k OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS 19 k ES 2 079 851 kInt. Cl. : A61K 39/39 11 N.◦ de publicación: 6 51 ESPAÑA k A61K 39/08 TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA 12 kNúmero de solicitud europea: 92903012.0 kFecha de presentación : 17.12.91 kNúmero de publicación de la solicitud: 0 563 254 kFecha de publicación de la solicitud: 06.10.93 T3 86 86 87 87 k 54 Tı́tulo: Uso de IL-4 para mejorar la respuesta inmunitaria frente a inmunógenos en vacunas. k 73 Titular/es: Schering Corporation k 72 Inventor/es: Rozhon, Edward J.; k 74 Agente: Elzaburu Márquez, Alberto 30 Prioridad: 19.12.90 US 629800 2000 Galloping Hill Road Kenilworth New Jersey 07033, US 45 Fecha de la publicación de la mención BOPI: 16.01.96 45 Fecha de la publicación del folleto de patente: ES 2 079 851 T3 16.01.96 Aviso: k k o’Connell, John, F.; Cox, Stuart, A.; Hayre, Michael, D. y Schwartz, Jerome k En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletı́n europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art◦ 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascı́culos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, 1 – 28036 Madrid 1 ES 2 079 851 T3 DESCRIPCION Antecedentes de la invención Esta invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden interleuquina-4 como un ingrediente activo para mejorar la respuesta inmunitaria primaria de un mamı́fero frente a inmunógenos en vacunas. La invención se refiere también al uso de interleuquina-4 para la fabricación de un medicamento destinado a aumentar la respuesta inmunitaria primaria de un mamı́fero frente a inmunógenos presentes en una vacuna, ası́ como a métodos para mejorar la respuesta inmunitaria primaria eficaz en mamı́feros frente a inmunógenos presentes en vacunas, mediante la administración a dichos mamı́feros de una cantidad eficaz de interleuquina-4 en asociación con dicha vacuna. Introducción La interleuquina-4 [denominada en lo sucesivo “IL-4”, pero conocida también como Factor 1 Estimulador de las Células B (BSF-1)], fue descrita originalmente por M. Howard y cols. en J. Exp. Med. (1982), Vol. 155, págs. 914-23, como un factor de crecimiento procedente de células T, distinto de la IL-2, el cual permitı́a un cultivo tisular a largo plazo de linfocitos B normales de ratón e interactuaba con linfocitos B activados para mantener su proliferación durante hasta 4 meses. Aunque se han usado explantes de linfocitos B mixtos para iniciar cultivos, se manifiesta que los linfocitos B con fenotipo inmaduro son aumentados especı́ficamente por la IL-4 en cultivo tisular. Véase por ejemplo C. Perchel y cols., J. Immunol. (1989), Vol. 142, 1558-1568. Además, G. Trenn y cols., J. Immunol. (1988), Vol. 140, 1101-1106, describen que la IL-4 estimula el desarrollo de células T citotóxicas a partir de una subpoblación Lyt-2+ de linfocitos T de múrido en reposo. H. Spits y cols., J. Immunol. (1987), Vol. 139, 1142-47, describen que la IL-4 puede actuar como un factor de crecimiento de células T en células humanas in vitro a partir de IL-2. El gen para IL-4 de ratón se clonó y expresó en células COS-7 [véase T. Otsuka y cols., Nuc. Acids Res. (1987), Vol. 15, 333-334]. El factor clonado tenı́a todas las actividades en cultivo tisular observadas para el factor purificado a partir de sobrenadantes de cultivos de células T. La clonación y la expresión del gen para IL-4 humano han sido descritas por N. Arai y cols., J. Immunol. (1989), Vol. 142, 274-282 y T. Yokota y cols., Proc. Natl. Acad. Sci. (1986), Vol. 83, 5844-5848, teniendo el factor producido en células COS-7 actividades similares a las de las moléculas nativas, tal como