diferencias en las carencias nutritivas son cultivo. La densidad de 10 larvas/mL, fija a los 27 días de compensadas entre las distintas especies utilizadas. En cultivo y su porcentaje de supervivencia fue de un 28%. general, se utilizaban dietas que combinen diatomeas junto con otras especies con el objetivo de obtener Por lo tanto, con la densidad de 5 larvas/ml se mejores rendimientos y una de estas diatomeas es obtienen buenos resultados para el cultivo larvario de Chaetoceros sp. Diferentes estudios demostraron que la coquina, sin excluir una densidad inicial de 10 alimentación, ya a nivel de progenitores, debe incorporar larvas/ml cuando las circunstancias del criadero o de ácidos grasos poliinsaturados de 20 y 22 carbonos y con la puesta lo exijan. más de tres dobles enlaces que son, verdaderos ácidos grasos esenciales (EFAs). Entre estos, destaca el DHA El último parámetro que se intentó optimizar fue el de la (22:6n3) y EPA (20:5n3) siendo este último bastante temperatura. abundante en la diatomea Chaetoceros sp., lo que nos progenitores acondicionados en el criadero como, de los dio la base para realizar este estudio. A partir de recientemente llegados del medio natural, se hicieron reproductores del banco natural de Vilarrube se obtienen cultivos en los que se mantenían a temperatura ambiente desoves para realizar las experiencias con distintas (16ºC) y otros en los que se siguió empleando la dietas: Dieta 1. Isochrysis sp.-Diacronema lutheri (1:1); temperatura habitual de 21ºC. Los mejores resultados Dieta 2. Isochrysis sp.-Diacronema lutheri-Chaetoceros fueron con la temperatura alta (21ºC). Con sp. (2:1:1); Dieta 3. Isochrysis sp.-Diacronema lutheriChaetoceros sp. (1:1:2). Coincidiendo con los cambios CIMA Memoria 2013 25 desoves obtenidos tanto de Cultivo Postlarvario Para finalizar y con el objetivo de mejorar el crecimiento La diferencia entre ellos radica en que, en el sistema y por lo tanto adelantar la salida de semilla del criadero, abierto, existe una entrada y salida constantes de agua y se ensayaron dos sistemas de cultivo postlarvario: un fitoplancton mientras que, en el sistema cerrado, el sistema de cultivo abierto frente a otro cerrado (Figura 3). cambio de agua se realiza cada dos días y el fitoplancton A los 50 días del desove, se trasladó la semilla de 0,7 se añade de forma manual una vez al día. En ambos mm a tanques troncocónicos en circuito abierto y cerrado sistemas se hacen muestreos cada 15 días para para estudiar la efectividad de ambos sistemas. controlar parámetros de crecimiento y supervivencia. Según los resultados a los 100 días de cultivo, la semilla trasladaron al minicriadero de O Vicedo, donde se realizó cultivada en el sistema abierto consiguió una talla de 2,3 el cultivo larvario y postlarvario siguiendo la metodología mm. La cultivada en el sistema cerrado, presentó una aplicada en ambos centros hasta el momento. De todas talla final de 1,8 mm. La supervivencia fue algo superior las puestas no se consiguió semilla dado que, al llegar a en el sistema de cultivo cerrado (92%) frente a un 74% una talla de ±1000 µm todos los individuos mueren. en el sistema abierto. Aunque la supervivencia es Posiblemente, el motivo fue debido a que faltaba perfilar mayor en el sistema cerrado (92% frente a un 74%), el una metodología adecuada para el minicriadero de O crecimiento de la semilla se produce de un modo Vicedo, dadas sus condiciones especiales. Realizados más rápido en el sistema abierto por lo que puede salir algunos cambios en los puntos críticos analizados, a antes al medio natural. partir de los desoves siguientes, ya se comienza a sacar Figura 3.Esquema de los sistemas ensayados para el preengorde de D. trunculus semilla para que pueda ser preengordada en las bateas c.- Transferencia de las técnicas de cultivo a escala de Vilargarcía y de Camariñas. En total, se obtuvieron superior semiindustrial 2.294.086 unidades de semilla de coquina que fueron En el criadero del CIMA de Ribadeo, se lleva realizando saliendo al medio natural (para su preengorde) desde el el cultivo de esta especie obteniendo una buena mes de septiembre-octubre y se fueron entregando a producción de semilla, aunque el objetivo de este medida que las condiciones ambientales eran óptimas. proyecto es optimizar acondicionamiento y en ciertos los aspectos cultivos en larvarios el y Todos los objetivos fueron desarrollados al 100% salvo postlarvarios para mejorar esta producción. Para cumplir algunos aspectos del cultivo postlarvario, concretamente el tercero de los objetivos suscitados se realizaron en lo que se refiere a la utilización de sustrato. Hasta el cultivos larvarios en el minicriadero de O Vicedo momento, cuando las larvas llegan a la fijación, se les transfiriendo las técnicas de cultivo ya desarrolladas en añade arena para que terminen la metamorfosis y en Ribadeo. De cuatro partidas de progenitores recogidos esta arena se realiza el cultivo postlarvario. Aunque se en el banco natural de Vilarrube, se comenzaron a hicieron pruebas preliminares no se pudo concluir si esta obtener desoves en el mes de febrero. Todos ellos, se adición era totalmente necesaria y por lo tanto, hará falta 26 la realización de más pruebas que no fueron posibles en garanticen minimizar el impacto de la siembra en las este proyecto debido a los recortes de presupuesto a poblaciones naturales. que fue sometido este parámetro, seguirá siendo objeto de estudio en otros proyectos puesto que, la eliminación d.- Otro motivo por el que se deben de estudiar de la arena en los cultivos mejoraría bastante su genéticamente más lotes de semilla, es el análisis de manipulación y, si fuese necesaria paternidades que determine la participación de todos los su utilización, es preciso determinar qué tipo de sustrato es el más individuos incluidos en el lote de reproductores. adecuado. En relación al Subproyecto 2, desarrollado por la Durante este período, el grupo de XENOMAR (UDC) empresa Ameixa de Carril S.L., en estos años se obtuvo llevaron a cabo tareas como: el estudio de las resultados que llevan a las siguientes conclusiones referidas al subproyecto 1: condiciones óptimas de preengorde de la coquina en batea (estabulación de la semilla, control de parámetros a.- Se aislaron 19 marcadores microsatélites en D. de crecimiento y ambientales y calendario de las trunculus genotecas operaciones de desdoble) y la implantación de nuevos enriquecidas y se optimizaron tres PCRs multiplex que sistemas de preengorde (instalación del sistema de aire amplifican simultáneamente 7 o 4 loci. La amplificación forzado y modificación de la batea, labores de limpieza de estos loci microsatélite permitió realizar análisis de del sistema, mejora y adaptación del mismo). En base a diversidad los resultados obtenidos, se llega a las siguientes mediante genética, construcción estructura de poblacional y paternidades por lo que serán útiles para estudios conclusiones: futuros de esta especie. a.- La coquina presenta poca resistencia a las b.- El análisis de microsatélites en los tres bancos condiciones ambientales desfavorables por lo que no se naturales estudiados (Vilarrube, O Barqueiro y O Vicedo) debe iniciar el proceso de preengorde en invierno u puso de manifiesto la ausencia de diferenciación otoño. El crecimiento en invierno es muy lento y presenta genética. mortalidades elevadas en todos los rangos de talla. En el caso de tener que sembrar la coquina en este periodo, la c.- El lote de reproductores empleado en el criadero semilla de mayor talla (tamiz 3000 µm) tiene una puede considerarse representativo de la población supervivencia mayor, por lo que sería necesario natural de la que proceden (Vilarrube). El estudio de la prolongar la permanencia en el criadero. diversidad genética, de uno de los lotes de semilla que se obtuvieron en criadero, mostró una reducción de la b.- El sistema de preengorde por flujo forzado parece ser variabilidad genética, por lo que deben continuar lo más interesante, pero se hicieron modificaciones para estudios genéticos de más lotes de semilla que solventar todos los problemas surgidos durante el garanticen la representatividad de toda la producción del proyecto y para mejorar la manejabilidad de la semilla en criadero y, de esta forma, llegar a conclusiones que los trabajos de limpieza y desdoble. CIMA Memoria 2013 27 PROYECTO DE INVESTIGACIÓN EQUIPO TÍTULO: INVESTIGADOR PRINCIPAL: REsearch to improve PROduction of SEED of established Nicolas, J.L. (UMR M100, France) and emerging bivalves species in European hatcheries. (REPROSEED). INVESTIGADORES/AS: CIMA: Martínez Patiño, D.; Nóvoa Vázquez, S.; INICIO: 2013 Ojea Martínez, J. FINALIZACIÓN: 2015 USC: Lopez Romalde, J. UMR-France: Sourdaine, P.; Suquet, M. ENTIDAD FINANCIADORA: Univ Bergen-Norway: Jacobsen, A.; Magnesen, T. Proyecto europeo FP 7-KBBE-2009 University of Bangor: G.B.: Beaumont, A. IMARES-Holland: Kamermans, P.; UMR-France: Robert, R. AquaTT-Ireland: Murphy, D. SYSAAF, France: Haffray, P. APOYO A LA INVESTIGACIÓN: CIMA: Álvarez Llamas, L.M.; Bouzamayor Yáñez, V.; Cotarelo Jardón, M.J.; Páez Pérez, J.; Ruíz Misioné, M. RESUMEN El CIMA de Ribadeo participa en el proyecto Europeo 1. Controles del agua de entrada y del circuito de REPROSED dando soporte técnico al grupo de la USC agua en el aspecto de obtener y proporcionar larvas de almeja La calidad del agua de mar utilizada en una instalación fina y japonesa (V. decussata y V. philippinarum), para la de cultivo es determinante para su buen funcionamiento. realización de ensayos de patogenicidad y de probiosis; Uno de los parámetros más importantes es la “calidad para lo cual se mantiene todo el sistema de cultivo y microbiológica”. Las características del agua de entrada control de los distintos aspectos que influyen en la determinarán los tratamientos necesarios para que sea producción del criadero. utilizable en el criadero. Las tareas realizadas fueron: Además, las instalaciones tienen un circuito de tuberías AGUA BRUTA DEPÓSITO SALA FILTROS ARENA 25 – 50 m INVERNADERO LARVARIOS SEMILLA AIE tanques ensayo cartucho 3 m ca rt u ch o3 m REPRODUCTORES cartucho 3 m UV cartucho 3 m AIT tanques fitoplancton AIB bolsas fitoplancton semilla ASBF sala bolsas ARF ARC fría caliente acondicionamiento reproductores ASBL sala bolsas ASF fría ASC ARAF caliente 28 fría ARAC ALT ALF ALNT ALNF caliente larvas tanques larvas grifo navaja tanques navaja grifo complejo, utilizando distintos tramos y tratamientos del sólo ligeramente la carga media de bacterias agua para abastecer los diferentes compartimentos del heterótrofas marinas, y no garantiza una reducción de criadero (reproductores, larvarios, semilla y fitoplancton). los valores máximos. En cuanto a la media de vibrios, va Las propias tuberías pueden funcionar como reservorios desde valores mínimos a estimaciones superiores a las de bacterias si estas llegan a colonizarlas, formando obtenidas para los puntos sin tratamiento adicional. biopelículas cuando la limpieza y mantenimiento no son los adecuados. El uso de radiación UV persigue eliminar la microbiota presente en el agua, sin embargo según los resultados Para la siembra de muestras se utilizan los medios Agar obtenidos su eficacia es irregular. Esto implica un riesgo Marino (AM, Pronadisa), para recuento de bacterias de proliferación excesiva de bacterias que resisten el heterótrofas marinas, y Tiosulfato-Citrato-Bilis-Sacarosa tratamiento, en un ambiente favorable para el desarrollo (TCBS, Oxoid), medio selectivo para vibrios. del que además se eliminan posibles competidores, entre los que pueden estar bacterias beneficiosas. La Las muestras se recogen semanalmente, en recipientes importancia se agrava al ser la línea utilizada para los estériles. Inmediatamente se llevan al laboratorio de cultivos larvarios. Por todo ello, sería necesaria la Microbiología de la planta y se procesan. Para ello se revisión de este sector, sin embargo, la excelente calidad hacen las diluciones necesarias, en tubos estériles con microbiológica del agua utilizada en la planta sugiere 4,5 ml de agua de mar estéril (AME), sembrándose 100 también la posibilidad de suprimir el uso de la radiación µl en los medios AM y TCBS. Las placas se incuban a UV. 25ºC. El medio TCBS se lee en 24-48 horas, para evitar los problemas de reversión de color de las colonias. El 2. Control del fitoplancton AM se debe dejar hasta 7 días, para permitir el En el criadero se mantienen diferentes tipos de cultivos crecimiento de los tipos más lentos, como pueden ser de microalgas, de las especies Isochrysis galbana, I. algunas bacterias pigmentadas. galbana T-iso, Pavlova lutheri, Chaetoceros calcitrans, C. gracilis, C. mülleri, Skeletonema costatum, Tetraselmis Los puntos de muestreo se determinaron en función de los tratamientos calentamiento,...) (filtración, en los radiación diferentes suecica y Phaeodactylum tricornutum. ultravioleta, apartados del Esta mezcla se suministra regularmente, llevando criadero, así como de los tramos de tuberías de consigo una importante carga bacteriana, ya que no se conexión. trata de cultivos axénicos. El control de esta carga que entra rutinariamente en el sistema de cultivo es El agua que sólo pasa por el filtro de arena general primordial para reducir los riesgos de proliferación de presenta una buena calidad, desde el punto de vista patógenos oportunistas. En esa línea, los mayores microbiológico. esfuerzos se encaminaron al conocimiento de las poblaciones de vibrios, principales patógenos de cultivos El tratamiento con filtro de cartucho ofrece unos larvarios, además de estimar los contenidos de bacterias resultados muy irregulares en lo que respecta a la carga marinas heterótrofas totales. tanto de bacterias heterótrofas marinas como a poblaciones de vibrios. En cuanto a la función de 2.1. Fitoplancton de cámara eliminación de materia en suspensión, en este caso Se cultiva en matraces de 6 l. a una temperatura de 17- parecen suficientes los filtros de arena, a juzgar por los 19ºC y con iluminación continua. Se utiliza agua que resultados del agua que no recibe más tratamiento. Un pasa por filtro de arena, autoclavándose en los problema de estos filtros puede ser el de su correcto botellones una vez llenos. Los recuentos medios son de mantenimiento, ya que si no se limpian y se cambian en 10.000 células por microlitro (cél/µl). Sirve como alimento el momento adecuado pueden convertirse en un punto para los cultivos larvarios y para inocular las bolsas. Se de acumulación de bacterias que se incorporarían al recoge una muestra que es mezcla de las diferentes sistema. especies. La combinación de filtro de cartucho-radiación UV reduce CIMA Memoria 2013 29 2.2. Cultivo en bolsas Se abren los ejemplares y se lavan con agua de mar Se mantienen cultivos en bolsas de 30-40 l., a la estéril (AME). Se toma un trozo de gónada, cortada temperatura ambiente del invernadero y con luz solar. asépticamente, con un peso conocido (≈ 0.08 g). Se Los recuentos medios son de 7.000 cél/µl. coloca en un mortero estéril y se homogeniza en 1 ml de AME. Se hacen las diluciones seriadas necesarias, Se utiliza para alimentar reproductores y semilla. Se sembrándose en los medios AM y TCBS. Los datos vacían las bolsas en un tanque de 1.500 l. donde se obtenidos se expresan en ufc/g de gónada. mezclan las diferentes especies, se rellena con agua y entonces se recoge la muestra para microbiología antes Se realizan muestreos a los lotes de reproductores de de que pase al criadero. almeja fina para evaluar el efecto sobre la carga bacteriana de diferentes acondicionamientos, variando la 2.3. Cultivo continuo temperatura y el alimento suministrados. Los mejores El sistema de producción de microalgas en continuo se resultados desde el punto de vista microbiológico, basa en un aporte constante del medio nutritivo a los representados por una reducción de carga bacteriana, se recipientes de cultivo y en la obtención de la cosecha de obtuvieron con el acondicionamiento a 20ºC sin alimento, microalgas también constante. Los recipientes utilizados seguido de otro con subida gradual de Tª y alimento, son bolsas de 400 l. El agua de entrada es esterilizada suponiendo en ambos casos los presuntos vibrios un 4% por pasteurización. El cultivo se realiza en el invernadero de las bacterias marinas totales. En cuanto al análisis de con luz natural, pero el sistema también cuenta con los datos en función del sexo de los individuos, no se iluminación cuyo observaron diferencias marcadas, con la excepción de encendido/apagado puede ser regulado en función de la los ejemplares mantenidos sin alimento, en que las temperatura deseada para las bolsas. Los recuentos hembras mostraron recuentos superiores a los machos. artificial (tipo luz-día), medios son de 1.000 cél/µl. La muestra se recoge en el tanque en que se mezcla, antes de ser repartido al 4. Muestras de cultivos larvarios criadero. La monitorización del cultivo larvario y el seguimiento de las diferentes etapas relacionadas con el mismo, nos La “calidad microbiológica”, en relación con la presencia permitirá conocer cuáles son las posibles vías de de vibrios, fue buena tanto para el fitoplancton de contaminación y los microorganismos responsables de cámara como para el de cultivo continuo. Los resultados las mortalidades. obtenidos permitieron aportar información para mejorar el alimento suministrado y evaluar las consecuencias de El control de la población bacteriana habitualmente los cambios adoptados. La sustitución del fitoplancton de asociada a los cultivos larvarios y post-larvarios de bolsas por el de cultivo continuo en el circuito de bivalvos, entre la que se encuentran los patógenos alimentación se demostró también como una mejora oportunistas responsables de la mayor parte de los sustancial. episodios de mortalidades masivas, es preciso para minimizar las pérdidas en la producción. 3. Muestras de reproductores Es importante conocer la carga bacteriana asociada a los 4.1. Larvas reproductores, y por tanto susceptible de ser transmitida Para el muestreo se escoge el cambio de agua de los verticalmente a la progenie. Se analizaron lotes de tanques de cultivo, después de lavar en el tamiz donde adultos utilizados como reproductores a lo largo de la quedan retenidas las larvas con la propia agua del temporada a su llegada al criadero desde el medio criadero. Se toma la muestra directamente, con asa de natural, procedentes de diferentes bancos y en distintos siembra estéril de 1 µl, y se extiende sobre las placas de meses del año. Además se analizaron individuos de los AM y TCBS. Se obtiene una estima cualitativa de las diferentes poblaciones grupos inmediatamente obtención de puestas. después de la Estos datos nos permitirán bacterianas, aunque permitiendo la comparación entre muestras al unificar el volumen evaluar la influencia del origen geográfico, la época del sembrado. año, el estadío de desarrollo gonadal y el tiempo de permanencia en la instalación. 30 4.2. Agua de cultivo Se recoge en un recipiente estéril del tanque una escala de planta de cultivo se abordaron en sus fases muestra del agua de cultivo justo antes del vaciado para iniciales, se enviaron las muestras a la USC para su el cambio de agua. En el laboratorio, se hacen las análisis. diluciones seriadas apropiadas y se siembran en AM y TCBS. Se obtienen datos cuantitativos, que se expresan Además se suministraron periódicamente larvas, semilla en ufc/ml. de las dos especies de almeja para la realización de pruebas de patogenidad de aislados realizados por el Los ensayos con probióticos, previamente preparados equipo de la USC. por el grupo de la USC para ver la viabilidad técnica a CIMA Memoria 2013 31 ACCIÓN DE INVESTIGACIÓN EQUIPO TÍTULO: INVESTIGADOR PRINCIPAL: Repoblación de especies marinas de interés comercial. No Couto, E. Subproyecto I.