Richard-Allan Scientific Chromaview

ESPAÑOL
Thermo Scientific™ Richard-Allan Scientific Chromaview® – Tinción Avanzada
Tinción de plata Steiner-Steiner modificado
Instrucciones de uso
Análisis técnico
Microtomía
Realice los cortes de 4 a 6 micrones.
Fijación
No existen requisitos especiales. La fijación con formol es apropiada.
Control de calidad
Debe utilizarse un corte que contenga espiroquetas, como H. pylori o Legionella pneumophila.
Procedimiento técnico
Solución de trabajo de reducción
Hidroquinona............................................1 cápsula
Agua destilada o desionizada...........................25 ml
Mezclar bien
Nota: Utilizando guantes, vacíe todo el contenido de la cápsula en agua destilada o desionizada y
disuelva. Deseche la cápsula vacía.
Agregue lo siguiente:
Solución de Almáciga......................................10 ml
Alcohol absoluto................................................5 ml
Solución de Nitrato de Plata n.° 2..................2 gotas
Mezclar bien
Protocolo de tinción estándar
1. Desparafinar e hidratar los cortes con agua desionizada.
2. Colocar los cortes en 40 ml de solución de sensibilización precalentada y colocar en la estufa o a baño
María a 60 °C durante 15 minutos.
3. Enjuagar bien los cortes con agua desionizada. Usar 3 cambios.
4. Colocar los cortes en 40 ml de solución de Nitrato de Sodio n.° 1 precalentada e incubar a 60 °C durante
1,5 horas.
5. Enjuagar los cortes con agua desionizada. Usar 3 cambios.
6. Deshidratar los cortes en dos cambios de alcohol al 95%.
7. Deshidratar los cortes en dos cambios de alcohol absoluto.
8. Colocar los cortes en 40 ml de solución de almáciga a temperatura ambiente, durante 5 minutos.
9. Retirar los cortes de la solución de Almáciga, drenar y dejar secar los cortes al aire.
10. Colocar los cortes en una solución de trabajo de reducción precalentada en la estufa o a baño María a
60 °C e incubar durante 15 a 30 minutos hasta que los cortes adquieran una tonalidad oro oscuro.
Nota: Comparar el color con el portaobjetos de control previamente teñido para estimar el punto de
equivalencia. Dado que la solución de trabajo de reducción es poco clara, se dificulta la examinación de
los cortes con microscopio.
11. Deshidratar los cortes en alcohol al 95% durante 1 minuto.
12. Deshidratar los cortes con dos cambios de alcohol absoluto durante 1 minuto cada uno.
13. Aclarar los cortes con tres cambios de reactivo aclarante durante 1 minuto cada uno y proceder al
montaje.
Protocolo de tinción con microondas
1. Desparafinar e hidratar los cortes con agua desionizada.
2. Colocar los cortes en un recipiente Coplin plástico que contenga 40 ml de solución de sensibilización.
Colocar en el microondas durante 40 segundos a alta potencia.
3. Enjuagar bien los cortes con agua desionizada. Usar 3 cambios.
4. Colocar los cortes en un recipiente Coplin plástico que contenga 40 ml de solución de Nitrato de Plata n.°
1. Habiendo colocado la tapa sin asegurarla, colocar en el microondas a alta potencia durante 30 segundos.
Permitir que los cortes permanezcan en la solución durante 10 minutos más (a temperatura ambiente).
5. Enjuagar bien los cortes con agua desionizada. Usar 3 cambios.
6. Enjuagar los cortes en dos cambios de alcohol al 95%.
7. Enjuagar los cortes en dos cambios de alcohol absoluto.
8. Colocar los cortes en 40 ml de solución de Almáciga a temperatura ambiente, durante 5 minutos.
9. Retirar los cortes de la solución de Almáciga, drenar y dejar secar los cortes al aire.
10. Colocar los cortes en una solución de trabajo de reducción precalentada en la estufa o a baño María a 60 °C
e incubar durante 15 a 30 minutos hasta que los cortes adquieran una tonalidad oro oscuro.
Nota: Comparar el color con el portaobjetos de control previamente teñido para estimar el punto de
equivalencia. Dado que la solución de trabajo de reducción es poco clara, se dificulta la examinación de los
cortes con microscopio.