se ha estudiado en cultivos tisulares. Puesto que la IL-4 fue estudiada en sistemas celulares tanto de seres humanos como de múridos, las actividades in vitro adicionales se atribuyeron a la molécula: i) la IL-4 desempeñó un papel importante en la inducción y regulación de la sı́ntesis de IgE, un proceso que tenı́a lugar cuando a subpoblaciones de linfocitos B se les inducı́a a proliferación [véase Pene, J. Proc. Natl. Acad. Sci. (1988), Vol. 85, 6880-6884]; ii) la IL-4 indujo receptores Fc de baja afinidad (CD23) en linfocitos B humanos normales en cultivo tisular [véase T. DeFrance y 2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2 cols., J. Exp. Med. (1987), Vol. 165, 1459-1457]; iii) la IL-4 interactuaba con otras linfoquinas, notablemente el interferón-γ [véase R. L. Coffman y cols., Immunol. Res. (1988), Vol. 102, 5-27], y S. Romagnani y cols., supra, y células T [véase R. L. Coffman y cols., supra, S. Romagnani y cols., supra, y M. D. Widmer y cols., Nature (1987), Vol. 326, 795-98], para causar una proliferación y alteración de células B; iv) la IL-4 mejoró la secreción de clases de anticuerpos especı́ficos, p. ej. Ig, por células B humanas [véase J. B. Splawski y cols., J. Immunol. (1989), Vol. 142, 15691572]; v) la IL-4 tiene efectos estimulantes sobre células T, células cebadas y macrófagos [véase K. H. Grabstein y cols., J. Immunol. (1987), Vol. 139, 1148-1153; F. Lee y cols., Proc. Natl. Acad. Sci. (1986), Vol. 83, 2061; y A. Zlotnik y cols., J. Immunol. (1987), Vol. 138, 4275-4279]; y vi) la IL-4 aumentó la expresión de antı́geno de clase II del MHC (complejo principal de histocompatibilidad) en las células B en reposo (R. Noelle y cols., PNAS 81.6149-6153, 1984). T. R. Mosmann y cols. en J. Immunol., Vol. 138, 1813-1816 describieron que las IL-4 de seres humanos y de múridos, que son homólogas en un 50 % en las secuencias de aminoácidos 1-90 y 129-149, eran especı́ficas de cada especie. El uso de IL-4 para mejorar la respuesta inmunitaria frente a provocaciones por antı́genos infecciosos, p. ej. infecciones crónicas debidas a virus, bacterias, hongos o protozoos, se describe en el documento WO 91/14450. El documento WO 91/01143 describe composiciones de vacunas que comprenden un antı́geno tal como una bacteria o virus, en combinación con una interleuquina tal como IL-1, IL-2 o IL4, preferiblemente IL-2, cuya composición se adsorbe sobre un mineral tal como un alumbre, y se presenta en forma de una suspensión, y también contiene un agente conservante añadido. El documento EP-A-0.351.876 describe composiciones para potenciar el efecto de la vacunación, las cuales contienen factor de diferenciación de células B humano (“BCDF humano”) como el ingrediente eficaz para potenciar la producción de anticuerpos frente a una vacuna tal como bacterias o virus. Además de BCDF humano, las composiciones pueden contener también una o más citoquinas, tales como IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, los interferones y M-CSF o G-CSF. El documento WO 88/00971 describe una vacuna recombinante que comprende un vector de vacuna el cual incorpora un primer nucleótido capaz de expresar todo o parte de un polipéptido antı́geno, p. ej. poxvirus del grupo al que pertenece la viruela, virus de herpes, adenovirus junto con una segunda secuencia de nucleótidos capaz de expresarse como todo o parte de una linfoquina, p. ej. una interleuquina tal como IL-1, 2, 3 o 4, o interferón gamma, eficaz para aumentar la respuesta inmunitaria frente al polipéptido antigénico. El documento EP-A-0.302.429 describe que la IL-4 humana mejora la respuesta inmunitaria y es útil para el tratamiento y la prevención de enfermedades tales como cáncer, infecciones, SIDA y deficiencia inmunitaria funcional. 