– Repoblación de especies de interés comercial en la costa gallega. INVESTIGADOR: Iglesias Estepa, D. INICIO: enero, 2012 FINALIZACIÓN: septiembre, 2014 APOYO A LA INVESTIGACIÓN: Martínez Verde, G.; Miranda Bamio, M. ENTIDAD FINANCIADORA: Dirección Xeral de Desenvolvemento Pesqueiro. Consellería do Medio Rural e do Mar.Xunta de Galicia. Código: PGIDIT- CIMA 12/01 RESUMEN Por ser actividades que se desenvuelven en el dominio Consellería do Medio Rural e do Mar y de las cofradías público marítimo-terrestre y habitualmente apoyadas por de pescadores implicadas en la gestión de la explotación la administración autonómica, las acciones y proyectos de los bancos. de las cofradías para la recuperación y la creación de zonas productivas para el marisqueo y la pesca precisan Durante 2013 se realizaron en cada banco y con de una adecuada evaluación, tanto de su oportunidad periodicidad semestral, los muestreos cuantitativos con como de su ejecución y de los resultados obtenidos. Por dragas desde embarcación. Con estas prospecciones se otra banda, generalmente la carga de trabajo en la obtienen, administración para dar respuesta a los problemas y distribución espacial demandas del sector suele ser demasiado alta para poblaciones de las diferentes especies de interés abordar bien otros problemas de nueva aparición o que comercial, fundamentalmente berberecho (Cerastoderma requieran de un mayor análisis. La puesta en marcha de edule), almeja fina (Tapes decussatus), almeja japonesa este subproyecto dentro de la acción de repoblación de (Tapes semidecussatus), almeja babosa (Venerupis especies con interés comercial, pretendió ofrecer el senegalensis), almeja rubia (Venerupis rhomboides), apoyo técnico necesario para la toma de decisiones en almeja bicuda (Paphia aurea) y reloj (Dosinia exoleta), relación con problemas de pérdida de producción de antes del inicio de la campaña (de octubre a marzo) y bancos, después de su remate. Por otro lado la acumulación de los cuales requieren amplia base de conocimiento de temática muy diversa. (Subp. I). entre otros datos, las densidades, la y la estructura de tallas de las esta clase de datos a lo largo del tiempo permite el análisis de la dinámica de población de cada especie Durante 2013 en el ámbito de este proyecto se (curvas de crecimiento, mortandad, reclutamiento, etc.). desarrollaron actividades en diversas áreas: Durante el desarrollo de las campañas extractivas se a. Seguimiento de los bancos de libre marisqueo en realiza el seguimiento productivo y económico de las la ría de Arousa mismas mediante la recepción y el análisis de los datos En el ámbito de este subproyecto se enmarcan todas las de actividades relacionadas con el seguimiento científico embarcaciones en los bancos y los muestreos de tallas técnico de la explotación de los bancos marisqueros a de individuos capturados. primera venta en lonja, la asistencia de flote de Lombos do Ulla, O Bohído y Cabío, iniciadas en los años 2002, 2006 y 2009, respectivamente. Los Al mismo tiempo, para detectar los niveles de mortandad resultados de estos seguimientos son empleados como y posibles episodios de afección de patologías en los base para el asesoramiento de los órganos de la bivalvos, mensualmente en cada banco se procede a la 32 introducción y recogida de individuos de las diferentes - Levantamiento batimétrico de la playa de Canelas, especies en juegos de cajas de confinamiento. De los (Cofradía de Vilaxoán). Abril de 2013. ejemplares vivos recogidos se separan muestras para su análisis patológico. - Análisis granulométrico de substrato submareal entre Punta Portomouro y Punta de Pedra Rubia (Boiro). Abril b. Repoblación de especies marinas de 2013. Durante 2013 no se realizaron actividades específicas de cultivo de rodaballo (Scophtalmus maximus) y lubrigante - Análisis granulométrico en la Playa do Castro (Cofradía (Hommarus gammarus) para su marcaje y suelta, de Aguiño). Septiembre de 2013. centrándose la actividad en la recuperación de individuos marcados en sueltas previas y en el análisis de los datos Igualmente se le prestó apoyo a la cofradía de proporcionados por estas recapturas. Cambados en el seguimiento del proyecto de regeneración del banco marisquero submareal de Sin embargo, de la misma manera que en los últimos Meloxo iniciado en ese año y consistente en el años, se procedió al marcaje y suelta en el Mar de Lira acondicionamiento de substrato y siembra de almeja de 1200 juveniles de lubrigantes procedentes de las babosa. El CIMA colabora mediante la colocación de una actividades formativas de los alumnos del IGaFA estructura con cajas de confinamiento para evaluar el (Instituto Galego de Formación en Acuicultura). crecimiento y la mortandad de los juveniles de almeja suplementados Desde junio de 2012 todas las cofradías con y la recogida de parámetros oceanográficos con un CTD. embarcaciones que pescan en el ámbito del área de suelta (Lira, Fisterra y Muros) cuentan con detectores de d. Experiencias de estudio de evolución productiva y las marcas metálicas que se inyectan en las crías antes sedimentaria en zonas regeneradas de las sueltas. En noviembre de 2013 se finalizó la experiencia que se llevó a cabo en los bancos intermareales de Pontedeume c. Apoyo técnico e información sobre con la que se pretendió observar durante un período de acondicionamiento de bancos marisqueros tres años la evolución del substrato y de las poblaciones Para evaluar las acciones de regeneración de bancos de bivalvos, comparando en una misma localidad y marisqueros concedidas a través de las ayudas a zonas con substrato corregido mediante el aporte de proyectos colectivos iniciados la DXORM solicita a las áridos gruesos con zonas adyacentes no emendadas en cofradías la presentación de informes técnicos sobre la una misma localidad. situación de las áreas tras la ejecución de las actuaciones regulares (primavera y otoño-invierno) sobre Con la experiencia se pretende estudiar las posibles la evolución del substrato y las poblaciones de moluscos diferencias: bivalvos comerciales en las zonas afectadas. Este equipo de recursos marinos del CIMA presta su apoyo 1. En la evolución de características del substrato técnico a las entidades y biólogos de zona para obtener (composición granulométrica, materia orgánica y el grado y analizar los datos relacionados con las características de compactación). del substrato, llevando a cabo las siguientes actividades: 2. En la dinámica poblacional, analizando el crecimiento 1. Elaboración de mapas batimétricos de alta resolución y la mortandad de almeja japonesa en cajas de mediante confinamiento situadas próximamente y en el mismo sistemas informáticos de información geográfica (GIS). nivel mareal, con un juego de cajas en zona corregida y otro en zona con lama sin corregir. 2. Análisis granulométrico de muestras de sedimento, facilitadas por los técnicos de las entidades o bien 3. En la evolución de las poblaciones de bivalvos tomadas por el personal del CIMA. comerciales y su productividad, a partir de los resultados de los muestreos poblacionales ordinarios realizados En concreto, en 2013 se colaboró mediante los semestralmente por el técnico de la cofradía. siguientes estudios: CIMA Memoria 2013 33 Complementariamente, una De las diversas actividades desarrolladas en este y en monitorización de parámetros ambientales de interés, otros proyectos del mismo equipo, durante el año 2013 para lo que se colocó un registrador de temperatura y quedaron colocados sensores de medición en continuo salinidad junto a las cajas de confinamiento y se de salinidad y temperatura en diversas localizaciones de introdujeron la costa gallega con importancia productiva: en el se está terreno realizando testigos verticales de sedimentación para observar el régimen de deposición de finos en las diferentes zonas. - Ría de Vigo: río Maior (Vilaboa), O Puntal (Arcade), A Barra- Praia Vella (Redondela). Si bien el análisis definitivo de los datos no está - Ría de Pontevedra: Placeres, Campelo. terminado, los resultados provisionales muestran que, en - Ría de Arousa: O Sarrido y Meloxo (Cambados), Cabío lo relativo a las mortalidades y crecimientos en cajas de y Lombos do Ulla (libre marisqueo en la ría de Arousa). confinamiento, las nuevas zonas son viables para el - Costa da Morte: Os Miñarzos (Lira). cultivo de moluscos infaunales y que no hay diferencias - Rías Altas: A Croa Grande (Pontedeume), batea de considerables entre la zona regenerada y la de substrato reinstalación nº 2 (Ferrol), A Caleira (Cariño). original, por lo que en este caso la actividad de regeneración supuso la creación de nuevas zonas de Contándose en muchos casos con la colaboración de los cultivo con alta capacidad productiva que antes de la técnicos de las cofradías en la descarga de los datos, regeneración eran impracticables para el marisqueo a toda la información generada fue filtrada, representada pie por la falta de consistencia del terreno. gráficamente y se puso a disposición de los órganos de gestión de la Consellería do Medio Rural e do Mar. e. Monitorización de parámetros ambientales marinos 34 PROYECTO DE INVESTIGACIÓN EQUIPO TÍTULO: COORDINADOR DEL PROYECTO Exploring the biological and socio-economic potential of HCMR (Greece): Mylonas, C.C. new/emerging candidate fish species for expansion of the INVESTIGADORA PRINCIPAL: European aquaculture industry (DIVERSIFY). CIMA: Linares Cuerpo, F. INICIO: diciembre, 2013 INVESTIGADOR: FINALIZACIÓN: diciembre, 2018 IGAFA: Rodríguez Villanueva, J.L. ENTIDAD FINANCIADORA: 7º Programa Diversification of Marco. KBBE2013.1.2.09 fish species and products in European Aquaculture APOYO A LA INVESTIGACIÓN: Cores González, M.J.; Méndez Pérez, B. Area 2.1.2. Increased Sustainability of all Production Systems (agriculture, forestry, fisheries and aquaculture) RESUMEN En este proyecto en el que participan 20 centros de especies citadas con el fin de proporcionar herramientas investigación y 8 empresas (SMEs) pertenecientes a 9 y métodos para la industria, y permitir en algunos casos países se pretenden abordar los factores más y optimizar en otros, la producción de estas especies con importantes que limitan (cuellos de botella) la acuicultura el objetivo de incrementar la producción en la UE. El de peces y que se cree pueden ser una alternativa para trabajo se centrará según las especies la industria acuícola de Europa. reproducción, y / o cría de larvas y / o la nutrición, y / o - en la tecnologías de producción para el engorde, y / o salud de Se abordarán 6 especies que se encuentran en los peces, y / o desarrollo de nuevos productos y diferentes etapas de desarrollo en cuanto a su “inclusión” factores socioeconómicos tales como estudios de la en la industria (investigación disponible y producción percepción de los productos de acuicultura, demanda de acuícola): con la corvina (Argyrosomus regius) y el mercado y preferencias de los consumidores. halibut (Hippoglossus hippoglossus) como las más desarrolladas, seguidas por la perca (Sanders El proyecto está dividido en paquetes de trabajo lucioperca) y la seriola (Seriola dumerili) con alguna referidos producción (reproducción, e investigación, la cherna (Polyprion a gestión y nutrición, organización cultivo del proyecto larvario, engorde, americanus) de la que no existe producción y está en patología, socioeconomía y diseminación) y dentro de fase de investigación y la lisa (Mugil cephalus) cuya cada una de ellas en grupos de trabajo (WP) según las acuicultura se realiza a partir de alevines capturados del especies resultando un total 31 paquetes de trabajo. medio natural. La especie en la que está involucrada la CMRM (CIMA e La selección de especies se realizó teniendo en cuenta IGAFA) en el proyecto, conjuntamente con el IEO y el factores biológicos y el potencial económico: rápido Acuario crecimiento, buen rendimiento, aceptabilidad en el americanus). Además el Acuario del Grove y la empresa mercado, idoneidad para la diversificación y desarrollo Isidro de la Cal colaboran también en el desarrollo de de productos de alto valor añadido. Para las especies esta especie. de la Coruña es la cherna (Polyprion marinas también se ha tenido en cuenta su potencial para ser cultivadas en jaulas Asimismo, participan en el desarrollo de esta especie los siguientes centros de investigación : Hellenic Center for La propuesta pretende hacer frente a los cuellos de Marine Research (HCMR), Universidad de las Palmas de botella específicos en la producción de cada una de las Gran Canaria (ULPGC), Institut de Recerca i Tecnologia CIMA Memoria 2013 35 Agroalimentaries (IRTA), Institut Francais de Recherche larvas ha sido establecido pero hasta el momento las Pour L'Exploitation de la Mer (IFREMER), Universidad de puestas han sido de un escaso número de huevos. La Laguna (ULL), SKRETTING Aquaculture Research Centre AS (SARS). En este momento, existen varios stocks de reproductores activos o potencialmente activos en Galicia. El grupo La cherna (Polyprion americanus) perteneciente a la Isidro de la Cal, dispone de un stock de 39 ejemplares de familia Serranidae es una de las especies de peces de un peso medio aproximado de unos 15kg, el IGAFA de mayor tamaño pudiendo alcanzar los 100 Kg, tiene una 12 ejemplares y el COV del IEO de 10 ejemplares de un amplia distribución geográfica ya que prácticamente está peso entre los 11-18 kg. El Acuario Finisterrae dispone distribuida por todo el mundo, excepto en los trópicos y de 24 ejemplares de entre 15 y 30 kg y el Acuario del se caracteriza por una prolongada fase pelágica juvenil. Grove dispone de juveniles que mantendrá en sus Su rápido crecimiento, su madurez reproductiva tardía, instalaciones para obtener futuros reproductores. su precio alto en el mercado, la facilidad de manipulación en cautividad, así como la reducción de su pesquería - En lo que se refiere a requerimientos nutricionales y los TAC se han reducido en 2012 en un 90% en los obtención de dietas óptimas no existen estudios sobre la EE.UU. (NOOA, www.fishwatch.com)– la convierten en cherna. Solo existen algunas referencias relacionadas una especie muy atractiva para la acuicultura comercial. con la alimentación en el medio natural procedentes de Es además una especie muy apreciada desde el punto capturas comerciales de vista gastronómico y tiene un precio en el mercado cautividad, pero existe alguna información referida a muy alto y estable, lo cual también es una gran ventaja especies similares. y tasas de alimentación en desde el punto de vista de la acuicultura, al ser una especie con gran potencial exportador. En resumen, aunque la escasez de reproductores es una desventaja para el cultivo integral de la cherna, el claro La falta de control de la reproducción y de protocolos de potencial biológico y económico de esta especie, justifica cultivo larvario se consideran los principales cuellos de la asignación de parte de los recursos de este proyecto botella que impiden el desarrollo del cultivo a gran escala en de esta especie. Se han obtenido desoves en cautividad involucrados hasta ahora en Europa para estudiar el con inducción hormonal potencial de la acuicultura de esta especie, superar los o mediante masaje en individuos con maduración natural y el desarrollo reunir a todos los centros de investigación cuellos de botella y producir juveniles de forma fiable y embrionario y las primeras etapas de la vida de las en cantidades adecuadas para la producción comercial. 36 6 PATOLOGÍA CIMA Memoria 2013 37 PROYECTO DE INVESTIGACIÓN EQUIPO TÍTULO: COORDINADOR DEL PROYECTO: Establishing the scientific bases and technical CETMAR: Fernández Otero, R. procedures and standards to recover the European flat oyster production through strategies to tackle the COORDINADOR CIENTÍFICO: main constraint, bonamiosis. CIMA: Villalba García, A. INICIO: mayo, 2010 INVESTIGADORES/AS: FINALIZACIÓN: octubre, 2013 CIMA: Cao Hermida, M.A.; Carballal Durán, M.J.; Fuentes González, J.M.; Iglesias Estepa, D.; No Couto, ENTIDADES FINANCIADORAS: E.; Parada Encisa, J.M.; Ramilo Álvarez, A. Unión Europea, 7º Programa Marco, Grant agreement no.: 243583. APOYO A LA INVESTIGACIÓN: Dirección Xeral de Desenvolvemento Pesqueiro CIMA: Fernández Abuín, I.; Giráldez Rivero, R.; Gregorio Consellería do Medio Rural e do Mar Chenlo, M.V.; Martínez Verde, G.; Meléndez Ramos, Xunta de Galicia, M.I.; Miranda Bamio, M.; Pazos Pazos, J.C.; Penas Código: PGIDT-CIMA 12/04 Pampín, E.; Rendo López, R.; Rodríguez Rodríguez, A.; Rúa Martínez, M.N.; Vilar Fernández, D. BECARIOS/AS: CIMA: Barreiro Martínez, L.; García Alves, L.; González García, M.M.; Marletta Vázquez, M.; Pérez González, L.; Rodríguez de la Ballina, N. RESUMEN La producción de ostra plana Ostrea edulis en Europa se improntas de corazón, histología estándar, PCR e redujo notablemente en la primera mitad del siglo XX hibridación como consecuencia de la sobrepesca. La propagación simultáneamente por tres laboratorios diferentes. Se ha de dos enfermedades, marteiliosis y bonamiosis, al concluido que se deben usar al menos 2 métodos para comienzo de las décadas de 1970 y in-situ hybridization) se evaluaron 1980, una detección sensible y una determinación realista de la respectivamente, agravaron drásticamente la caída de prevalencia de la infección en una muestra. Los dos producción. Cinco asociaciones de productores de ostra métodos elegidos deberían incluir un método basado en plana, tres empresas, siete instituciones de investigación el examen microscópico y un método molecular, para y un centro tecnológico, correspondientes a 6 países permitir la visualización del parásito e incrementar la europeos (Irlanda, Holanda, Reino Unido, Dinamarca, sensibilidad en infecciones ligeras, respectivamente. Francia y España), han participado en este proyecto Además, deberían establecerse protocolos fijos que (OYSTERECOVER) con el objetivo global de establecer permitan las bases científicas y técnicas, los procedimientos y laboratorios. Estas conclusiones se transmitirán a las estándares que permitan recuperar la producción de O. autoridades responsables del control zoosanitario por si edulis mediante el desarrollo de estrategias para superar consideran oportuno asumirlas. obtener resultados reproducibles entre el principal obstáculo, la bonamiosis. Por cuestiones de propiedad intelectual de los resultados del proyecto, no La búsqueda de posibles localizaciones de Bonamia en se permite la divulgación de resultados detallados, por lo el ecosistema, alternativas a la propia ostra, que que este resumen sólo incorpora ideas globales. pudieran constituir un reservorio o vehículo de transmisión del parásito, permitió constatar su presencia OYSTERECOVER ha contribuido a estandarizar y validar en otros invertebrados, de forma que los resultados los métodos de diagnóstico de Bonamia. Por primera concretos vez, cuatro métodos de diagnóstico (examen de recomendaciones para el sector ostrícola: 38 condujeron a establecer las siguientes 1. Extremar la precaución con los movimientos y herramienta transferencias de equipamiento, agua de mar de SIG que compila información e cartográfica, distribución espacial de biomasa y densidad invertebrados (incluyendo especies de moluscos sin de ostras, batimetría, tipo de sustrato y prevalencia de consideración oficial de hospedadores de Bonamia Bonamia de bancos y áreas de cultivo del litoral atlántico ostreae) desde áreas afectadas a áreas libres del europeo. Esta herramienta es muy útil para identificar parásito. áreas de interés para su recuperación y para el asesoramiento de la gestión de su explotación. En este 2. Filtrar el agua de mar que se bombea a los criaderos mismo contexto se ha realizado la caracterización de moluscos de áreas afectadas, para impedir la entrada genética de 16 bancos de ostra del litoral atlántico del parásito a las instalaciones y evitar que las larvas de europeo. Con ello se ha evidenciado que las poblaciones ostra se infecten. de un mismo país son más semejantes que entre países diferentes, llegándose en el a área identificar tres estudiada, regiones 3. Usar métodos de diagnóstico adecuados para detectar biogeográficas lo que es infecciones iniciales o latentes antes de mover lotes de congruente con la adaptación de las poblaciones de ostras. ostras a condiciones ambientales concretas. Esta información resulta fundamental para impedir la pérdida Varios estudios independientes previos a este proyecto de variabilidad genética así como el uso de las estirpes habían concluido que la única manera efectiva de geográficas adecuadas en planes de recuperación y superar la bonamiosis es la producción de estirpes de programas de selección de estirpes resistentes. ostra resistentes a esta enfermedad. En consecuencia, en OYSTERECOVER se investigó sobre las bases Se comparó el rendimiento en el engorde de diferentes fisiológicas y moleculares de la resistencia a Bonamia, estirpes de ostras en diferentes regiones, lo que ha mediante y permitido identificar las estirpes más adecuadas en cada genómico. Un primer resultado relevante fue el desarrollo región, constatándose una variabilidad