ESPAÑOL Thermo Scientific™ Richard-Allan Scientific Chromaview® – Tinción Avanzada Tinción de plata Steiner-Steiner modificado Instrucciones de uso Análisis técnico Microtomía Realice los cortes de 4 a 6 micrones. Fijación No existen requisitos especiales. La fijación con formol es apropiada. Control de calidad Debe utilizarse un corte que contenga espiroquetas, como H. pylori o Legionella pneumophila. Procedimiento técnico Solución de trabajo de reducción Hidroquinona............................................1 cápsula Agua destilada o desionizada...........................25 ml Mezclar bien Nota: Utilizando guantes, vacíe todo el contenido de la cápsula en agua destilada o desionizada y disuelva. Deseche la cápsula vacía. Agregue lo siguiente: Solución de Almáciga......................................10 ml Alcohol absoluto................................................5 ml Solución de Nitrato de Plata n.° 2..................2 gotas Mezclar bien Protocolo de tinción estándar 1. Desparafinar e hidratar los cortes con agua desionizada. 2. Colocar los cortes en 40 ml de solución de sensibilización precalentada y colocar en la estufa o a baño María a 60 °C durante 15 minutos. 3. Enjuagar bien los cortes con agua desionizada. Usar 3 cambios. 4. Colocar los cortes en 40 ml de solución de Nitrato de Sodio n.° 1 precalentada e incubar a 60 °C durante 1,5 horas. 5. Enjuagar los cortes con agua desionizada. Usar 3 cambios. 6. Deshidratar los cortes en dos cambios de alcohol al 95%. 7. Deshidratar los cortes en dos cambios de alcohol absoluto. 8. Colocar los cortes en 40 ml de solución de almáciga a temperatura ambiente, durante 5 minutos. 9. Retirar los cortes de la solución de Almáciga, drenar y dejar secar los cortes al aire. 10. Colocar los cortes en una solución de trabajo de reducción precalentada en la estufa o a baño María a 60 °C e incubar durante 15 a 30 minutos hasta que los cortes adquieran una tonalidad oro oscuro. Nota: Comparar el color con el portaobjetos de control previamente teñido para estimar el punto de equivalencia. Dado que la solución de trabajo de reducción es poco clara, se dificulta la examinación de los cortes con microscopio. 11. Deshidratar los cortes en alcohol al 95% durante 1 minuto. 12. Deshidratar los cortes con dos cambios de alcohol absoluto durante 1 minuto cada uno. 13. Aclarar los cortes con tres cambios de reactivo aclarante durante 1 minuto cada uno y proceder al montaje. Protocolo de tinción con microondas 1. Desparafinar e hidratar los cortes con agua desionizada. 2. Colocar los cortes en un recipiente Coplin plástico que contenga 40 ml de solución de sensibilización. Colocar en el microondas durante 40 segundos a alta potencia. 3. Enjuagar bien los cortes con agua desionizada. Usar 3 cambios. 4. Colocar los cortes en un recipiente Coplin plástico que contenga 40 ml de solución de Nitrato de Plata n.° 1. Habiendo colocado la tapa sin asegurarla, colocar en el microondas a alta potencia durante 30 segundos. Permitir que los cortes permanezcan en la solución durante 10 minutos más (a temperatura ambiente). 5. Enjuagar bien los cortes con agua desionizada. Usar 3 cambios. 6. Enjuagar los cortes en dos cambios de alcohol al 95%. 7. Enjuagar los cortes en dos cambios de alcohol absoluto. 8. Colocar los cortes en 40 ml de solución de Almáciga a temperatura ambiente, durante 5 minutos. 