3 ES 2 079 851 T3 De acuerdo con la presente invención, se crea el uso de IL-4 recombinante humana procedente de E. coli, para la fabricación de un medicamento destinado a mejorar la respuesta inmunitaria primaria de un mamı́fero frente a inmunógenos presentes en una vacuna de toxoide, con la condición de que el medicamento esté exento de factor de diferenciación de células B humano (BCDF humano). Descripción de las figuras La Figura 1 ilustra la cronologı́a de la respuesta inmunitaria lograda por la administración de IL-4 recombinante humana y una vacuna de toxoide de tétanos a macacos de laboratorio (Macaca sp.), de acuerdo con la presente invención. Las figuras 2-5 ilustran gráficamente la aparición de anticuerpos de tétanos en función del tiempo, frente a la vacuna de toxoide de tétanos, en el modelo del macaco de laboratorio, administrando 0,5 mcg/kg y 20 mcg/kg de IL-4 humana recombinante y una vacuna de toxoide de tétanos de acuerdo con la presente invención. Descripción detallada de la invención y de las realizaciones preferidas Sorprendentemente, se ha hallado que la administración de IL-4 humana recombinante (en lo sucesivo denominada “rhIL-4”) a macacos de laboratorio, simultáneamente con una vacuna de toxoide de tétanos dio por resultado una respuesta inmunitaria primaria mejorada en los monos. Este resultado es particularmente sorprendente dado que, cuando se administró rhIL-4 a macacos de laboratorio durante la inoculación de vacuna de recuerdo con virus recombinante de hepatitis B (rHBVax) aproximadamente dos meses después de administrar vacuna rHBVax, y ası́ como cuando se administró IL-4 a macacos de laboratorio durante la inoculación de vacuna de recuerdo con vacuna de poliovirus inactivados de Salk, aproximadamente un mes después de administrar vacuna de poliovrius inactivados de Salk, no se observó ninguna respuesta anamnésica, es decir, secundaria o de memoria. Los métodos de esta invención para disponer la administración de IL-4 con una vacuna tienen las siguientes ventajas. Puede reducirse la carga antigénica total de la vacuna que se ha de administrar, puesto que menos cantidad de antı́geno en presencia de IL4 provocarı́a una respuesta inmunológica al menos equivalente a la lograda por administración de la vacuna antes indicada. Dado que se requerirı́a menos antı́geno por cada vacunación administrando IL-4 de acuerdo con esta invención, se reducirı́a la probabilidad de efectos colaterales indeseables asociados con algunas vacunas actualmente en uso. Además, puesto que se requiere menos inmunógeno para lograr una protección efectiva, se reducirı́a el coste global de la vacuna por cada paciente. La respuesta inmunitaria de cierto tipo de individuos que responde deficientemente a la vacunación se mejorarı́a administrando IL-4 de acuerdo con esta invención. Tales tipos de individuos que se beneficiarı́an de los métodos de esta invención incluyen (1) los tipos que tienen una sensibilidad inmunitaria deteriorada, tal como niños nacidos con ciertas deficiencias inmunitarias, (2) individuos supuestamente normales que no son sensibles frente a ciertas vacunas, ası́ 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4 como (3) individuos que se someten a terapias inmunosupresivas, inclusive con radiación, corticosteroides, etc. Por tanto, los autores de la presente invención han descubierto métodos eficaces para (1) mejorar una respuesta inmunitaria primaria eficaz en tales mamı́feros frente a inmunógenos presentes en una vacuna; (2) mejorar un nivel eficaz de anticuerpos en mamı́feros