de rendimiento de una amplia base de datos con genes que se expresan (supervivencia, crecimiento, susceptibilidad a Bonamia) en los hemocitos de Ostrea edulis. A partir de esta lista tanto entre estirpes como dentro de cada estirpe. enfoques experimentales proteómico se seleccionaron genes candidatos a ser utilizados como marcadores. Entre estos, se han identificado dos claros El uso de colectores de semilla es una práctica extendida marcadores moleculares con un alto potencial para ser entre los ostricultores. La eficiencia de diferentes tipos de utilizados en programas de selección genética de colectores se evaluó en el seno del proyecto y se han estirpes resistentes a la bonamiosis. elaborado recomendaciones sobre qué tipo, cómo deben usarse y cuándo han de colocarse en diferentes En el seno del proyecto se ha desarrollado una regiones. CIMA Memoria 2013 39 PROYECTO DE INVESTIGACIÓN EQUIPO TÍTULO: COORDINADORA DEL PROYECTO: Caracterización de la situación sanitaria del litoral CETMAR: Abollo Rodríguez, E. español relativa a la infección por virus herpes en moluscos bivalvos y evaluación del impacto de la INVESTIGADORES: enfermedad. CIMA: Villalba García, A. INTECMAR: Darriba Couñago, S.; Pérez Bello, J.L. INICIO: enero, 2011 FINALIZACIÓN: diciembre, 2013 APOYO A LA INVESTIGACIÓN: CIMA: Busto Loureiro, B.; Meléndez Ramos, M.I.; Penas ENTIDADES FINANCIADORAS: Pampín, E. Junta Asesora de Cultivos Marinos (JACUMAR) Ministerio de Agricultura, Alimentación y Medio BECARIOS: Ambiente CIMA: González García, M.M.; Vilar Fernández, D. Dirección Xeral de Desenvolvemento Pesqueiro Consellería do Medio Rural e do Mar Xunta de Galicia RESUMEN Desde el verano de 2008, la industria ostrícola francesa Carles de la Ràpita (Cataluña), Centro Agua del Pino del está sufriendo mortandades masivas de semilla de ostra IFAPA (Andalucía) y CIMA (Galicia). Se acordó un rizada Crassostrea gigas, cuya causa más relevante es protocolo de diagnóstico común por PCR, que se una variante nueva de un virus que ya se conocía ajustaba al protocolo fijado en el Reglamento 175/2010 previamente. Se trata del virus herpes de ostreidos tipo 1 de la UE, usando la pareja de cebadores HERP F/R y la nueva variante, muy virulenta, se bautizó como diseñados en el seno del proyecto, dado que la microvariante Europea secuencia de los cebadores del reglamento no se ha estableció un reglamento específico (175/2010) para hecho pública. Los resultados mostraron mayor acuerdo evitar la expansión de esta enfermedad emergente. intralaboratorio Dada la carencia de información en España sobre la cambios en el protocolo. (OsHV1-var). La Unión que interlaboratorio, proponiéndose presencia y efecto de los virus herpes en las áreas de cultivo de moluscos y bancos marisqueros Incidencia de la infección por OsHV-1 μvar en el y considerando que la importación de C. gigas de áreas engorde de ostra rizada en Galicia. costeras francesas afectadas por el OsHV-1 era una El enfoque experimental de este estudio implicó el práctica extendida en varias CCAA, con el consiguiente seguimiento del engorde de cohortes de semilla de ostra riesgo de introducción del patógeno, se planteó este rizada de varios orígenes mediante la estimación proyecto, en el que se integraron equipos de periódica de su rendimiento, en concreto su crecimiento, investigadores de Cataluña, Andalucía, Asturias, Ceuta y su supervivencia y la prevalencia de la infección por Galicia, para caracterizar la situación sanitaria litoral de OsHV1-var. En un primer experimento, el seguimiento las CC AA implicadas en lo referente a las infecciones del engorde de semilla de ostra se realizó en sendas por virus herpes, tanto en poblaciones de C. gigas como bateas de dos polígonos de cultivo de la ría de Arousa, O en otras especies de interés marisquero. Por parte de GROVE A y CAMBADOS D, utilizando 4 cohortes Galicia participaron el CETMAR, el INTECMAR y el distintas de semilla de ostra: un lote de ostra rizada CIMA. procedente de Francia, otro lote de ostra rizada procedente de un criadero español, otro lote de ostra Intercalibración del diagnóstico del OsHV-1 μvar. rizada procedente de ese mismo criadero español, que El equipo del CIMA preparó el material necesario para un se había preengordado en un semillero flotante, y un lote ejercicio de intercalibración del diagnóstico del OsHV-1, de ostra plana procedente de otro criadero español. en el que participaron tres laboratorios, IRTA de Sant 40 El crecimiento de los lotes de semilla de ostra rizada fue fue del 26%, semejante a la de la semilla francesa en su similar independientemente del polígono de cultivo, salvo primer mes; sin embargo, la tasa de mortalidad fue en el caso del lote del criadero (Fig. 1A). La semilla de disminuyendo desde entonces y al cabo de 3 meses se ostra plana creció más lentamente que la ostra rizada. hizo insignificante, cuando la mortalidad acumulada En la semilla procedente de Francia la mortalidad fue estaba justo por debajo del 50%. Probablemente esta muy alta en los tres primeros meses en ambas bateas, O cohorte ya había sufrido mortalidad en el semillero y, Grove y Cambados, superando el 80%; a partir de ese quizás, su mayor edad y tamaño contribuyó a una menor momento la tasa de mortalidad se redujo marcadamente mortalidad en la batea. En el caso de la ostra plana, la y la mortalidad acumulada se estabilizó en torno al 85% mortalidad fue casi insignificante durante 9 meses, no (Fig. 1B). En el lote recogido en el criadero gallego, la hubo mortalidad juvenil, pero hacia la mitad de la mortalidad fue extremadamente alta, registrándose el primavera 97% tras 22 días desde su emplazamiento en batea. En notablemente, superándose el 80% de mortalidad el caso de la semilla preengordada en el semillero acumulada 6 meses después. de 2013 la mortalidad se incrementó flotante la mortalidad registrada tras los primeros 22 días Francia (CAMBADOS D) Criadero (GROVE A) 100 100 90 90 80 80 Mortalidad acumulada (%) Fig. 1. A: Evolución mensual de la altura media (± error estándar) de cada lote de semilla de ostra rizada y un lote de ostra plana durante el engorde. B: Evolución mensual de la mortalidad acumulada (%) de cada lote de semilla durante el engorde. Altura media (± EE, mm) Francia (GROVE A) Semillero (GROVE A) 70 60 50 40 30 20 10 0 Ostra plana (GROVE A) 70 60 50 40 30 20 10 M J J A S O N D J FM AM J J A S O 2012 0 2013 CIMA Memoria 2013 M J J A S O N D J FM AM J J A S O 2012 41 2013 C. gigas Francia (Grove) C. gigas semillero (Grove) Ostra plana (Grove) C. gigas Francia (Cambados) C. gigas criadero (Grove) Porcentaje de casos positivos por PCR 100 Fig. 2. Evolución mensual del porcentaje de casos positivos por PCR para OsHV1var en cada lote de semilla de ostra rizada y en un lote de ostra plana 80 60 40 20 0 May Jun Jul Aug Sep Oct Nov Dec Jan Feb Mar Apr 2012 La prevalencia del OsHV1-µvar 2013 analizó meses siguientes en los pocos supervivientes que mensualmente en todos los lotes de ostra mediante PCR se quedaron. En el lote preengordado en el semillero (Fig. 2). Todos los ejemplares de la muestra inicial de flotante, el 96% de los individuos resultaron positivos semilla de Francia, antes de su emplazamiento en batea, antes del emplazamiento en batea; en los meses mostraron resultados negativos para OsHV-1 µvar; sin siguientes el porcentaje disminuyó. Por tanto, en cada embargo, en la muestra del 30 de mayo un 97% de los lote de semilla de ostra rizada, tras un máximo temprano individuos fueron positivos. ¿Qué pasó? El virus OsHV1- de prevalencia del virus, a medida que la semilla µvar ya estaba presente en otras ostras de esta batea y, infectada iba muriendo, la prevalencia disminuía entre muy probablemente, infectó a las ostras francesas poco los supervivientes. En el caso de la ostra plana también después de su introducción; ese pico inicial de casos se detectaron casos positivos por PCR, incluso hubo positivos por PCR coincidió con la elevada mortalidad registros superiores al 60%, pero la mortalidad fue inicial. Desde entonces el porcentaje de casos positivos insignificante en esos meses. La causa de la mortalidad disminuyó en ambas bateas. En la muestra inicial de la de ostra plana registrada en los últimos meses tuvo que semilla procedente del criadero gallego, antes de su ser distinta a la infección vírica y probablemente se debió emplazamiento en batea, el porcentaje de casos a bonamiosis. positivos de OsHV-1µvar fue del 10%, es decir que algunas ostras ya venían infectadas del criadero; De este primer experimento se concluyó que todas las transcurridos 22 días desde la introducción, el 100% de cohortes de ostra rizada sufrieron mortalidad alta o muy las ostras eran positivas por PCR, lo que es coherente alta al inicio del engorde, que muy probablemente se con la mortalidad extremadamente alta en ese periodo debió a la infección por OsHV1-var. Incluso la semilla inicial. El porcentaje de casos positivos disminuyó en los de ostra rizada libre de OsHV1 puede sufrir mortalidad 42 elevada si se engorda en un área afectada por OsHV1- batea de GROVE A, registrándose una mortalidad var pues adquiere pronto la infección. Parece existir un insignificante sin que se detectase ningún caso positivo umbral de tamaño de la ostra rizada, en torno a 30 mm, por OsHV1-var, lo que indica una alta resistencia del por encima del cual la ostra tolera al virus, es decir que mejillón a la infección por el virus. por encima de ese tamaño el virus no es letal. La detección frecuente de casos positivos de OsHV1-var Tras varios muestreos de dos bancos de ostra rizada en ostras rizadas de tamaño grande sugiere que, aun asilvestrada, localizados en la ría do Barqueiro y en la de tolerando la infección, las ostras grandes podrían ser Viveiro, no se ha detectado en ellos ningún caso positivo focos de infección. La ostra plana es tolerante o por OsHV1-microvar. resistente al OsHV1-var, pero su papel como reservorio no se debe desdeñar. Las conclusiones de este estudio junto con la información bibliográfica disponible permiten avanzar la Un segundo experimento de seguimiento del engorde de hipótesis de que el engorde de la ostra rizada podría semilla de ostra rizada en la batea del polígono GROVE desarrollarse con supervivencia provechosa incluso en A usada en el primer experimento y otra batea del polígonos en que el virus está presente: para ello sería polígono REDONDELA A (ría de Vigo) mostró que la preciso que la ostra rizada hubiese superado el tamaño semilla de ostra rizada, incluso estando libre de OsHV1 umbral de susceptibilidad (aprox. 30 mm) al comienzo inicialmente, puede sufrir mortalidad elevada si se del periodo en que la temperatura del agua supera 16º C. engorda en un área afectada por OsHV1-var (GROVE El preengorde de la semilla hasta alcanzar dicho tamaño A), OsHV1-var umbral podría realizarse en una zona libre del virus (p. (REDONDELA A), la mortalidad de la semilla de ostra mientras que en ausencia de ej. REDONDELA A) o bien en la propia zona afectada rizada es insignificante. En este experimento se realizó durante un periodo de temperatura inferior a 16 ºC. La un seguimiento del engorde de semilla de mejillón en la hipótesis debe ser contrastada. CIMA Memoria 2013 43 PROYECTO DE INVESTIGACIÓN EQUIPO TÍTULO: INVESTIGADOR PRINCIPAL: Perkinsosis de la almeja: expresión proteínica en los Villalba García, A. hemocitos y plasma del hospedador y en el parásito durante su interacción. INVESTIGADORES/AS: Cao Hermida, M.A.; Carballal Durán, M.J. INICIO: enero, 2012 FINALIZACIÓN: diciembre, 2014 APOYO A LA INVESTIGACIÓN: CIMA: Buceta Barros, A.; Meléndez Ramos, ENTIDAD FINANCIADORA: M.I.; Penas Pampín, E. Ministerio de Economía y Competitividad. Código: AGL2011-30449-C02-01 BECARIOS/AS: Fernández Boo, S.; Pérez González, L. RESUMEN Perkinsus olseni es un protozoo parásito de moluscos respuesta inmune del hospedador frente al parásito con una amplia distribución mundial, al que se ha puede ser muy útil para definir criterios de selección responsabilizado de mortandades masivas de almejas en de reproductores en programas de mejora genética varios países. Este parásito está muy extendido por los para aumentar la resistencia de las almejas a la bancos marisqueros de Galicia. La almeja japonesa perkinsosis. En el sistema inmunitario de los moluscos Ruditapes philippinarum es una de las especies bivalvos se integran un componente celular, cuyo susceptibles. Esta almeja es un recurso marisquero componente principal son importante en varios continentes; los países con mayor componente humoral, constituido producción mundial son China, Corea del Sur, Japón, moléculas presentes en el plasma de la hemolinfa. los hemocitos, y un básicamente por Italia, España, Francia, Irlanda y Reino Unido. La producción mundial de esta almeja aumenta año tras El objetivo de este proyecto es analizar los efectos año, habiendo pasado de 350.000 toneladas en 1990 a de la infección por P. olseni sobre la expresión 3,5 millones en 2010, según las estadísticas de la FAO. proteica de los hemocitos y el plasma de la En Galicia la situación es similar, de forma que las hemolinfa estadísticas del total de ventas anuales en lonja reflejan implementado dos enfoques experimentales, con uno de un aumento progresivo desde las 285 toneladas en 1997 ellos se exploran los efectos de la etapa inicial de la a las 3.200 en 2012 (www.pescadegalicia.com). P. infección, a través de infección experimental en el olseni es una amenaza para la producción mundial laboratorio, mientras que el otro aborda los efectos de la de almeja japonesa, como lo prueba el declive de la infección crónica, utilizando almejas infectadas de forma producción coreana y las mortalidades altas registradas natural. de la almeja japonesa. Se han en países del sur de Europa asociadas a perkinsosis. Como consecuencia, P. olseni se incluyó en la lista de Infección enfermedades de declaración laboratorio. En este la experimento se utilizaron almejas libres del parásito que se expusieron individualmente durante 24 horas a una cuenta que las almejas no crecen en ambientes cerrados suspensión de 106 zooesporas de P. olseni. Tras la sino en medio abierto la lucha contra la enfermedad ha exposición, las almejas se mantuvieron durante 8 días en de basarse en impedir que el parásito se propague a tanques con agua de mar esterilizada, aireada y con zonas libres de la enfermedad y, en cuanto a las zonas microalgas cultivadas como alimento. Almejas que no ya afectadas, la producción de estirpes de almejas fueron expuestas al parásito y se mantuvieron en las resistentes es una opción realista y prometedora para su mismas condiciones que las expuestas se utilizaron uso en parques de cultivo o la repoblación de bancos como control. Se extrajo hemolinfa de las almejas y se marisqueros mezcló, resultando 2 réplicas de 20 almejas cada una En este de en Organización Mundial de Sanidad Animal. Teniendo en afectados. obligatoria experimental sentido, el conocimiento de las bases moleculares de la 44 por tratamiento. A continuación se separó la fracción menor, hasta el punto de que no se encontraron marcas celular (hemocitos) del plasma de la hemolinfa. proteicas exclusivas de tratamiento en el plasma (Tabla 1). Estos resultados sugieren que con la exposición al Infección en el medio natural. En este caso se parásito se activa la síntesis de un número notable utilizaron almejas de un banco afectado por el parásito. de proteínas mientras que cuando la infección Tras extraer la hemolinfa de cada almeja, se separó progresa y alcanza niveles intensos, se inhibe la individualmente la fracción celular (hemocitos) del síntesis de un número elevado de proteínas. Tras la plasma. Cada almeja se diagnosticó y se seleccionaron comparación 42 almejas con infección intensa por P. olseni y otras 42 comunes y exclusivas se han separado de los geles y almejas no infectadas. Las muestras se agruparon, están siendo analizadas para identificar la proteína resultando 3 réplicas de 14 almejas cada una por correspondiente a cada marca y conocer su función. entre tratamientos, marcas proteicas tratamiento. Una vez identificadas marcas proteicas comunes y En ambos enfoques experimentales, las proteínas exclusivas presentes en las muestras de hemocitos y en las de exclusivas se separaron de los geles y se enviaron al plasma se las marcas proteicas electroforesis Laboratorio de Proteómica del Complejo Hospitalario Universitario de Santiago de Compostela, para identificar marcas proteicas presentes en los geles resultantes de la proteína correspondiente a cada marca. En dicho la separación se analizaron con el paquete informático Laboratorio de Proteómica tuvieron dificultades en la PD Quest 8.4.0. Más de 500 marcas proteicas se secuenciación peptídica, lo que se achacó a problemas distinguieron en los geles correspondientes a hemocitos, derivados de la tinción con plata realizada sobre los con un promedio de 570 marcas por gel, mientras que el geles para la identificación de marcas proteicas. Por ello número fue inferior en los geles de plasma, con un se decidió cambiar de tinción y se repitieron los geles, promedio de 281 marcas por gel. Considerando todas las que en esta ocasión se tiñeron con Sypro ruby. Las réplicas de cada tratamiento, se elaboró un mapa marcas proteicas exclusivas de tratamientos que ya se sintético referencia mediante tratamientos, bidimensional, produciendo 3 geles de cada réplica. Las de separaron de tratamiento habían seleccionado previamente se separaron de los incorporando sólo las marcas proteicas presentes en geles nuevos y se enviaron al Laboratorio de Proteómica todas las réplicas. Estos mapas de referencia incluían en mencionado. torno al 40% del número total de marcas proteicas correspondientes a muestras de hemocitos y 25 marcas diferentes observadas en para las cada réplicas de Se enviaron 11 marcas proteicas cada proteicas correspondientes a muestras de plasma. Los tratamiento. La comparación de los mapas sintéticos péptidos extraídos de las marcas proteicas se analizaron entre tratamientos, siguiendo criterios conservadores, por MALDI-TOF/MS, MALDI-TOF/TOF y secuenciación permitió identificar de forma inequívoca marcas proteicas “de novo”. La información de huella peptídica y del comunes a tratamientos así como marcas proteicas espectro de fragmentación peptídica de cada marca se exclusivas de cada tratamiento (Tabla 1). Los efectos del combinaron mediante GPS Explorer Software v3.6, patógeno en la expresión proteica en el inicio de la usando Mascot software v2.1. para identificar proteínas infección fueron diferentes con respecto a infecciones frente a la base de datos de Mollusca (NCBInr crónicas. Así el promedio del número de marcas DATABASE). proteicas en los geles de hemocitos creció por exposición al parásito en el laboratorio con respecto al Se obtuvieron secuencias peptídicas para las 11 marcas control pero disminuyó en las infecciones crónicas proteicas de hemocitos, de las que 1 correspondía a intensas se almejas no infectadas recogidas en el campo, 2 a observaron en el caso de las proteínas plasmáticas. La (Tabla 1). Las mismas tendencias almejas muy infectadas en el campo, 5 a almejas control comparación entre tratamientos mostró que, en el caso de la exposición en laboratorio y 3 a almejas expuestas de la exposición en el laboratorio, el número de marcas al parásito en laboratorio. En el caso de las marcas proteicas comunes a almejas expuestas y no expuestas proteicas fue alto mientras que el número de marcas exclusivas de peptídicas para 20 de las 25 marcas, 6 correspondientes cada tratamiento fue muy bajo, tanto en hemocitos como a almejas expuestas al parásito en laboratorio y 14 a en plasma. En el caso de la infección natural, el número almejas control. de de marcas exclusivas de cada tratamiento fue incluso CIMA Memoria 2013 45 plasma, se obtuvieron secuencias Tabla 1. Resumen de los resultados del análisis de las marcas proteicas de cada tratamiento y de la comparación de almejas expuestas al parásito en laboratorio frente a almejas control y almejas con infección natural intensa frente a almejas no infectadas Enfoque experimental Fracción de la hemolinfa Tratamiento Promedio del número de marcas proteicas Número de marcas proteicas en los mapas de referencia Control 561 248 Hemocitos Exposición en laboratorio 5 153 Expuestas 596 252 Control 418 234 Plasma 3 15 105 Expuestas 360 143 Control 592 278 Hemocitos Infección en el medio natural Comparación de infectadas frente