O bien,
Colocar la solución de trabajo de reducción en un recipiente Coplin plástico y colocar en el microondas durante
15 minutos a una potencia del 50%. Agregar los cortes. Colocar los cortes en el microondas durante 20
segundos a una potencia del 50% en señales de 5 segundos. Se debe tener cuidado para evitar que la solución
de trabajo de reducción hierva. Permitir que los cortes permanezcan en la solución durante 1 a 5 minutos hasta
alcanzar la intensidad deseada.
11. Deshidratar los cortes en alcohol al 95% durante 1 minuto.
12. Deshidratar los cortes con dos cambios de alcohol absoluto durante 1 minuto cada uno.
13. Aclarar los cortes con tres cambios de reactivo aclarante durante 1 minuto cada uno y proceder al montaje.
Resultados
Espiroquetas: Marrón a negro
Bacterias no filamentosas: Marrón a negro
Fondo: Dorado
Análisis
Todos los reactivos de tinción deben almacenarse en un refrigerador a 2-8 °C. Los reactivos de tinción de plata
Steiner-Steiner modificado son solo para uso “In Vitro”. Algunos de los reactivos utilizados en este kit se consideran tóxicos. Consulte las Hojas de datos de seguridad de los materiales para conocer la Información de salud
y seguridad. Todos los reactivos son estables y no deben formar precipitados de aplicarse los parámetros de
almacenamiento habituales. Se recomienda que todos los reactivos de tinción se desechen después de su uso.
Comentarios técnicos
Deben utilizarse fórceps de plástico o fórceps de metal cubierto de parafina para evitar la formación de un
precipitado de plata. Las bandejas para tinción deben lavarse meticulosamente y, luego, enjuagarse con varios
cambios de agua desionizada para eliminar la posibilidad de que se formen precipitados de plata y garantizar
la aparición de la reacción primaria. Los mejores resultados tienen lugar cuando se utiliza el microondas para
reducir el tiempo en la solución de sensibilización y la solución de Nitrato de plata y cuando se utiliza una estufa
o baño María a 60 °C para el paso de reducción. Esto produce la mejor demostración de espiroquetas y da
tiempo para controlar la reacción cuando se elimina el precipitado no deseado. Las frecuencias de los hornos
microondas pueden variar según el modelo. Puede ser necesario ajustar los niveles de potencia o los tiempos
para alcanzar los resultados deseados.
Probable modo de acción
Los microorganismos que se tiñen positivamente con esta técnica poseen una pared celular que adsorbe la plata
de una solución de plata (argirofílica). La plata se adsorbe en primer lugar en una forma no visible y, posteriormente, es reducida por la solución reductora de trabajo (hidroquinona) a una forma metálica visible.
Referencias
1. Bancroft, J.D. y Stevens, A. Theory and Practice of Histological Techniques. Churchill Livingstone, New York,
NY, 1977.
2. Sheehan, D.C. y Hrapchak, B.B. Theory and Practice of Histotechnology, 2nd Edition. Mosby, St. Louis, MO,
1980.
3. Thompson, C.C. Selected Histochemical and Histopathological Methods. Springfield, IL, 1966.
4. Carson, F. L. Histotechnology: A Self-Instructional Text, 2nd Edition. ASCP Press, Chicago, 1997.
Información para pedidos
Producto
TamañoCant.
Kit de Plata Steiner-Steiner
1 Kit
1
87009
Solución de Nitrato de Plata n.° 2 (cuentagotas)
8 ml
1
88021
Solución de sensibilización
500 ml
1
88054
Solución de Nitrato de Plata n.° 1
500 ml
1
88033
Solución de Almáciga
500 ml
1
88034
Hidroquinona (cápsula)
6 cápsulas
2 botellas
88035
©2013 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. All trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific Inc. and its subsidiaries.
Anatomical Pathology
IS87009ES R4/13
Richard-Allan Scientific
Subsidiary of Thermo Fisher Scientific
4481 Campus Drive, Kalamazoo, MI 49008
Phone: 1 (800) 522-7270
Phone: + 1 (269) 544-5600
www.thermoscientific.com/pathology
Thermo Shandon Limited
Subsidiary of Thermo Fisher Scientific
Tudor Road, Manor Park,
Runcorn, Cheshire WA7 1TA, UK
Phone: +44 (0) 1928 534 050
Fax: + 44 (0) 1928 534 049
Ref.