expuestos a inmunógenos presentes en vacunas; y (3) mejorar una respuesta inmunitaria primaria en mamı́feros frente a inmunógenos presentes en una vacuna, en los cuales la respuesta inmunitaria por dicho mamı́fero en ausencia de IL-4 no es suficientemente fuerte ni suficientemente rápida para evitar una enfermedad. Las respuestas inmunitarias desarrolladas por dichos mamı́feros en ausencia de IL-4 pueden no ser suficientemente fuertes o rápidas para evitar una enfermedad en dichos mamı́feros, pero los autores han hallado métodos eficaces que comprenden administrar a tales mamı́feros una cierta cantidad de IL-4, preferiblemente IL-4 humano recombinante, eficaz para cada una de tales finalidades. Las vacunas consideradas para uso de acuerdo con esta invención incluyen vacunas bacterianas, vacunas de toxoides (toxinas inactivadas) y vacunas vı́ricas, o sus mezclas (“antı́genos múltiples”), usadas para inmunización activa en un ser humano. Véase por ejemplo el capı́tulo 75, titulado “Immunizing Agents”, en Pharmaceutical Sciences de Remington, 14a¯ edición, 1990, Mack Publishing Co., págs. 1426-1441, y las antitoxinas, toxoides, vacunas y vacunas vivas aprobadas por la FDA y enumeradas en la pág. 210 (Product Category Index) de la “Physicians’ Desk Reference”, 44a¯ edición, 1990. Entre las vacunas bacterianas adecuadas se incluyen vacunas bacterianas contra las siguientes entidades o condiciones de enfermedad: cólera, tos ferina, peste, fiebre tifoidea, meningitis, neumonı́a neumocócica, infecciones por H. influenzae del tipo B, lepra, gonorrea, infecciones por meningococos del grupo B, infecciones por estreptococos del grupo B, septicemia por bacterias Gram-negativas, septicemia por E. coli, e infecciones por Pseudomonas aeruginosa. Entre los toxoides adecuados se incluyen toxoide de difteria, toxoide de botulismo y toxoide de tétanos. Entre las vacunas vı́ricas adecuadas se incluyen vacunas vı́ricas vivas e inactivadas contra las siguientes entidades o estados de enfermedad: poliomielitis, sarampión, rubéola, fiebre amarilla, parotiditis y hepatitis B. Entre los “antı́genos múltiples” adecuados se incluyen toxoides de difteria y de tétanos, el antı́geno triple-toxoides de difteria, tos ferina y tétanos tal como están disponibles de Connaught Laboratories, Inc., Swiftevater, Pensilvania 18370, EE.UU. La amplia variedad de cepas vı́ricas y de sustratos celulares usados en diferentes paı́ses y el esquema de inmunización se describen en las Tablas 10-6 y 10-7, respectivamente, del capı́tulo 10, titulado “Immunization against viral diseases”, en la pág. 4, renglón 27, y págs. 283-301 de un libro de D. O. White & F. Fenner, Medical Virology (1986), 3a¯ edición, Academic Press Inc., Orlando, Florida, EE.UU. La expresión “en asociación con”, tal como se 3 5 ES 2 079 851 T3 usa aquı́, se refiere a la administración de IL-4 simultáneamente, durante o inmediatamente antes, o a continuación de la administración de la vacuna. Por ejemplo, la IL-4 puede administrarse durante 10 a 14 dı́as antes y después de administrarse la vacuna apropiada. Normalmente, se administrarı́a IL-4 antes de administrar la vacuna apropiada, durante un tiempo suficiente para obtener niveles de IL-4 en estado estable en el tejido linfoide de un mamı́fero. Tales niveles se determinan mediante el uso de mediciones con patrones farmacocinéticos. La administración de IL-4 se continuarı́a después de administrarse la vacuna, en el perı́odo durante el cual los inmunógenos presentes en la vacuna están siendo procesados por el sistema inmunitario del mamı́fero, y durante un tiempo suficiente para permitir que la IL-4 proporcione una respuesta