a control Marcas Marcas proteicas proteicas comunes a exclusivas de ambos cada tratamientos tratamiento 10 1 176 Infectadas 529 241 Control 189 54 Plasma 2 0 46 Infectadas 160 46 69 0 PROYECTO DE INVESTIGACIÓN EQUIPO TÍTULO: INVESTIGADORA PRINCIPAL Identificación de marcadores proteicos como indicadores Cao Hermida, M.A. de contaminación ambiental en la almeja fina (Ruditapes decussatus) y en el berberecho (Cerastoderma edule). INVESTIGADORES: Fernández Boo, S.; Hermida Prieto, M.; Villalba INICIO: 2009 Garcia, A. FINALIZACIÓN: 2012 (concedida prórroga hasta abril 2013) APOYO A LA INVESTIGACIÓN: Gregorio Chenlo, M.V.; Meléndez Ramos, I.; Penas ENTIDAD FINANCIADORA: Pampín, E. Consellería de Economía e Industria. PGIDIT. Programa sectorial del Medio Marino, Xunta de Galicia. Código: 09MMA008501PR RESUMEN Una gran cantidad de contaminantes acceden al medio El principal objetivo de este proyecto es la evaluación marino de forma directa o indirecta, pero sólo un número toxicoproteómica de la almeja (Ruditapes decussatus) y reducido de ellos está siendo evaluado de forma el berberecho (Cerastoderma edule) frente a diversos sistemática. En este caso se encuentran, desde hace contaminantes presentes en el medio marino. Para ello décadas, los contaminantes persistentes, como metales se estudiará el análisis de la expresión de las proteínas pesados, policíclicos presentes en el hepatopáncreas y músculo aductor de (PAHs/HAPs) y compuestos organoclorados (OCs), cuya hidrocarburos aromáticos las especies Ruditapes decussatus y Cerastoderma distribución y tendencias temporales están siendo objeto edule lo que nos permitirá entender las diferencias en la de estudio a través de programas internacionales de susceptibilidad seguimiento y vigilancia ambiental en el ámbito atlántico diferentes órganos de la almeja fina y del berberecho. (OSPAR). Además, los cambios en la expresión de proteínas a contaminantes observadas en implicadas en mecanismos de defensa de la almeja y del Actualmente, la contaminación por metales pesados es berberecho frente a contaminantes, nos ayudará a una de las mayores preocupaciones que afectan a la monitorizar el estado de salud de los moluscos, sociedad. Los moluscos, como organismos filtradores, facilitando el control y la protección tanto de la calidad tienden a acumular metales en sus órganos, y este del agua donde habitan hecho el obtenido, permitiendo la evaluación de la calidad consumidor. Fruto de esta preocupación sanitaria, se medioambiental. El estudio de los patrones de expresión enmarca la normativa recogida en la Reglamentación proteica Técnico-Sanitaria poblaciones puede suponer un referida serio a la riesgo para producción y mediante control desarrollar como del producto final morfometría y poblaciones contaminadas, permitirá Decreto 571/1999), y que ha de ser aplicada en todo tipo clasificar muestras desconocidas como contaminadas o de cultivos marinos. También, la Unión Europea en el no. El método también permite la identificación de las Reglamento CE nº 466/2001 recoge los contenidos proteínas que contribuyen más a los cambios detectados máximos que pueden presentar algunos contaminantes entre los grupos. Estas proteínas, en los alimentos. Todo ello determina que sea necesario asociadas a la contaminación, pueden ser empleadas realizar un control y protección, tanto de la calidad del como biomarcadores, siendo un criterio de uso potencial agua donde habitan como del producto final obtenido, en programas de toxicología ambiental. la legislación vigente. CIMA Memoria 2013 47 método en comercialización de moluscos bivalvos vivos (Real siguiendo siempre las recomendaciones establecidas por un geométrica diagnóstico para identificadas como Análisis histológico y toxicológico dos especies, no obstante no existió un patrón común Las muestras recogidas en las tres zonas de estudio del para ningún metal en concreto, ni para ninguna zona. En litoral el caso de organoclorados, en casi todos los casos las gallego: Lira-ría de Muros (zona libre de contaminación), Sarrido-ría de Arousa y Placeres-ría de ANOVA fueron significativas y en la comparación por Pontevedra (zonas contaminadas) reveló la presencia de pares Placeres resultó ser significativamente diferente a patógenos en almejas y berberechos de las tres zonas Lira y Sarrido. de estudio. Análisis comparativo y búsqueda de proteínas Con respecto al análisis toxicológico, se puede constatar específicas de cada zona para una misma especie y que los resultados no eran los esperados, siendo órgano además los Se analizaron 216 geles correspondientes a 3 réplicas de organoclorados, se observó que en general los valores 6 individuos para cada órgano, molusco y zona. La Tabla de Placeres fueron superiores en ambas especies a la 1 representa los resultados obtenidos en dicho análisis zona de Lira y Sarrido. En metales pesados, la diferencia empleando el programa PDQuest 7.4.0. bastante heterogéneos. Respecto a en la media fue significativa para varios de ellos en las Tabla 1.- Análisis de los “spots” en los geles, incluyendo el número de spots comunes y exclusivos a cada zona, molusco y órgano y el número de spots enviados a secuenciar. Lira almeja hepatopáncreas Placeres almeja hepatopáncreas Sarrido almeja hepatopáncreas “Spots” comunes “Spots” exclusivos “Spots” enviados a secuenciar 254 36 4 218 21 3 266 33 4 Almeja hepatopáncreas 108 Lira almeja músculo 123 Placeres almeja músculo Sarrido almeja músculo Almeja músculo 69 Lira berberecho hepatopáncreas Placeres berberecho hepatopáncreas Sarrido berberecho hepatopáncreas 3 12 2 120 6 2 155 26 3 4 135 13 2 116 3 3 129 18 3 Berberecho hepatopáncreas 35 4 Lira berberecho músculo 72 8 2 Placeres berberecho músculo 52 1 1 Sarrido berberecho músculo 74 5 2 Berberecho músculo 30 2 Análisis estadístico y morfométrico de la expresión indicativo de que a pesar de que existen diferencias en proteica los Análisis cualitativo diferencias no son tan patentes como para resultar Los test chi-cuadrado efectuados en todas las matrices significativas, seguramente porque el número de spots fueron no significativos en todos los casos. Esto es comunes a todas ellas es importante. 48 spots identificados en cada población, estas Análisis cuantitativo Análisis morfológico En el caso de las muestras de hepatopáncreas de El estudio de la forma, que es el objetivo de la almeja, se identificaron 4 spots con una capacidad de morfometría geométrica, se adapta en este caso para discriminación corregida comparaciones de del 77,8%. intensidades En las poder evaluar las diferencias en la posición de los el “fold distintos spots en las muestras estudiadas. En el caso de mediante change” el número de spots “downregulated” fue muy las numeroso, existiendo sin embargo un spot con una seleccionaron 8 Relative warps para explicar un 80% de diferenciación muy superior y que fue coincidente en la varianza. Con la representación de los dos primeros ambas spot se pudo apreciar una clara separación de las muestras “upregulated” fue también coincidente entre ambas de las tres procedencias. En el caso de músculo de poblaciones. En el caso del análisis discriminante en almeja no hubo una diferenciación tan clara ya que a músculo de almeja las diferencias fueron incluso pesar de que el número de Relative warps fue menor no mayores, ya que con cuatro, la mostraron un patrón claro en su representación. poblaciones. llegó casi Asimismo, el único clasificación correcta muestras de hepatopáncreas de almeja se al 100%. El análisis “fold change” no tuvo resultados similares al caso anterior, siendo los spots El análisis de las muestras de hepatopáncreas de seleccionados todos “upregulated” y en un número e berberecho, a pesar de no ser tan claro como en el caso intensidad de almeja, sí parece mostrar una separación de las bastante inferior, aunque de nuevo manteniendo coherencia entre ambas poblaciones. muestras de Lira respecto a las otras dos mediante la observación de los valores del Relative Warp 2, que El análisis discriminante en las muestras de berberecho acumuló un 20% de la varianza. Pudo observarse que la dio como resultado la selección de 4 spots en ambos diferenciación en este RW se debe principalmente a dos casos, capaces de discriminar cerca del 90% de los “landmarks”, lo que posibilitó la identificación del “spot” casos, tanto en hepatopáncreas como en músculo. En la correspondiente. Respecto a las muestras de músculo comparación de los geles de hepatopáncreas mediante de berberecho muestran una configuración parecida al el “fold change” la cantidad de spots varió mucho según caso de hepatopáncreas, en el sentido que el RW1 las muestras comparadas. Por ejemplo, el número de permite diferenciar las muestras de Lira respecto las spots “upregulated” en la comparación entre Lira y otras dos. Placeres fue muy elevado. Sin embargo, sí que se mantuvo cierta coherencia en los spots seleccionados en Identificación proteica. Los spots con mayor ambas comparativas. Por último, las variaciones en intensidad y los más interesantes procedentes de cada intensidad en los geles de músculo fueron muy uno de los distintos análisis fueron enviados a un servicio pequeñas. externo de secuenciación obteniéndose la identificación de las siguientes proteínas: ALMEJA HEPATOPÁNCREAS LIRA EXCLUSIVOS PLACERES EXCLUSIVOS SARRIDO EXCLUSIVOS COMUNES Synaptotagminlike protein 5 Dynein beta chain, ciliary Betainehomocysteine Smethyltransferase 2 Betaureidopropionase Omegacristallin Heat shock protein 22 isoform 2 Neutral ceramidase B A-kinase anchor protein 9 G protein B subunit Glutamate receptorinteracting protein1 CIMA Memoria 2013 DOWN REGULADAS Betainehomocysteine Smethyltransferase 2 UP REGULADAS MORFOMETRIA Cathepsin L Prohormone convertase 1 Ferritin subunit 49 ALMEJA MÚSCULO LIRA EXCLUSIVOS PLACERES EXCLUSIVOS Arginine kinase Phosphoglucomutase1 V-type proton ATPase subunit B Tetratricopeptide repeat protein 26 SARRIDO EXCLUSIVOS Dihydrolipoyl dehydrogenase, mitochondrial COMUNES UP REGULADAS 26S proteasome nonATPase regulatory subunit 2 Calponin-2 E3 ubiquitin-protein ligase HUWE1 Actin G protein B subunit Actin Calponin-2 BERBERECHO HEPATOPÁNCREAS LIRA EXCLUSIVOS PLACERES EXCLUSIVOS Retinal dehydrogenase 1 Vesicular glutamate transporter 2 Actin Putative C1q domain containing protein MgC1q12 SARRIDO EXCLUSIVOS COMUNES Hypothetical protein CGI_10027319 Cadherin EGF LAG seven-pass G-type receptor 1 DnaJ-like protein subfamily C member 27 Actin Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K UP REGULADAS N(4)-(Beta-Nacetylglucosaminyl)-Lasparaginase Collagen alpha-5(VI) chain Isocitrate dehydrogenase [NADP], mitochondrial Actin BERBERECHO MÚSCULO LIRA EXCLUSIVOS Succinate dehydrogenase [ubiquinone] flavoprotein subunit B, mitochondrial Malate dehydrogenase, cytoplasmic, partial PLACERES EXCLUSIVOS SARRIDO EXCLUSIVOS COMUNES DOWN REGULADAS UP REGULADAS MORFOMETRIA Prohormone convertase 1 Complement C1q-like protein 4 Heat shock protein 70 B2 Vigilin Heat shock protein 70 B2 Fibropellin-1 Uncharacterized protein y4xO Vigilin 50 Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2-like protein 1 ACCIÓN DE INVESTIGACIÓN EQUIPO TÍTULO: INVESTIGADORA PRINCIPAL: Estudio de la marteiliosis que afecta a los berberechos Carballal Durán, M.J. Cerastoderma edule de Galicia. INVESTIGADORES/AS: INICIO: mayo, 2013 CIMA: Iglesias Estepa, D.; No Couto, E.; Villalba FINALIZACIÓN: diciembre, 2014 García, A. CETMAR: Abollo Rodríguez, E. ENTIDAD FINANCIADORA: Cofradía de Pescadores “San Antonio” de Consellería do Medio Rural e do Mar Cambados: Mariño Balsa, J.C. Código: PGIDIT-CIMA 13/03 Delegación de Carril de la Consellería do Medio Rural e do Mar: Fernández Barreiro, J. APOYO A LA INVESTIGACIÓN: CIMA: Meléndez Ramos, I.; Penas Pampín, E. RESUMEN La marteiliosis es una enfermedad infecciosa originada berberechos de O Sarrido (Cambados) y de otros bancos por parásitos del género Marteilia. Este género se de la ría de Arousa. Las intensas mortalidades causadas incluye en la orden Paramyxidea, dentro del filo por este parasito llevaron a la práctica desaparición de Cercozoa. En la actualidad, en los Paramyxidae se este recurso en la ría de Arousa. incluyen dos géneros que afectan a los moluscos bivalvos de interés comercial, el género Marteilia y el En esta acción de investigación se pretende profundizar género Marteilioides. Los parásitos pertenecientes al en el estudio de la marteiliosis que afecta al berberecho género Marteilia afectan a moluscos bivalvos de gran C. edule en Galicia con el fin de adquirir un nivel de interés económico para la acuicultura europea, como son conocimientos que facilite la toma de decisiones en la la ostra plana, Ostrea edulis, y los mejillones Mytilus gestión del recurso y, si es el caso, el desarrollo de galloprovinciallis y Mytilus edulis. La especie Marteilia estrategias de lucha que conduzcan a la mitigación de refringens es la causante de la enfermedad de los Abers, sus efectos. Durante el año 2013 se llevaron a cabo que actividades dirigidas a la consecución de los siguientes causó importantes mortalidades desde su descubrimiento en 1968 en Ostrea edulis en Europa y objetivos: Marteilia sydneyi es responsable de la enfermedad conocida como QX, causante de altas mortalidades en la 1. Desarrollar un programa activo de vigilancia de la ostra Saccostrea glomerata en Australia. enfermedad en poblaciones de berberecho que aún no están afectadas, con el fin de conocer el status La marteiliosis en Cerastoderma edule se detectó por sanitario de las poblaciones en todo momento. primera vez en Francia en 1975 (Comps et al., 1975; La marteiliosis afectó en 2012 a berberechos de la ría de Rev. Trav. Inst. Peches Marit., 4:317-326). En España, Arousa causando una gran mortalidad. Ante el riesgo de se detectó en berberechos del Delta del Ebro, con un propagación de esta enfermedad a las rías limítrofes, se 40% de prevalencia, asociada a un episodio de elevada desarrolló un programa de vigilancia centrado en el mortalidad en 2008 (Carrasco et al., 2011; Aquaculture, análisis de berberechos de bancos de las rías de 321: 197-202). En Galicia se detectó por primera vez en Pontevedra y Noia. Con este fin, se recogieron con febrero de 2012, en berberechos C. edule de Lombos do periodicidad bimestral muestras de 30 individuos en los Ulla asociada a una mortalidad masiva del huésped. En bancos de Placeres (ría de Pontevedra) y Testal (Noia). los meses siguientes, la enfermedad se detectó en Se hicieron cortes histológicos de los berberechos que CIMA Memoria 2013 51 se analizaron con microscopio óptico. El análisis de las paredes acanaladas de 0,20 m2 cada una, que se muestras recogidas a lo largo de 2013 indicó que los enterraron en el substrato. En el submareal las cajas berberechos de Noia no estaban afectados por Marteilia. tenían paredes cerradas y se dispusieron en una En el caso de la ría de Pontevedra si se diagnosticaron estructura metálica que se depositaba sobre el fondo. berberechos afectados por la marteiliosis. Los primeros Las cajas estaban recubiertas con malla plástica con el casos se detectaron en el mes de febrero con una baja fin de evitar la pérdida de los berberechos y su muerte prevalencia (6,7%). En el mes de julio se detectó de por depredación. En cada caja se cerró una zona de 2 nuevo un caso (3,3%), incrementándose la prevalencia 0,03 m empleando una malla, en esta zona se colocaron en los meses siguientes hasta alcanzar en el mes de 15 berberechos para el estudio de la mortalidad. Cada diciembre el 63%. Los berberechos de los bancos de mes se tomó una muestra de 25-30 individuos (5 o 6 por Campelo, Combarro y Tambo fueron analizados en el caja) para el mes de diciembre, resultando que los 3 bancos estaban mortalidad, y los individuos que murieron en el recinto afectados por la marteiliosis. cerrado se sustituyeron por otros de la caja. En cada estudio histopatológico, se determinó la emplazamiento se colocó una sonda registradora en 2. Monitorizar la evolución de la prevalencia de la continuo de la temperatura y salinidad. enfermedad en los bancos de Cerastoderma edule afectados, especialmente en lo que se refiere a los En el banco de Sarrido, el seguimiento de la introducción nuevos individuos que se incorporen a la población a de invierno remató en el mes de agosto y el de través del reclutamiento. primavera en septiembre. La observación de las En el mes de junio de 2013 se detecta una nueva muestras al microscopio indicó que los berberechos no cohorte de berberechos en los bancos de Sarrido y estaban afectados por la marteiliosis pero si por otras Lombos do Ulla. Con el fin de analizar la evolución del patologías. estado de salud de estas poblaciones, cada mes se importantes fueron las siguientes: neoplasia diseminada, recogieron 30 berberechos en cada uno de estos granulomatosis, bolsas bacterianas, esporoquistes y bancos. De cada individuo se realizó un corte histológico metacercarias de trematodos, y haplosporidios. La que se examinó con microscopio óptico. Durante 2013 prevalencia de bolsas bacterianas fue alta pero la no se detectó la enfermedad en el banco de Sarrido. En intensidad de la infección fue baja por lo que no debieron las muestras de Lombos do Ulla analizadas hasta el causar importantes problemas patológicos. En la gráfica momento, no se detectó la enfermedad. se Los muestran parásitos las y prevalencias enfermedades de las más principales patologías y la mortalidad finita mensual. La prevalencia 3. Analizar aspectos relacionados con la transmisión de neoplasia se incrementó progresivamente y alcanza de la enfermedad, tanto en el medio natural como en el máximo valor en mayo. Este aumento de la neoplasia laboratorio. parece estar relacionado con la mortalidad, ya que el El estudio de la posible transmisión de la marteiliosis se mes siguiente de la máxima subida de la prevalencia de abordó mediante experimentos en el medio natural y en neoplasia la mortalidad alcanza el máximo valor, y el laboratorio. después decrece al bajar la neoplasia, probablemente por muerte de los individuos muy afectados por la Experimento de transmisión en el medio natural enfermedad. En la introducción de primavera los Se introdujeron berberechos procedentes del banco de resultados Testal (Noia), libre de marteiliosis, en el banco neoplasia se incrementó progresivamente, alcanzó un intermareal de Sarrido y en el banco submareal de máximo Lombos do Ulla, ambos afectados por la enfermedad probablemente por la muerte de los individuos muy durante 2012. Con el fin de analizar el posible efecto afectados. La mortalidad se incrementó con el aumento estacional, se introdujeron fueron valor en similares, julio y la prevalencia descendió en de la agosto, berberechos en cuatro de la neoplasia y alcanzó el máximo valor en agosto el momentos del año coincidiendo con el invierno, con la mes siguiente de la máxima prevalencia de la neoplasia. primavera, con el verano y con el otoño. En cada una de Por otra parte, en el mes de julio se detecta que un 20% las introducciones se colocaron 5 cajas de 100 de los berberechos tenían haplosporidios, y en un 12% berberechos, previamente marcados, de estos las infecciones eran intensas por lo que Sarrido, en el banco de y 6 cajas de 100 berberechos marcados en probablemente también causaron cierta mortalidad. Lombos do Ulla. En el intermareal se utilizaron cajas de 52 En el banco de Lombos do Ulla, las introducciones de afectados por marteiliosis y si por otras patologías berberechos de Noia en las cajas no terminaron en el similares a las detectadas en el banco de O Sarrido, año 2013, ya que la mortalidad finita mensual fue muy detectándose baja (siempre por debajo del 20%). La observación de prevalencias menores. las muestras indicó que los berberechos no estaban CIMA Memoria 2013 53 neoplasia diseminada pero con Experimento de transmisión en el laboratorio Se realizó un experimento de 5. Caracterizar el nivel ultraestructural y molecular transmisión por de la especie de Marteilia que afecta a los cohabitación. Para ello, en vasos de vidrio y en circuito berberechos gallegos. abierto en el laboratorio, se colocaron berberechos de un La identificación de la especie que causa la marteiliosis banco no afectado por marteiliosis (Noia) junto con en los berberechos de Galicia se realizó mediante el berberechos de otro banco muy afectado por esta estudio enfermedad (O Sarrido). En cada uno de los 3 vasos de mediante transmisión se pusieron 10 berberechos de Noia y 10 ultraestructura permitió incluirla en el género Marteilia. de Sarrido. En cada uno de los 3 vasos control se Las características morfológicas mostraron proximidad, pusieron 20 berberechos de Noia. de las análisis características moleculares. ultraestructurales El examen de y la Al final del pero no completa identidad, con la especie Marteilia experimento se analizaron los cortes histológicos de los cochillia que fue recientemente descrita por Carrasco et berberechos. El análisis de los resultados indicó que no al. (2013) en berberechos del Delta del Ebro afectados se berberechos por marteiliosis. Son necesarios más estudios para saber Cerastoderma edule. Estos resultados sugieren que la si estas diferencias son debidas a la variabilidad transmisión no se produce de forma directa entre intraespecífica berberechos, y confirmarían lo descrito para Marteilia análisis molecular indicó que el parásito que causó la refringens en otros bivalvos. Son necesarios más marteiliosis en berberechos de Galicia es M. cochillia. ensayos para confirmar esta hipótesis ya que la duración Este parásito parece tener una alta especificidad, ya que del experimento fue corta (65 días) y es posible que se no se detectó ni en almejas R. philippinarum ni en necesite más tiempo para transmitir la enfermedad. almejas Venerupis corrugata transmitió la marteiliosis entre o a un examen impreciso. Con todo, el de Lombos do Ulla, recogidas cuando esta enfermedad era muy intensa en 4. Evaluar la susceptibilidad de otra especie de los berberechos. Tampoco se detectó en mejillones berberecho, el birollo C. glaucum, a las infecciones Mytilus galloprovincialis recogidos de bateas próximas a por Marteilia sp. bancos muy afectados, aunque si se detectó Marteilia Durante el año 2013 se tomaron muestras mensuales de refringens en alguno de ellos. Todos estos estudios 25 berberechos Cerastoderma glaucum adultos en el fueron recogidos en la siguiente publicación: banco de Sarrido. Los berberechos se procesaron por técnicas cortes Collapse of the cockle Cerastoderma edule fishery in ría histológicos mostró que los berberechos no estaban histológicas. El análisis de los de Arousa (Galicia NW Spain) associated with the afectados por marteiliosis. Estos resultados sugieren que protistan parasite Marteilia cochillia. Vilalba A., Iglesias C. glaucum es resistente a esta enfermedad ya que D., Ramilo A., Darriba S., Parada J. M., No E., Abollo E., convivieron en el medio con una población de C. edule Molares, J., Carballal M. J. Diseases of Aquatic muy infectada con Marteilia. Organisms (en prensa). 