9. Retirar los cortes de la solución de Almáciga, drenar y dejar secar los cortes al aire. 10. Colocar los cortes en una solución de trabajo de reducción precalentada en la estufa o a baño María a 60 °C e incubar durante 15 a 30 minutos hasta que los cortes adquieran una tonalidad oro oscuro. Nota: Comparar el color con el portaobjetos de control previamente teñido para estimar el punto de equivalencia. Dado que la solución de trabajo de reducción es poco clara, se dificulta la examinación de los cortes con microscopio. O bien, Colocar la solución de trabajo de reducción en un recipiente Coplin plástico y colocar en el microondas durante 15 minutos a una potencia del 50%. Agregar los cortes. Colocar los cortes en el microondas durante 20 segundos a una potencia del 50% en señales de 5 segundos. Se debe tener cuidado para evitar que la solución de trabajo de reducción hierva. Permitir que los cortes permanezcan en la solución durante 1 a 5 minutos hasta alcanzar la intensidad deseada. 11. Deshidratar los cortes en alcohol al 95% durante 1 minuto. 12. Deshidratar los cortes con dos cambios de alcohol absoluto durante 1 minuto cada uno. 13. Aclarar los cortes con tres cambios de reactivo aclarante durante 1 minuto cada uno y proceder al montaje. Resultados Espiroquetas: Marrón a negro Bacterias no filamentosas: Marrón a negro Fondo: Dorado Análisis Todos los reactivos de tinción deben almacenarse en un refrigerador a 2-8 °C. Los reactivos de tinción de plata Steiner-Steiner modificado son solo para uso “In Vitro”. Algunos de los reactivos utilizados en este kit se consideran tóxicos. Consulte las Hojas de datos de seguridad de los materiales para conocer la Información de salud y seguridad. Todos los reactivos son estables y no deben formar precipitados de aplicarse los parámetros de almacenamiento habituales. Se recomienda que todos los reactivos de tinción se desechen después de su uso. Comentarios técnicos Deben utilizarse fórceps de plástico o fórceps de metal cubierto de parafina para evitar la formación de un precipitado de plata. Las bandejas para tinción deben lavarse meticulosamente y, luego, enjuagarse con varios cambios de agua desionizada para eliminar la posibilidad de que se formen precipitados de plata y garantizar la aparición de la reacción primaria. Los mejores resultados tienen lugar cuando se utiliza el microondas para reducir el tiempo en la solución de sensibilización y la solución de Nitrato de plata y cuando se utiliza una estufa o baño María a 60 °C para el paso de reducción. Esto produce la mejor demostración de espiroquetas y da tiempo para controlar la reacción cuando se elimina el precipitado no deseado. Las frecuencias de los hornos microondas pueden variar según el modelo. Puede ser necesario ajustar los niveles de potencia o los tiempos para alcanzar los resultados deseados. Probable modo de acción Los microorganismos que se tiñen positivamente con esta técnica poseen una pared celular que adsorbe la plata de una solución de plata (argirofílica). La plata se adsorbe en primer lugar en una forma no visible y, posteriormente, es reducida por la solución reductora de trabajo (hidroquinona) a una forma metálica visible. Referencias 1. Bancroft, J.D. y Stevens, A. Theory and Practice of Histological Techniques. Churchill Livingstone, New York, NY, 1977. 2. Sheehan, D.C. y Hrapchak, B.B. Theory and Practice of Histotechnology, 2nd Edition. Mosby, St. Louis, MO, 1980. 3. Thompson, C.C. Selected Histochemical and Histopathological Methods. Springfield, IL, 1966. 4. Carson, F. L. Histotechnology: A Self-Instructional Text, 2nd Edition. ASCP Press, Chicago, 1997. Información para pedidos Producto TamañoCant. Kit de Plata Steiner-Steiner 1 Kit 1 87009 Solución de Nitrato de Plata n.° 2 (cuentagotas) 8 ml 1 88021 Solución de sensibilización 500 ml 1 88054 Solución de Nitrato de Plata n.° 1 500 ml 1 88033 Solución de Almáciga 500 ml 1 88034 Hidroquinona (cápsula) 6 cápsulas 2 botellas 88035 ©2013 Thermo Fisher Scientific Inc. 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