inmunitaria primaria aumentada. La vacuna se administra por la vı́a y con la concentración recomendadas para cada especie usada. Cualquier IL-4 adecuada puede emplearse en la presente invención. Moléculas de ADN complementario (cDNA) para IL-4 se han clonado y secuenciado recientemente en diversos laboratorios, p. ej. Yokota y cols., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1986), Vol. 83, 5894-5898 (ser humano); Lee y cols., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1986), Vol. 83, 2061-2065 (ratón); Noma y cols., Nature (1986), Vol. 319, 640-646 (ratón); y Genzyme Corporation, Boston, Massachusetts (ser humano y ratón). Además, se ha purificado IL-4 no recombinante a partir de sobrenadantes de diversos cultivos, p. ej. Sanderson y cols., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1986), Vol. 83, 437-440 (ratón); Grabstein y cols., J. Exp. Med. (1985), Vol. 163, 1405-1413 (ratón); Ohara y cols., J. Immunol. (1985), Vol. 135, 2518-2523 (BSF-1 de ratón); Butler y cols., J. Immunol. (1984), Vol. 133, 251-255 (BCGF de ser humano); y Farrar y cols., J. Immunol. (1983), Vol. 131, 1838-1842 (BCGF de ratón). Las descripciones de todos estos artı́culos se incorporan aquı́ por sus referencias, por sus enseñanzas sobre las secuencias de ADN y aminoácidos y sobre métodos para obtener materiales de IL-4 adecuados para su uso en la presente invención. Preferiblemente, la IL-4 usada en la presente invención es IL-4 humana, y con la máxima preferencia es la versión humana con la secuencia descrita por Yokoto y cols., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1986), Vol. 83, 5894-5898, y en la Solicitud de Patente PCT n◦ 87/02990, publicada el 21 de mayo de 1987, que se expresa en y aı́sla a partir de E. coli (documentos WO 89/01046 y US-A-4.958.007). La producción de IL-4 a partir de células CHO se describe en el documento WO 91/01744. La producción de IL-4 a partir de E. coli se describe en el documento WO 91/06655. La expresión “cantidad eficaz”, tal como se usa aquı́ como la cantidad eficaz de IL-4 administrada de acuerdo con esta invención, significa una cantidad de IL-4 que produce una elevación en el nivel de anticuerpo, suficiente para proporcionar una protección aumentada frente a un agente infeccioso. El aumento exacto en el nivel de anticuerpo que podrı́a considerarse significativo puede ser pequeño. La cantidad eficaz de 4 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6 IL-4 administrada con preferencia es tı́picamente de 0,25 hasta 15 microgramos de IL-4, preferiblemente IL-4 humana producida de modo recombinante a partir de E. coli o de células CHO, por kilogramo de peso corporal y por dı́a. Más preferiblemente, se administran a los mamı́feros desde 0,25 a 5 microgramos de rhIL-4 por kilogramo de peso corporal y por dı́a, y con la máxima preferencia se administran a los mamı́feros desde 0,25 a 1 microgramos de rhIL-4 por kilogramo de peso corporal y por dı́a. La cantidad, la frecuencia y el perı́odo de administración variarán dependiendo de factores tales como el nivel de los tı́tulos especı́ficos de anticuerpo, la clase de anticuerpo que se ha de inducir y el tipo de vacuna, ası́ como la edad del paciente, nutrición, etc. Usualmente, la administración de IL-4 será inicialmente diaria, y puede continuar periódicamente durante toda la vida del paciente. Las cantidades y frecuencia posológicas pueden determinarse durante las exploraciones selectivas iniciales del tı́tulo de anticuerpo especı́fico y de la magnitud del efecto de la IL-4 sobre la elevación de los tı́tulos de anticuerpo. La administración de la dosis puede realizarse por las vı́as