54 ACCIÓN DE INVESTIGACIÓN EQUIPO TÍTULO: INVESTIGADOR PRINCIPAL: Nuevo programa de selección de ostra plana, Ostrea Fuentes González, J.M. edulis, resistente a la bonamiosis, con especial énfasis en el estudio de las mortandades, de posible origen INVESTIGADOR: vírica, en las fases de cultivo larvario y preengorde de la Villalba García, A. semilla. (NOVOSOR). APOYO A LA INVESTIGACIÓN: Giraldez Rivero, R.; Gregorio Chenlo, M.V. INICIO: junio, 2012 FINALIZACIÓN: diciembre, 2014 ENTIDAD FINANCIADORA: Dirección Xeral de Desenvolvemento Pesqueiro. Consellería do Medio Rural e do Mar. Xunta de Galicia RESUMEN Desde finales de los años 70, las poblaciones naturales y virus tipo herpes, diferente al OsHV descrito para la cultivadas de ostra plana europea, Ostrea edulis, están especie Crassostrea gigas. Esto nos hizo pensar que las siendo afectadas por una pandemia causada por el masivas mortalidades acaecidas al inicio del cultivo protozoo Bonamia ostreae. larvario pudiesen también ser debidas al mismo tipo de Esta pandemia provoca mortalidades masivas a lo largo de todo el litoral virus. Atlántico europeo. Una de las formas de lucha más eficaces contra este tipo de pandemias es la obtención Esta acción de investigación tiene como objetivo de estirpes resistentes o tolerantes a la enfermedad, principal el reinicio del programa de selección de ostras mediante programas de cría selectiva. En el año 2000 se resistentes a la bonamiosis en Galicia, a partir de varias inició en el Centro de Investigacións Mariñas-CIMA un poblaciones naturales (Ortigueira, Noia y Pontevedra) y programa de selección de ostras resistentes con el de una población semi-natural (IGAFA), haciendo objetivo de obtener variedades de ostra plana más especial hincapié en el estudio de las malformaciones en tolerantes a la bonamiosis en Galicia. El programa se el velo de las larvas, en el caso de que éstas vuelvan inició con un proyecto preliminar consistente en la acontecer. Durante el año 2013 se llevaron a cabo las evaluación de varias familias de ostra plana obtenidas en fases de: acondicionamiento de los reproductores, criadero a partir de reproductores procedentes de obtención de las puestas, cultivo larvario y cultivo de la diferentes poblaciones naturales de la costa europea. En semilla. De los resultados obtenidos podemos extraer las una segunda fase del programa, realizada durante el siguientes conclusiones: trienio 2004-2007, se inició el programa de cría selectiva propiamente dicho. En el año 2008, cando iniciamos la 1. Las malformaciones del velo afectan, con mayor o tercera fase de desarrollo del mismo, comenzaron a menor intensidad, a las larvas de todos los stocks de acontecer mortalidades masivas y recurrentes, al inicio ostra utilizados en este experimento. de la fase de cultivo larvario, ocasionadas por malformaciones en el aparato locomotor (el velo) de las 2. En el caso de O. edulis, estas malformaciones larvas, que impedía la correcta natación y alimentación afectan, por término medio, al 25% de las larvas emitidas de en cada puesta, aunque en ciertos casos este porcentaje las mismas. Los resultados de los análisis preliminares realizados en estas larvas nos puede superar el 50% hicieron sospechar de un posible origen vírico de estas mortalidades. Más tarde, en la fase de pre-engorde en 3. Las malformaciones también se detectaron en las batea, la semilla cultivada volvió a sufrir mortalidades larvas de la ostra plana de Provenza, Ostrea stentina, masivas, que en este caso sí fueron causadas por un aunque en porcentajes significativamente menores que CIMA Memoria 2013 55 las de los stocks de O. edulis. Esta especie de ostra obtuvo con el stock salvaje procedente de la ría plana de Ortigueira que fue lo que presentó una menor apareció de manera accidental entre los reproductores procedentes de Ortigueira. mortalidad. Los otros dos stocks salvajes de las rías de Noia 4. A pesar de la presencia, en las células de diversos y Pontevedra presentaron mortalidades intermedias. tejidos de larvas con velos malformados, de síntomas microscópicos compatibles con una infección vírica, no 7. El número medio de larvas emitidas por puesta fue fuimos capaces de encontrar partículas virales en los semejante en los cuatro stocks de O. edulis es núcleos de estas células cuando fueron examinadas significativamente menor en el caso de O. stentina. mediante el microscopio electrónico de transmisión. 8. El rendimiento medio de los cultivos de todos los 5. Sí se detectó de forma inequívoca una infección viral stocks utilizados, desde la obtención de las puestas de tipo herpesvirus en semilla de un lote procedente de hasta el inicio de la fase de pre-engorde en batea, fue una puesta del stock de Noia, lo cual indica la presencia bastante bajo (7,1%). Este rendimiento fue aún menor de este tipo de virus en nuestras instalaciones. (1,7%) si sólo incluimos en los cálculos los cuatro stocks de O. edulis. 6. Durante las fases de acondicionamiento de los reproductores y obtención de las puestas, el stock que 9. El stock O. stentina, mostró ser significativamente más presentó un peor comportamiento (mayor mortalidad) fue robusto (menos mortalidad en casi todas las fases del el stock semi-salvaje del IGAFA. El mejor resultado se cultivo) que los cuatro stocks de O. edulis. 56 PROYECTO DE INVESTIGACIÓN EQUIPO TÍTULO: INVESTIGADOR PRINCIPAL: Poblaciones bacterianas en los criaderos de bivalvos y su Universidad de Santiago: Barja Pérez, J,L. influencia en la producción: patógenos y probióticos. INVESTIGADORES/AS: INICIO: enero, 2012 CIMA: Montes Pérez, J.; Ojea Martínez, J. FINALIZACIÓN: diciembre, 2014 Universidad de Santiago: Dubert Pérez, J.; Prado Plana, S. ENTIDAD FINANCIADORA: Ministerio de Ciencia e Innovación APOYO A LA INVESTIGACIÓN: CIMA: Meléndez Ramos, I.; Penas Pampín, E. RESUMEN El presente proyecto tiene por objeto el estudio del papel aplicando el protocolo diseñado por el grupo en de las poblaciones bacterianas en la supervivencia de proyectos anteriores. los cultivos larvarios de moluscos bivalvos mantenidos en criaderos y su repercusión en la producción. 4. El ensayo de bacterias probióticas (ya disponibles en el grupo de trabajo), en lo que se refiere a su El trabajo está estructurado desde un punto de vista conservación, interacciones del producto en el criadero y multidisciplinar, integrando conocimientos de Biología de vías de uso en el sistema de producción. Cultivos, Microbiología, Patología y Tecnología Farmacéutica. Se parte de los resultados obtenidos en El aspecto más relevante de este proyecto es la proyectos previos y se pretende avanzar en el desarrollo oportunidad de obtener el máximo rendimiento de de procedimientos mejorados a partir del análisis de los trabajos anteriores junto con los resultados obtenidos en datos elaborados y de la nueva investigación a realizar. la experimentación propuesta, aplicando una aproximación innovadora consistente en la integración En los últimos años ha habido un importante desarrollo de toda la información disponible. Esta visión global del del conocimiento de la biología de las nuevas especies criadero es importante dada la falta de estudios de este de bivalvos introducidas en la acuicultura, así como tipo, a causa de la gran inversión de tiempo necesario y avances en la tecnología de producción de las la dificultad de obtener resultados a largo plazo. microalgas usadas como alimento. Sin embargo, es todavía escaso el conocimiento de los procesos En el año 2013, se ha continuado con las líneas básicas microbiológicos implicados en todo el sistema del de integración de las distintas disciplinas, y en el caso criadero. del Departamento de Patología del CIMA de Corón, con los datos Los cuatro objetivos generales son: de parasitología y de desarrollo gonadal de especies como: almeja fina (Venerupis decussatus), almeja babosa (Venerupis pullastra), almeja japonesa 1. El análisis integrado de los datos microbiológicos, (Venerupis philippinarum), coquina (Donax trunculus), histopatológicos y de cultivo. longueirón (Ensis siliqua) y longueirón “vello” (Solen marginatus), procedentes en su día de puesta inducida 2. La caracterización fenotípica y molecular de aislados del Centro de Cultivos de Ribadeo. bacterianos asociados al criadero, relevantes por su potencial patogénico o beneficioso. Para el diagnóstico parasitológico, se utilizaron técnicas histológicas, muestras de glándula digestiva, branquia, 3. La definición de los controles mínimos a realizar en manto y pie se fijan en Davidson, se realizan los bloques un criadero para conocer su status de parafina, cortes de 5 micras, aplicando diversas microbiológico, CIMA Memoria 2013 57 tinciones. - Se ha estudiado el efecto de diferentes protocolos de acondicionamiento en la carga bacteriana de los Durante el desarrollo del proyecto se han alcanzado ya reproductores. resultados relevantes: La aplicabilidad final de los resultados del proyecto - Se han descrito dos nuevas patologías de larvas. incluiría tanto el conocimiento de la dinámica de las poblaciones bacterianas en criadero y su transferencia - Se ha demostrado la no especificidad de hospedador. entre compartimentos, la presencia de potenciales bacterias patógenas, la influencia de las distintas - Se ha estudiado la dinámica de las poblaciones de especies de bivalvos cultivadas y, por último, la Vibrio en el fitoplancton usado como alimento para las aplicación de bacterias probióticas para regular la larvas. microbiota asociada al sistema. Es decir, una mejora de la producción final del criadero. 58 ACCIÓN DE INVESTIGACIÓN EQUIPO TÍTULO: COORDINADORA DEL PROYECTO: Estudio epidemiológico de la almeja rubia (Venerupis López Gómez, M.C. rhomboides) en Galicia afectada por colonias procariotas intracelulares (CPI). Identificación de las INVESTIGADORES: CPI. Seguimiento de la estructura de tallas de CIMA: Febrero Mayor, F.M.; No Couto, E. poblaciones de almeja rubia de 4 bancos de la ría de Xefatura de Coordinación da Área do Mar, Vigo: Vigo. Rodríguez González, L.M. INTECMAR: Darriba Couñago, S. INICIO: octubre, 2013 FINALIZACIÓN: octubre, 2015 APOYO A LA INVESTIGACIÓN: CIMA: Meléndez Ramos, M.I.; Penas Pampín, E. ENTIDAD FINANCIADORA: Dirección Xeral de Desenvolvemento Pesqueiro. Consellería do Medio Rural e do Mar. Xunta de Galicia RESUMEN Eventos de mortalidades elevadas en los bancos de 1.- Realizar el seguimiento de la estructura de tallas de almeja de las poblaciones de almeja rubia de 4 bancos de la ría de pescadores de la ría de Vigo e informes emitidos por los Vigo (los cuales fueron estudiados en la acción biólogos de zona; también informes emitidos por la preliminar de la almeja rubia), para relacionarla con una Unidad de Patología del INTECMAR, que confirmaban la posible mejora del reclutamiento. rubia comunicados por las cofradías detección de colonias procariotas intracelulares tipo rickettsias (CPI) en bancos de almeja rubia de la ría de 2.- Profundizar en la identificación del agente etiológico Vigo. Llevaron a que en el año 2012 la Consellería do (CPI tipo rickettsias), a nivel molecular. Medio Rural e do Mar encargara a investigadores del CIMA una acción corta “Análisis preliminar de la 3.- Observación al microscopio óptico, empleando una problemática de disminución de la producción de almeja escala cuantitativa de intensidad, de las preparaciones rubia (Venerupis rhomboides) en la ría de Vigo”. Indicar histológicas recogidas hasta la actualidad en bancos de que en dicho informe las CPI fueron denominadas OPIBr la ría de Vigo y de la ría de Arousa. (Organismos Procariontes Intracelulares en Branquia), pero a partir de ahora serán denominadas CPI. En el 4.- Continuar el estudio epidemiológico iniciado como informe de respecta a la consecuencia de los episodios de mortalidad de esta patología de esta especie, se destaca la presencia de especie en la ría de Vigo, centrándose en los agentes CPI- I y II en la branquia, por sus prevalencias e patógenos que fueron identificados como posibles intensidades (las CPI-I con mayor intensidad que las responsables de causar efectos deleterios en la almeja CPI-II); así como la presencia del protozoo Nematopsis rubia. dicho trabajo, en lo que sp. también localizado en la branquia. Destacar que las CPI-II son colonias que están hiperparasitas por un virus Con respecto a la estructura de tallas (Objetivo 1), los (Darriba et al., 2012). resultados de la acción preliminar del 2012 mostraron en conjunto abundancias de población muy reducidas y, en Posteriormente en el año 2013 la Consellería encargó a muchos casos, estructuras de tamaños desequilibrados, investigadores de sugiriendo la existencia de un déficit en la incorporación investigación para continuar con el estudio de la almeja de juveniles a la fracción comercial. Sobre esta base se rubia en la ría de Vigo. esperaba que durante los dos próximos años la situación del CIMA la siguiente acción productiva de la almeja rubia en la ría de Vigo no En esta acción se contemplan los siguientes objetivos: mejorase o mismo empeorase. Para seguir estudiando la CIMA Memoria 2013 59 estructura de la población de almeja rubia en la ría de de los 162 individuos totales (9,98%). La talla media, Vigo, se eligieron 4 bancos sublitorales en los que cerca de la legal, fue de 38,08±7,62 mm y un porcentaje trabajan los barcos del plan de a flote para muestrear: de legales bajo (38,27%). Cabo de Mar, Tirán, Liméns e Islas Cíes. En el banco de Liméns (30/10/2013) sigue la estructura de la población del banco de Tirán, con una talla media En el muestreo de Tirán (16/10/2013) la estructura de la más alta, cerca de la legal (35,23±6,49) y un porcentaje población tiene un tamaño desequilibrado, apareciendo también bajo de legales (21,01%). La estructura de la solamente 16 individuos de la fracción juvenil (< 26mm) población es la de la siguiente gráfica: La estructura de la población del banco de las Islas Cíes totales del muestreo (72%). La talla media fue baja (12/11/2013) es muy distinto de los dos anteriores, (26,50±9,25 mm) y un porcentaje de legales muy estando equilibrada con una elevada fracción de reducido (12,67%). La gráfica de la población es la juveniles (<26mm), 108 frente a los 150 individuos siguiente: 60 Por último el banco de Cabo de Mar (18/11/2013) tiene KC878324 (Endozoicomonas sp. WP70); KF799154 una estructura de población muy semejante al de las (Uncultured Islas Cíes, con una talla media baja (28,62±14,65 mm) y Estamos diseñando nuevos cebadores para continuar un porcentaje de legales bajo (35,93%). En este banco con la identificación. bacterium clone Wood Hole a5663). no se encontraron ejemplares entre las tallas 22-33 mm. Tiene elevada fracción de juveniles (<26mm), 91 de los En lo que corresponde al Objetivo 3, se está llevando a 150 individuos totales del muestreo (60,67%). cabo la observación al microscopio óptico, aplicando una escala cuantitativa a las preparaciones histológicas La conclusión de estos primeros muestreos indica que disponibles en el laboratorio (pero a las que no se les los dos bancos (Liméns y Tirán) tienen una estructura aplicó dicha escala), así como a las muestras del otoño desequilibrada de la población y no presenta una del 2013 de los bancos de Vigo en los que se está fracción juvenil por lo que puede existir un déficit en la llevando a cabo el estudio de la estructura de tallas. incorporación de juveniles a la fracción comercial. En los Trabajo realizado o pendiente de observación: otros dos bancos (Cabo de Mar e Islas Cíes) la estructura de la población está equilibrada con una amplia fracción de juveniles que en un futuro podrían incorporarse a la fracción comercial. - Corcubión (30 indv) Mar 2011 (observado). - Fisterra (30 indv) Jl 2011 (observado). - Cabo do Mar (30 ind) My, Jl, Sept, Dic 2011 y Marzo 2012 (observado) Cabio (30 ind) Febr - Dic 2011; Para la identificación del agente etiológico (CPI tipo Mar, My, Jn, Sept, Oct 2012 (observado). rickettsias) (Objetivo 2) se llevó a cabo la extracción de - Liméns (50 indv) Octubre 2013 (en observación). ADN de la branquia (de individuos diagnosticados - Tirán (50 indv) Octubre 2013 (en observación). previamente por histología), así como PCRs utilizando - Islas Cíes (50 indv) Octubre 2013 (pendiente de cebadores diseñados por (Giovannoni, 1991) y (Meetselaar et al., 2010) para amplificar el gen 16s rDNA de bacterias. Las secuencias obtenidas de hasta 1527 pb fueron analizadas en el GENBank observación). - Cabo do Mar (50 indv) Julio y Octubre 2013 (en observación). encontrándose similitudes con KC668434 (Uncultured bacterium clone Con respecto al Objetivo 4, los datos obtenidos de la P3-C12); KC668464 (Uncultured bacterium clone P8- observación histológica están archivados en la base de G11); KC668432 (Uncultured bacterium clone P3-C09); datos Access para su posterior análisis. CIMA Memoria 2013 61 7 PROCESOS OCEANOGRÁFICOS COSTEROS 62 ACCIÓN DE INVESTIGACIÓN EQUIPO TÍTULO: INVESTIGADOR PRINCIPAL: Las biotoxinas marinas en las zonas de cultivo de Blanco Pérez, J. mejillón, con especial atención a las toxinas emergentes: presencia en el mejillón y en el INVESTIGADORES/AS: sedimento, desarrollo de métodos de detección y INTECMAR: Arévalo Bartolomé, F.; Moroño Mariño, A.; evaluación de la utilidad del sedimento para el Correa Jorge, J. análisis de riesgo. (TOSE). APOYO A LA INVESTIGACIÓN: INICIO: febrero, 2012 CIMA: Mariño Cadarso, C.; Martín Sánchez, H. FINALIZACIÓN: febrero, 2014 INTECMAR: Muñíz Romero, S. ENTIDAD FINANCIADORA: BECARIA: Dirección Xeral de Desenvolvemento Pesqueiro. Martín Morales, E. Consellería do Medio Rural e do Mar. Xunta de Galicia RESUMEN Existen un buen número de toxinas lipofílicas, consideradas emergentes porque están relativamente 3. Determinar la persistencia y/o transformación de las toxinas en los sedimentos de batea. poco estudiadas y presentan una considerable toxicidad estimada por bioensayo de ratón y por otros 4. Describir los perfiles verticales de las toxinas procedimientos. Es necesario controlar estas toxinas identificables pero la intensidad del control a realizar debe adaptarse al especialmente relevantes para las toxinas que se o rastreables en zonas de bateas riesgo que representan. Se sabe que algunas de estas puedan estudiar. toxinas están presentes en Galicia pero no está clara ni la importancia de las presentes ni si hay presencia de Se han obtenido todas las muestras necesarias, pero más toxinas que las ya detectadas. Como para aclarar algunos datos están aún por procesar. estas dos situaciones son necesarios registros largos en el tiempo y estos no existen consideramos de interés En relación al Objetivo 1, se desarrolló una técnica de evaluar la posibilidad de utilización de los sedimentos detección/cuantificación por HPLC-MS/MS con fases como registro continuo de las toxinas y de esta forma móviles alcalinas que en modo positivo es capaz de habilitar una nueva herramienta para conocer la detectar y cuantificar más de 30 toxinas entre las que se presencia e incidencia en el pasado de las toxinas incluyen marinas, con especial atención las espirólidos, las pinnatoxinas, las toxinas pteriatoxinas (probable) y las gymnodiminas conocidas emergentes y, más concretamente, en las iminas cíclicas en la actualidad, así como las toxinas DSP, la palytoxina, (espirólidos, pinnatoxinas, en los y las pectenotoxinas 2 y 1, los azaspirácidos 1-6 y 37 y la gymnodiminas). Para esto se plantearon los siguientes pteriatoxinas brevetoxina 2, todo ello en un cromatograma de 7.5 objetivos: minutos incluyendo el reequilibrado de la columna. El método se desarrolló en dos versiones, la primera para 1. Desarrollar métodos analíticos para el control de las muestras estándar de moluscos o muestreadores toxinas emergentes y especialmente de iminas cíclicas. pasivos, que no requieren preconcentración de la muestra y la segunda para sedimento, que dadas las 2. Iniciar el control rutinario de dichas toxinas en zonas bajas concentraciones de las toxinas en él, requieren de cultivo elegidas. una etapa de preconcentración. En ambos casos la inyección de la muestra se hace a un cartucho trampa CIMA Memoria 2013 63 (“trap column”) colocado en una válvula de 2 posiciones rápidamente y la tercera prácticamente no sufre que, al cambiar de posición deriva la muestra del alteración alguna en un período de 1 mes. cartucho a la columna cromatográfica para su análisis. Según estos estudios de estabilidad el 13-desmetil SPX Sin preconcentración se inyectan 5µL de muestra y con C no debería poderse detectar en el sedimento por lo preconcentración 500µL en fases móviles ligeramente que se evaluó la posibilidad de que estuviese contenido diferentes para optimizar la retención de las toxinas en el en quistes de resistencia de los dinoflagelados que segundo caso. producen la toxina. El análisis del sedimento tamizado para eliminar la fracción menor de 5µm mostró que Este método se complementó con otro en modo negativo prácticamente no se pierde toxina en la fracción fina, por para el estudio de las yessotoxinas más importantes de lo que es esperable que en realidad la toxina esté dentro entre las conocidas. de los quistes. En relación con el Objetivo 2, se realizó un año de En relación al Objetivo 4, se obtuvieron perfiles de 13- monitorización de presencia de estas toxinas en mejillón desmetil SPXC y otras toxinas en diversas estaciones de y en disolución en agua, por medio del uso de las rías de Ares, Muros, Pontevedra y Arousa. Los datos muestreadores dos preliminares de dos estaciones de la ría de Pontevedra estaciones: Bueu en la ría de Pontevedra y Arnela en la muestran que la concentración de 13-desmetil SPXC ría de Ares y Betanzos. La única imina cíclica que se disminuye exponencialmente con la profundidad en el encontró, con presencia significativa, fue el 13-desmetil sedimento y la presencia de máximos subsuperficiales. SPX C, tanto en el agua como en los bivalvos. Su La extrapolación de estos máximos a la superficie del concentración en los bivalvos fue siempre baja en ambas sedimento daría valores en 2 y 6 veces más altos que en estaciones al igual que en columna de agua en Bueu. En la actualidad, lo que indica, de forma preliminar, que las Arnela, sin embargo, la presencia en agua fue importante proliferaciones en el pasado no han sido sustancialmente aunque mayores que las actuales. esta pasivos no (Diaion se vio HP20), traducida en en altas concentraciones en el mejillón de la zona. Dado que no se encontraron iminas cíclicas distintas del En relación al Objetivo 3, se encontraron diversas 13-desmetil SPXC en los sedimentos de Galicia toxinas en sedimentos, tanto arenosos como fangosos. analizados, decidimos analizar sedimentos de alguna El estudio de la degradación en agua mostró que hay zona en la que estén presentes en la columna de agua, grandes diferencias en estabilidad entre las toxinas. El para comprobar si el sedimento es un indicador fiable. ácido okadaico no se degrada, prácticamente, mientras En colaboración con el IRTA se obtuvieron muestras del que la mitad del 13-desmetil SPX C desaparece del agua delta del Ebro y en ellas, a pesar de ser muy arenosas, en 21 días (agua de mar) o 9.5 días (agua de mar en pudieron detectarse pinnatoxinas, lo cual sugiere que los condiciones reductoras). Conclusiones similares se sedimentos son un indicador fiable de la presencia de obtienen con incubaciones de 13-desmetilSPX C, estas iminas cíclicas y que en realidad en Galicia o bien Gymnodimina y ácido okadaico en sedimentos de no están presentes o lo están pero con una incidencia distintas rías y de 4 o 20 cm de profundidad: las dos marginal. primeras toxinas (iminas cíclicas) se degradan 64 PROYECTO DE INVESTIGACIÓN EQUIPO TÍTULO: INVESTIGADOR PRINCIPAL: Transportadores y metabolitos implicados en la Blanco Pérez, J. depuración de la toxina ASP en bivalvos, con especial referencia a una especie de eliminación lenta, la vieira APOYO A LA INVESTIGACIÓN: Pecten maximus (TRAIDA). Mariño Cadarso, C.; Martín Sánchez, H. Subproyecto 1.- Inhibición del transporte a través de membrana del ácido domoico en moluscos bivalvos BECARIA: (INDOME). Martín Morales, E. INICIO: enero, 2013 FINALIZACIÓN: diciembre, 2015 ENTIDAD FINANCIADORA: Ministerio de Economía y Competitividad RESUMEN La principal toxina ASP, el ácido domoico, se acumula en Este subproyecto se ocupará de llevar a cabo la parte la glándula digestiva de la vieira Pecten maximus experimental y analítica y los estudios de metabolómica durante períodos mucho más largos que en otros necesarios para el desarrollo de los dos subproyectos, bivalvos, lo cual impide que esta especie sea utilizada en llevando a cabo experimentos de exposición de dos acuicultura y dificulta sustancialmente la explotación de especies al ácido domoico, de inhibición selectiva de sus poblaciones naturales. Estudios recientes de este transportadores de membrana y de prospección de otros equipo han mostrado que la toxina se encuentra libre en aminoácidos y metabolitos que pudieran tener relación el citoplasma de las células de dicho órgano, por lo que con la acumulación de ácido domoico, especialmente en la explicación más probable para la elevada retención del la vieira. compuesto es la carencia o ineficacia de transportadores de membrana que faciliten su excreción. La alta Adicionalmente se probará la capacidad de distintas acumulación hace que no sea posible encontrar sustancias, entre ellas metales, para ligar ácido domoico individuos sin toxina, lo cual dificulta los estudios y por tanto con potencialidad para habilitar rutas de experimentales. eliminación de las células diferentes de las de la molécula libre. Para tratar de abrir vías de solución para el problema hemos considerado caracterizar, Los estudios se realizarán mediante la exposición de inicialmente, el/los transportadores implicados utilizando vieiras y mejillones a células tóxicas y ácido domoico tres disuelto, mediante el análisis detallado de poblaciones estrategias identificando metabolómica, los indispensable complementarias: a) posibles implicados; identificando genes algunos genómica, b) naturales de vieira y mediante la exposición de metabolitos fragmentos de tejidos con toxina a inhibidores de relacionados con la acumulación de ácido domoico y c) transportadores fisiológica: identificando inhibidores de transportadores relacionados. Los analisis de ácido domoico y los de membrana o de procesos asociados al transporte, estudios de metabolitos se realizarán mediante UHPLC- que reducen su tasa de eliminación en las especies que MS depuran rápidamente. herramientas de libre acceso de metabolómica. En el proyecto coordinado, utilizando esta estrategia En el presente año se ha determinado la toxicidad de combinada se identificarán los candidatos más probables varias cepas de Pseudo-nitzschia se ha realizado un de entre los transportadores y se comprobará la experimento de intoxicación de mejillones y se han expresión de los genes que los regulan cuando los seleccionado mejillones con alta y baja exposición al bivalvos están expuestos a la toxina. ácido domoico que se tranfirieron al Subproyecto 2 para o CIMA Memoria 2013 de membrana UHPLC-MSn 65 y utilizando de procesos posteriormente la evaluación de las diferencias en expresión génica. Se han desarrollado, además diversas actividades previas para la continuación de las actividades previstas. 66 ACCIÓN DE INVESTIGACIÓN EQUIPO TÍTULO: INVESTIGADOR PRINCIPAL: Efecto de las biotransformaciones de toxinas de tipo Blanco Pérez, J. diarreico (DSP) en organismos del intermareal sobre las diferencias de toxicidad estimada por LC-MS/MS y INVESTIGADORES/AS: bioensayo de ratón y sus repercusiones para los cierres INTECMAR: Arévalo Bartolomé, F.; Moroño de explotación y la salud humana (ESTINFA). Mariño, A.; Correa Jorge, J. INICIO: mayo, 2013 APOYO A LA INVESTIGACIÓN: FINALIZACIÓN: mayo, 2015 CIMA: Mariño Cadarso, C.; Martín Sánchez, H. INTECMAR: Muñíz, S. ENTIDAD FINANCIADORA: Dirección Xeral de Desenvolvemento Pesqueiro. Consellería do Medio Rural e do Mar. Xunta de Galicia RESUMEN Esta acción de investigación surge de la aparición de Durante este primer año el trabajo a realizar se centró en algunas discrepancias, especialmente en fases tardías la obtención de muestras de moluscos del intermareal de los episodios de toxicidad DSP, entre la estimación de expuestos a toxinas DSP, en la medida de lo posible, en la toxicidad por bioensayo de ratón y por HPLC-MS/MS, varios en el sentido de que la última de estas técnicas estima desintoxicación. Se han obtenido más de 60 muestras valores superiores. Para clarificar esta situación y que evaluar su impacto, se plantean los siguientes objetivos: japonesa, momentos comprenden rubia), del ciclo de intoxicación/ diversas almejas (fina, babosa, navajas (navaja, longueirón) y berberecho, en alguna de las cuales ya se ha estimado 1.- Evaluación de la extensión del problema identificando la toxicidad por alguna de las dos técnicas y una en qué especies se presenta. submuestra de 10g se mantiene congelada. 2.- Identificación de los compuestos responsables. Para el Objetivo 3 se ha revisado la información existente sobre digestión simulada y se ha elegido el 3.- Evaluación de la liberación de toxinas de los método a utilizar. compuestos responsables durante un proceso simulado de digestión humana. CIMA Memoria 2013 67 8 RECURSOS MARINOS 68 ACCIÓN DE INVESTIGACIÓN EQUIPO TÍTULO: INVESTIGADOR PRINCIPAL: Evaluación del crecimiento estacional y anual de la De Coo Martín, A. navaja (Ensis arcuatus) y longueirón (Ensis silíqua) y longueirón vello (Solen marginatus) en los diferentes INVESTIGADORES: ambientes productivos de Galicia. Monitoring de estado CIMA: García Fernández, A. reproductivo-gametogénico de estas especies. Cofradía de Vilaxoán: Alcalde Creo, A. Cofradía de O Grove: Otero, J. INICIO: 2013 FINALIZACIÓN: 2015 PERSONAL DE APOYO: Fariña Iglesias, J.A. ENTIDAD FINANCIADORA: Consellería do Medio Rural e do Mar. Xunta de Galicia RESUMEN 1.-INTRODUCCIÓN Durante finales de 2010, y en los años 2011 y 2012, este próximos que pueden presentar características más equipo de investigación vino desarrollando un estudio normales. sobre la dinámica de poblaciones de los solénidos en Galicia. Reseñar los dos aspectos más relevantes de la presente acción-ampliación: (1) los muestreos de comprobación Hay que señalar que estos años no fueron normales en se efectuarán en los bancos intermareales de navaja y lo que respecta a temperatura y precipitaciones en las longueirón vello de la Cofradía de Vilaxoán y en las rías donde se realizaron los muestreos. Los años, según zonas de buceo de navaja y longueirón de O Grove, y (2) las informaciones meteorológicas de MeteoGalicia y el período de duración que, dadas las fechas actuales y otras, resultaron estar significativamente apartados de la procesos de aprobación, se extendería a dos años, hasta normalidad. Así el invierno de 2010-2011 registró detectar las fijaciones naturales de estas especies en el elevadas precipitaciones y bajadas de salinidad que año 2015. afectaron de forma relevante tanto en el intermareal (Vilaxoán) como submareal próximo (Lourizán- 2.-TRABAJOS REALIZADOS Pontevedra) que interfieren en la reproducción, tanto en el proceso de maduración, puesta y posterior 2.1.- Seguimiento de las condiciones oceanográficas. supervivencia en las estaciones de estudio. Por otro lado 2.2.- 12 muestreos: en zona intermareal para navaja y a finales de 2011 e invierno de 2012 se presentó el longueirón vello en Vilaxoán, en submareal en O Grove proceso contrario de no presencia de lluvias, cielos para navaja y longueirón y datos de navaja en la ría de claros, etc. con valores desconocidos en la historia y con Pontevedra y Noia derivados de muestreos de la acción un resultado global de años más cálidos y secos. de investigación de especies exóticas. Es por esto que consideramos interesante la 3.- RESULTADOS Y AVANCES INICIALES continuación del proyecto por DOS AÑOS más, lo que nos permitiría, por un lado, la confirmación de los datos hasta aquí alcanzados y la comparación con los años 3.1.- El año 2013 no resultó un año de valores normales y por lo contrario registró datos aún más severos que los 3 años anteriores (ver figura anexa) CIMA Memoria 2013 69 SALINIDADE (Estacion de Cortegada) 0,6 metros 35 S a lin id a d e 30 25 20 15 10 5 0 Xa Fe Mr Ab Ma Xñ Xl Ag Se Ou No De Xa Fe Mr Ab Ma Xñ Xl Ag Se Ou No De Xa Fe Mr Ab Ma Xñ Xl Ag Se Ou No De Xa Fe Mr Ab Ma Xñ Xl Ag Se Ou No De Meses 2010 2011 2012 2013 3.2.- Estas condiciones oceanográficas se asocian a no y longueirón y a un crecimiento general más reducido en detección de cría de longueirón vello en Vilaxoán, navaja en intermareal. detección del reclutamiento anual en O Grove de navaja 70 ACCIÓN DE INVESTIGACIÓN EQUIPO TÍTULO: INVESTIGADOR PRINCIPAL: Estudio de las especies exóticas presentes en las aguas De Coo Martín, A. costeras y rías de Galicia: evaluación de su distribución y abundancia, de sus repercusiones ambientales y socioeconómicas y medidas de prevención y protección. INVESTIGADORES: CIMA: Fernández Álvarez, A.; García Fernández, A.; López Gómez, M.C.; INICIO: 2013 Delegación CMReM Carril: Fernández Barreiro, J.; FINALIZACIÓN: 2015 Iglesias Núñez, R.A.; Otero González, X. Delegación CMReM Celeiro: Cerdeira Arias, J.D.; ENTIDAD FINANCIADORA: Teijeiro Golpe, O.E. Consellería do Medio Rural e do Mar. Xunta de Galicia Delegación CMReM Vigo: Febrero Mayor, F.; Rodríguez González, L.M. UTPB: Bañón Díaz, R.; Filgueira Rodríguez, F.J.; Juncal Caldas, L.; Ribo Landín, J. Colaborador externo-Malacólogo: Trigo, J. ASISTENCIAS TÉCNICAS: Cofradía de Vilaxoán: Alcalde Creo, A. Cofradía de Noia: Solís Pais, L. Cofradía de O Grove: Otero Mascato, J. Cofradía de Cangas: Barreiro Ríos, B. Cofradía de Pontevedra: Simón Gómez, A. Cofradía de Carril: Conde Varela, L. Cofradía de Vicedo: Gómez Brandariz, D. APOYO A LA INVESTIGACIÓN: Briones Beiras, M.; Fariña Iglesias, J.A.; Meléndez Ramos, M.I.; Penas Pampín, E. RESUMEN I.- INTRODUCCIÓN El presente programa se plantea como una colaboración 1.1.- Catálogo actualizado. entre equipos y persoal investigador del CIMA, biólogos 1.2.- Fichas por especie. de playas, UTPB, Cofradías de Noia, O Grove, Vilaxoán, 1.3.- Base de datos. Bibliografía. Carril, 1.4.- Creación de colección tanto gráfica y de ejemplares Lonxa Campelo (Pontevedra, Lourizán y Combarro) y Cangas, y sus asistencias técnicas y por conservados. una duración inicial de tres años. 2.- Creación de un observatorio de las especies Los objetivos acordados fueron los siguientes : exóticas marinas. Subobjetivos: 1.- Elaboración de un catálogo de las especies 2.1.- Centralización y atención. exóticas marinas presentes en las aguas costeras y 2.2.- Conocimiento público y contacto. rías de Galicia. Recopilación de la información 2.3.- Recogida de información y muestras. bibliográfica y práctica disponible. 2.4.- Comunicación, coordinación equipo, investigación y Subobjetivos: relación entidades semejantes. CIMA Memoria 2013 71 o Muestreo distribución Cyclope neritea en zona de 3.- Estimación de los efectos medio-ambientales y socio-económicos de las especies conocidas y de Carril, Vilaxoán, Pontevedra y ría de Noia. nueva localización. o Muestreo submareal de rias de Viveiro y Celeiro. Subobjetivos: o Muestreo Stramonita haemastona 3.1.- Capacidad invasora y de expansión y ocupación en playas de la Mariña Lucense. o Muestreo espacial. 3.2.- Niveles de depredación y consumo de recursos de de población referenciada de Anadar kaghosimensis en ría de Viveiro. o Muestreo de población Anadara kaghosimensis en otras especies. 3.3.- Sobrecostes y deterioros en empresas acuícolas e zona de Carril. infraestructuras litorales. o Muestreo Crepipatela dilatata en zona Illa de Arousa. 3.4.- Repercusiones socio-económicas. o Muestreo en Ensenada de O Grove sobre poblaciones 3.5.- Otro tipo de efecto. de Hexaplex trunculus y Bolinus brandaris. o Muestreo banco natural de ostra plana en ría de Noia 4.- Evaluación de métodos y medidas de prevención afectada por Crepidula fornicata. y protección de los ecosistemas y las especies Los muestreos se realizaron durante los meses de autóctonas. septiembre y octubre y las muestras se congelaron en el Subobjetivos: CIMA. 4.1.- Análisis de las vías de entrada. 2.2.4.- Procesamiento y toma de datos de muestras 4.2.- Métodos de gestión, control y erradicación. congeladas realizado en los meses de noviembre y 4.3.- Técnicas de protección. diciembre. 4.4.- Posibilidades de aprovechamiento comercial. 2.2.5.- Diseño, debate y elaboración de cartel para campaña de colaboración con Observatorio de Especies 5.- Revisión de la legislación y de las estrategias de Exóticas Mariñas de Galicia. gestión, control y posible erradicación diseñadas por 2.2.6.- La parte de patología tiene realizado controles las distintas administraciones. específicos en Anadara e iniciada la revisión bibliográfica específica. 6.- Divulgación de la problemática y resultados: 2.2.7.- Se tiene comenzada la revisión bibliográfica Subobjetivos: 6.1.- Elaboración en profundidad de los temas-especies relacionadas con memorias anuales, final y la acción de investigación. publicaciones. 2.2.8.- Reuniones con la Subdirectora del Parque das 6.2.- Generación de reuniones con expertos implicados. Illas Atlánticas, 6.3.- Puesta a disposición de catálogo, resultados Responsable de la Planta de Insuiña en O Grove para investigación y base de datos bibliográfica. colaborar con la Acción de Investigación. 6.4.- Sensibilización social: Edición de DVD y manual Montserrat Martínez y con el 2.2.9.- Se tienen iniciado los contactos con grupos didáctico. científicos especialistas en taxónes de especies marinas para colaborar en el buen desarrollo de la acción de II.-TRABAJOS REALIZADOS investigación. 2.1.- La acción fue aprobada el 15-06-2013, aunque no III.- RESULTADOS Y AVANCES INICIALES se comenzó de forma práctica hasta la disposición de los presupuestos efectivos el 21-08-2013. 3.1.- Alcanzado un buen nivel de colaboración entre los miembros del equipo y un posicionamiento realista sobre 2.2.- Principales acciones realizadas en el ano 2013: la amplitud, diversidad y complejidad de los temas abordados en la acción de investigación. 2.2.1.- Funcionamiento equipo, determinación de responsabilidades y tareas para 2013. 3.2.