intravenosa, nasal, parenteral, oral, subcutánea, tópica, transdérmica, o por cualquier otro método aceptable. La IL-4 puede administrarse en cualquier número de formas convencionales de dosificación. Los preparados parenterales incluyen soluciones o suspensiones estériles. La administración por inhalación puede realizarse en forma de una nebulización nasal u oral, o por insuflación. Las formas tópicas de dosificación incluyen cremas, pomadas, lociones, dispositivos transdérmicos (p. ej. del tipo de parche convencional de reservorio o matriz), y similares. Las formulaciones de composiciones farmacéuticas consideradas por las formas de dosificación antes indicadas pueden prepararse con excipientes y aditivos convencionales farmacéuticamente aceptables, usando técnicas convencionales. En el momento presente, la IL-4 se administra preferiblemente por vı́a intravenosa. Las soluciones que se han de administrar pueden ser polvos liofilizados reconstituidos, y adicionalmente pueden contener agentes conservantes, tampones, agentes dispersantes, etc. Preferiblemente, la IL-4 se reconstituye con tampón citrato 10 milimolar de pH apropiado y agua estéril exenta de agentes conservantes, con una concentración máxima que no exceda de 100 microgramos por mililitro, y se administra por infusión intravenosa continua o por inyección intravenosa. Para infusión continua, la dosis diaria puede añadirse a 5 ml de solución salina normal, y la solución puede infundirse por bomba mecánica o por gravedad. Materiales y métodos La IL-4 recombinante humana usada en los siguientes experimentos procedı́a de células CHO, y el método para su preparación se describe en el documento WO 91/01744. Diseño de experimentos Monos Macacos de laboratorio machos adultos, obtenidos del Sureste de Asia, se adquirieron de una 7 ES 2 079 851 T3 fuente comercial, p. ej. de Hazelton and Charles River Laboratories. Todos los monos se pusieron en cuarentena durante un mı́nimo de 90 dı́as antes de su utilización. Toxoide de tétanos e inoculación de los animales La vacuna de toxoide de tétanos usada en este experimento fue el fluido de toxoide de tétanos R , obtenido de Lederle Laboratories, Purgonated Pearl River, Nueva York 10965, EE.UU. Quince (15) macacos de laboratorio desarrollados hasta la edad adulta se infectaron con citomegalovirus de primates (PCMV) antes de empezar este estudio. En ese momento, todos los animales presentaban un tı́tulo apreciable de anticuerpo contra el PCMV. La finalidad de incluir este testigo interno fue ensayar si el tratamiento con IL-4 afectarı́a inespecı́ficamente a los niveles de anticuerpo. No era de esperar que la IL4 produjera una mejora del anticuerpo contra el PCMV, ya que no se administró una vacuna de PCMV. Los procedimientos estándar usados para medir respuestas de anticuerpos fueron un radioinmunoanálisis para el PCMV y un radioinmunoanálisis en fase sólida (véase J. A. Berzofasky y cols., “Antigen-Antibody Interactions and Monoclonal Antibodies”, págs. 315-356 de “Fundamental Immunology” (1989), 2a ¯ edición, W. E. Paul (compilador), Raven Press, Nueva York, EE.UU.) para la vacuna rHBVax y la vacuna de poliovirus inactivados de Salk. Se hicieron sangrı́as para obtener sangre destinada a los análisis de anticuerpos de toxoides de PCMV y de tétanos, una vez a la semana durante nueve semanas (2 a 7 en la Figura 1) antes de la administración de IL-4, y dos veces cada semana durante las 22 semanas (8 a 30) del estudio. La administración de rhIL-4 por vı́a intravenosa con niveles posológicos de dos veces por dı́a [5,0 y 20,0 µg/(kg.dı́a) = B.I.D.] y la de placebo se empezaron en el medio de la semana 8, hasta el medio