- Se recogió una información inicial importante para 2.2.2.- Adquisición de material aprobado. programar el próximo año. 2.2.3.- Muestreos : o Muestreo ría de Vigo: Distribución Crepidula fornicata y 3.3.- Los datos iniciales de las especies más importantes fauna asociada. obtenidos, serían: 72 - Crepidula fornicata: Muy extendida. Densidades bajas - Hexaplex trunculus: Bastante extendido (ría Arousa- (1-10 ind/m2). Expansión a otras especies y zonas Vigo) y densidad baja y parece en fase de expansión nuevas: Zonas naturales y banco natural O. plana ría fuera de la Ensenada de O Grove. Muros-Noia. - Bolinus brandaris: Baja densidad mucho menor que - Anadara kaghosimensis: Pequeña población en fase Hexaplex. de estabilización, presentando activación reproductiva y crecimiento una - Cyclope neritea: Muy extendida en rías Pontevedra, comprobación de la población de Anadara en Ribadeo, rápido. Se está realizando Arousa (mucho menos Muros Noia). Densidades altas detectada en los años 90. (10-50 ind/m2). Rápida movilidad y concentración. - Crepipatella dilatata: Bastante extentida y densidades - Stramonita haemastoma: Expansión en playas/rocas bajas. Gran capacidad reproductiva. costa lucense. Densidad baja. CIMA Memoria 2013 73 ACCIÓN DE INVESTIGACIÓN EQUIPO TÍTULO: COORDINADORA: Estudio de los bancos naturales de coquina: Martínez Patiño, D. problemática de su desaparición en Galicia. INVESTIGADORES/AS: INICIO: septiembre, 2013 CIMA: Febrero Mayor, F.; Iglesias Estepa, D.; Montes FINALIZACIÓN: diciembre, 2015 Pérez, J.; No Couto, E.; Nóvoa Vázquez, S.; Ojea Martínez, J. ENTIDAD FINANCIADORA: UNI VIGO: Nombela Castaño, M.A. Xunta de Galicia. ECIMAT: Dirección Xeral de Investigación, Desenvolvemento e Fernández, S.; Trigo Sampedro, N. Innovación. CSIC: Álvarez Salgado, X.A.; Otero Villar, J. Beiras García-Sabell, R.; González INTECMAR: Doval González, M.D. Xefatura de Coordinación da Área do Mar. Celeiro: Cerdeira Arias, D.; Teijeiro Golpe, O. Departamento Territorial de Vigo. CMReM: Iglesias, E.; Rodríguez González, L.M. Xefatura Comarcal de Ferrol. CMReM: Brezmes Comesaña, C.; Liñán Gil, I.M. USC: Barja Pérez, J.L.; Dubert, J.; Olveira, G.; Prado Plana, S. XENOMAR. UDC: Insua Pombo, A.; Méndez Felpeto, J.; Nantón Varela, A. ASISTENCIAS TÉCNICAS: Cofradía de Vicedo: Gómez Brandariz, D. Cofradía do Barqueiro: del río Rocha, G. Cofradía de Cedeira: Quintana Couto, A. APOYO A LA INVESTIGACIÓN: CIMA: Álvarez Llamas, L.M.; Bouzamayor Yáñez, V.; Cotarelo Jardón, M.J.; Meléndez Ramos, I.; Páez Pérez, J.; Penas Pampín, E.; Ruíz Misioné, M. Xefatura de Coordinación da Área do Mar. Celeiro: Martín Salas, F. RESUMEN El objetivo de este trabajo es estudiar las causas por las dentro de cada línea, se abordaron las siguientes que desaparecieron los bancos de coquina que existían actividades: en Galicia, abordando tanto el estudio medio ambiental de los bancos como el estudio de su población. 1.- Naturaleza de los bancos Los bancos estudiados fueron: Vilarrube en Valdoviño, Para eso se marcaron unas líneas de actuación a Playa América en Nigrán y Lombo das Navallas en la ría desarrollar por los grupos de trabajo participantes en do Barqueiro. esta acción. - Sedimentos. En este estudio, el objetivo es caracterizar Durante el último cuatrimestre del año 2013, que se texturalmente los sedimentos para saber su tamaño corresponde con el primero del desarrollo de la acción, 74 medio, su grado de selección, así como todos aquellos el agua que baña los bancos naturales de coquina parámetros características durante la marea alta. Hasta la fecha, se recogieron granulométricas (mediana, modas, curtosis, asimetría, que definen sus muestras de las tres zonas en septiembre de 2013 y etc). diciembre 2013–enero 2014. Por otro lado se estudiará la composición de los 2.- Muestreos poblacionales sedimentos atendiendo a diferentes parámetros como Se realizaron muestreos periódicos y por estratos son: su contenido en materia orgánica y carbonatos, (intermareales y submareales), comparando los bancos composición mineralógica y contenido en metales tanto marisqueros de Lombo das Navallas y Playa América mayoritarios como minoritarios. El primer paso fue la como bancos problema, con el banco de Vilarrube como recogida de las distintas muestras y su separación para banco control. llevar a cabo las diferentes analíticas según las distintas metodologías. - Lombo das Navallas en la ría do Barqueiro. Se realizaron dos muestreos de la población del banco de - Ecotoxicología de los sedimentos. Se llevó a cabo un Lombo das Navallas, los pasados 18 de septiembre y 5 muestreo de sedimentos en Playa América, el 19 de de diciembre. octubre. Se hizo el estudio ecotoxicológico de los sedimentos con - Playa América. Este banco está dividido en dos sub organismos marinos pertenecientes a tres niveles tróficos recogidos. Realizando bioensayos zonas: “Playa América” y “Panxón”. Se realizaron dos diferentes: fitoplancton (productor primario), erizo de mar muestreos en el intermareal de la sub zona de “Playa (herbívoro) y copépodo (carnívoro). Los bioensayos se América”, en septiembre (18 y 19) y en diciembre (4 y 5) llevan a cabo con elutriados, extracción acuosa de los y un muestreo en el sublitoral de esa misma zona el 5 de contaminantes retenidos en el sedimento problema. diciembre. - Compactación de los sedimentos. Se hace este estudio - Vilarrube. Banco de coquina en Valdoviño. Se a la vez que los muestreos de población ya que se trata realizaron dos muestreos, el primero a finales de de correlacionar este parámetro con las características septiembre y el otro en diciembre. de las distintas poblaciones por lo que los puntos de los muestreos son los mismos. 3.- Tolerancia de la coquina a diversos parámetros El estudio de la resistencia de esta especie a las - Análisis del agua. El objetivo es caracterizar las aguas condiciones del medio a las que puedan estar expuestas que afectan a los bancos desde el punto de vista en algunas ocasiones es una de las líneas a abordar: fisicoquímico prestando atención a su contenido en nutrientes orgánicos e inorgánicos, tanto disueltos como - en la salinidades con las coquinas del banco de Vilarrube caracterización fisicoquímica de los sedimentos, servirá recogidas en noviembre. Se emplearon ejemplares de para comprobar si las diferencias fisicoquímicas del agua diferentes tamaños. suspensión. Esta información, junto con Salinidad. Se hicieron experiencias con distintas y los sedimentos, son quién de explicar el éxito dispar de los bancos naturales de coquina en las tres playas - estudiadas. del agua. Con el objetivo de estudiar su respuesta ante Adaptación a la naturaleza de los fondos y agitación factores de esta naturaleza se hicieron pruebas Se comenzó por dotar a los biólogos de zona y a las puntuales en el laboratorio, con adultos y con semilla, asistencias técnicas de las cofradías de Baiona, Cedeira, sometiéndolos a diferentes grados de agitación de agua O Barqueiro y O Vicedo, con el material científico y la y diferentes tipos de substrato. formación necesaria para recoger, procesar y conservar las muestras de agua que se analizarán en los 4.- Patología y microbiología laboratorios del IIM-CSIC y del INTECMAR. Igualmente El objetivo de este apartado es conocer el estado importante fue la elección de los puntos de toma de parasitológico de este recurso, de cara a valorar la muestras, tanto en los ríos que vierten a las playas existencia o no de patologías relevantes. estudiadas (Miñor, Das Mestas/Ferreiras y Sor), como en CIMA Memoria 2013 75 Estudios anteriores realizados por Carballal et al., organismos (2008), como el informe de JACUMAR (2009), que repetir el estudio en otras zonas de playa incluyendo el recoge una serie de parasitologías, que no causaban submareal. daños importantes, con la única excepción bentónicos infaunales. Se recomienda de organismos tipo rickettsias con prevalencias en algunos Se marcaron los puntos de recogida de las muestras de meses relativamente altas, lo que puede constituir un las aguas tanto continentales como marinas de los tres peligro potencial, ya habiéndose descrito mortalidades bancos. En los bancos el aspecto más destacable son en Francia asociadas a esta patología (Comps y las elevadas concentraciones de clorofila encontradas Raimbault, 1978). en Vilarrube en comparación con los bancos de Playa América y Lombo das Navallas, donde se encontraron Se realizaron muestreos microbiológicos en el banco de las concentraciones más bajas. Vilarrube en los meses de septiembre y diciembre, y en este último muestreo también se hizo el estudio de En el banco de Lombo das Navallas, los datos de los presencia o número de herpesvirus de ostra. muestreos muestran una población debilitada y representada, mayormente, por individuos de la segunda 5.- Análisis de la diversidad genética cohorte de 15 mm de media, con tamaños máximos de El objeto es la diferenciación genética de las coquinas en unos 25 mm. las localidades gallegas donde exista el recurso, mediante marcadores microsatélite. Durante estos Todo esto indica que nos encontramos ante una meses, el grupo Xenomar recogió muestras de coquina población que no da crecido y que sobrevive gracias a de los bancos naturales de Vilarrube, Playa América y unos pocos individuos que maduran prematuramente, los Lombo das Navallas. individuos de entre 12 y 25 mm. 6.- Recopilación de bibliografía y tratamiento de Existe una correlación entre los individuos más pesados datos y el sedimento más ligero. Por parte de cada grupo de trabajo está recopilando toda la información existente sobre los bancos de En Playa América existe una población de coquina de coquina de Galicia, tanto la bibliografía de los trabajos muy existentes, como los datos obtenidos en estudios comercial. Hay una diferencia importante entre las anteriores que hagan referencia a esta especie, para densidades encontradas en los muestreos intermareales poder marcar los protocolos para una gestión eficiente de septiembre y de diciembre. Aunque con índices de de los datos. densidad muy bajos en los dos casos, en diciembre la baja densidad con escasa/nula importancia densidad de población de coquina (ind/m2) se multiplicó Los resultados más destacables de los trabajos por 4. realizados en la primera anualidad de esta acción, son: En el muestreo sublitoral de diciembre aparece una En cuanto al estudio de los sedimentos, en el actual densidad importante de individuos de casi 10 ind/m2 estado de desarrollo del proyecto, podríamos concluir (multiplica por 20 o por 3 las encontradas en el que se hizo el protocolo tanto para la recogida de las intermareal en septiembre y diciembre, respectivamente) muestras de campo, como los tratamientos previos a los aunque toda la población pertenece a individuos análisis granulométricos y composicionales. juveniles (tallas entre 8 y 22 mm). Ningún adulto. Los resultados de todos los bioensayos para el estudio Habría que valorar la presencia de posibles progenitores toxicológico realizados en Playa América indican que de esta semilla; quizás los reproductores se encuentren para la zona de la playa estudiada y en esta época del a mayor profundidad: están pendientes, a partir de 2014, año no existe toxicidad sobre los organismos marinos de realizar otros muestreos sublitorales mediante buceo. representativos de 3 niveles tróficos utilizados. Por lo tanto y a falta de estudios más exhaustivos podemos El banco marisquero de coquina de la playa de Vilarrube afirmar que en la actualidad no existe contaminación presenta un comportamiento normal en relación a la química en la zona que represente un peligro para los evolución esperada de las cohortes. No obstante se 76 constata una disminución generalizada de los efectivos no pueden considerarse como preocupantes para el comparando los dos muestreos realizados hasta el desarrollo de este recurso. momento. Los análisis microbiológicos muestran una carga de En el comportamiento de la coquina, se observó una bacterias marinas normal y una cantidad algo elevada mayor tolerancia de los ejemplares más pequeños a las de vibrios, la presencia del herpesvirus dio un resultado bajas salinidades, los más grandes toleran mejor los negativo. fuertes movimientos del agua y todos los ejemplares presentaron un rápido enterramiento en el substrato A nivel genético se consiguieron los marcadores microsatélite para la especie Donax trunculus, siendo Hasta el momento las parasitologías detectadas, tanto este el primer paso para el análisis genético poblacional por las características de estas, como por su intensidad, de las localidades objeto de estudio. CIMA Memoria 2013 77 DIVULGACIÓN 78 9 ARTÍCULOS EN REVISTAS SCI CARBALLAL, M.J.; IGLESIAS, D.; DÍAZ, S.; VILLALBA, A. Disseminated neoplasia in clams Venerupis aurea from Galicia (NW Spain): histopathology, ultrastructure and ploidy of the neoplastic cells, and comparison of diagnostic procedures. Journal of Invertebrate Pathology, 112:16-19. DA COSTA, F.; BARREIRO, B.; OJEA, J.; NÓVOA, S.; MARTÍNEZ-PATIÑO, D. Effects of stocking density on intermediate culture of the razor clam Ensis arcuatus (Pharidae: Bivalvia). Aquaculture Research, 1–8. DA SILVA, P.M.; VIANNA, R.T.; GUERTLER, C.; FERREIRA, L.P.; SANTANA, L.N.; FERNÁNDER-BOO, S.; RAMILO, A.; CAO, A.; VILLALBA, A. First report of the protozoan parasite Perkinsus marinus in South America, infecting mangrove oysters Crassostrea rizophorae from Paraíba River (NE, Brazil). Journal of Invertebrate Pathology, 113: 96-103. DÍAZ, S.; VILLALBA, A.; INSUA, A.; SOUDANT, P.; FERNÁNDEZ, J.; MÉNDEZ, J.; CARBALLAL, M.J. Disseminated neoplasia causes changes in ploidy and apoptosis frequency in cockles Cerastoderma edule. J. Invertebr. Pathol.,113: 214-219. DOMINGUES, P.; SÁNCHEZ, F.J.; IGLESIAS, J.; OTERO, J.J.; PAZOS, G.; LINARES, F. Variations in Weight and Proximate Composition of Newly Hatched Octopus vulgaris (Cuvier 1797) Paralarvae. Journal of Applied Aquaculture, 25:219–226. LYNCH, S.A.; VILLALBA, A.; ABOLLO, E.; ENGELSMA, M.; STOKES, N.; CULLOTY, S.C. The occurrence of haplosporidian parasites, Haplosporidium nelsoni and Haplosporidium sp., in oysters in Ireland. Journal of Invertebrate Pathology, 112:208-212. MARTÍN-GÓMEZ, L.; VILLALBA, A.; CARBALLAL, M.J.; ABOLLO, E. Identification of relevant cancer related-genes in the flat oyster Ostrea edulis affected by disseminated neoplasia. Marine Biotechnology, 15:159-174. PAZ, B.; BLANCO, J.; FRANCO, J.M. Yessotoxins production during the culture of Protoceratium reticulatum strains isolated from Galician Rias Baixas (NW Spain). Harmful Algae, 21-22: 13–19. RAMILO, A.; NAVAS, J.I.; VILLALBA, A.; ABOLLO, E. New species-specific PCR assays for diagnosis of Bonamia ostreae and Bonamia exitiosa in the European flat oyster Ostrea edulis: conventional, real-time and multiplex PCR. Diseases of Aquatic Organisms, 104:140-161. RUIZ, P.; DÍAZ, S.; ORBEA, A.; CARBALLAL, M.J.; VILLALBA, A.; CAJARAVILLE, M.P. Biomarkers and transcription levels of cancer-related genes in cockles Cerastoderma edule from Galicia (NW Spain) with disseminated neoplasia. Aquatic Toxicology, 136-137: 101-111. RUIZ, M.; DARRIBA, S.; RODRÍGUEZ, R.; LÓPEZ, C. Histological survey of symbionts and other conditions of pod razor clam Ensis siliqua (Linnaeus, 1758) in Galicia (NW Spain). Journal of Invertebrate Pathology CIMA Memoria 2013 79 10 LIBROS Clam fisheries and aquaculture. Editor: Fiz da Costa González, Nova Science Publishers, ISBN: 978-1-62257-521-3, New York: DA COSTA, F.; ARANDA-BURGOS, J.A.; CERVIÑO-OTERO, A.; FERNÁNDEZPARDO, A.; LOUZÁN, A.; NÓVOA, S.; OJEA, J.; MARTÍNEZ-PATIÑO, D. Clam Reproduction, pp. 45-72. LÓPEZ, C.; DARRIBA, S.; NAVAS, J.I. Clam Symbionts. pp. 107-148 RUIZ, M.; LÓPEZ, C. Neoplasms in Clams. pp. 149-162. ROMALDE, J.L.; DIÉGUEZ, A.L.; DOCE, A.; LASA, A.; BALBOA, S.; LÓPEZ, C.; BEAZ-HIDALGO, R. Advances in the Knowledge of the Microbiota Associated with Clams from Natural Beds. pp 163-190. DA COSTA, F.; ARANDA-BURGOS, J.A.; CERVIÑO-OTERO, A.; FERNÁNDEZPARDO, A.; LOUZÁN, A.; NÓVOA, S.; OJEA, J.; MARTÍNEZ-PATIÑO, D. Clam Hatchery and Nursery Culture. pp. 217-254. GUERRA DÍAZ, A. Clam Production and Cultivation in Galicia (NW Spain): The Role of Hatcheries. pp. 255-272. PARADA, J.M.; MOLARES, J. Artisanal Exploitation of Natural Clam Beds: Organization and Management Tools. pp. 273-290. Libro de Resúmenes, XIV Congreso Nacional de Acuicultura. VILLALBA, A.; RAMILO, A.; ABOLLO, E. Impacto de la infección por virus herpes de ostreidos tipo 1 en el engorde de ostra rizada Crassostrea gigas en Galicia. pp. 112-113. CASTRO, N.; MAGARIÑOS, B.; BANDÍN, I.; RODRÍGUEZ, J.L.; LINARES, F.; TORANZO, A.E. Influencia de macroalgas en la resistencia del lenguado a enfermedades microbianas. pp. 158-159. FERNÁNDEZ-PARDO, A.; MURADO, M.; RIAL, D.; MARTÍNEZ-PATIÑO, D.; NÓVOA, S. Optimización del cultivo larvario de Venerupis pullastra mediante una aproximación factorial de segundo orden. pp. 208-209. MEDINA, A.; FERNÁNDEZ-PARDO, A.; MARTÍNEZ, D.; OJEA, J.; NÓVOA, S. Estudio de la Tasa de Aclaramiento y de Ingestión de tres especies de almeja: fina (Ruditapes decussatus), japónica (Ruditapes philippinarum) y rubia (Venerupis rhomboides). pp. 272-273. MEDINA, A.; ARANDA, J.A.; CERVIÑO, A.; NÓVOA, S.; OJEA, J.; MARTÍNEZ, D. Evaluación de dos sistemas de preengorde de especies de almeja: fina (Ruditapes decussatus), japónica (Ruditapes philippinarum) y rubia (Venerupis rhomboides). pp. 274-275. Advances in aquaculture hatchery technology. G. Allan and G. Burnell editors, Woodhead Publishing Limited, ISBN: 978-0-85709-119-2, 518 pp. KAMERMANS, P.; GALLEY, T.; BOUDRY, P.; FUENTES, J.; MCCOMBIE, H.; BATISTA, F.M.; BLANCO, A.; DOMINGUEZ, L.; CORNETTE, F.; PINCOT, L.; BEAUMONT, A. Blue mussel hatchery technology in Europe. 80 11 PONENCIAS Y PANELES Congreso: First Internacional Conference Fish and Shellfish Immunology. Vigo. DE LA BALLINA, N.R.; RAMILO, A.; VILLALBA, A.; CAO, A. Proteomic approach to identify markers of resistence to bonamiosis in the proteins of the oyster Ostrea edulis haemolymph. MARTÍN-GÓMEZ, L.; VILLALBA, A.; CARBALLAL, M.J.; ABOLLO, E. Molecular characterisation of TNF, AIF, dermatopontin and VAMP genes of the flat oyster Ostrea edulis and analysis of their modulation by diseases. PARDO, B.G.; MILLÁN, A.; FERNÁNDEZ, C.; ALVAREZ-DIOS, J.A.; GÓMEZ-TATO, A.; CAO, A.; RAMILO, A.; CARBALLAL, M.J.; VILLALBA, A.; MARTÍNEZ, A. Identification of candidates genes involved in responses of Ostrea edulis to bonamiosis based on oligo-microarray analysis. Congreso: XVIth International Conference of the European Association of Fish Pathologists “Diseases of Fish and Shellfish”. Tampere, Finlandia. Ponencias VILLALBA, A. Collapse of the cockle Cerastoderma edule fishery in Ría de Arousa (Galicia, NW Spain) due to marteiliosis. VILLALBA, A. Evaluation of the impact of the infection with ostreid herpesvirus-1 (OsHV-1) µvar in the on-growing of pacific oysters Crassostrea gigas in Galicia (NW Spain). Paneles CARBALLAL, M.J.; RAMILO, A.; ABOLLO, E.; VILLALBA, A. First detection of Minchinia sp. (Haplosporida) infecting cockles Cerastoderma edule from Galicia (NW Spain). RAMILO, A.; VILLALBA, A.; CARBALLAL, M.J.; IGLESIAS, D.; ABOLLO, E. Sequences of SSU rDNA, ITS AND IGS regions of Marteilia sp. (Cercozoa: Paramyxidae) infecting cockles Cerastoderma edule from Galicia (NW Spain), and a specific PCR assay for its diagnosis. VILLALBA, A.; IGLESIAS, D.; DARRIBA, S.; PARADA, J.M.; NO, E.; RAMILO, A.; ABOLLO, E.; CARBALLAL, M.J. Collapse of the cockle Cerastoderma edule fishery in Ría de Arousa (Galicia, NW Spain) due to marteiliosis. VILLALBA, A.; RAMILO, A.; ABOLLO, E. Evaluation of the impact of the infection with ostreid herpesvirus-1 (OsHV-1) µvar in the on-growing of pacific oysters Crassostrea gigas in Galicia (NW Spain). Congreso: Aquaculture 2013. Las Palmas, Gran Canaria. MATIAS, A.M.; DÍAZ, S.; SOUSA, J.; VILLALBA, A.; CARBALLAL, M.J.; LEITÃO, A. Variation of the karyotype of neoplastic cells associated to severity of disseminated Neoplasia in cockles Cerastoderma edule. Congreso: XVI Foro de Recursos Marinos y Acuicultura de las Rías Gallegas. O Grove (Pontevedra). Ponencias FERNÁNDEZ OTERO, R.; VILLALBA GARCÍA, A. OYSTERECOVER: Abrindo o camiño para a recuperación da ostra plana en Europa. CIMA Memoria 2013 81 MARTÍNEZ PATIÑO, D. Incorporación de nuevas especies al cultivo industrial en criadero. Paneles ARANDA, J.A.; CERVIÑO-OTERO, A.; DA COSTA, F.; FERNÁNDEZ-PARDO, A.; LOUZÁN, A.; NÓVOA, S.; OJEA, J.; MARTÍNEZ, D. Desarrollo embrionario y larvario de especies de moluscos bivalvos de interés comercial. GUERRERO, S.; MARIÑO, J.C.; FERNÁNDEZ, M.; OTERO, X.; SANTOS, I. Crecimiento y supervivencia de semilla de almeja babosa Venerupis pullastra (Montagu, 1803) colocada en bolsas en dos zonas submareales de la Ría de Arousa (Pontevedra, España). NANTÓN, A.; FREIRE, R.; ARIAS, A.; NÓVOA, S.; LOUZÁN, A.; MARTÍNEZ-PATIÑO, D.; MÉNDEZ, J. Estudio preliminar de una región de control del genoma mitocondrial de la coquina Donax trunculus. OJEA, J.; MARTÍNEZ-PATIÑO, D.; NÓVOA, S.; RODRÍGUEZ, N.; FERREIRO, L.; BARCELÓ, E.; GÓMEZ, D.; GARCÍA, M.; CATOIRA, J.L. Proyecto de regeneración del erizo de mar, Paracentrotus lividus, en las Rías Altas. (Ribadeo, San Cosme, Burela, San Cibrao, Celeiro, O Vicedo y Espasante). PÉREZ ACOSTA, C.; GUERRERO, S.; FERNANDEZ BESADA, M. Efecto de la salinidad sobre la supervivencia de semilla de almeja. SANTOS, I.; TOCA, F.A.; MARIÑO, J.C.; FERNÁNDEZ, M.; GUERRERO, S. Supervivencia de la almeja japonesa Ruditapes philippinarum (Adams et Reeves, 1850) en tres tipos de sustrato: Fango, Conchilla de mejillón y Mixto al 50% en el banco intermareal del Sarrido, Cambados (Pontevedra). Congreso: XIV Congreso Nacional de Acuicultura. Gijón. VILLALBA GARCÍA, A.: Miembro del Comité Científico. CASTRO, N.; MAGARIÑOS, B.; BANDÍN, I.; RODRÍGUEZ, J.L.; LINARES, F.; TORANZO, A.E. Influencia de macroalgas en la resistencia del lenguado a enfermedades microbianas. FERNÁNDEZ-PARDO, A.; MURADO, M.; RIAL, D.; MARTÍNEZ-PATIÑO, D.; NÓVOA, S. Optimización del cultivo larvario de Venerupis pullastra mediante una aproximación factorial de segundo orden. MEDINA, A.; FERNÁNDEZ-PARDO, A.; MARTÍNEZ, D.; OJEA, J.; NÓVOA, S. Estudio de la Tasa de Aclaramiento y de Ingestión de tres especies de almeja: fina (Ruditapes decussatus), japónica (Ruditapes philippinarum) y rubia (Venerupis rhomboides). MEDINA, A.; ARANDA, J.A.; CERVIÑO, A.; NÓVOA, S.; OJEA, J.; MARTÍNEZ, D. Evaluación de dos sistemas de preengorde de especies de almeja: fina (Ruditapes decussatus), japónica (Ruditapes philippinarum) y rubia (Venerupis rhomboides). VILLALBA, A.; RAMILO, A.; ABOLLO, E. Impacto de la infección por virus herpes de ostreidos tipo 1 en el engorde de ostra rizada Crassostrea gigas en Galicia. Congreso: Fourth Joint Symposium and AOAC Task Force Meeting. Bayona. MARTÍN MORALES, E.; MARIÑO, C.; ARÉVALO, F.; MOROÑO, A.; CORREA, J.; BLANCO, J. A prospective study of cyclic imines in two Galician aquaculture areas. MARTÍN MORALES, E.; MARIÑO, C.; BLANCO PÉREZ, J. The origin of persistent low levels of 13-desmethyl SPX C in Galician waters: Stability in seawater and sediments. Congreso: 2do Congreso Nacional de la Sociedad Mexicana para el Estudio de los Florecimientos Algales Nocivos. Ponencia magistral: BLANCO PÉREZ, J. Ficotoxinas en organismos marinos. Detección, acumulación y minimización de su impacto. Congreso: Seminario de divulgación “OYSTERECOVER Final Workshop – A Change of Scenario”, Vigo. VILLALBA, A.; PARDO B.G. A new scenario for starting selective breeding programmes. 82 Congreso: Impacto de la infección por virus herpes en el sector ostrícola, situación actual y perspectiva futura. Vigo. Ponente: Villalba García, A. VILLALBA, A.; RAMILO, A.; ABOLLO, E. Sostenibilidad del cultivo de ostra rizada en Galicia en el contexto de la infección por virus herpes. CIMA Memoria 2013 83 12 EDICIÓN DE PUBLICACIONES Revista Galega dos Recursos Mariños (4 series). Blanco, J.; Salgado, C.; Molares, J.; Fernández, M.L. Journal of Shellfish Research. Villalba García, A. (miembro del Comité Editorial) Diseases of Aquatic Organisms. Villalba García, A. (editor revisor) 84 ASESORAMIENTO CIMA Memoria 2013 85 13 INFORMES Título: Informe técnico-biológico sobre la solicitud de extracción de áridos en Punta Lioira (Rianxo) para vertido con fines de regeneración en el banco marisquero Punta Fincheira-Punta Salto Ladrón (Rianxo) y Parques de Carril. Autor/a: No Couto, E. Solicitante: Dirección Xeral de Desenvolvemento Pesqueiro Título: Análisis granulométrico de substrato submareal entre Punta Portomouro y Punta de Pedra Rubia (Boiro). Autor/a: No Couto, E. Solicitante: Agrupación Profesional de Mariscadores Ría de Arousa, Abanqueiro. Título: Análisis granulométrico de muestras de sedimento de una zona submareal de la Playa do Castro sometida a regeneración del substrato. Auto/a: No Couto, E. Solicitante: Cofradía de Aguiño Título: Informe del año 2012 correspondiente a las “Experiencias para el cultivo del besugo realizadas en las Jaulas Experimentales” de las que es titular el Centro de Investigacións Mariñas (Consellería do Medio Rural e do Mar) ubicadas en Bueu. Autor/a: Linares Cuerpo, F. Solicitante: Servizo de Innovación Tecnolóxica da Acuicultura. Secretaría Xeral do Mar. Consellería do Medio Rural e do Mar. Título: Informe sobre el análisis realizado a una muestra de ostra rizada recogida en una batea afectada por mortalidad anormal. Autor/a: Villalba García, A. Solicitante: Servizo de Inspección Veterinaria Título: Informe sobre el análisis realizado a una muestra de ostra rizada de una batea del polígono Grove A para el diagnóstico de virus herpes de ostreidos tipo 1 - µvar. Autor: Villalba García, A. Solicitante: Servizo de Inspección Veterinaria Título: Informe sobre los análisis realizados a las muestras de ostra rizada recogidas en tres bateas del polígono “Grove A” para el diagnóstico de la microvariante del virus herpes de ostreidos tipo 1 (OsHV1 - µvar). Autor: Villalba García, A. Solicitante: Servizo de Inspección Veterinaria 86 14 REUNIONES Reuniones de planificación de los planes de explotación de los bancos marisqueros “Lombos do Ulla”, “O Bohido” y “Cabío”. Carril. Participantes: Iglesias Estepa, D.; No Couto, E. Reunión de coordinación del proyecto (Kick-off meeting) “Exploring the biological and socio-economic potential of new/emerging candidate fish species for expansion of the European aquaculture industry (DIVERSIFY)”. Hellenic Center for Marine Research, Heraklion (Creta). Participante: Linares Cuerpo, F. Representante del CIMA en el “Clúster Uso Sostenible de Recursos Marinos” del Campus del Mar para el diseño de Planes Estratégicos. Participante: Villalba García, A. Participación en una reunión de coordinación del proyecto “Establishing the scientific bases and technical procedures and standards to recover the European flat oyster production through strategies to tackle the main constraint, bonamiosis”. Yerseke (Holanda). Participante: Villalba García, A. Reunión de coordinación del Plan Nacional JACUMAR “Caracterización de la situación sanitaria del litoral español relativa a la infección por virus herpes en moluscos bivalvos y evaluación del impacto de la enfermedad”. Participación por videoconferencia: Villalba García, A. Reunión de asesoramiento a la administración y coordinación sobre la marteiliosis que afecta a los berberechos de Galicia. INTECMAR. Participante: Villalba García, A. Reunión de coordinación del proyecto “Establishing the scientific bases and technical procedures and standards to recover the European flat oyster production through strategies to tackle the main constraint, bonamiosis”. CETMAR Participante: Villalba García, A. CIMA Memoria 2013 87 15 OTROS 15.1. ASESORAMIENTO. OTROS Representante del CIMA como responsable del seguimiento del proyecto ATRUGAL en la convocatoria 2013 FEDER-FEP de la CMRM. Linares Cuerpo, F. Convenio de colaboración entre la Xunta de Galicia a través de la Consellería do Medio Rural e do Mar y la Asociación de Acuicultores “Illa do Santo” de Bueu (Pontevedra), para el cultivo de peces en jaulas. Linares Cuerpo, F. Actualización de los cálculos de costes de la determinación de toxicidad DSP por medio de Bioensayo de ratón y HPLC-MS/MS, obtenidas en el subproyecto “Evaluación del impacto de los métodos y niveles utilizados para el control de toxinas en el mejillón” del proyecto JACUMAR “Cultivo de mitílidos: expansión y sostenibilidad (CULMITES)”. Blanco Pérez, J. 15.2. REVISIÓN DE ARTÍCULOS EN PUBLICACIONES CIENTÍFICAS Journal of Invertebrate Pathology (2 artículos) Carballal Durán, M.J. Toxicon (2 artículos) Chemosphere Latin American Journal of Aquatic Research Food Additives and Contaminants Blanco Pérez, J. Diseases of Aquatic Organisms Montes Pérez, J. Diseases of Aquatic Organisms (2 manuscritos) Journal of Invertebrate Pathology Villalba García, A. 88 FORMACIÓN CIMA Memoria 2013 89 16 TESIS DOCTORALES 16.1. DIRECCION/TUTORIZACIÓN DE TESIS Tema: Estudio del desarrollo gametogénico de la almeja fina, Ruditapes decussatus (Linné, 1758) en el medio natural y optimización de las condiciones del acondicionamiento en criadero. Doctorando/a: Ojea Martínez, J. Titulación: Licenciada en Biología Tutor/a y director/a de la tesis: Abad Caeiro, M.; Martínez Patiño, D. (Codirectora) Tema: Alimentación en una planta de cultivos. Calidad del alimento vivo y alternativas a su sustitución o suplementación. Doctorando/a: Fernández Pardo, A. Titulación: Licenciada en Biología Tutor/a y director/a de la tesis: Martínez Patiño, D.; Nóvoa Vázquez, S. Tema: Optimización del cultivo intensivo de la almeja fina Ruditapes decussatus en criadero. Doctorando/a: Aranda Burgos, J.A. Titulación: Licenciado en Biología Tutor/a y director/a de la tesis: Martínez Patiño, D. (Tutora y directora); da Costa González, F. (Codirector). Tema: Optimización del cultivo de la coquina Donax trunculus en criadero. Doctorando/a: Louzán Pérez, A. Titulación: Licenciada en Biología Tutor/a y director/a de la tesis: Martínez Patiño, D.; Nóvoa Vázquez, S. Tema: La perkinsosis en el litoral español: caracterización de variantes taxonómicas del parásito y de la respuesta inmunitaria del hospedador. Doctorando/a: Fernández Boo, S. Titulación: Licenciado en Biología Tutor/a y director/a de la tesis: Villalba Garcia, A. (Tutor y codirector); Cao Hermida, A. (Codirectora); Martínez Portela, P. (Codirector, USC). Tema: Estudio proteómico del sistema inmunitario de la ostra Ostrea edulis y de su respuesta frente a la bonamiosis. Doctorando/a: Rodríguez de la Ballina, N. Titulación: Licenciada en Biología Tutor/a y director/a de la tesis: Villalba Garcia, A. (Tutor y codirector); Cao Hermida, A. (Codirectora) Tema: Estudio histopatológico de los solénidos comerciales en Galicia (Ensis arcuatus, Ensis siliqua y Solen marginatus). 90 Doctorando/a: Ruíz Pérez, M. Titulación: Licenciada en Ciencias del Mar Tutor/a y director/a de la tesis: López Romalde, J. (Tutor, USC); López Gómez, C. (Directora, CIMA); Darriba, S. (Directora, INTECMAR) Tema: Estudo dunha neoplasia diseminada e outras alteracións patolóxicas que afectan as poboacións de berberecho, Cerastoderma edule, de Galicia. Doctorando/a: Díaz Costa, S.M. Titulación: Licenciada en Ciencias del Mar Directores Tesis: Carballal Durán, M.J.; Villalba García, A. Tema: Toxinas emergentes en Galicia. Doctorando/a: Martín Morales, E. Titulación: Licenciada en Biología Tutor/a y director/a de la tesis: Blanco Pérez, J. Tema: Caracterización molecular de genes implicados en la respuesta inmune de la ostra plana (Ostrea edulis) y japonesa (Crassostrea gigas) frente a patógenos. Doctorando/a: Martín Gómez, L. Titulación: Licenciada en Biología Tutor/a y director/a de la tesis: Villalba García, A. (Tutor y codirector), Abollo Rodríguez, E. (Codirectora, CETMAR) Tema: Desarrollo de herramientas moleculares de diagnóstico y su aplicación a los estudios de patología de moluscos bivalvos. Doctorando/a: Ramilo Álvarez, A. Titulación: Licenciada en Biología Tutor/a y director/a de la tesis: Villalba García, A. (Codirector), Abollo Rodríguez, E. (Codirectora, CETMAR) 16.2.PARTICIPACIÓN EN TRIBUNALES DE TESIS BLANCO PÉREZ, J. Título: Identificación de genes implicados en la eliminación de biotoxinas en el mejillón Mytilus galloprovincialis Lmk.: clonación y expresión de los cDNA que codifican para tres proteínas transportadoras ABC pertenecientes a las subfamilias C (proteínas MRP) y G. Doctorando/a: Lozano Paredes, V. Universidad: Universidad de Santiago de Compostela Título: Identificación de genes implicados en la eliminación de biotoxinas en el mejillón Mytilus galloprovincialis Lmk.: clonación y expresión de los cDNA que codifican para dos proteínas transportadoras ABC de la subfamilia B (proteínas MDR). Doctorando/a: Martínez Escauriaza, R. Universidad: Universidad de Santiago de Compostela VILLALBA GARCIA, A. Título: Coccidiosis and molecular basis of the immune response of common octopus (Octopus vulgaris Cuvier, 1797) Doctorando/a: Castellanos Martínez, S. Universidad: Universidad de Vigo Título: Cancer development in bivalve molluscs in relation with chemical pollution CIMA Memoria 2013 91 Doctorando/a: Ruiz Rodríguez, P. Universidad: Estación Marina de Plentzia, Universidad del País Vasco, Plentzia (Vizcaya) MARTINEZ PATIÑO, D. Título: Identificación de genes implicados en la eliminación de biotoxinas en el mejillón Mytilus galloprovincialis Lmk.: clonación y expresión de los cDNA que codifican para tres proteínas transportadoras ABC pertenecientes a las subfamilias C (proteínas MRP) y G. Doctorando/a: Lozano Paredes, V. Universidad: Universidad de Santiago de Compostela Título: Estudio genético poblacional de la almeja babosa Venerupis pullastra. Doctorando/a: Pereira Fernández, S.M. Universidad: Universidad de A Coruña Título: Inducción de la fijación en moluscos bivalvos. Genes Homeobox y su conservación en bivalvos. Doctorando/a: Mesias Gansbiller, C. Universidad: Universidad de Santiago de Compostela Título: Caracterización genética de poblaciones de Paracentrotus lividus (Lamarck, 1816) en Asturias, Galicia y Canarias y desarrollo de sistemas de cultivo en batea. Doctorando/a: Tourón Besada, N. Universidad: Universidad de Santiago de Compostela NÓVOA VÁZQUEZ, S. Título: Estudio del desarrollo gametogénico de la almeja fina, Ruditapes decussatus (Linné, 1758) en el medio natural y optimización de las condiciones del acondicionamiento en criadero. Doctorando/a: Ojea Martínez, J. Universidad: Universidad de Santiago de Compostela FUENTES GONZÁLEZ, J. Título: Dinámica ecológica de una especie de almeja nativa y otra introducida: Implicaciones para la conservación y gestión del marisqueo. Doctorando/a: Bidegain Cancer, G. Universidad: Universidad de Santander 92 16.3.TESIS PRESENTADAS Título: Estudio del desarrollo gametogénico de la almeja fina, Ruditapes decussatus (Linné, 1758) en el medio natural y optimización de las condiciones del acondicionamiento en criadero. Doctorando/a: Ojea Martínez, J. Universidad: Universidad de Santiago de Compostela Fecha presentación: junio-2013 RESUMEN El objetivo fundamental de esta tesis es optimizar el proceso de acondicionamiento en criadero de la almeja fina (Ruditapes decussatus), para poder obtener larvas la mayor parte del año. Los experimentos se hacen trabajando con volúmenes similares a los criaderos industriales para que los resultados puedan ser válidos para su aplicación en este tipo de criaderos. Se realiza el seguimiento de una población natural situada en las Lagunas de Baldaio (A Coruña) para establecer su patrón anual de desarrollo gonadal, determinando su ciclo gametogénico mediante un estudio histológico y de composición bioquímica de la gónada-masa visceral. Los reproductores usados en los acondicionamientos serán del mismo banco, lo que nos permitirá disponer de un patrón al que referir los resultados obtenidos a través de la manipulación que se realiza durante el acondicionamiento en criadero; el estudio de éste, se hace atendiendo sobre todo a la influencia de dos factores externos importantes: el efecto de la temperatura y de la ración del alimento. Para estudiar el efecto de la temperatura se realizan tres acondicionamientos durante el año, en octubre, febrero y abril y se ensayan dos regímenes de temperatura, uno con subida gradual y otro con temperatura constante a 20ºC. Para estudiar el efecto de la ración de alimento se ensayan dos raciones del 3% y 6% en peso seco de microalgas con respecto al peso seco de la carne de los reproductores. La almeja fina tiene un ciclo reproductivo anual con un periodo de reposo de octubre a diciembre. En enero la mayoría de las almejas empiezan la gametogénesis y el período de puesta abarca desde mayo a agosto. Los carbohidratos y lípidos son los componentes bioquímicos que más se movilizan durante la gametogénesis. En general los carbohidratos aumentan durante las fases de reposo e inicio y disminuyen durante el desarrollo gametogénico. Los lípidos aumentan con la maduración de la gónada. CIMA Memoria 2013 93 17 CURSOS 17.1. CURSOS IMPARTIDOS Máster Interuniversitario en Acuicultura. USC, UVIGO, UDC BLANCO PÉREZ, J. Mareas Tóxicas VILLALBA GARCÍA, A. Enfermedades en Invertebrados Seminarios impartidos: - Neoplasia en moluscos - Estrategias de lucha contra enfermedades de moluscos Sesión de prácticas NO COUTO, E. Sesión de prácticas sobre: Diseño de muestreos cuantitativos, análisis de muestras y seguimiento productivo de las zonas de libre marisqueo en la Ria de Arousa. European Master of Science in Marine Environment and Resources. Universidad del País Vasco VILLALBA GARCÍA, A. Histology and Histopathology of Aquatic Animals Seminarios impartidos: - General Histopathology of Molluscs - Sesión práctica: Microscopical observations of general mollusc histopathology - Neoplastic lesions in mollusks - Sesión práctica: Identification of neoplastic lesions Programa de Doctorado en Acuicultura. Facultad de Ciencias del Mar de la Universidad Católica del Norte. Coquimbo (Chile). VILLALBA GARCÍA, A. Taller teórico – práctico: Taller de Biopatología de Moluscos 94 17.2. ASISTENCIA A CURSOS a) EGAP. Santiago de Compostela Prevención de riscos laborais: seguridade nos laboratorios. Bouzamayor Yáñez, V. Curso Superior de Linguaxe Administrativa. Cruzado Estévez, A. Estatuto Básico do Empregado Público. Cruzado Estévez, A. Lingua inglesa. Linares Cuerpo, F.; Nóvoa Vázquez, S. b) Centro Tecnológico del Mar. CETMAR. Vigo Seminario: Caracterización da situación sanitaria do litoral español relativa á infección por virus herpes en moluscos bivalvos e avaliación de impacto da enfermidade. Carballal Durán, M.J. CIMA Memoria 2013 95 18 ESTANCIAS 18.1. ESTANCIAS EN EL CIMA Nombre: Yuri Bovi Morais Carvalho Organismo: Universidade Federal do Rio Grande, Rio Grande do Sul (Brasil). Estudiante de doctorado becado por CAPES (Gobierno Federal de Brasil) Tema desarrollado: Aprendizaje sobre enfermedades de moluscos, con énfasis en análisis de muestras traídas de Brasil. Nombre: Zoe Hilton Organismo: Cawthron Institute, Nueva Zelanda Tema desarrollado: Programas de selección genética en moluscos. Nombre: María Prado Organismo: Cork University College, Irlanda Tema desarrollado: Análisis proteómicos en el contexto de la respuesta inmunitaria de la ostra plana. Nombre: Lamia Azbaid Organismo: Institut National de Recherche Halieutique. Tanger (Marruecos). Tema desarrollado: Parasitología de moluscos. 18.2. ESTUDIANTES EN PRÁCTICAS Alumno/a: Corrochano González, J.B. Procedencia: Universidad Complutense de Madrid Duración: 160 horas Tutor/a: Ojea Martínez, J. Alumno/a: Rodríguez Riveira, A. Procedencia: Universidade de Santiago de Compostela Duración: 240 horas Tutor/a: Ojea Martínez, J. 18.3. TFM. MÁSTER INTERUNIVERSITARIO GALLEGO DE ACUICULTURA Alumno/a: Hermida Alonso, L. Universidad: Santiago de Compostela Título TFM: Cultivo larvario de tres especies de almeja de interés comercial en Galicia: Ruditapes philippinarum, Venerupis corrugata y Politapes rhomboides. 96 CUENTAS CIMA Memoria 2013 97 19 GASTOS I.- Distribución del presupuesto por capítulos Capítulo Cantidad (Euros) 1.964.811,79 € Capítulo I: Gastos de personal Capítulo II: Gastos corrientes en bienes y servicios 159.070,17 € Capítulo IV: Transferencias corrientes 640.940,29 € Capítulo VI: Inversiones reales Capítulo VII: Transferencias de capital 2.764.822,25 € Total 98 20 FUENTES DE FINANCIACIÓN ORIGEN DE LOS FONDOS CANTIDAD (€) Propia: Dirección Xeral de Desenvolvemento Pesqueiro. Consellería do Medio Rural e do Mar. Xunta de Galicia 140.619,45 € a) Acciones de Investigación que desarrolla el CIMA b) Convenios con entidades externas 5.398,79 € I+D de la Xunta de Galicia Plan Nacional de Cultivos Marinos Administración General del Estado 146.452,47 € JACUMAR INIA, MCYT/MEC 91.531,61 € Unión Europea (INTERREG, VI Programa Marco,...) 384.002,32 € Total CIMA Memoria 2013 99 100