de la semana 12, y se continuaron durante un total de 25 dı́as. Se administró vacuna de toxoide de tétanos (0,5 ml, que contenı́an 5 unidades Lf de toxoide de tétanos) por inyección intramuscular a cada uno de los 15 monos, en el dı́a 11◦ de la administración de rhIL-4. Los resultados de la determinación de los tı́tulos de anticuerpo contra tétanos, para los tres grupos (datos medios de los grupos) se muestran en la Figura 2 y la Tabla I. La Figura 2 ilustra gráficamente la res- 5 10 15 20 25 30 puesta mejorada del grupo de 5 µg/(kg.dı́a), comparado con los grupos testigo y de 20 µg/(kg.dı́a) (véase la Figura 5). La respuesta del grupo de 5 µg/kg (mostrada en las Figuras 2 y 4) fue estadı́sticamente significativa, comparada con la respuesta del grupo testigo, mostrada en las Figuras 2 y 3. La Tabla I demuestra que (1) en las semanas 4-6 siguientes a la vacunación con toxoide de tétanos, el grupo que recibió la dosis de 5 µg/kg de IL-4 tuvo un tı́tulo de anticuerpo estadı́sticamente mayor que el del grupo testigo de placebo; (2) en las semanas 7-9 siguientes a la vacunación, los dos grupos que habı́an recibido IL-4 (5,0 µg/kg y 20 mg/kg) tuvieron un tı́tulo de anticuerpo de tétanos mayor que el de los grupos testigo de placebo. TABLA I Respuesta de anticuerpo a vacuna de tétanos primaria: Efecto de la IL-4 Dosis de IL-4(1) Grupo Nivel Semana Semanas Semanas Semanas 11 12-13 14-16 17-19 I 0 37±21(2) 2127±606 2456±488 1223±139 II 5 49±30 2178±529 5333±697 3973±631 III 20 46±20 1560±228 2355±152 1677±227 (1) (2) 35 40 45 50 8 µg/kg de peso del animal. Los valores representan el tı́tulo medio de anticuerpo durante el perı́odo de tiempo; N = 5 monos por grupo (± = error tı́pico de la medida). En vista de los resultados de los experimentos antes indicados, es de esperar que la IL-4, preferiblemente rhIL-4, mejorarı́a una respuesta inmunitaria en mamı́feros después de una exposición primaria a una vacuna en la que la respuesta inmunitaria por dichos mamı́feros no es suficientemente fuerte ni suficientemente rápida para evitar una enfermedad. Serı́an de esperar resultados similares para vacunas bacterianas y vı́ricas, y para mezclas de cada una de éstas con toxoides. 55 60 65 5 9 ES 2 079 851 T3 REIVINDICACIONES 1. El uso de IL-4 humano recombinante procedente de E. coli, para la fabricación de un medicamento destinado a mejorar una respuesta inmunitaria primaria de un mamı́fero frente a inmunógenos presentes en una vacuna de toxoide, con la condición de que el medicamento esté exento de factor de diferenciación de células B humano (BCDF humano). 2. El uso de la reivindicación 1, en el que la IL-4 se administra a dicho mamı́fero si- 5 10 10 multáneamente con dicha vacuna. 3. El uso de cualesquiera reivindicaciones precedentes, en el que la IL-4 se administra por vı́a parenteral. 4. El uso de cualquier reivindicación precedente, en el que la cantidad de IL-4 administrada está en el intervalo de 0,25 hasta 15 microgramos por kilogramo de peso corporal y por dı́a. 5. El uso de cualquier reivindicación precedente, en el que la vacuna de toxoide es una vacuna de toxoide de tétanos. 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposición Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicación del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a España y solicitadas antes del 7-10-1992, no producirán ningún efecto en España en la medida en que confieran protección a productos quı́micos y farmacéuticos como tales. 65 Esta información no prejuzga que la patente esté o no incluı́da en la mencionada reserva. 6 ES 2 079 851 T3 7 ES 2 079 851 T3 8 ES 2 079 851 T3 9 ES 2 079 851 T3 10 ES 2 079 851 T3 11